RESUMO: Este estudo foi realizado com o objetivo de descrever casos de carbúnculo sintomático (infecção por Clostridium chauvoei) diagnosticados em bovinos do Centro-Oeste brasileiro de 1994-2014, avaliando a epidemiologia, os sinais clínicos, os achados de necropsia e a histopatologia; objetivou-se também avaliar os seguintes testes laboratoriais para o diagnóstico de carbúnculo sintomático: cultura microbiológica e identificação do agente, cultura microbiológica e identificação do agente por reação em cadeia de polimerase (PCR) e identificação do agente em material fixado em formol e incluído em parafina (FFIP). Os critérios para o diagnóstico presuntivo de carbúnculo sintomático incluíram miosite necro-hemorrágica enfisematosa, caracterizada por infiltrado inflamatório, necrose de coagulação de miofribras, edema intersticial, hemorragia e bolhas de gás em meio às miofribras. Cinquenta e nove casos oriundos de 51 surtos foram encontrados, o que corresponde a 1,1% das 5.375 mortes de bovinos investigadas. Em cinco desses casos, amostras do músculo afetado foram cultivadas para clostrídios patogênicos. Amostras semelhantes de outros três animais foram cultivadas para clostrídios e os isolamentos identificados subsequentes por PCR. Doze fragmentos de músculo afetado FFIP foram submetidos a PCR para identificação do agente etiológico. Com exceção de janeiro, os casos de carbúnculo sintomático foram observados em todos os meses do ano com uma maior incidência em junho-outubro. A faixa etária da maioria dos bovinos afetados era de 7-12 anos de idade, mas bovinos mais jovens que 6 meses e mais velhos que 24 meses foram também afetados. Os históricos de vacinação eram escassos nesses surtos. Em 32 surtos havia alguma informação sobre a vacinação, mas em apenas dois casos a vacinação tinha sido realizada adequadamente. Cinquenta e seis casos de carbúnculo sintomático deste estudo eram casos clássicos afetando os músculos esqueléticos. Os músculos mais afetados foram os dos membros pélvicos. Em dez casos os músculos da língua, miocárdio e diafragma estavam também afetados. Apenas três dos casos apresentaram a forma visceral (cardíaca). O curso clínico foi de 6-24 horas, mas na maioria dos casos os bovinos foram encontrados mortos. Em casos da forma visceral ocorria morte súbita. Clostridium chauvoei foi confirmado como o agente causal por cultura em cinco casos e por PCR em amostra FFIP em 8 casos. Cultura bacteriana seguida de PCR do isolado não demonstrou C. chauvoei. Carbúnculo sintomático é uma doença frequente em bovinos no Mato Grosso do Sul podendo provocar importantes prejuízos para os produtores rurais. Esses prejuízos podem ser reduzidos através de um programa de vacinação adequado usando-se vacinas eficazes contra cepas de C. chauvoei prevalentes na região.

ABSTRACT: This study aimed to review cases of blackleg (Clostridium chauvoei infection) diagnosed in cattle from Midwestern Brazil from 1994 to 2014 considering epidemiological, clinical, necropsy and histopathological findings. Also the following laboratory tests were used for the diagnosis of some cases of blackleg: microbiological culture and identification of the agent, microbiological culture and identification of the agent by the polymerase chain reaction (PCR), and identification of the agent in formalin fixed paraffin embedded tissues (FFPE). Criteria for presumptive diagnosis of blackleg included necrohemorrhagic emphysematous myositis consisting of inflammatory infiltrate, coagulative necrosis of myofiber, interstitial edema, hemorrhage, and gas bubbles between myofibers. Fifty nine cases from 51 outbreaks of blackleg were found, which corresponded to 1.1% of 5,375 cattle deaths investigated. In five of those outbreaks, samples of affected muscles cultures for the identification of pathogenic clostridia were made. Another three samples of similar material were cultured for clostridia with subsequent identification of the isolate by PCR. Twelve samples of FFPE affected muscle fragments were submitted to PCR for identification of the etiological agent. Except for January, cases were observed in each month of the year, with higher numbers in July-October. Most affected cattle were in the age of 7-12 years, but calves younger than 6 month-old and older than 24 months were also observed. Vaccination histories were scarce. In 32 outbreaks some vaccination history was available, but only in two of those vaccination has been carried out properly. In 56 six cases the skeletal muscles were involved. Muscles of the hind limbs were the most affected. In ten cases muscles of the tongue, myocardium and diaphragm were also affected. In three of the cases the visceral form was observed. Deaths occurred after a clinical course of 6-24 hours, but in most cases cattle were found death. Sudden death was the outcome in visceral cases (cardiac) blackleg. Clostridium chauvoei was confirmed to be the cause by culturing in 5 cases, and by PCR and histopatology in 8 cases. Bacterial culture followed by PCR did not demonstrate C. chauvoei. Calculation of the economic impact indicates that blackleg is a frequent disease in the state of Mato Grosso do Sul (MS) that inflicts significant economic loss. The amount of these losses would be reduced through proper vaccination programs against the prevalent strains of C. chauvoei in the region.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a real importância de enteropatógenos anaeróbios e rotavirus em comparação à outros agentes mais comuns como causa de diarreia em leitões até cinco dias de idade. Leitões com 0 a 7 dias de vida, 30 diarreicos e 30 não diarreicos (controles) de 15 granjas diferentes foram eutanasiados e necropsiados. Amostras de jejuno, íleo, colon e ceco foram coletadas e submetidas à detecção dos seguintes enteropatógenos: Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC), Clostridium perfringens, Clostridium difficile, rotavirus e Isospora suis. Entre os animais diarréicos, 23.3% foram positivos para C. difficile, 70% para C. perfringens tipo A cpb2+, 14.3% para rotavirus e 10% para ETEC. Entre os leitões não-diarréicos, 10% foram positivos para C. difficile, 76.7% para C. perfringens tipo A cpb2+, 3.3% para ETEC e 3.3% for I. suis. C. perfringens tipo C não foi detectado em nenhum animal. Lesões histológicas características de C. difficile, E. coli e rotavirus foram observadas. Por outro lado, nenhuma lesão sugestiva de C. perfringens foi detectada. Foi possível observar uma correlação positiva entre edema de mesocolon e presença das toxinas A/B. Apesar de C. perfringens tipo A cpb2+ ter sido o patógeno mais encontrado, nenhuma associação com lesões foi encontrada. C. difficile e Rotavirus foram os agentes mais relevantes associados à diarreia neonatal, e ficou demonstrada a relevância de associação de histopatologia com testes de detecção microbiológica para se firmar um diagnóstico.

The purpose of the study was to evaluate the real importance of anaerobic enteropathogens and rotavirus in contrast to more common agents as cause of diarrhea in piglets within the first week of life. Sixty 1- to 7-day-old piglets, 30 diarrheic and 30 non-diarrheic (control), from 15 different herds were selected, euthanized and necropsied. Samples of the jejunum, ileum, colon, cecum and feces were collected from the piglets and analyzed to determine the presence of the following enteropathogens: enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC), Clostridium perfringens types A and C, Clostridium difficile, rotavirus and Isospora suis. Among diarrheic piglets, 23.3% were positive for C. difficile, 70% for C. perfringens type A cpb2+, 14.3% for rotavirus and 10% for ETEC. Among non-diarrheic control piglets, 10% were positive for C. difficile, 76.7% for C. perfringens type A cpb2+, 0% for rotavirus, 3.3% for ETEC and 3.3% for I. suis. C. perfringens type C was not detected in any of the animals. Histological lesions characteristic of C. difficile, E. coli and rotavirus were observed. However, no C. perfringens type A suggestive lesions were detected. There was a positive correlation between mesocolon edema and the presence of C. difficile toxins. Although C. perfringens type A cpb2+ was the most frequently detected enteropathogen, there was no association between its presence and diarrhea or macro or microscopic changes. C. difficile and Rotavirus were the most relevant pathogens involved with neonatal diarrhea in this study, and histopathology associated with microbiological test proved to be the key to reach a final diagnosis.

Um surto de leptospirose foi observado em bovinos leiteiros em Santo Antônio do Monte, Minas Gerais. O rebanho apresentava reações positivas anti-leptospira sorovar Hardjo no teste de microaglutinação (MAT) e havia sido vacinado anteriormente com vacina experimental contendo a sorovariedade Hardjo. O MAT revelou 48,06% dos bovinos positivos para sorovariedade Hardjo genótipo Hardjobovis, 36,82% para sorovariedade Hardjo genótipo Hardjoprajitno. Os animais apresentavam aborto e mastite com presença de sangue no leite. A presente pesquisa teve como objetivos isolar as sorovariedades existentes a partir da urina de vacas sorologicamente positivas, elaborar uma vacina experimental com as sorovariedades isoladas no rebanho, avaliar a eficiência do programa de vacinação por um período de dois anos por meio da sorologia do rebanho. Foi isolada Leptospira spp. a partir da urina de duas vacas com sinais sugestivos da doença. As amostras isoladas foram identificadas pela sorologia com anticorpos monoclonais e seqüenciamento do gene 16S rRNA como pertencentes à espécie Leptospira interrogans, sorogrupo Sejroe, sorovariedade Hardjo e genótipo Hardjoprajitno. O uso da vacina autógena foi eficaz no controle da leptospirose no rebanho no período de dois anos. Os resultados da sorologia revelaram ausência de animais positivos na última prova realizada no rebanho.

An outbreak of leptospirosis in dairy cattle was observed in Santo Antonio do Monte, Minas Gerais. The herd had positive reactions in anti-Leptospira serovar Hardjo agglutination test (MAT) and had been previously vaccinated with a vaccine containing serovars Hardjo. The MAT showed 48.06% of cattle positive for serovars Hardjo genotype Hardjobovis, 36.82% for serovars Hardjo genotype Hardjoprajitno. The animals had abortions and mastitis with blood in the milk. This study aimed to isolate the existing serovars from the urine of serologically positive cows, produce an experimental vaccine with the serovars isolated in the herd, evaluating the effectiveness of the vaccination program for a period of two years through the herd serology. Leptospira spp. was isolated from the urine of two cows with signs suggestive of the disease. The strains were identified by serology with monoclonal antibodies and 16S rRNA gene sequencing as belonging to the Leptospira interrogans species Sejroe serogroup Hardjo serovars and Hardjoprajitno genotype. Use of the autochthonous vaccine was effective in leptospirosis controlling in the herd in two years. The serology results showed the absence of positive animals in the last race held in the herd.

Objetivou-se descrever os aspectos clínicos, anátomo-histopatológicos e microbiológicos da paratuberculose em um rebanho Gir leiteiro no Estado da Paraíba. Uma vaca de oito anos que apresentava diarréia persistente, refratária a tratamento foi necropsiada para estudo anátamo-histopatológico. Também foram coletadas amostras de fezes de todos os 160 animais do plantel, com idade superior a 12 meses, para tentativa de isolamento de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Ao exame clínico, o animal caso índice apresentou caquexia, diarréia profusa e desidratação grave. À necropsia, o animal apresentou-se emaciado e, ao exame detalhado do trato digestivo, foi observado espessamento da parede e superfície mucosa do íleo e intestino grosso. À microscopia, verificou-se intensa infiltração de macrófagos espumosos associado a raras células epiteliódes e gigantes do tipo Langerhans na lâmina própria e submucosa. À coloração de Ziehl-Neelsen foram observadas miríade de bacilos álcool-ácido resistentes no citoplasma destas células. Houve crescimento de colônias bacterianas em duas das 160 amostras de fezes após 150 dias de incubação em tubos com meio Herrold's egg-yolk suplementados com micobactina J e ausência de crescimento nos tubos com mesmo meio, mas sem suplementação. Os microrganismos isolados foram corados pelo Ziehl-Neelsen observando-se presença de grande quantidade de bacilos álcool-ácido resistente, com morfologia compatível ao gênero Mycobacterium. Baseado na história clínica, achados anátomo-histopatológicos e histoquímicos (Ziehl-Neelsen), e microbiológicos, firmou-se o primeiro diagnóstico de paratuberculose em Zebu na Paraíba.

This paper describes the clinical, pathological, and microbiologic aspects of paratuberculosis (Johne's disease) in a dairy Gyr herd in the State of Paraíba, northeastern Brazil. An eight years old cow with chronic unresponsive diarrhea was clinically examined and euthanized for pathological evaluation. Fecal samples from all 160 animals over 12 months of age from the herd were collected for isolation of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Clinically, the index case cow was severely dehydrated, cachectic, with profuse mucous diarrhea. The main post-mortem findings were emaciation and thickened intestinal wall. Microscopically, the intestinal lamina propria and submucosa were infiltrated by macrophages, epithelioid cells, and Langhans giant cells with numerous alcohol-acid resistant bacilli in the cytoplasm. Two fecal samples displayed growth in slants of Herrold's egg-yolk agar supplemented with mycobactin J, 150 days after incubation. No growth was noticed in slants without mycobactin J. Microscopic examination of the isolated microorganisms stained by Ziehl-Neelsen revealed considerable amounts of alcohol-acid resistant bacilli, morphologically compatible with Mycobacterium spp. Based on the clinical signs, gross and histological lesions, growth time, bacterial morphology in Ziehl-Neelsen staining, and dependence of mycobactin J, the first diagnosis of paratuberculosis in Zebu cattle was made.

Um total of 110 amostras de Streptococcus suis isoladas de suínos doentes, no Brasil foram sorotipificadas e analisadas para a virulência. Sorotipificação das amostras resultou na seguinte classificação: 42 amostras do sorotipo 2 (38,2%), 10 amostras do sorotipo 14 (9,1%), sete amostras do sorotipo 9 (6,4%), três amostras de cada sorotipo, 7 e 11 (2,7%), duas amostras de cada sorotipo, 1 e 8 (1,8%) e uma amostra de cada um dos sorotipos, ½, 3, 5, 6 e 10 (0,9%). Reações cruzadas entre os sorotipos 1, 14 e 7 foram observadas em 21 amostras (19,1%). Somente 41,9% das amostras foram patogênicas para camundongos.

A total of 110 strains of Streptococcus suis, isolated from diseased pigs in Brazil were serotyped and analyzed for virulence. Serotyping of the strains resulted in the following classification: 42 strains of serotype 2 (38.2%), 10 strains of serotype 14 (9.1%), seven strains of serotype 9 (6.4%), three strains each of serotype 7 and 11 (2.7%), two strains each of serotype 1 and 8 (1.8%) and one strain each of serotypes ½, 3, 5, 6 and 10 (0.9%). Cross reactions among serotypes 1, 14 and 7 were observed in 21 strains (19.1%). Only 41.9% of the strains were lethal for mice using the pathogenicity test.

O carbúnculo sintomático é causado pelo Clostridium chauvoei, enquanto o edema maligno é causado pelo C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii, C. perfringens tipo A, e/ou C. novyi tipo A. Corpos policlonais anti-C. chauvoei, anti-C. septicum, anti-C. sordellii and anti-C.novyi tipo A foram produzidos em coelhos e purificados em uma coluna de DEAE-celulose. Alíquotas das imunoglobulinas foram conjugadas com isotiocianato de fluoresceína e o restante foi usado na técnica de streptavidina biotina peroxidase (SBP). SBP foi padronizada para detectar C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii e C. novyi tipo A em tecidos de cobaias fixados em formol e incluídos em parafina. A mesma foi comparada com a técnica de imunofluorescência direta (IFD). Secções e impressões do músculo da área de inoculação, coração, fígado, baço e rim, foram obtidas para ambas as técnicas. Nenhuma reação cruzada foi observada quando tecidos inoculados com outras espécies de Clostridia foram tratadas com esses quatro anticorpos primários. C. chauvoei e C. septicum foram detectados em todos os espécimes provenientes dos animais inoculados com esses microrganismos, enquanto somente secções de músculo obtidas de todos os animais inoculados com C. sordellii e C. novyi tipo A foram positivas. Os mesmos resultados observados pela técnica de SBP, foram obtidos em impressões de tecidos desses microrganismos corados pela IFD. Os resultados indicam que a técnica de SBP permite a detecção de C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii e C. novyi tipo A em tecidos de cobaias fixados em formol e incluídos em parafina.

Blackleg is caused by Clostridium chauvoei, whereas malignant oedema is caused by C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii, C. perfringens type A, and/or C. novyi type A. Anti-C. chauvoei, anti-C. septicum, anti-C. sordellii and anti-C. novyi type A polyclonal antibodies were produced in rabbits and purified in a column of DEAE-cellulose. Aliquots of the antisera were conjugated with fluorescein isothiocyanate and the remaining was used for the streptavidin biotin peroxidase technique (SBPT). SBPT was standardized to detect C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii and C. novyi type A in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of guinea pigs. SBPT was compared to a fluorescent antibody technique (FAT). Sections and smears of muscle from inoculation area (MIA), heart, liver, spleen and kidney, were obtained for both SBPT and FAT. Cross-reactions between the different Clostridial species were not observed. C. chauvoei and C. septicum were detected in all specimens from the animals inoculated with these microorganisms, while only sections of muscle obtained from all the animals inoculated with C. sordellii and C. novyi type A were positive. The same results observed by the SBPT, were obtained on tissue smears of these microorganisms stained by the FAT. The results indicate that SBPT is suitable for detection of C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii and C. novyi type A in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of guinea pigs.

São descritos surtos de enterotoxemia em caprinos em cinco propriedades no Estado do Rio Grande do Sul. Os animais afetados eram, normalmente, encontrados mortos ou apresentavam evolução aguda de 2 a 3 horas com acentuada depressão, cólicas abdominais e diarréia profusa com fibrina. Em duas propriedades relataram-se casos com a evolução de até 12 horas. Em treze animais necropsiados observaram-se aumento de líquidos nas cavidades abdominal, torácica e pericárdica, congestão e hiperemia da serosa e mucosa do intestino, conteúdo do cólon líquido com fibrina além de hemorragias de serosa e fibrina. Em um animal constatou-se microangiopatia cerebral caracterizada por acúmulo de material homogêneo e eosinofílico no espaço perivascular. No conteúdo intestinal, colônias com bastonetes morfológica e bioquimicamente sugestivos de Clostridium perfringens foram caracterizadas no estudo bacteriológico. A soroneutralização em camundongos com conteúdo intestinal dos animais afetados, revelou a presença da toxina épsilon. Estes achados evidenciam a enterotoxemia como doença de importância para criação de caprinos no Rio Grande do Sul.

Five outbreaks of caprine enterotoxaemia in Rio Grande do Sul, Brazil, were studied. The animals were found dead or had a clinical course that usually lasted 2-3 hours. From two farms a clinical manifestation period of 12 hours was reported. Clinical signs were characterized by depression, marked abdominal discomfort, profuse watery diarrhea with fibrin clots, and death. Thirteen necropsies were performed and hydropericardium, hydrothorax and hydroperitoneum were commonly found. The mucosa and serosa of the colon were congested, and its contents was watery with multiple fibrin clots. Serosal hemorrhages and fibrin clots in the gallbladder were also seen. Fibrinous colitis and thyphilitis were the most frequent histological changes. Cerebral microangiopathy was observed in one case, which was characterized by acute perivascular proteinaceous edema around arterioles of the nucleus caudatus and thalamus. Large numbers of Gram-positive rods, often in clumps and with morphology consistent with Clostridium perfringens, were seen in intestinal smears. The intestinal contents of six goats were positive for epsilon toxin by mouse neutralization test. These findings suggest that enterotoxaemia is an important disease of goat flocks in southern Brazil.