RESUMEN Se evaluó la prevalencia de infección por parásitos tripanosomátidos en Didelphis marsupialis y su relación con los aspectos morfológicos/etarios en una zona rural de El Carmen de Bolívar, Colombia. En cinco visitas (2018-2019) se instalaron trampas Tomahawk® en los ecótopos peridoméstico y silvestre en la Vereda El Alférez, durante tres noches consecutivas/visita. A los animales recolectados, se les determinaron medidas corporales, sexo y edad; y se les extrajo sangre por cardiopuntura, previa sedación, para extracción del ácido desoxirribonucleico (ADN) total y amplificación de la región conservada del ADN de minicírculos de kinetoplasto (ADNk) de parásitos tripanosomátidos. La asociación entre parámetros morfológicos de los didélfidos y su frecuencia de infección por parásitos tripanosomátidos fue determinada mediante una regresión binomial. Se recolectaron 30 individuos de D. marsupialis (60,0% hembras y 40,0% machos/66,7% adultos y 33,3% juveniles). El diagnóstico molecular reveló una frecuencia de infección por parásitos tripanosomátidos del 46,7%. El estadio (p=0,024) fue determinante para la infección. Se discute el papel de D. marsupialis como potencial reservorio de parásitos tripanosomátidos en la zona evaluada.

ABSTRACT We studied the prevalence of infection by trypanosomatid parasites in Didelphis marsupialis and its relationship with morphological/age aspects in a rural area of El Carmen de Bolivar, Colombia. Five visits were made to the Vereda El Alférez; each of which lasted three consecutive nights. During these visits, Tomahawk® traps were installed in the peridomestic and wild ecotopes of the Vereda El Alférez. Body measurements, sex and age were determined from the collected animals. Blood was extracted by cardiopuncture, after sedation, in order to obtain total deoxyribonucleic acid (DNA) and amplify the conserved region of the kinetoplast minicircle DNA (kDNA) of parasitic trypanosomatids. The association between morphological parameters of didelphids and their frequency of infection by parasitic trypanosomatids was determined by binomial regression. Thirty D. marsupialis specimens (60.0% females and 40.0% males/66.7% adults and 33.3% juveniles) were collected. Molecular diagnosis revealed a frequency of trypanosomatid parasite infection of 46.7%. Stage (p=0.024) was a determinant for infection. We discuss the role of D. marsupialis as a potential reservoir of parasitic trypanosomatids in the Vereda El Alférez.

ABSTRACT We studied the prevalence of infection by trypanosomatid parasites in Didelphis marsupialis and its relationship with morphological/age aspects in a rural area of El Carmen de Bolivar, Colombia. Five visits were made to the Vereda El Alférez; each of which lasted three consecutive nights. During these visits, Tomahawk® traps were installed in the peridomestic and wild ecotopes of the Vereda El Alférez. Body measurements, sex and age were determined from the collected animals. Blood was extracted by cardiopuncture, after sedation, in order to obtain total deoxyribonucleic acid (DNA) and amplify the conserved region of the kinetoplast minicircle DNA (kDNA) of parasitic trypanosomatids. The association between morphological parameters of didelphids and their frequency of infection by parasitic trypanosomatids was determined by binomial regression. Thirty D. marsupialis specimens (60.0% females and 40.0% males/66.7% adults and 33.3% juveniles) were collected. Molecular diagnosis revealed a frequency of trypanosomatid parasite infection of 46.7%. Stage (p=0.024) was a determinant for infection. We discuss the role of D. marsupialis as a potential reservoir of parasitic trypanosomatids in the Vereda El Alférez.

RESUMEN Se evaluó la prevalencia de infección por parásitos tripanosomátidos en Didelphis marsupialis y su relación con los aspectos morfológicos/etarios en una zona rural de El Carmen de Bolívar, Colombia. En cinco visitas (2018-2019) se instalaron trampas Tomahawk® en los ecótopos peridoméstico y silvestre en la Vereda El Alférez, durante tres noches consecutivas/visita. A los animales recolectados, se les determinaron medidas corporales, sexo y edad; y se les extrajo sangre por cardiopuntura, previa sedación, para extracción del ácido desoxirribonucleico (ADN) total y amplificación de la región conservada del ADN de minicírculos de kinetoplasto (ADNk) de parásitos tripanosomátidos. La asociación entre parámetros morfológicos de los didélfidos y su frecuencia de infección por parásitos tripanosomátidos fue determinada mediante una regresión binomial. Se recolectaron 30 individuos de D. marsupialis (60,0% hembras y 40,0% machos/66,7% adultos y 33,3% juveniles). El diagnóstico molecular reveló una frecuencia de infección por parásitos tripanosomátidos del 46,7%. El estadio (p=0,024) fue determinante para la infección. Se discute el papel de D. marsupialis como potencial reservorio de parásitos tripanosomátidos en la zona evaluada.

RESUMEN Introducción. Paraguay es un país endémico para el dengue y la intervención primaria para esta arbovirosis es el control químico de su vector Aedes aegypti, siendo necesario estudiar su resistencia frente a insecticidas utilizados para el control y conocer su sostenibilidad en espacio y tiempo. Objetivo. Determinar la susceptibilidad de poblaciones silvestres de Ae. aegypti procedentes de Villa Elisa-Central, frente al adulticida deltametrina y conocer el área potencial de distribución de estas poblacionesresistentes/susceptibles. Metodología. Se utilizaron mosquitos Ae. aegypti adultos de la Filial 1 obtenidos de ovitrampas colocadas en viviendas geo-localizadas entre diciembre 2017-marzo 2018. Las hembras resultantes de la cría en condiciones ad hoc en laboratorio fueron expuestas a concentraciones crecientes del insecticida. La distribución real de las poblaciones de mosquitos y su área de influencia, fueron modeladas mediante DIVA-GIS. Resultados. La mortalidad promedio observada para cada dosis de deltametrina fue: 5,3% para (0,03%); 47,4% para (0,15%) y 61,2% para (0,3). Se observó áreas de influencia para la presencia de Ae. aegypti. Conclusión. los valores correspondientes a la mortalidad resultaron inferiores al 98%, lo cual fue indicativo de resistencia a dosis diagnóstica. El modelo de distribución geográfica de la población evaluada demostró la existencia de áreas idóneas con condiciones bioclimáticas óptimas (niveles de precipitación, temperatura y humedad), propicias para la aparición de reservorios de agua y presencia del vector, tanto en Villa Elisa, como en los distritos localizados en la periferia tales como San Lorenzo, Lambaré, Ñemby, San Antonio y Fernando de la Mora.

ABSTRACT Introduction. Paraguay is an endemic country for dengue and the primary intervention for this arbovirus is the chemical control of its vector Aedes aegypti, being necessary to study its resistance against insecticides used for control and to know its sustainability in space and time. Objective. To determine the susceptibility of wild populations of Ae. aegypti from Villa Elisa-Central, against the adulticide deltamethrin and to know the potential area of distribution of these resistant/susceptible populations. Methodology. Mosquitoes Ae. aegypti adults from Filial 1 obtained from ovitraps placed in geo-located dwellings between December 2017 and March 2018. The females resulting from rearing under ad hoc conditions in the laboratory were exposed to increasing concentrations of the insecticide. The actual distribution of mosquito populations and their area of influence were modeled using DIVA-GIS. Results. The average mortality observed for each dose of deltamethrin was: 5.3% for (0.03%); 47.4% for (0.15%) and 61.2% for (0.3). Areas of influence were observed for the presence of Ae. aegypti. Conclusion. The values corresponding to mortality were lower than 98%, which was indicative of resistance to diagnostic dose. The geographic distribution model of the evaluated population demonstrated the existence of suitable areas with optimal bioclimatic conditions (levels of precipitation, temperature and humidity), conducive to the appearance of water reservoirs and the presence of the vector, both in Villa Elisa and in the districts located on the outskirts such as San Lorenzo, Lambaré, Ñemby, San Antonio and Fernando de la Mora.

RESUMEN Objetivos: Conocer la diversidad genética de Aedes aegypti en el corredor vial transfronterizo Central-Alto Paraná de Paraguay, con registros de casos de dengue. Materiales y métodos: Se seleccionaron veinte hembras adultas de la eclosión de huevos de Ae. aegypti procedentes de casas geolocalizadas en los departamentos de Alto Paraná, Caaguazú, Cordillera y Central, entre el 2018 y 2019. Se extrajo ADN del tejido de las hembras para amplificación aleatoria de sus patrones polimórficos mediante amplificación aleatoria del ADN polimórfico por PCR (RAPD-PCR), usando cebadores H3 y B03 a fin de conocer parámetros genéticos de diversidad poblacional. Las relaciones entre las poblaciones de mosquitos según la localidad fueron visualizadas mediante análisis no apareado de la media aritmética. Las áreas idóneas de distribución geográfica real y potencial de estas poblaciones de Ae. aegypti fueron analizadas mediante DIVA-GIS 7.3.0 y MAXENT. Resultados: Se identificaron 40 loci mediante perfiles RAPD-PCR, con diferenciación génica moderada (Gst = 0,12). El corredor transfronterizo presentó condiciones bioclimáticas para la presencia de poblaciones variantes de Ae. aegypti, siendo determinantes en la distribución la precipitación del trimestre más cálido y la temperatura media del trimestre más seco. Conclusiones: Se evidencia que existe diversidad genética moderada en las poblaciones de Ae. aegypti procedentes de zonas con registros de casos de dengue ubicadas en el corredor vial transfronterizo que une los departamentos Central y Alto Paraná de Paraguay. El estudio de variabilidad genética de Ae. aegypti es de gran utilidad para la vigilancia entomoepidemiológica y evaluación de posibles eventos de resistencia al control químico.

ABSTRACT Objective: To determine the genetic diversity of Aedes aegypti in the Central-Alto Paraná cross-border road corridor of Paraguay, an area that has reports of dengue cases. Materials and methods: Twenty adult females were selected from hatching Ae. aegypti eggs from households geolocated in the departments of Alto Paraná, Caaguazú, Cordillera and Central, between 2018 and 2019. DNA was extracted from the tissue of females for amplifying their polymorphic patterns by random amplification of polymorphic DNA by PCR (RAPD-PCR), using primers H3 and B03 in order to identify genetic parameters of population diversity. The relationships between mosquito populations according to locality were observed by unpaired arithmetic mean analysis. We used DIVA-GIS 7.3.0 and MAXENT to analyze the suitable areas of actual and potential geographic distribution of these Ae. aegypti populations. Results: Forty loci were identified by RAPD-PCR profiling, with moderate gene differentiation (Gst = 0.12). The cross-border corridor presented bioclimatic conditions for the presence of variant populations of Ae. aegypti, with precipitation in the warmest quarter and mean temperature in the driest quarter being determinant in the distribution. Conclusions: There is evidence of moderate genetic diversity in Ae. aegypti populations from areas that have reported dengue cases in the cross-border road corridor linking the Central and Alto Paraná departments of Paraguay. The study of genetic variability of Ae. aegypti is very useful for entomo-epidemiological surveillance and evaluation of possible resistance to chemical control.

ABSTRACT Objective: To determine the genetic diversity of Aedes aegypti in the Central-Alto Paraná cross-border road corridor of Paraguay, an area that has reports of dengue cases. Materials and methods: Twenty adult females were selected from hatching Ae. aegypti eggs from households geolocated in the departments of Alto Paraná, Caaguazú, Cordillera and Central, between 2018 and 2019. DNA was extracted from the tissue of females for amplifying their polymorphic patterns by random amplification of polymorphic DNA by PCR (RAPD-PCR), using primers H3 and B03 in order to identify genetic parameters of population diversity. The relationships between mosquito populations according to locality were observed by unpaired arithmetic mean analysis. We used DIVA-GIS 7.3.0 and MAXENT to analyze the suitable areas of actual and potential geographic distribution of these Ae. aegypti populations. Results: Forty loci were identified by RAPD-PCR profiling, with moderate gene differentiation (Gst = 0.12). The cross-border corridor presented bioclimatic conditions for the presence of variant populations of Ae. aegypti, with precipitation in the warmest quarter and mean temperature in the driest quarter being determinant in the distribution. Conclusions: There is evidence of moderate genetic diversity in Ae. aegypti populations from areas that have reported dengue cases in the cross-border road corridor linking the Central and Alto Paraná departments of Paraguay. The study of genetic variability of Ae. aegypti is very useful for entomo-epidemiological surveillance and evaluation of possible resistance to chemical control.

RESUMEN Objetivos: Conocer la diversidad genética de Aedes aegypti en el corredor vial transfronterizo Central-Alto Paraná de Paraguay, con registros de casos de dengue. Materiales y métodos: Se seleccionaron veinte hembras adultas de la eclosión de huevos de Ae. aegypti procedentes de casas geolocalizadas en los departamentos de Alto Paraná, Caaguazú, Cordillera y Central, entre el 2018 y 2019. Se extrajo ADN del tejido de las hembras para amplificación aleatoria de sus patrones polimórficos mediante amplificación aleatoria del ADN polimórfico por PCR (RAPD-PCR), usando cebadores H3 y B03 a fin de conocer parámetros genéticos de diversidad poblacional. Las relaciones entre las poblaciones de mosquitos según la localidad fueron visualizadas mediante análisis no apareado de la media aritmética. Las áreas idóneas de distribución geográfica real y potencial de estas poblaciones de Ae. aegypti fueron analizadas mediante DIVA-GIS 7.3.0 y MAXENT. Resultados: Se identificaron 40 loci mediante perfiles RAPD-PCR, con diferenciación génica moderada (Gst = 0,12). El corredor transfronterizo presentó condiciones bioclimáticas para la presencia de poblaciones variantes de Ae. aegypti, siendo determinantes en la distribución la precipitación del trimestre más cálido y la temperatura media del trimestre más seco. Conclusiones: Se evidencia que existe diversidad genética moderada en las poblaciones de Ae. aegypti procedentes de zonas con registros de casos de dengue ubicadas en el corredor vial transfronterizo que une los departamentos Central y Alto Paraná de Paraguay. El estudio de variabilidad genética de Ae. aegypti es de gran utilidad para la vigilancia entomoepidemiológica y evaluación de posibles eventos de resistencia al control químico.

ABSTRACT The objective of this study was to determine ocular manifestations of toxocariasis in schoolchildren. A study was conducted in two schools in the Anzoátegui state in Venezuela in 2019. The ELISA test was used to determine IgG antibodies against Toxocara spp. The families completed a questionnaire, and the children were clinically evaluated by pediatricians and ophthalmologists. 118 children participated, 18.6% presented anti-Toxocara spp. The clinical manifestations with a statistically significant association were allergic reactions, epiphora, and decreased visual acuity. The ophthalmological evaluation found keratitis, uveitis, iritis, retinal granuloma, endophthalmitis, amaurosis, leukocoria, retinal detachment and endotropia. The findings show a high frequency of eye disease in children with toxocariasis from a state of Venezuela.

RESUMEN El objetivo de este estudio fue determinar manifestaciones oculares de la toxocariasis en escolares. Se realizó un estudio en dos escuelas del estado Anzoátegui en Venezuela en el 2019. Se empleó la prueba de ELISA para determinar los anticuerpos IgG contra Toxocara spp. Las familias completaron un cuestionario y los niños fueron evaluados clínicamente por pediatras y oftalmólogos. Participaron 118 niños, el 18,6% presentó anticuerpos anti-Toxocara spp. Las manifestaciones clínicas con asociación estadísticamente significativa fueron las reacciones alérgicas, epífora y disminución de la agudeza visual. En la evaluación oftalmológica se encontró queratitis, uveítis, iritis, granuloma retiniano, endoftalmitis, amaurosis, leucocoria, desprendimiento de retina y endotropía. Los hallazgos muestran una alta frecuencia de enfermedad ocular en niños con toxocariasis de un estado de Venezuela.

ABSTRACT The objective of this study was to determine ocular manifestations of toxocariasis in schoolchildren. A study was conducted in two schools in the Anzoátegui state in Venezuela in 2019. The ELISA test was used to determine IgG antibodies against Toxocara spp. The families completed a questionnaire, and the children were clinically evaluated by pediatricians and ophthalmologists. 118 children participated, 18.6% presented anti-Toxocara spp. The clinical manifestations with a statistically significant association were allergic reactions, epiphora, and decreased visual acuity. The ophthalmological evaluation found keratitis, uveitis, iritis, retinal granuloma, endophthalmitis, amaurosis, leukocoria, retinal detachment and endotropia. The findings show a high frequency of eye disease in children with toxocariasis from a state of Venezuela.

RESUMEN El objetivo de este estudio fue determinar manifestaciones oculares de la toxocariasis en escolares. Se realizó un estudio en dos escuelas del estado Anzoátegui en Venezuela en el 2019. Se empleó la prueba de ELISA para determinar los anticuerpos IgG contra Toxocara spp. Las familias completaron un cuestionario y los niños fueron evaluados clínicamente por pediatras y oftalmólogos. Participaron 118 niños, el 18,6% presentó anticuerpos anti-Toxocara spp. Las manifestaciones clínicas con asociación estadísticamente significativa fueron las reacciones alérgicas, epífora y disminución de la agudeza visual. En la evaluación oftalmológica se encontró queratitis, uveítis, iritis, granuloma retiniano, endoftalmitis, amaurosis, leucocoria, desprendimiento de retina y endotropía. Los hallazgos muestran una alta frecuencia de enfermedad ocular en niños con toxocariasis de un estado de Venezuela.

ABSTRACT Introduction To know the natural infestation by triatominae and their infection by Trypanosoma cruzi (T. cruzi) in Acrocomia Aculeata (A. aculeata) or coyol palm in the state of Anzoátegui, Venezuela. Materials and Methods Triatominic infestation and its infection by T. cruzi was studied in non-affected A. aculeata in phytosanitary campaigns. The presence of the parasite was determined by microscopy and PCR-kDNA, and its characterization was made by means of molecular markers. Results Fourteen palm trees with triatominic infestation were found; 48.8% of the individuals corresponded to Rhodnius prolixus and 48.2% to Maculata Triatoma, with ontogenetic development towards adult. The parasitology and molecular tests, their typical morphology and the infection in the murine model revealed the presence of T. cruzi in an average of 54,8%, for both species of triatominae, with circulation of the TcI genotype of T. cruzi. Conclusions The infestation of coyol palm trees with Rhodnius prolixus and Maculata Triatoma was reported for the state of Anzoátegui in Venezuela, as well as the presence of TcI sub-populations of T. cruzi, being this palm tree the peridomicilar habitat of the triatominae-T. cruzi binomial and possible bioindicador of risk of infection for surrounding human populations.

RESUMEN Objetivos Conocer la infestación natural por triatominos y su infección por Trypanosoma cruzi (T. cruzi) en Acrocomia aculeata (A. aculeata) o palma corozo en el estado Anzoátegui, Venezuela. Materiales y métodos Se estudió la infestación triatomínica y su infección por T. cruzi en A. aculeata desafectadas en campañas fitosanitarias. La presencia del parásito se determinó por microscopia y PCR-kDNA, y se realizó su caracterización mediante marcadores moleculares. Resultados Se encontraron 14 palmeras con infestación triatomínica, el 48,8 % de los ejemplares correspondieron a Rhodnius prolixus y el 48,2 % a Triatoma maculata, con desarrollo ontogénico hacia el adulto. Las pruebas parasitológicas y moleculares, su morfología típica y la infección en el modelo murino revelaron la presencia de T. cruzi en 54,8 % en promedio, para ambas especies de triatominos, con circulación del genotipo TcI de T. cruzi. Conclusiónes Se reportó para el estado Anzoátegui en Venezuela, la infestación de palma corozo con Rhodnius prolixus y Triatoma maculata y la presencia de subpoblaciones TcI de T. cruzi, siendo esta palma el hábitat peridomiciliar del binomio triatominos-T. cruzi y posible bioindicador de riesgo de infección para poblaciones humanas circunvecinas.

Introduction. To know the natural infestation by triatominae and their infection by Trypanosoma cruzi (T. cruzi) in Acrocomia Aculeata (A. aculeata) or coyol palm in the state of Anzoátegui, Venezuela. Materials and Methods. Triatominic infestation and its infection by T. cruzi was studied in non-affected A. aculeata in phytosanitary campaigns. The presence of the parasite was determined by microscopy and PCR-kDNA, and its characterization was made by means of molecular markers. Results. Fourteen palm trees with triatominic infestation were found; 48.8% of the individuals corresponded to Rhodnius prolixus and 48.2% to Maculata Triatoma, with ontogenetic development towards adult. The parasitology and molecular tests, their typical morphology and the infection in the murine model revealed the presence of T. cruzi in an average of 54,8%, for both species of triatominae, with circulation of the TcI genotype of T. cruzi. Conclusions. The infestation of coyol palm trees with Rhodnius prolixus and Maculata Triatoma was reported for the state of Anzoátegui in Venezuela, as well as the presence of TcI sub-populations of T. cruzi, being this palm tree the peridomicilar habitat of the triatominae-T. cruzi binomial and possible bioindicador of risk of infection for surrounding human populations.

Objetivos. Conocer la infestación natural por triatominos y su infección por Trypanosoma cruzi (T. cruzi) en Acrocomia aculeata (A. aculeata) o palma corozo en el estado Anzoátegui, Venezuela. Materiales y métodos. Se estudió la infestación triatomínica y su infección por T. cruzi en A. aculeata desafectadas en campañas fitosanitarias. La presencia del parásito se determinó por microscopia y PCR-kDNA, y se realizó su caracterización mediante marcadores moleculares. Resultados. Se encontraron 14 palmeras con infestación triatomínica, el 48,8 % de los ejemplares correspondieron a Rhodnius prolixus y el 48,2 % a Triatoma maculata, con desarrollo ontogénico hacia el adulto. Las pruebas parasitológicas y moleculares, su morfología típica y la infección en el modelo murino revelaron la presencia de T. cruzi en 54,8 % en promedio, para ambas especies de triatominos, con circulación del genotipo TcI de T. cruzi. Conclusiónes. Se reportó para el estado Anzoátegui en Venezuela, la infestación de palma corozo con Rhodnius prolixus y Triatoma maculata y la presencia de subpoblaciones TcI de T. cruzi, siendo esta palma el hábitat peridomiciliar del binomio triatominos-T. cruzi y posible bioindicador de riesgo de infección para poblaciones humanas circunvecinas.

La leishmaniasis es una enfermedad con diversidad clínica y epidemiológica, producida por varias especies de protozoarios parásitos del género Leishmania. Estos parásitos infectan una amplia variedad de hospedadores mamíferos y son transmitidos por insectos del género Lutzomyia, en nuestro país. Los caninos han sido implicados como posibles reservorios del parásito. Para el diagnóstico de leishmaniasis se utilizan técnicas parasitológicas que generalmente tienen baja sensibilidad e inmunológicas, con pobre especificidad. Debido a las limitaciones en el diagnóstico, y lo difícil de la obtención, transporte y almacenamiento de las muestras, en este trabajo se planteó estandarizar de una técnica de PCR anidada (Leishmania nested PCR, Ln-PCR) para la detección de ADN de Leishmania sp. en muestras de sangre de caninos colectadas en papel de filtro. Para ello se titularon las concentraciones de reactivos de la PCR para la amplificación del ADN del parásito y se determinó la sensibilidad analítica y la especificidad de la técnica. Se evaluaron 36 muestras de sangre de caninos (6 infectados y 30 no infectados). Las condiciones óptimas de reacción fueron 0,2 mM de dNTPs, 0,4 µM de cada cebador y 1 U de Taq polimerasa. La sensibilidad analítica de Ln-PCR fue de 10 fg y la especificidad fue de 100% en la detección de ADN de Leishmania sp., ya que no se observó amplificación con ADN de otros parásitos, ni con ADN humano, ni de perro. De las muestras de caninos evaluadas los seis controles infectados todos amplificaron por la PCR, mientras que los 30 no infectados, en ninguno se observó amplificación. La extracción de ADN de muestras de sangre colectadas en papel de filtro fue eficiente para la amplificación por la PCR, técnica que puede ser muy útil para el diagnóstico de leishmaniasis en animales y su implicación como posibles reservorios.

Leishmaniasis is a disease with clinical and epidemiological diversity, caused by several species of protozoan parasites of the genus Leishmania. These parasites infect a wide variety of mammalian hosts, and are transmitted by insects of the genus Lutzomyia in our country. Canines have been implicated as potential reservoirs of the parasite. For the diagnosis of leishmaniasis, parasitological techniques generally with low sensitivity and immunological techniques, with poor specificity, are used. Because of limitations in the diagnosis, and the difficulty to obtain, transport, and store samples, the aim of this research was to standardize a Leishmania nested PCR test (Ln-PCR), for the detection of Leishmania sp. DNA in blood samples from dogs collected in filter paper. For that purpose, concentrations of the PCR reagent for DNA parasite amplification were titrated and the analytical sensitivity and specificity of the technique were determined. A total of 36 canine blood samples (6 infected and 30 uninfected) were evaluated.  The optimal reaction conditions were: 0.2 mM dNTPs; 0.4 µM of each primer; and 1 U of Taq polymerase. The analytical sensitivity of the Ln-PCR was 10 fg and the specificity was 100% in detecting Leishmania sp. DNA, since no amplification was observed with DNA from other parasites, human DNA or canine DNA. The six samples from infected canines evaluated amplified Leishmania sp. DNA by PCR, whereas in none of the 30 samples from uninfected canines the amplification was observed. The DNA extraction from blood samples collected in filter paper was efficient for the PCR amplification, a technique that can be very useful for the diagnosis of leishmaniasis in animals and their involvement as potential reservoirs.

Por cuanto el molusco Achatina fulica nativo del África es vector de helmintos, pero su relación con protozoarios y bacterias es poco conocida, decidimos estudiar las excretas de 1.200 ejemplares capturados en los estados Anzoátegui, Monagas, Sucre y Nueva Esparta, del noreste de Venezuela. Su moco pedal y heces mostraron infección por los protozoarios Chilomastix spp., Trichomonas spp., Giardia spp., Balantidium spp., Entamoeba spp., Iodamoeba spp., Blastocystis spp. Y por los helmintos de los grupos Ascarioidea, Trichuroidea, Ancylostomatidae y Cestoda. El moco céfalopodal mostró únicamente larvas de Rhabditida. Las bacterias Citrobacter freundii, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, K. azaenae, Aeromonas hydrophila, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter spp. infectaron a las tres excretas. Los mecanismos de transmisión y la composición de las excretas, como nichos fisiológicamente apropiados para los organismos encontrados, son discutidos en relación con el riesgo epidemiológico que el molusco representa en salud pública y veterinaria.

The mollusk Achatina fulica, native to Eastern Equatorial Africa, has been incriminated as a carrier or vector of helminthes. Nevertheless, information in the literature as regards its status as a carrier for bacteria is scarce, and we could find no reference at all for its relation to protozoa. We studied microscopically the excreta from 1200 snails captured in Anzoátegui, Monagas, Sucre and Nueva Esparta states, in northeast Venezuela. The pedal mucus and feces were infected by the protozoa Chilomastix spp., Trichomonas spp., Giardia spp., Balantidium spp., Entamoeba spp., Iodamoeba spp., Blastocystis spp., as well as helminthes of Ascarioidea, Trichuroidea, Ancylostomatidae and Cestoda groups. The only helminthes found in the cephalopodal mucus were Rhabditida larvae. The three excreta were also infected by the bacteria: Citrobacter freundii, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, K. azaenae, Aeromonas hydrophila, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter spp. Risk of infection and transmission mechanisms as well as the composition of the excreta as appropriate physiological niches for the organisms mentioned, are discussed with regard to the epidemiological importance of this snail for in human and veterinary health.

Objectives. To compare two extraction protocols of Trypanosoma cruzi DNA for use in DNA amplification of kinetoplast minicircles (kDNA) through the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). Materials and methods. Epimastigotes of T. cruzi were cultured in axenic conditions and masses from 1.5 to 100 x 106 parasites were obtained. DNA extraction was performed using two protocols: extraction with organic solvents (phenol/chloroform), and with resin (Chelex®100), from different parasitic sediments. Concentration and purity of DNA was determined by spectrophotometry, and integrity was assessed by agarose gel electrophoresis. Analysis of variance and comparisons of means were performed through Tukey’s test, using the Statistix 8.0 software. Results. Ten DNA extractions were done of each one of the different amounts of parasitic sediments. In the DNA extraction with Chelex®100 resin, a higher performance was obtained but a lower purity and integrity compared to the extraction with organic solvents. However, it allowed a product amplification of 330 bp of T. cruzi kDNA. Conclusions. Although the technique of Chelex®100 provided less purity and integrity of DNA, it allowed a successful amplification of kDNA by PCR, avoiding the use of laborious techniques and toxic organic solvents

Objetivos. Comparar dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi para su uso en la amplificación de ADN de minicírculos de kinetoplasto (ADNk) mediante la técnica de Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR). Materiales y métodos. Se cultivaron epimastigotas de T. cruzi en condiciones exénicas obteniéndose masas entre 1,5 hasta 100 x 10(6) parásitos. A partir de estas se procedió a la extracción de ADN mediante dos protocolos: extracción con solventes orgánicos (fenol/cloroformo), y empleo de resina (Chelex®100), a partir de los diferentes sedimentos parasitarios. La concentración y pureza del ADN se determinó por espectrofotometría y la integridad se evaluó mediante electroforesis en geles de agarosa. Se realizó el análisis de varianza y comparaciones de medias mediante la prueba de Tukey, utilizando el software Statistix 8.0. Resultados. Se realizaron diez extracciones de ADN de cada una de las diferentes cantidades de parásitos sedimentados. En la extracción de ADN con la resina Chelex®100 se obtuvo mayor rendimiento, pero menor pureza e integridad respecto a la extracción con solventes orgánicos. Sin embargo, permitió la amplificación del producto de 330 pb de ADNk de T. cruzi. Conclusiones. Aun cuando la técnica de Chelex®100 proporcionó menor pureza e integridad del ADN, permitió la amplificación con éxito de ADNk por PCR, evitando el uso de técnicas laboriosas y solventes orgánicos tóxicos

Introducción. La enfermedad de Chagas es causada por el parásito Trypanosoma cruzi y su diagnóstico inmunológico se basa principalmente en la detección de anticuerpos contra T. cruzi mediante pruebas tales como ELISA, inmunofluorescencia indirecta (IFI) y hemaglutinación indirecta (HAI). Esta última tiene el inconveniente de requerir la preparación de eritrocitos de carnero, difíciles de obtener y de poca duración. Sin embargo, existen pruebas alternativas, como la técnica de aglutinación directa. Objetivo. Estandarizar la técnica de aglutinación directa para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. Materiales y métodos. Se prepararon parásitos epimastigotes de T. cruzi mediante dos protocolos, con tratamiento con tripsina y sin él. Los parásitos se colorearon, y se determinaron las condiciones óptimas de concentración parasitaria y diluciones de suero. Se utilizaron sueros de pacientes con enfermedad de Chagas, de individuos sanos y con otras parasitosis. Resultados. La concentración parasitaria óptima fue de 500 x10 6 parásitos/ml, utilizando parásitos coloreados y sin tratamiento con tripsina. Las diluciones de suero óptimas fueron de 1/25, 1/50 y1/100, y el punto de corte, la dilución de 1/50. La técnica estandarizada mostró índices diagnósticos de sensibilidad de 94,3 % (IC 95% 79,5-99,0) y de especificidad de 96,3 % (IC 95% 88,8-99,0); se encontró reacción cruzada en tres sueros de individuos con leishmaniasis visceral, con valores pronósticos positivo y negativo de 91,7 % (IC 95% 76,4-97,8) y de 97,5 % (IC 95% 90,4-99,6), respectivamente. Se compararon los resultados con los obtenidos por HAI, ELISA e IFI y la concordancia fue de 96 % con un índice kappa de 0,90 (IC 95% 0,81-0,99). Conclusión. La técnica de aglutinación directa estandarizada podría ser útil para el inmunodiagnóstico de la enfermedad de Chagas.

Introduction: Chagas´ disease is caused by the parasite Trypanosoma cruzi and its immunological diagnosis is mainly based on the detection of antibodies against T. cruzi using tests such as the ELISA, the indirect fluorescence antibody test (IFAT) and the indirect hemagglutination test (IHAT). The main disadvantage of the IHAT is the need to prepare sheep erythrocytes, whose availability is limited and they have a short duration once prepared. However, there are alternative tests, such as the direct agglutination test (DAT). Objective: To standardize the direct agglutination test for the diagnosis of Chagas disease. Materials and methods: Trypanosoma cruzi epimastigotes were prepared using two protocols, with and without trypsin treatment. The parasites were stained and optimal conditions for parasitic concentration and serum dilutions were determined. We evaluated the technique using sera from patients with Chagas disease, from healthy individuals and from individuals with other parasitic diseases. Results: The optimal parasitic concentration was 500 x 10 6 parasites/ml using stained parasites without trypsin treatment. The optimal serum dilutions were 1/25, 1/50 y 1/100 and the cut-off point was the 1/50 dilution. The diagnostic indices for the standardized technique were as follows: Sensitivity, 94.3% (95% CI: 79.5-99.0) and specificity, 96.3% (95% CI: 88.8-99.0), with positive and negative predictive values ?? of 91.7% (95% CI: 76.4-97.8) and 97.5% (95% CI: 90.4-99.6), respectively. Cross-reaction was observed only in three sera from individuals with visceral leishmaniasis. The results were compared with those obtained by IHA, ELISA, and IFA, and the concordance rate was 96% and the kappa index, 0.90 (95% CI: 0.81-0.99). Conclusion: The standardized direct agglutination test could be useful for immunodiagnosis of Chagas disease.

Objectives. To compare two extraction protocols of Trypanosoma cruzi DNA for use in DNA amplification of kinetoplast minicircles (kDNA) through the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). Materials and methods. Epimastigotes of T. cruzi were cultured in axenic conditions and masses from 1.5 to 100 x 106 parasites were obtained. DNA extraction was performed using two protocols: extraction with organic solvents (phenol/chloroform), and with resin (Chelex®100), from different parasitic sediments. Concentration and purity of DNA was determined by spectrophotometry, and integrity was assessed by agarose gel electrophoresis. Analysis of variance and comparisons of means were performed through Tukey’s test, using the Statistix 8.0 software. Results. Ten DNA extractions were done of each one of the different amounts of parasitic sediments. In the DNA extraction with Chelex®100 resin, a higher performance was obtained but a lower purity and integrity compared to the extraction with organic solvents. However, it allowed a product amplification of 330 bp of T. cruzi kDNA. Conclusions. Although the technique of Chelex®100 provided less purity and integrity of DNA, it allowed a successful amplification of kDNA by PCR, avoiding the use of laborious techniques and toxic organic solvents

Objetivos. Comparar dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi para su uso en la amplificación de ADN de minicírculos de kinetoplasto (ADNk) mediante la técnica de Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR). Materiales y métodos. Se cultivaron epimastigotas de T. cruzi en condiciones exénicas obteniéndose masas entre 1,5 hasta 100 x 10(6) parásitos. A partir de estas se procedió a la extracción de ADN mediante dos protocolos: extracción con solventes orgánicos (fenol/cloroformo), y empleo de resina (Chelex®100), a partir de los diferentes sedimentos parasitarios. La concentración y pureza del ADN se determinó por espectrofotometría y la integridad se evaluó mediante electroforesis en geles de agarosa. Se realizó el análisis de varianza y comparaciones de medias mediante la prueba de Tukey, utilizando el software Statistix 8.0. Resultados. Se realizaron diez extracciones de ADN de cada una de las diferentes cantidades de parásitos sedimentados. En la extracción de ADN con la resina Chelex®100 se obtuvo mayor rendimiento, pero menor pureza e integridad respecto a la extracción con solventes orgánicos. Sin embargo, permitió la amplificación del producto de 330 pb de ADNk de T. cruzi. Conclusiones. Aun cuando la técnica de Chelex®100 proporcionó menor pureza e integridad del ADN, permitió la amplificación con éxito de ADNk por PCR, evitando el uso de técnicas laboriosas y solventes orgánicos tóxicos

La Enfermedad de Chagas o Tripanosomiasis Americana está adquiriendo cada vez mayor importancia en la región amazónica de Venezuela, en la cual hasta ahora se carecía de información de la presencia de Trypanosoma cruzi en triatóminos, reservorios y humanos, particularmente para el estado Bolívar, el estado de mayor superficie del país, situado al sur del río Orinoco. Cuatro ejemplares de Triatoma maculata fueron recolectados en el peridomicilio de la comunidad de Maniapure, en el municipio Cedeño. En dos de los ejemplares se determinó la infección natural por Trypanosoma cruzi al examen al fresco de heces con presencia de tripomastigotos metacíclicos infectantes. Los parásitos fueron inoculados en modelos murinos y aislados en cultivos para su caracterización molecular. Se confirmó el diagnóstico de este parásito por pruebas parasitológicas y moleculares, caracterizándose los aislados como TcI. La importancia de estos hallazgos pioneros podría motivar el estudio de la transmisión vectorial de la Enfermedad de Chagas en este estado catalogado como no endémico.

American Trypanosomiasis or Chagas disease is becoming increasingly important in the Amazon region of Venezuela, in which up to now information was lacking of the presence of Trypanosoma cruzi in triatomins, reservoirs and humans, particularly for Bolivar State, the State with the largest territory of the country, located in the South of the Orinoco River. Four specimens of Triatoma maculata were collected in the peri-domiciliar area of the community of Maniapure, in the Cedeño municipality. Two of these individuals were found naturally infected with Trypanosoma cruzi upon examination of fresh stool with presence of metacyclic trypomastigotes. Parasites were inoculated in murine models and isolated for molecular characterization. Parasite isolates were molecularly characterized as TcI. The importance of these pioneering findings should motivate the study of the vector or oral transmission of Chagas disease in this non endemic State of Venezuela.