ABSTRACT: Enterococci have been used as sentinel organisms for monitoring antimicrobial resistance in food, humans, and other animals. In this sense, the present study evaluated the antimicrobial susceptibility profile and the presence of genes associated with resistance to erythromycin (msrC and ermB) and tetracycline [tet(M) and/or tet(L)] in enterococci isolated from raw sheep’s milk and cheeses (colonial, feta-, and pecorino-type) from South region of Brazil. A total of 156 enterococci were isolated from milk (n=80) and cheese (n=76) samples, identified by MALDI-TOF. Enterococcus faecalis (50.6%; n=79) was the most frequent species isolated from both samples. According to in vitro susceptibility tests, enterococci strains were not susceptible to the most commonly antimicrobial agents used in human and veterinary medicine. The frequency of MDR strains in enterococci isolated from milk (53.7%) was higher than those from cheese (24.2%). The tet(M) gene was the most commonly detected among tetracycline not-susceptible strains. The present study provided the first evidence of antimicrobial not-susceptible enterococci in raw sheep’s milk and cheeses in South Brazil. Drug-resistant strains, particularly those that are MDR, constitute a One Health issue. ABSTRACT food humans animals sense msrC ermB tetM tet M [tet(M andor or tetL L tet(L) sheeps sheep s colonial, colonial (colonial feta, feta , feta- pecorinotype pecorino type pecorino-type Brazil 15 n=80 n80 n 80 (n=80 n=76 n76 76 (n=76 samples MALDITOF. MALDITOF MALDI TOF. TOF MALDI-TOF 50.6% 506 50 6 (50.6% n=79 n79 79 tests medicine 53.7% 537 53 7 (53.7% 24.2%. 242 24.2% . 24 2 (24.2%) tet(M notsusceptible Drugresistant Drug resistant issue tet(L 1 n=8 n8 8 (n=8 n=7 n7 (n=7 50.6 5 (50.6 53.7 (53.7 24.2 (24.2% n= (n= 50. (50. 53. (53. 24. (24.2 (n (50 (53 (24. (5 (24 ( (2

RESUMO: Os enterococos têm sido usados como organismos sentinela para monitorar o padrão de suscetibilidade a antimicrobianos em alimentos, humanos e outros animais. Neste sentido, o presente estudo objetivou avaliar o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e os genes associados com a resistência a eritromicina (msrC and ermB) e à tetraciclina [tet(M) and/or tet(L)] em enterococos isolados de leite cru de ovelha e queijos (colonial, tipo-feta e tipo-pecorino) do Sul do Brasil. Um total de 156 enterococos foram isolados de leite (n=80) e queijo (n=76), identificados por MALDI-TOF. Enterococcus faecalis (50,6%; n=79) foi a espécie mais frequentemente isolada de ambas as amostras. De acordo com o teste de suscetibilidade in vitro, as cepas de enterococos não foram susceptíveis aos agentes antimicrobianos mais comumente utilizados na clínica humana e veterinária. A frequência de cepas de enterococos MDR isoladas do leite (53,7%) foi superior à do queijo (24,2%). O gene tet(M) foi o mais comumente detectado entre as cepas não susceptíveis à tetraciclina. O presente estudo fornece as primeiras evidências de enterococos não susceptíveis aos antimicrobianos em leite cru de ovelha e queijos no Sul do Brasil. Cepas resistentes a drogas, particularmente as que são MDR, representam uma preocupação de Saúde Única. RESUMO alimentos animais sentido msrC ermB tetM tet M [tet(M andor or tetL L tet(L) colonial, colonial (colonial tipofeta tipo feta tipopecorino pecorino tipo-pecorino Brasil 15 n=80 n80 n 80 (n=80 n=76, n76 n=76 , 76 (n=76) MALDITOF. MALDITOF MALDI TOF. TOF MALDI-TOF 50,6% 506 50 6 (50,6% n=79 n79 79 amostras vitro veterinária 53,7% 537 53 7 (53,7% 24,2%. 242 24,2% . 24 2 (24,2%) tet(M drogas Única tet(L 1 n=8 n8 8 (n=8 n7 n=7 (n=76 50,6 5 (50,6 53,7 (53,7 24,2 (24,2% n= (n= (n=7 50, (50, 53, (53, 24, (24,2 (n (50 (53 (24, (5 (24 ( (2

Resumo A liofilização é considerada uma das técnicas mais seguras para obtenção de estabilidade de cepas de cultura. Para este processo, podem ser utilizados crioprotetores, que são substâncias que protegem as estruturas celulares durante o período de congelamento, descongelamento e desidratação. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o desempenho da glicose, trealose e quitosana como crioprotetores para manutenção de cepas de Escherichia coli e Saccharomyces cerevisiae. Para tratamento estatístico, utilizou-se ANOVA e teste de Tukey com o software Bioestat, versão 5.3. Para Escherichia coli, a Trealose apresentou melhores resultados após a liofilização, porém nenhum dos tratamentos mostrou-se eficaz em prolongar a viabilidade até os 60 dias de armazenamento. Para Saccharomyces cerevisiae, todos os tratamentos apresentaram-se satisfatórios ao longo dos 60 dias avaliados.

Abstract Lyophilization is considered one of the safest techniques for acquiring stability of culture strains. For this process, cryoprotectants, which are substances that protect cell structures during the period of freezing, thawing and dehydration, may be used. The objective of the present work was to evaluate the performance of glucose, trehalose, and chitosan as cryoprotectants for Escherichia coli e Saccharomyces cerevisiae. For statistical treatment, ANOVA and Tukey’s test were used with the software Bioestat, version 5.3. For Escherichia coli Trealose presented better performance after lyophilization, but none of the treatments proved to be effective in prolonging viability up to 60 days of storage. For Saccharomyces cerevisiae all treatments were satisfactory throughout the 60 days evaluated.