RESUMO O objetivo da pesquisa foi avaliar in vitro e in vivo o efeito do dodecil sulfato de sódio (SDS) sobre o lentivírus caprino (LVC) no colostro e no leite, a fim de desenvolver um método prático e eficiente no bloqueio da via de transmissão lactogênica do vírus. No experimento in vitro, o colostro e o leite de cabras positivas foram tratados com SDS a 0,25%, 0,50% e 1,0%. Em seguida, as células somáticas do colostro e do leite foram obtidas e direcionadas ao cocultivo com células de membrana sinovial caprina (MSC). No teste in vivo, os cabritos foram alimentados com colostro e leite providos de cabras positivas para LVC, tratados com SDS nas mesmas concentrações usadas no teste in vitro. Os animais foram acompanhados pelos testes de reação em cadeia da polimerase nested (nPCR) e western blot (WB). Nos resultados in vitro, no colostro, observou-se que, em todas as concentrações de SDS, ocorreu uma atividade inibitória contra o LVC, sem a inativação. Em relação às células do leite, o SDS apresentou, nas concentrações de 0,25 e 0,5%, atividade inibitória contra o LVC, e na concentração de 1%, houve inativação viral. Nos testes in vivo, as três concentrações de SDS testadas não foram efetivas na inativação do LVC no colostro e no leite caprino, o que se comprovou pela soroconversão e pela presença de DNA proviral nos animais.

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate in vitro and in vivo the effect of sodium dodecyl sulfate (SDS) on the caprine lentivirus (CLV) in colostrum and milk. This was performed to develop a practical and efficient method of blocking the lactogenic transmission of the virus. In the in vitro experiment, colostrum and milk were treated with 0.25%; 0.50% and 1% SDS. Then, somatic cells of colostrum and milk were submitted to co-culture with caprine synovial membrane cells (CSM). In the in vivo test, goats were fed with colostrum and milk provided from CLV-positive goats treated with SDS in the same concentrations used in the in vitro experiment. Animals were tested by nested polymerase chain reaction (nPCR) and Western blot (WB) assays. In the in vitro experiment, inhibitory activity against CLV without inactivation occurred in colostrum with all SDS concentrations. However, concentrations of 0.25 and 0.5% SDS presented only inhibitory activity against CLV in milk cells, and 1% concentration provided inactivation of the virus. In the in vivo tests, none of the three concentrations of SDS was effective in inactivating LVC in colostrum or goat milk, which was confirmed by seroconversion and presence of proviral DNA in animals afterwards.

RESUMO O objetivo do presente estudo foi determinar a susceptibilidade dos folículos ovarianos, espermatozoides e embriões caprinos ao Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV). Para isto, foram analisados espermatozoides e folículos ovarianos pelas técnicas de imunohistoquímica e microscopia eletrônica de transmissão, antes e após protocolos de infecção in vitro com o CAEV. Foram submetidos à análise ultraestrutural, embriões caprinos produzidos in vivo, oriundos de cabras negativas e positivas para o CAEV. Nas amostras seminais, provenientes de animais tanto com infecção natural quanto dos artificialmente infectados, foi observada imunomarcação positiva dos espermatozoides, assim como alterações degenerativas na sua análise ultraestrutural. Já nas amostras de tecido ovariano, a imunomarcação foi mais discreta e identificada na região do estroma. No tocante à análise ultraestrutural, folículos e embriões se apresentaram íntegros. De acordo com esses resultados, pode-se concluir que os espermatozoides caprinos apresentaramse infectados, assinalando a susceptibilidade dessas células ao vírus, bem como a potencialidade do CAEV ser carreado ao cerne do oócito, originando embriões infectados.

ABSTRACT The aim of this study was to determine the susceptibility of goat ovarian follicles, spermatozoa and embryos to caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV). Spermatozoa and ovarian follicles were analyzed, before and after in vitro infection with CAEV, through immunohistochemistry and transmission electron microscopy techniques. Goat embryos, produced in vivo from infected and non-infected goats, were submitted to ultrastructural analysis. Immunohistochemical examination of seminal samples from goats naturally and artificially infected with CAEV revealed viral antigens in spermatozoa, while the ultrastructural analysis showed degenerative changes in these cells. Ovarian tissue samples presented a more discreet immunohistochemical positive reaction situated in the stroma region. Ultrastructural analysis revealed that the embryos and ovarian follicles were intact. These results indicate that the spermatozoa were infected, confirming the susceptibility of these cells to the virus, as well as the potential of CAEV entering the oocyte, giving rise to infected embryos.

RESUMO Inibidores da enzima transcriptase reversa e da protease foram avaliados quanto ao seu efeito inibitório na replicação do Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV) cepa CAEV Cork e do vírus Maedi-Visna (MVV) cepa K1514 cultivados em células fibroblásticas de caprinos. Os fármacos utilizados foram: lamivudina, didanosina, estavudina, zidovudina, efavirenz, atazanavir e lopinavir/ritonavir. A maior concentração utilizada para lamivudina, estavudina, zidovudina e efavirenz foi 500 ?M, para atazanavir foi 50 ?M e 5,0 ?M para lopinavir/r e didanosina. A atividade antiviral in vitro foi pesquisada por meio da avaliação da viabilidade celular através da redução do MTT e pela pesquisa de inibição dos efeitos citopáticos (CPE) dos vírus. A replicação dos vírus só não foi completamente bloqueada pelos inibidores de protease (IP) atazanavir e lopinavir/r enquanto os demais apresentaram eficácia antiviral significativa em diferentes concentrações. Os IP juntamente com o efavirenz, não mostraram atividade antiviral quando foram avaliados pela técnica de redução do MTT. Esses dados indicam que os fármacos inibidores da transcriptase reversa lamivudina, didanosina, estavudina e zidovudina são eficazes na inibição in vitro dos lentivírus de pequenos ruminantes.

ABSTRACT Inhibitors of the reverse transcriptase and protease enzymes were evaluated for their inhibitory effect on the replication of caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) strain CAEV Cork and of the Maedi-Visna virus (MVV) strain K1514 cultured in fibroblastic cells. The drugs lamivudine, didanosine, stavudine, zidovudine, efavirenz, atazanavir and lopinavir/ritonavir were used. The highest concentration used for lamivudine, stavudine, zidovudine and efavirenz was 500 ?M, for atazanavir it was 50 ?M and 5.0 ?M for lopinavir/r and didanosine. The in vitro antiviral activity was investigated by evaluating the cell viability by the MTT method and testing for inhibition of cytopathic effects (CPE) of the virus. The replication of the virus was not completely inhibited by the protease inhibitors atazanavir and lopinavir/r in the test for CPE, while the others drugs showed significant antiviral efficacy in different concentrations. The protease inhibitors together with the efavirenz did not show antiviral activity when they were assessed by the reduced MTT technique. These data showed that the reverse transcriptase inhibitor drugs lamivudine, didanosine, stavudine and zidovudine were effective in the in vitro inhibition of small ruminant lentivirus.

RESUMO Há muito tempo, diversas plantas têm sido utilizadas como medicinais. Além disso, inúmeras pesquisas são realizadas com o intuito de validar os seus princípios ativos. A Melia azedarach, que apresenta uma ampla utilização popular, já teve muitos princípios ativos isolados e várias ações farmacológicas testadas e comprovadas. Entre estas ações destacam-se a atividade antiviral, antimicrobiana, antimalarial, antiparasitária, inseticida, contraceptiva e antifoliculogênica e citotóxica devidamente comprovadas. Portanto, visando contribuir para um maior conhecimento a respeito desta planta, apresentamos um levantamento enfocando suas principais ações farmacológicas, biológicas e químicas. Evidenciando desta forma o seu potencial medicinal e fitoquímico, portanto sua utilização na medicina popular.

ABSTRACT Different plants have been used as medicinal plants for many years. Moreover, various studies have been carried out to validate their active principles. Melia azedarach is widely used popularly, and various of its active principles have been isolated and some of its pharmacological actions have been tested and proven. These proven aspects include its antiviral, antimicrobial, antimalarial, antiparasitic, insecticidal, contraceptive and antifolliculogenesis properties. Therefore, this survey was conducted in regard to the main pharmacological, biological and chemical actions of M. azedarach in order to add to the knowledge concerning this plant, evidencing its medicinal potential and phytochemistry in relation to the use of this plant in popular medicine.

ABSTRACT Maedi-Visna is a chronic and progressive disease of sheep. The etiologic agent Maedi-Visna Virus (MVV) is a lentivirus belonging to the Retroviridae family. The main manifestations of the inflammation induced by MVV are progressive weight loss, interstitial pneumonia, encephalitis, mastitis, arthritis, and lymphadenopathy. With the objective of identifying MaediVisna Virus and suggestive lung lesions of the disease, samples of blood and lung fragments of 223 sheep were collected in slaughterhouses of the metropolitan area of Fortaleza, State of Ceará, Brazil. The serum samples were submitted to the agar-gel immunodiffusion test (AGIDT) using a kit diagnosis for Maedi-Visna supplied by the Federal Rural University of Pernambuco. The lung fragments were submitted to the processing of classic histologic and immunohistochemistry. It was verified that 11 (4.93%) were positive for the IDGA. The lung microscopic lesions were characterized by thickening of the interalveolar septa, diffuse and multifocal infiltration of lymphocytes, atelectasis and lymphoid aggregates. Corcerning the immunohistochemistry technique the presence of a viric protein was verified in cells of the interalveolar septa. It was therefore concluded that the microscopic lesions found characterize a pneumonia interstitial and that the immunohistochemistry technique allowed for the demonstration of the viral agent naturally in lung fragments of infected sheep. Maedi Visna (MVV family loss encephalitis mastitis arthritis lymphadenopathy 22 Fortaleza Ceará Brazil agargel agar gel AGIDT (AGIDT Pernambuco 1 4.93% 493 4 93 (4.93% IDGA septa lymphocytes aggregates 2 4.93 49 9 (4.93 4.9 (4.9 4. (4. (4 (

RESUMO Maedi-Visna (MV) é uma doença crônica e progressiva de ovinos. O agente etiológico MaediVisna Vírus (MVV) é um lentivírus pertencente à família Retroviridae. As principais manifestações da inflamação induzida pelo MVV são perda progressiva de peso, pneumonia intersticial, encefalite, mastite, artrite e linfadenopatia. Com o objetivo de identificar o Maedi-Visna Vírus e lesões pulmonares sugestivas da doença, foram coletadas amostras de sangue e fragmentos pulmonares de 223 ovinos provenientes de abatedouros da região metropolitana de Fortaleza. Os soros foram submetidos ao teste de imunodifusão em gel de agarose (IDGA) utilizando-se um “kit” diagnóstico para Maedi-Visna fornecido pela Universidade Federal Rural de Pernambuco. Os fragmentos pulmonares foram submetidos ao processamento clássico de histologia e imunoistoquímica. Constatou-se que 11 amostras (4,93%) apresentavam-se positivas para o teste de IDGA. As lesões microscópicas pulmonares caracterizaram-se por espessamento dos septos interalveolares, infiltração linfocitária difusa e multifocal, além de áreas de atelectasia e agregados linfóides. No que diz respeito à técnica de imunoistoquímica verificou-se a presença da proteína vírica em células do septo interalveolar. Desta forma, concluiu-se que as lesões microscópicas encontradas caracterizam pneumonia intersticial e que a técnica de imunoistoquímica permitiu identificar o agente viral em fragmentos pulmonares de ovinos naturalmente infectados. Maedi Visna MV (MV (MVV Retroviridae peso encefalite mastite linfadenopatia 22 Fortaleza IDGA (IDGA utilizandose utilizando se kit “kit Pernambuco Constatouse Constatou 1 4,93% 493 4 93 (4,93% apresentavamse apresentavam caracterizaramse caracterizaram interalveolares multifocal linfóides verificouse verificou interalveolar forma concluiuse concluiu infectados 2 4,93 49 9 (4,93 4,9 (4,9 4, (4, (4 (