A produção de verotoxinas foi investigada em 1.127 isolamentos de Escherichia coli feitos a partir de 243 bovinos de leite, de água de consumo humano e animal e de amostras de leite de 60 propriedades da bacia leiteira de Pelotas, no período de dezembro de 1999 a dezembro de 2000, com o objetivo de determinar a prevalência de E. coli verotoxigênicas (VTEC) nas propriedades e no rebanho, de detectar a presença de sorotipos ligados a infecções humanas e de identificar, nas propriedades e na região de Pelotas, potenciais fatores de risco de infecção para os animais. A detecção das toxinas em sobrenadante de culturas de E. coli isoladas foi realizada através do ensaio de citotoxicidade em células Vero. VTEC foi isolada em 95% (57/60) das propriedades estudadas, em 49% (119/243) dos animais testados, em 5% (3/60) das amostras de água de consumo humano, em 8,35% (5/60) das amostras de água de consumo animal e em 5% (3/60) das amostras de leite. A prevalência de bovinos infectados em cada propriedade variou de 0 a 100%. Em 2,9% (7/243) dos animais testados, foram isoladas VTEC pertencentes aos sorogrupos O157, O91 e O112, que incluem cepas responsáveis por casos de colite hemorrágica e síndrome urêmica hemolítica em humanos. Fatores de risco de contaminação, como a precipitação pluviométrica, a temperatura, o tamanho da propriedade e a concentração de animais, apresentaram evidências de influenciarem a prevalência de VTEC nos animais. Estes resultados sugerem que o grupo VTEC está amplamente distribuído na bacia leiteira de Pelotas e inclui organismos pertencentes a sorogrupos patogênicos para humanos.

The production of verotoxin was investigated in 1127 Escherichia coli isolated from 243 dairy cattle, water for human and animal consumption, and milk samples from 60 dairy farms from Pelotas-Brazil, from December of 1999 to December of 2000, to determine the prevalence of verotoxigenic E. coli (VTEC) in farms, to detect the presence of serotypes involved in human infections and to identify potential risk factors for animal infection. Vero cell assay was used to detect toxins in culture supernatants from E. coli isolated. VTEC was isolated in 95% (57/60) from farms and in 49% (119/243) from cattle, 5% (3/60) from water of human consumption, in 8.35% (5/60) from water animal consumption and 5% (3/60) from milk samples. The prevalence of cattle infected for each farm ranged from 0 to 100%. VTEC belonging to serogroups O157, O91 and O112, which include strains responsible for cases of hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome in humans, were isolated from 7 (2.9%) out of 243 cattle. Risk factors for contamination, such as amount of rain, farm size and cattle number, influenced cattle prevalence rate. These results suggest that VTEC is widely distributed among dairy cattle in the region surveyed and includes organisms from serogroups pathogenic for humans.

A leptospirose canina é conhecida como enfermidade de Stuttgard desde 1898, sendo os cães, depois dos roedores, considerados como a segunda principal fonte de infecção para o homem. O isolamento de um sorovar patogênico da urina de um cão, laboratorial e clinicamente identificado como tendo leptospirose, e sua utilização para testar amostras de soro de casos de leptospirose humana e canina, evidenciou a sua importância no ecossistema da região sul do Brasil. Os resultados do teste de soroaglutinação microscópica indicaram que 100% das amostras de soro humano de 12 pacientes do banco de soro de 2001 do Centro de Controle de Zoonoses, que haviam reagido com títulos que variaram de 25 a 3.200 para o sorovar canicola, e 72% das amostras de 105 soros caninos do mesmo banco de soro, também reagiram contra o novo isolado. O título médio e mediana dos soros humanos testados com a bateria de antígenos recomendada pela OMS, foi respectivamente 630 e 100, ao passo que os testados com o isolado foi de 1.823 e 400. Nos soros caninos, os títulos foram respectivamente de 347 e 100 para a bateria e de 1.088 e 200 para o isolado.

Canine leptospirosis has been known as Stuttgart disease since 1898, and dogs are considered to be the second principal source of infection in man. The isolation of a pathogenic serovar from dog urine that was diagnosed clinically and laboratorial as having leptospirosis and its utilization to test serological samples of human and canine cases of leptospirosis, has demonstrated its importance to the ecosystem of the southern region of Brazil. The results of the serological microscopic agglutination test indicated that 100% of human serum samples from 12 patients from the serum bank of 2001 at the Center for Control of Zoonoses, that had titers between 25 and 3,200 with the canicola serovar, and 72% of 105 canine serum samples from the same serum bank, also reacted with the new isolate. The mean and median titers of the human serum samples tested with the battery of antigens recommended by WHO was 630 and 100 respectively, and when tested with the isolate it was 1,823 and 400. In the dog sera, the values were respectively 347 and 100 with the battery, and 1,088 and 200 with the isolate.

Foi investigado um surto de intoxicação alimentar ocorrido em um restaurante institucional. Cinqüenta e seis pessoas, de um total de 88, foram acometidas de vômitos, diarréia, dores abdominais, prostração, febre e cefaléia após ingerirem uma refeição composta de sanduíche de galinha, refresco de laranja e pudim de leite. Os sintomas apareceram entre uma hora e meia e 12 horas após a ingestão da refeição e duraram 24 a 36 horas. As taxas de ataque específico foram de 64% para o sanduíche de galinha, de 61% para o refresco de laranja e de 60% para o pudim. A contagem de Staphylococcus aureus secretores de enterotoxina A no sanduíche de galinha foi de 2 X 10(8)UFC.g-1. Estes resultados, juntamente com os obtidos nos questionários aplicados às pessoas que ficaram doentes, forneceram provas circunstanciais que permitiram concluir que ocorreu uma intoxicação alimentar provocada pelo sanduíche de galinha contaminado com enterotoxina A de Staphylococcus aureus.

An outbreak of foodbome intoxication in an institutional restaurant was investigated. Fifty-six people, out of 88, had vomiting, diarrhea, abdominal pain, prostration, fever and headache after eating a meal that included chicken sandwich, orange drink and milk pudding. Symptoms appeared between one and a halfhour and 12 hours after eating the meal and lasted from 24 to 36 hours. Specifíc attack rates were 64% for chicken sandwich, 61% for orange drink and 60% for milk pudding. Enterotoxin A secreting Staphylococcus aureus count in chicken Sandwich was 2 X 10(8)CFU.g-1. Results of the questionnaire appleied to patrons, and results of bacteriological analysis of food items, provided circunstantial evidence to conclude that an outbreak of foodbome intoxication caused by the chicken sandwich contaminated with Staphylococcus aureus enterotoxin A has ocurred.

O comércio de alimentos prontos para o consumo por vendedores ambulantes pode constituir um alto risco para a saúde dos consumidores, visto que as pessoas envolvidas nesta atividade geralmente não tem preparo para a manipulação correta de alimentos. Neste trabalho foram investigadas as condições de preparo e a qualidade higiênico-sanitária de lanches comercializados por vendedores ambulantes em Pelotas. Foram colhidas de 60 estabelecimentos, uma amostra de água, uma da superfície de manuseio e um lanche (cachorro-quente). Nos cachorros-quentes foram realizadas contagens de bactérias aeróbias mesófilas (BAM), Staphylococcus coagulase positiva (STA), coliformes totais (CT), coliformes a 45ºC (CF), e investigada a presença de Salmonella sp. Na água e superfície foram realizadas contagens de BAM, CT e CF. Entre as 60 amostras de cachorros-quentes analisadas, 53%, 48%, 37% e 25% estavam fora do padrão para CT, BAM, STA e CF, respectivamente. Em nenhuma amostra foi detectada a presença de Salmonella. As amostras de água apresentaram apenas 3 (5%) amostras fora do padrão para BAM, e 27% e 23% fora do padrão para CT e CF, respectivamente. Em relação às superfícies, 70% foram consideradas insatisfatórias para contagem de BAM e 68% e 67% para CT e CF. Os resultados sugerem que as condições higiênicas existentes em muitos estabelecimentos não são adequadas, o que se reflete em uma proporção relativamente alta de lanches com qualidade microbiológica insatisfatória para o consumo.

Street-vending of ready-to-eat (RTE) foods can be a risk to the consumers health, since people usually involved in this activity does not have proper knowledge in safe handling of foods. Despite this, only a few studies have been made on the microbiological quality of these foods and places where they are prepared. In this paper we report on the higienic-sanitary quality of hot-dogs sold by street-vendors from Pelotas,RS. Samples of hot-dogs, water and work surfaces, were collected from 60 street-vending places and taken to the laboratory for analysis. Counts of aerobic mesophilic bacteria (TPC), Staphylococcus coagulase positive (SCP), total coliforms (TC) and coliforms at 45ºC (FC) were made on samples of hot-dogs. SPC, TC and FC counts were made on the water and surface samples. Among the 60 samples of hot-dogs 53%, 48%, 37% and 25% were found unsatisfactory for TC, TPC, STA and FC, respectively. Only 3 (5%) water samples were found unsatisfactory according to the TPC standard used, and 27% and 23% did not read the standards for TC and FC. Regarding the surfaces, 70% were found unsatisfactory for TPC, 68% for TC and 67% for FC. Salmonella sp was not detected in any of the samples tested. These results suggest that the hygiene practices of many food street-vending places are not adequate, resulting in a high proportion of read-to-eat RTE) foods with microbiological quality unsatisfactory for consumption.

A leptospirose constitui um problema sanitário de importância mundial. Esta doença caracteriza-se por apresentar sintomas muito parecidos com os de outras doenças como a dengue e a gripe e, clinicamente é difícil de distingui-las. Técnicas de diagnóstico da leptospirose atualmente disponíveis apresentam baixa sensibilidade e ou especificidade. Por isso, tem havido um grande esforço no sentido de desenvolver testes rápidos e eficientes, baseados em técnicas de biologia molecular. Este trabalho objetivou a avaliação e otimização do Nested-PCR, para o diagnóstico de leptospirose. Para isso foi desenhado um par de primers que amplifica uma região de 264 pb do gene LipL32. A sensibilidade e especificidade do teste foram avaliadas utilizando 7 sorovares saprófitas e 35 sorovares patogênicos. Este PCR mostrou-se específico para leptospiras patogênicas, porém a sensibilidade não foi muito alta. Com o objetivo de melhorar a sensibilidade do teste , foi desenhado outro par de primers que amplifica uma região de 183 pb do gene LipL32, interna a de 264 pb para a realização do Nested-PCR. Nesta reação foi utilizado como DNA molde o produto da primeira amplificação. O Nested-PCR mostrou-se mais sensível que o PCR normal, pois foi capaz de detectar um baixo número de células bacterianas.

Leptospirosis is a worldwide sanitary problem. Its clinical signs resemble that of other diseases like Dengue and Flu, and it is difficult to distinguish between them. Currently available diagnostic methods shown low sensitivity and specificity. Efforts have been made to develop simpler, faster and more efficient diagnostic methods. The aim of this work was to evaluate and optimize a Nested-PCR method for diagnosis of leptospirosis. Primers were designed to amplify a 264 bp region within the LipL32 gene. The sensitivity and specificity of the assay was evaluated using seven saprophytic serovars and 35 pathogenic serovars. This technique showed to be very specific for pathogenic serovars, however it lacked sensitivity. In order to enhance the sensitivity, another primer pair was designed which amplify a 183 bp region within the 264 bp region in lipL32 gene, and used in a Nested-PCR assay. This approach was much more sensitive than traditional PCR.

Na leptospirose, o teste de soroaglutinação microscópica (MAT) é a base do diagnóstico sorológico, sendo amplamente usado. Em nosso estudo, o MAT foi aplicado para avaliar a influência da temperatura, tempo de incubação, densidade do antígeno, a idade da cultura na aglutinabilidade das leptospiras e a interferência desses fatores na interpretação do diagnóstico. Três amostras de soro com títulos de 100, 800 e 25600 para o sorovar tande (isolado local), do sorogrupo canicola foram utilizadas com combinações diferentes entre os quatro fatores. Houve uma significante relação entre todos os fatores principalmente a densidade do antígeno e a idade da cultura.

In leptospirosis, the Microscopic Agglutination Test (MAT) is the basis of serological diagnosis and the most widely used. In our study, the MAT was applied to evaluate the influence of temperature, incubation time, antigen density and age of the culture in the agglutinability of Leptospires and the interference of these factors in diagnosis. Three serum samples with titers of 100, 800 and 25.600 to the serovar tande (local isolate) of canicola serogroup were used with different combinations among the four factors. There was a significant relation among all factors, specially between the antigen density and age of the culture.

Foram obtidos dois hibridomas secretores de anticorpos monoclonais (MAbs) que reagem com uma lipoproteína (LipL32) da membrana externa de leptospiras patogênicas. Para a produção dos hibridomas, células do baço de camundongos BALB/c, imunizados com LipL32 recombinante (rLipL32), foram fusionadas com células SP2/O-Ag14, selecionadas em meio HAT e testadas em ELISA indireto. Um dos MAbs secretados pelos hibridomas é do isotipo IgG2b e o outro do isotipo IgM. A especificidade dos MAbs foi confirmada em ELISA indireto e immunoblotting usando rLipL32 purificada, Escherichia coli (E. coli) expressando LipL32 e sorovares patogênicos e saprófitas. Os dois MAbs reagiram com a maioria dos sorovares patogênicos e não reagiram com sorovares saprófitas. Os MAbs possuem potencial para uso em testes de diagnóstico de leptospirose.

Two hybridomas secreting monoclonal antibodies (MAbs) that react with a lipoprotein (LipL32) of the outer membrane of pathogenic Leptospira were obtained. For hybridoma production, spleen cells from BALB/c mice imunized with recombinant LipL32 (rLipL32) were fused to SP2/O-Ag14 cells, selected in HAT medium and screened in an indirect ELISA. One MAb produced was of the IgG2b isotype and the other was an IgM. MAbs specificity was confirmed by indirect ELISA and immunoblotting using purified rLipL32 and whole-cell antigen preparations from Escherichia coli (E. coli) expressing LipL32 and from pathogenic and non-pathogenic serovars. Both Mabs reacted with most of the pathogenic serovars tested and none reacted with non-pathogenic Leptospira. The MAbs described have potential for use in diagnostic tests for leptospirosis.

Realizou-se um estudo soroepidemiológico com trabalhadores do Saneamento Ambiental de Pelotas-RS para estimar a freqüência e investigar fatores de risco associados à infecção por leptospira. A partir do resultado sorológico, selecionaram-se 2 grupos de trabalhadores, divididos em um grupo de 34 indivíduos com sorologia positiva, casos; e um grupo de 115 com sorologia negativa, controles. Através de um questionário padronizado, coletaram-se informações sobre variáveis demográficas, ocupacionais, comportamentais e ambientais nos locais de trabalho e de moradia dos indivíduos. A freqüência de aglutininas anti-leptospira foi igual a 10,36% (n=386). Os fatores de risco detectados foram: local geográfico de trabalho; presença de esgotos a céu aberto, criação de suínos e presença de 3-4 animais no local de moradia e, como fator de proteção, a presença de sanitário interno à moradia. Essas informações são úteis para prevenir a leptospirose nessa categoria de trabalhadores.

A seroepidemiological survey was realized with environmental sanitation workers of Pelotas-RS city, Brazil, to examine the frequency and to investigate risk factors for leptospira infection. Two groups of workers were selected due to serological status, divided into groups of 34 subjects with positive serology, cases; and a group of 115 subjects with negative serology, the later one being the control group. Demografics variables, occupational, behaviors and environmental in work places and home were investigated by a questionaire. The frequency of anti-leptospiral agglutinins was 10.36% (n=386). The risk factors detected were: geografic place of work, the presence of oppened drain, swine creation and the presence of 3-4 animals at home, and the protection factor in the presence of internal sanitation of residence. This information may be useful to prevent leptospirosis in environmental sanitation workers.

Durante o ano de 1995, usando a técnica de soroaglutinação microscópica com antígenos vivos, para diagnóstico de leptospirose, foram examinadas 425 amostras sangüíneas provenientes de cães da área de influência do Centro de Controle de Zoonoses de Pelotas. Foram detectadas 148 (34,8%) amostras positivas, com título igual ou maior a 1:100, para os seguintes sorovares; L. canicola (58,1%), L. icterohaemorrhagiae (20,9%), L. copenhageni (11,4%), L. grippotyphosa e L. castellonis (2,7%), L andamana, L. autumnalis e L. pyrogenes (1,4%). Houve maior ocorrência da infecção nos meses de março, agosto, setembro, outubro e novembro, coincidindo com o registro de temperaturas mais elevadas e maiores precipitações pluviométricas, um mês antes de cada surto, caracterizando que estes dois fatores são importantes para a manutenção das leptospiras a nível ambiental.

During the year of 1995 we examined 425 serum samples from dogs in the area of influence of the Center for Zoonosis Control, performing the microscopic agglutination test for diagnosis of leptospirosis. Of these, 148 (34.8%) gave positive reactions with titers equal or higher than 1:100, for the following serovars: L. canicola (58.1%), L. icterohaemorrhagiae (20.9%), L. copenhageni (11.4%), L. grippotiphosa and L. castellonis (2.7%) L. andamana and L. autumnalis and L. pyrogenes with (1.4%). The prevalence of infection was higher in March, August, September, October and November, which coincided, with the higher temperatures and pluvial precipitation observed the month before the outbreaks. This observation stress the importance of these two factors for the survival of leptospira in the environment.

A pesquisa de aglutininas anti-Leptospira, pela técnica de soroaglutinação microscópica, em soros de trabalhadores dos serviços de águas, bueiros e galerias, esgotos, coleta de lixo e limpeza pública, do Município de Pelotas, RS, Brasil, revelou 10,4% de reagentes a um ou mais sorovares; não houve diferenças significantes entre as proporções de reagentes de cada um dos setores de trabalho. Foram identificados 12 sorovares diferentes; castelonis e australis, apesar de mais freqüentes, não apresentaram diferenças estatisticamente significantes com os demais. Constatou-se que 86,9% das amostras apresentavam títulos aglutinantes compreendidos entre 100 e 400; as proporções de soros com títulos iguais a 100 e 400 foram superiores às dos títulos 800, 1.600 e 3.200 (p < 0,05).

Sera from 386 environmental sanitation workers, concerned with water supply, drains and drainage galleries, sewers, garbage collection and road sweepers, were examined for leptospiral agglutinins by the microscopic agglutination test. Altogether 40 of the 386 workers (10.4%) were positive to one or more serovars; however, the difference in seropositivity between the professional categories was not significant (p > 0.05). Twelve serovars were recorded among the seropositive workers with predominance of L. castelonis and L. australis; but the difference between the serovars was not statistically significant (p > 0.05). Of the seropositive workers, 86.9% had agglutination titres > 100 and < 400; the rates for titres 100 and 400 were higher than 800, 1,600 and 3,200 (p < 0.05).

Sera from 386 environmental sanitation workers, concerned with water supply, drains and drainage galleries, sewers, garbage collection and road sweepers, were examined for leptospiral agglutinins by the microscopic agglutination test. Altogether 40 of the 386 workers (10.4%) were positive to one or more serovars; however, the difference in seropositivity between the professional categories was not significant (p > 0.05). Twelve serovars were recorded among the seropositive workers with predominance of L. castelonis and L. australis; but the difference between the serovars was not statistically significant (p > 0.05). Of the seropositive workers, 86.9% had agglutination titres > 100 and < 400; the rates for titres 100 and 400 were higher than 800, 1,600 and 3,200 (p < 0.05).

A pesquisa de aglutininas anti-Leptospira, pela técnica de soroaglutinação microscópica, em soros de trabalhadores dos serviços de águas, bueiros e galerias, esgotos, coleta de lixo e limpeza pública, do Município de Pelotas, RS, Brasil, revelou 10,4% de reagentes a um ou mais sorovares; não houve diferenças significantes entre as proporções de reagentes de cada um dos setores de trabalho. Foram identificados 12 sorovares diferentes; castelonis e australis, apesar de mais freqüentes, não apresentaram diferenças estatisticamente significantes com os demais. Constatou-se que 86,9% das amostras apresentavam títulos aglutinantes compreendidos entre 100 e 400; as proporções de soros com títulos iguais a 100 e 400 foram superiores às dos títulos 800, 1.600 e 3.200 (p < 0,05).

A leptospirose é uma zoonose causada por 'ima bactéria que pertence ao gênero Leptospira e a espécie L. interrogans a qual apresenta mais de 200 sorovares diferentes. A principal fonte de infecção desta doença são os roedores peri-domésticos, tais como o rato e o camundongo. Dentre os animais domésticos, os suínos são os principais reservatórios de leptospiras. Esses animais eliminam o agente através da urina, contaminando a água, o solo e os alimentos, principais vias de transmissão da doença. O sêmen de touros infectados também pode transmitir o agente, através da monta natural e da inseminação artificial. A suscetibilidade dos bovinos varia de acordo com alguns fatores, tais como idade, estado fisiológico, utilização e densidade populacional. No Continente Americano, os sorovares predominantes nesta espécie são hardjo, pomona e grippotyphosa. A prevalência varia considerável mente entre rebanhos, entre regiões e entre países.

Leptospirosis is a zoonosis caused by a bacteria belonging to genus Leptospira and to the spicies L. interrogans which has more than 200 different serovars. The principal infection source of this disease are rodents, such as the rat and the mouse. Among domestic animals, swine are the principal reservoirs of leptospires. These animals eliminate the bacteria through the urine infecting water, soil and foods, which are the principal ways of transmission of the disease. The semen of infected bulls also can transmit the bacterium through eigther natural service or artificial insemination. The suscetibility of the cattle vary according to several factors such as age, physiological state, utilization and populational density. In the American Continent, the predominant serovars of this species are hardjo, pomona and grippotyphosa. The prevalence varies among herds, regions and countries.