Resumen Desde su fundación, la Universidad EAN es pionera en ofrecer educación enfocada a fortalecer competencias emprendedoras. Por este motivo, es siempre un desafío diseñar programas enfocados en potenciar emprendedores. Este artículo enmarca el acompañamiento emprendedor dentro de unas tendencias globales y necesarias en el ecosistema colombiano, tales como: el pensamiento en diseño aplicado en los negocios, el emprendimiento ágil, los programas de aceleración, y la innovación a partir de la investigación. Lo anterior, se ha convertido en buenas prácticas para la incubación de empresas desde las universidades (Bhatli, 2014). De esta forma, se analiza la evolución, procesos y resultados de los programas de acompañamiento desarrollados en la Universidad EAN: Modelo IN3 -Incuba-Innova-Integra-, el Punto de Atención al Emprendedor (PAE) y su Fondo de Capital Semilla; y finalmente, el programa actual llamado EAN Impacta.

Resumo Desde sua fundação, a Universidade EAN é pioneira em oferecer educação enfocada ao fortalecimento de competências empreendedoras; por este motivo é sempre um desafio desenhar programas enfocados em potencializar empreendedores. Este artigo enquadra o acompanhamento empreendedor dentro de umas tendencias globais e necessárias dentro do ecossistema colombiano, como: o pensamento em desenho aplicado nos negocios, o empreendimento ágil, os programas de aceleração e a inovação a partir da investigação, os quais têm se convertido em boas práticas para a incubação de empresas desde as universidades (Bhatli, 2014). A partir do anterior, analisa-se a evolução, os processos e os resultados dos programas de acompanhamento desenvolvidos na Universidade EAN: Modelo IN3 (Incuba-Inova-Integra), o Ponto de Atenção ao Empreendedor (PAE) e seu Fundo de Capital Semente, e, finalmente o programa atual chamado EAN Impacta. Estes programas realizam-se para oferecer aos empreendedores Eanistas elementos de apoio para levar á realidade suas inciativas empresarias. A análise comega desde 2011 com o modelo IN3 até o modelo atual EAN Impacta, fazendo ênfase em como o primeiro estabelece as bases para o desenvolvimento do modelo atual e como este se potencializa com as novas tendências globais em incubação empresarial.

Abstract Since its foundation, Universidad EAN has been a pioneer in offering formation and training to foster entrepreneurial competencies; for this reason, it has always been a permanent challenge to design programs focusing on the formation of entrepreneurs. This article describes the entrepreneurs’ tutoring and follow- up made following necessary global trends in Colombian ecosystems, such as applied design thought on business, agile entrepreneurship, accelerating programs and innovation resulting from research, which have become the best practices of company incubation for universities (Bhatli, 2014). From this start, we analysed the evolution, processes and outcomes of Universidad EAN tutoring and follow- up programs: IN3 Model (Incubate- Innovate- Integrate), the Entrepreneur Assistance Office ("PAE" in Spanish) and the Seed Capital Funding, as well as the current program named EAN Impact.

Resumé L’Université EAN est, depuis sa fondation, pionniére en Colombie en termes d’offre de cursus éducatifs dédiés á l’amélioration des compétences entrepreneuriales cherchant de maniére permanente á créer des programmes destinés á renforcer les compétences des entrepreneurs. Cet article offre une synthése du type d’accompagnement entrepreneurial offert par l’Université EAN et les tendances globales de l’écosystéme colombien tels que : la création entrepreneuriale, l’entrepreneuriat agile, les programmes d’amélioration et d’innovation fondés sur la recherche universitaire se convertissant en pratiques d’incubation d’entreprises (Bhatli, 2014). Cet article analysera l’évolution, les processus et les résultats des programmes d’accompagnement mis en place par l’Université EAN : le Modéle IN3 (Incubation-Innovation-Intégration), le Service d’Accompagnement á l’Entrepreneur (SAE) et son Fond de Capital Risque ainsi que le programme EAN Impact.

The aims of the study were to determine the prevalence of antibodies anti-E canis and the molecular detection of E. canis as well as to determine the species and level of tick infestations in dogs from a rural community in Aragua state, Venezuela. Blood samples from 110 domestic dogs were obtained and analyzed by Indirect Immunofluorescence (IFI) and Nested Polymerase Chain Reaction (PCR). The seroprevalence was 77.3% and the molecular detection was 45.2%. The percentage of dogs infested with ticks was 69%, mostly with Rhipicephalus sanguineus. The results showed that 80% (68/85) of seropositive dogs and 32% (8/25) of seronegative dogs were tick infested (OR=8.5, 95%, CI 3.19 to 22.6; p<0.00001)

Los objetivos de esta investigación fueron determinar la prevalencia de anticuerpos anti-E. canis y la detección molecular de E. canis, así como determinar el nivel de infestación y especies de garrapatas en perros de una comunidad rural del estado Aragua, Venezuela. Se recolectaron muestras sanguíneas de 110 perros domésticos y fueron evaluadas por inmunofluorescencia indirecta (IFI) y por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa anidada (PCR). La seroprevalencia resultó en 77.3% y la detección molecular fue de 45.2%. El porcentaje de perros infestados por garrapatas fue de 69%, identificándose mayormente a Rhipicephalus sanguineus. Se determinó que 80% (68/85) de los perros seropositivos y el 32% (8/25) de los seronegativos estaban infestados por garrapatas (OR=8.5, IC 95%: 3.19-22.6; p<0.00001)

Algunos microorganismos patógenos aumentan su proliferación al cultivarlos en presencia de insulina, por lo tanto, la hiperinsulinemia podría influir sobre las infecciones de pacientes diabéticos. En este trabajo se determinó el efecto de la insulina sobre el crecimiento y expresión de proteínas celulares de Klebsiella pneumoniae aislada de pie diabético. Las bacterias se cultivaron en medio Luria-Bertani en presencia o en ausencia de insulina humana. El crecimiento se determinó midiendo la DO600 de los cultivos hasta alcanzar la fase estacionaria; se colectaron bacterias a diferentes tiempos para extraer sus proteínas celulares (extractos) y analizarlas mediante electroforesis en geles de poliacrilamida-SDS y densitometría cuantitativa. En presencia de insulina (0,5 U/mL) el crecimiento bacteriano se incrementó en 40% respecto al control en las fases logarítmica temprana y media. Todos los perfiles electroforéticos de los extractos mostraron 27 bandas polipeptídicas (rango 150-9 kDa). La expresión del 41% de estas bandas aumentó en los extractos de las bacterias cultivadas con insulina, respecto a los controles, mientras que la expresión del 22% disminuyó. Los resultados indicaron que la insulina incrementó la proliferación y moduló la expresión genética de K. pneumoniae, sugiriendo que la hiperinsulinemia podría favorecer la severidad de infecciones en pacientes diabéticos.

Some pathogens increase their proliferation when cultured in the presence of insulin, therefore, hyperinsulinemia may influence diabetic infections. In this work we determine the effect of insulin on growth and cellular protein expression from Klebsiella pneumoniae isolated from diabetic foot infections. Bacteria were grown in Luria-Bertani medium in the presence and absence of human insulin. Growth was determined by measuring OD600 of the cultures until reached the stationary phase. In order to extract cellular proteins, bacteria were collected at different times to obtain extracts that were analyzed by electrophoresis on SDS-polyacrylamide gels and quantitative densitometry. In the presence of insulin (0.5 U/mL) bacterial growth increased by 40% compared with control in the early and middle logarithmic phase. All electrophoretic profiles of the extracts showed 27 polypeptide bands (range 150-9 kDa). The expression of 41% of these bands increased in extracts from bacteria grown with insulin when compared with controls, whereas protein expression decreased by 22%. The results indicated that insulin increased K. pneumoniae proliferation and modulated gene expression, suggesting that hyperinsulinemia could contribute to the severity of the infections in diabetic patients.

Objetives. To analyze the involvement of methyl guanosine triphosphate cap (5’cap) and the start site of the genomic RNA of Dengue virus serotype 2 (DENV-2) American genotype in translation, using a cell-free system prepared from human placenta. Materials and methods. The recombinant plasmid pTZ18R-D2 was prepared containing DNA encoding the 5’UTR and the first 201 nucleotides of the viral capsid. This plasmid was used to transcribe the corresponding RNA (RNA-D2) without the 5’ cap. The RNA-D2 was translated in a system consisting of the postmitochondrial fraction (S-30) from human placenta and the incorporation of [14C] aminoacids in the presence of RNA-D2 and in its absence (control) was evaluated. Seven antisense oligonucleotides (OAs1-7) directed against sequences of the SLA, SLB and CHP structures of RNA-D2 were designed and the effect thereof on RNA-D2 translation was analyzed. Results.The RNA-D2 produced a significant increase (p<0.001) in the incorporation of [14C] amino acids, with 75% stimulation of translational activity compared to the control. Analysis of the translation products showed peak incorporation corresponding to peptides with apparent molecular weight close to the expected (7.746 kDa).The OAs5, complementary to a sequence of SLB structure of RNA-D2, completely inhibited translation. Conclusions. The RNA-D2 was translated specifically and efficiently under conditions similar to human intracellular conditions, by an alternative 5’ cap-independent mechanism, which would involve the SLB structure. This mechanism might be seen as an aim in the development of antisense therapies to inhibit virus replication.

Objetivos. Analizar la participación de la caperuza metil-guanosín-trifosfato (5´cap) y de la región inicial del ARN genómico del virus dengue serotipo 2 (DENV-2) genotipo Americano en la traducción, utilizando un sistema libre de células obtenido de placenta humana. Materiales y métodos. Se preparó el plásmido recombinante pTZ18R-D2 conteniendo el ADN que codifica la 5´UTR y los primeros 201 nucleótidos de la cápside viral. Este plásmido se utilizó para transcribir el ARN correspondiente (ARN-D2), sin la 5´cap. El ARN-D2 fue traducido en un sistema constituido por la fracción posmitocondrial (S-30) de placenta humana y se evaluó la incorporación de [ 14C] aminoácidos en presencia del ARN-D2 y en su ausencia (control). Se diseñaron siete oligonucleótidos antisentido (OAs1-7) dirigidos contra secuencias de las estructuras SLA, SLB y cHP del ARN-D2 y se analizó el efecto de los mismos sobre la traducción ARN-D2. Resultados. El ARN-D2 produjo un incremento significativo (p<0,001) en la incorporación de [14C] aminoácidos, con estimulación del 75% de la actividad traduccional respecto al control. El análisis de los productos de traducción mostró un pico de incorporación correspondiente a péptidos con peso molecular aparente cercano al esperado (7,746 kDa). El OAs5, complementario a una secuencia de la estructura SLB del ARN-D2, inhibió completamente la traducción. Conclusiones. El ARN-D2 fue traducido de manera específica y eficiente, bajo condiciones semejantes a las intracelulares en humanos, por un mecanismo alternativo independiente de la 5´cap, que involucraría a la estructura SLB. Este mecanismo podría considerarse como blanco en el desarrollo de terapias antisentido para inhibir la reproducción del virus.

Objetives. To analyze the involvement of methyl guanosine triphosphate cap (5’cap) and the start site of the genomic RNA of Dengue virus serotype 2 (DENV-2) American genotype in translation, using a cell-free system prepared from human placenta. Materials and methods. The recombinant plasmid pTZ18R-D2 was prepared containing DNA encoding the 5’UTR and the first 201 nucleotides of the viral capsid. This plasmid was used to transcribe the corresponding RNA (RNA-D2) without the 5’ cap. The RNA-D2 was translated in a system consisting of the postmitochondrial fraction (S-30) from human placenta and the incorporation of [14C] aminoacids in the presence of RNA-D2 and in its absence (control) was evaluated. Seven antisense oligonucleotides (OAs1-7) directed against sequences of the SLA, SLB and CHP structures of RNA-D2 were designed and the effect thereof on RNA-D2 translation was analyzed. Results.The RNA-D2 produced a significant increase (p<0.001) in the incorporation of [14C] amino acids, with 75% stimulation of translational activity compared to the control. Analysis of the translation products showed peak incorporation corresponding to peptides with apparent molecular weight close to the expected (7.746 kDa).The OAs5, complementary to a sequence of SLB structure of RNA-D2, completely inhibited translation. Conclusions. The RNA-D2 was translated specifically and efficiently under conditions similar to human intracellular conditions, by an alternative 5’ cap-independent mechanism, which would involve the SLB structure. This mechanism might be seen as an aim in the development of antisense therapies to inhibit virus replication.

Objetivos. Analizar la participación de la caperuza metil-guanosín-trifosfato (5´cap) y de la región inicial del ARN genómico del virus dengue serotipo 2 (DENV-2) genotipo Americano en la traducción, utilizando un sistema libre de células obtenido de placenta humana. Materiales y métodos. Se preparó el plásmido recombinante pTZ18R-D2 conteniendo el ADN que codifica la 5´UTR y los primeros 201 nucleótidos de la cápside viral. Este plásmido se utilizó para transcribir el ARN correspondiente (ARN-D2), sin la 5´cap. El ARN-D2 fue traducido en un sistema constituido por la fracción posmitocondrial (S-30) de placenta humana y se evaluó la incorporación de [ 14C] aminoácidos en presencia del ARN-D2 y en su ausencia (control). Se diseñaron siete oligonucleótidos antisentido (OAs1-7) dirigidos contra secuencias de las estructuras SLA, SLB y cHP del ARN-D2 y se analizó el efecto de los mismos sobre la traducción ARN-D2. Resultados. El ARN-D2 produjo un incremento significativo (p<0,001) en la incorporación de [14C] aminoácidos, con estimulación del 75% de la actividad traduccional respecto al control. El análisis de los productos de traducción mostró un pico de incorporación correspondiente a péptidos con peso molecular aparente cercano al esperado (7,746 kDa). El OAs5, complementario a una secuencia de la estructura SLB del ARN-D2, inhibió completamente la traducción. Conclusiones. El ARN-D2 fue traducido de manera específica y eficiente, bajo condiciones semejantes a las intracelulares en humanos, por un mecanismo alternativo independiente de la 5´cap, que involucraría a la estructura SLB. Este mecanismo podría considerarse como blanco en el desarrollo de terapias antisentido para inhibir la reproducción del virus.

Las enzimas ribonucleasas (RNasas) han sido utilizadas con efectividad en el tratamiento de ciertos tipos de cáncer y pueden tener otras propiedades aplicables en biotecnología. Con el objetivo de identificar la presencia de actividad RNasa en el látex de las plantas tropicales Calotropis procera y Pedilanthus tithymaloides se colectaron muestras a partir de plantas adultas ubicadas al norte del estado Aragua, Venezuela. Las proteínas solubles fueron extraídas con acetato de sodio 50 mM pH 5 (16 mL/mg de látex) y eliminada la porción poliisoprenoide por centrifugación a 16.000 x g durante 15 min. La actividad RNasa se estimó utilizando una técnica que incluye la aplicación de alícuotas de la mezcla de reacción sobre geles de poliacrilamida-urea y separadas por electroforesis. La degradación del sustrato fue cuantificada por densitometría. Se probaron diversos sustratos (ARNttotal, ARNt phe y ARNm transcrito in vitro a partir de ADN plasmídico). El látex de ambas especies presentó actividad RNasa, con actividades específicas iniciales de 1,42 ± 0,74 mg de ARN hidrolizado/min/mg de proteína; 0,45 ± 0,18 ng de ARN hidrolizado/min/ng de proteína y 0,28 ± 0,07 ng de ARN hidrolizado/min/ng de proteína para el ARNttotal, ARNm transcrito y ARNt phe, respectivamente, en C. procera, y de 0,02 ± 0,001 ng de ARN hidrolizado/min/ng de proteína para el ARNm transcrito y ARNt phe en P. tithymaloides. Este constituye el primer reporte acerca de la presencia de enzimas RNasas en el látex de estas especies.

Ribonuclease enzymes (RNase) have been used effectively in the treatment of certain cancers and other properties that may be applicable in biotechnology. In order to identify the RNase activity in the latex of Calotropis procera and Pedilanthus tithymaloides, tropical plants samples were collected from adult plants located in the North State of Aragua, Venezuela. Soluble proteins were extracted with 50 mM sodium acetate pH 5 (16 mL/mug latex) and poliisoprenoide portion was removed by centrifugation at 16,000 x g for 15 min. RNase activity was estimated using a technique that involves the application of reaction mixture aliquots on polyacrylamide-urea gels and separated by electrophoresis. Substrate degradation was quantified by densitometry. Various substrates were tested (tRNAtotal, tRNAphe and mRNA transcribed in vitro from plasmid DNA). The latex from both species showed RNase activity, with initial specific activities of 1.42 ± 0.74 mg of RNA hydrolyzed/min/mg protein, 0.45 ± 0.18 ng RNA hydrolyzed/min/ng protein and 0.28 ± 0.07 ng RNA hydrolyzed/min/ng protein for the tRNAtotal, mRNA transcribed and tRNAphe, respectively, for C. procera; and 0.02 ± 0.001 ng RNA hydrolyzed/min/ng protein for the mRNA transcribed and tRNAphe in P. tithymaloides. This is the first report of RNases enzymes in the latex from these species.

La levadura Saccharomyces cerevisiae es sensible a la insulina de mamíferos y actúa en el metabolismo de carbohidratos. Sin embargo, no hay estudios de su efecto en las enzimas glucolíticas de este microorganismo. Este trabajo demuestra que la insulina estimula la actividad de piruvato quinasa en S. cerevisiae durante su crecimiento en medio rico suplementado con glucosa y en condiciones aeróbicas. En la fase logarítmica temprana, la máxima estimulación sobre el control se observó en presencia de 3 µM de insulina (actividad específica: 701 U/mg proteína, 404% de estimulación; actividad absoluta: 1,73 U/10(6) células, 652% de estimulación), sugiriendo un efecto sobre la regulación de la expresión genética de la enzima. La presencia de 1,2-3 µM de la hormona estimuló en 51-68% la expresión de las proteínas citoplasmáticas y, a concentraciones mayores (4,5-9 µM), también estimuló en 25-32% la proliferación celular, indicando hiperplasia e hipertrofia celular de acuerdo a la concentración de la insulina en el medio. El efecto de la hormona disminuyó en la fase logarítmica tardía de crecimiento, sugiriendo un periodo de acción, posiblemente por un mecanismo regulatorio dependiente de nutrientes. Este sistema puede servir como modelo para estudiar muchos de los efectos moleculares de la insulina no conocidos aún.

Saccharomyces cerevisiae yeast is sensitive to mammal’s insulin and acts in carbohydrate metabolism. Nevertheless, there are no studies of its effects on the glycolytic enzymes of this microorganism. This study shows that insulin stimulates pyruvate kinase activity in S. cerevisae during its growth in rich glucose supplemented media, and under aerobic conditions. In the early logarithmic phase, the maximum stimulation over control was seen in presence of 3 µM insulin (specific activity: 701 U/mg protein, 404% stimulation; absolute activity: 1.73 U/10(6) cells, 652% stimulation), suggesting an effect over the regulation of the genetic expression of the enzyme. The presence of 1.2-3 µM of insulin stimulated the expression of cytoplasmic proteins in 51-68% and at higher concentrations (4.5-9 µM) it also stimulated cell proliferation in 25-32%, indicating cell hyperplasia and hypertrophy according to the hormone concentration in the medium. The effect of the insulin decreased in the late logarithmic growth phase, suggesting a period of action, possibly due to a nutrient dependent regulatory mechanism. This system can serve as model to study many of the molecular effects of insulin not yet known.

La enzima glucosa oxidasa (GOX) es componente esencial de reactivos para determinación de glicemia y otros parámetros paraclínicos. Para su producción suele utilizarse Aspergillus niger cultivado en medios con sustratos costosos de grado analítico. Por tanto, se planteó purificar GOX producida por A. niger, cultivado con nutrientes complejos y económicos, y evaluar su efectividad en mediciones de concentración de glucosa. Para ello se formularon 4 tipos de medio, uno estándar y tres alternativos con azúcar industrial y fertilizantes. Los cultivos se realizaron en fiolas con 50 mL de medio bajo un diseño de bloques al azar, evaluando el crecimiento y la actividad enzimática. El medio alternativo con mejor rendimiento fue seleccionado para producción en biorreactores de 5 L y posterior purificación de GOX (fraccionamiento salino y cromatografías en Sephadex G-25 y DEAE-Sephacel). Se obtuvieron altos rendimientos de enzima (7 mg por carga) de alta pureza (39000 U/g) y un K M aparente para glucosa de 22 ± 1 mM. El reactivo de diagnóstico formulado presentó un intervalo de linealidad óptima (de 50 a 600 mg/dL de glucosa). Por lo que se concluyó que los sustratos en el medio de cultivo alternativo no interfieren en la calidad y cantidad del producto purificado.

The enzyme glucose oxidase (GOX) is an essential component of reagents used for determining blood sugar and other clinical parameters. Aspergillus niger grown in media prepared with expensive analytical grade substrates is used for its production. Therefore, we decided to purify GOX produced by A. niger grown in media with complex and inexpensive nutrients and to evaluate its efficiency in glucose concentration measurement assays. For this purpose we formulated four types of media, one standard and other three alternatives in which we used industrial sugar and fertilizers. The cultures were done in 50 mL flasks under a random block design, evaluating growth and enzymatic activity. The alternative medium with the best yield was selected for production in 5 liter bioreactors and later GOX purification (saline fractioning and Sephadex G-25 and DEAE-Sephacel chromatography ). Two large enzyme yields were obtained (7 mg per load), highly purified (39000 U/g), and with an apparent 22 ± 1 mM glucose K M. The diagnostic reagent formulated presented an optimal linearity interval (between 50 and 60 mg/dL glucose). Therefore, it was concluded that the substrates in the alternative culture medium did not interfere in the quality and quantity of the purified product.