O nematóide das galhas, Meloidogyne mayaguensis, causa sérias perdas econômicas em plantações de goiaba no Brasil. Fungos parasitas de ovos de M. mayaguensis ainda não foram estudados no Brasil, mas essas informações podem servir de base para estudos futuros de controle biológico em campo. Os fungos parasitas de ovos, Pochonia chlamydosporia var. chlamydosporia, P.chlamydosporia var. catenulata e Lecanicillium psalliotae foram isolados em ovos de M. mayaguensis e analisados quanto às suas características morfológicas e culturais. Para os isolados de P. chlamydosporia a melhor temperatura para crescimento e esporulação variou entre 24 e 28 ºC. Para o isolado de L. psalliotae, a melhor temperatura para crescimento foi 30 ºC. Em estado sólido, os isolados de P. chlamydosporia produziram entre 3,5 e 5,2 x 10(6) chlamidosporos por g de substrato colonizado, enquanto que o isolado de L. psalliotae produziu 8,5 x 10(8) conídios por g de substrato colonizado. Há necessidade de estudos futuros para mostrar o potencial desses fungos como agentes de controle biológico de M. mayaguensis.

The root-knot nematode, Meloidogyne mayaguensis, causes serious economic loss to guava plantation in Brazil. Fungi associated with eggs of M. mayaguensis in Brazilian soil have not been studied yet, but this knowledge could form the basis for future field studies on biological control of this nematode. The egg parasitic fungi, Pochonia chlamydosporia var. chlamydosporia, P.chlamydosporia var. catenulata and Lecanicillium psalliotae, were isolated from M. mayaguensis eggs and analyzed based on their cultural and morphological characteristics. The optimum temperature for growth and spore production ranged between 24 and 28ºC for P. chlamydosporia isolates. For the isolate of L. psalliotae, the best growth was at 30ºC. In solid state fermentation, P. chlamydosporia isolates produced between 3.5 and 5.2 x 10(6) chlamydospores per g of colonized substrate, whereas L. psalliotae isolate produced 8.5 x 10(8) conidia per g of colonized substrate. Future studies are required to clarify the potential of these fungi as biological control agents of M. mayaguensis.

A phylogenetic analysis of the 5.8S rDNA and internal transcribed spacer (ITS1 and ITS2) sequences from some entomogenous Paecilomyces species supports the polyphyly of the genus and showed the existence of cryptic species. In the Eurotiales, anamorphs Paecilomyces variotii and Paecilomyces leycettanus were related to the teleomorphs Talaromyces and Thermoascus. In the Hypocreales, three major ITS subgroups were found, one of which included Paecilomyces viridis, Paecilomyces penicillatus, Paecilomyces carneus and isolates identified as Paecilomyces lilacinus and Paecilomyces marquandii. However, the majority of the P. lilacinus and P. marquandii isolates formed a distinct and distantly related subgroup, while the other major subgroup contained Paecilomyces farinosus, Paecilomyces amoeneroseus, Paecilomyces fumosoroseus and Paecilomyces tenuipes.

Amplified fragment length polymorphism (AFLP) was used to investigate polymorphism among 43 Hirsutella thompsonii isolates (33 from Thailand) obtained from various mite species. The outgroups were an unidentified Hirsutella isolate along with Hirsutella nodulosa and Hirsutella kirchneri. Phylogenetic analyses of the AFLP data showed significant variation among isolates and the existence of three H. thompsonii clades. We also investigated the isolates using PCR with specific primers for the Hirsutella exotoxin gene Hirsutelin A (HtA) and 18 of these isolates were used for sequencing of the partial beta-tubulin gene. Phylogenetic analyses of beta-tubulin sequences showed two distinct H. thompsonii clades, one of which included AFLP clades I and II. For both markers grouping of the H. thompsonii isolates was not related to either host mite species or geographical origin, although for the HtA gene one clade contained only isolates with no detectable HtA band. These results confirm the high intraspecific polymorphism of H. thompsonii, and maximum likelihood analysis showed no monophyletic group within this species. To refine the taxonomy of this genus other studies should be undertaken using additional molecular markers and several other Hirsutella isolates.

Quarenta e nove isolados brasileiros de Dicyma pulvinata foram analisados quanto a características morfológicas, análises de RFLP, RAPD e AFLP. Este fungo é um micoparasita do Microcyclus ulei, o agente causal da mais importante doença da seringueira (Hevea brasiliensis), o mal-das-folhas. Estes isolados foram comparados com isolados indianos obtidos a partir de lesões de Cercosporidium sp., com um isolado proveniente da França obtido a partir de lesões de Cladosporium fulvum e com um isolado de D. ampullifera proveniente de Papua-Nova Guiné. A análise de parâmetros morfológicos confirmou a identificação dos isolados brasileiros. As representações gráficas das matrizes de distância de cada marcador molecular mostraram resultados semelhantes. Os isolados de D. pulvinata obtidos de M. ulei mostraram-se intimamente relacionados. Por outro lado, os isolados - referência, incluídos nestes estudos, mostraram-se bastante dispersos. De acordo com a análise de variância molecular, considerando todos os marcadores, os isolados de D. pulvinata obtidos de M. ulei, apresentaram diferença significativa entre isolados procedentes de áreas de cultivo de seringueira favoráveis à ocorrência do mal-das-folhas (regiões norte e nordeste do Brasil) e aqueles de áreas de escape da doença (Mato Grosso).

Forty-nine Brazilian Dicyma pulvinata isolates were examined by morphological traits and RFLP, RAPD and AFLP analyses. This fungus is a mycoparasite of Microcyclus ulei, the causal agent of the most devastating rubber (Hevea brasiliensis) disease, known as "South American Leaf Blight" (SALB). These isolates were compared with an Indian isolate from Cercosporidium sp., and a French isolate from Cladosporium fulvum. They were also compared with Dicyma ampullifera from Papua New Guinea. The morphological parameters analyzed confirmed the identification of the Brazilian isolates. The graphic representations of the distance matrices of each molecular marker showed similar results. Dicyma pulvinata isolates from M. ulei were closely related, whereas the reference isolates examined were dispersed. Among the D. pulvinata isolates obtained from M. ulei, a significant pairwise distance was obtained, for all the molecular markers, between the isolates from the areas favorable to the occurrence of SALB (North and Northeast of Brazil) and the region of escape for the disease (Mato Grosso State).

A variabilidade genética entre 22 isolados dos fungos Alternaria alternata e A. Cassiae, obtidos de Senna obtusifolia, foi estudada através da análise de RAPD. No total, 491 bandas foram selecionadas com o uso de 28 primers. O agrupamento baseado em similaridades computadas dos marcadores mostrou dois distintos grupos de isolados relacionados às espécies. A análise de RAPD provou ser um método eficiente para detecção da variabilidade genética entre isolados de A. alternata e A. cassiae ocorrendo em S. obtusifolia, e também para distinguir as espécies de Alternaria.

The genetic variability of 22 isolates of the fungi Alternaria alternata and A. cassiae, obtained from Senna obtusifolia, was studied by RAPD analysis. A total of 491 scorable bands were produced with the use of 28 primers. Cluster analysis based on similarities computed from RAPD markers showed two distinct genetic groups of isolates related to both species. RAPD analysis proved to be an efficient method for detecting genetic variability of A. cassiae and A. alternata isolates occurring in S. obtusifolia, and also for distinguishing Alternaria species.

O fungo entomopatogênico Nomuraea rileyi (Farlow) Samson pode produzir epizootias em populações de lagarta-da-soja, Anticarsia gemmatalis Hübner, controlando essa praga naturalmente. No entanto, o fenômeno nem sempre ocorre a tempo de evitar que populações de A. gemmatalis atinjam o nível de dano econômico na cultura. Observações sobre a produção de conídios em cadáveres de A. gemmatalis em condições de campo mostraram que alta umidade relativa e precipitação são fatores determinantes na cinética da esporulação do fungo in vivo. O início da esporulação foi retardado e a produção de conídios diminuída quando cadáveres de A. gemmatalis infectados com N. rileyi foram submetidos a períodos longos de estresse hídrico (umidade relativa de 25-30%). Observações no campo também demonstraram que a viabilidade de conídios de N. rileyi pode permanecer elevada (>75% germinação) por períodos de até 10 dias na superfície de cadáveres, servindo como fonte de inóculo durante esse período.

The entomopathogenic fungus Nomuraea rileyi (Farlow) Samson produces epizootics on populations of the velvetbean caterpillar, Anticarsia gemmatalis Hübner, resulting in its natural control. However, sometimes this phenomenon does not occur soon enough to prevent pest population outbreaks and damage to the crop. Observations of N. rileyi conidial production on the surface of A. gemmatalis cadavers in the field showed that high relative humidity and precipitation determine the sporulation dynamics. In fact, initiation of sporulation is delayed and conidia production is reduced when A. gemmatalis cadavers infected with N. rileyi are exposed to water stress (relative humidity 25-30%) in the laboratory. Field observations also demonstrated that N. rileyi conidial viability remain high (>75% germination) until 10 days on A. gemmatalis cadaver surface, acting as an inoculum source for this period.

Isolados de Alternaria spp. patogênicos ao fedegoso (Senna obtusifolia) foram estudados quanto aos aspectos morfológicos e padrões isoenzimáticos, em gel de poliacrilamida. Com base nas características culturais, morfologia de colônias e morfometria de conídios, verificou-se que 11 dos 13 isolados pertenciam à espécie A. cassiae e os outros dois à A. alternata. Os resultados da análise eletroforética corroboraram as informações obtidas por meio de critérios morfológicos. Portanto, esta técnica tem potencial para ser usada na separação destas espécies de Alternaria. A ocorrência de mais de uma espécie deste gênero fúngico em S. obtusifolia foi constatada, ampliando o número de patógenos a serem avaliados no programa de desenvolvimento de um bioherbicida para esta espécie de planta daninha.

Alternaria spp. isolates pathogenic to sicklepod (Senna obtusifolia) were characterized based on morphological characteristics and isozyme patterns. Colonial morphology and conidial shape showed that 11 of the 13 isolates belong to A. cassiae. The other two isolates were identified as A. alternata. Isoenzyme patterns confirmed the results of morphological criteria. The occurrence of more than one species of this fungus infecting S. obtusifolia was found, widening the range of suitable pathogens to be evaluated in bioherbicide programs for sicklepod control.

Os fungos entomopatogênicos Paecilomyces fumosoroseus e P. lilacinus foram transformados com o plasmídio pBT6, contendo o gene de <FONT FACE="Symbol">b</font>-tubulina modificado, isolado do fungo Neurospora crassa, o qual confere resistência ao fungicida benomil. Transformantes resistentes ao benomil, obtidos da P. lilacinus, apresentaram tolerância a concentrações superiores a 30 <FONT FACE="Symbol">m</font>g/ml, enquanto transformantes da P. fumosoroseus apresentaram tolerância a 20 <FONT FACE="Symbol">m</font>g/ml. Após 5 passagens seriadas dos transformantes em meio contendo benomil e 5 passagens seriadas em meio não seletivo, 100% dos transformantes da P. lilacinus apresentaram estabilidade mitótica, através do teste de germinação de conídios. Em contraste, somente 4 dos 9 transformantes obtidos para P. fumosoroseus foram mitoticamente estáveis. Análise de Southern blot dos DNA genômicos de ambas as espécies sugere que o mecanismo de transformação foi por substituição alélica do gene de <FONT FACE="Symbol">b</font>-tubulina, para todos os transformantes obtidos. As seqüências não homólogas do vetor não foram detectadas nos genomas dos transformantes.

The entomopathogenic fungi Paecilomyces fumosoroseus and P. lilacinus have been transformed to resistance to the fungicide benomyl by a polyethylene glycol (PEG)-mediated procedure using a mutant <FONT FACE="Symbol">b</font>-tubulin gene from Neurospora crassa carried on plasmid pBT6. Benomyl-resistant transformants of P. lilacinus were obtained that could tolerate greater than 30 µg/ml benomyl and P. fumosoroseus transformants were obtained that could tolerate 20 µg/ml benomyl. Following 5 serial passages of transformants on benomyl-containing media and 5 serial passages on non-selective media, 100% of P. lilacinus transformants were found to be mitotically stable by a conidial germination test. In contrast, only 4 out of 9 transformants of P. fumosoroseus were mitotically stable. Southern blot analysis of genomic DNA from both species suggested that the mechanism of transformation in all transformants was by gene replacement of the <FONT FACE="Symbol">b</font>-tubulin allele. Non-homologous vector sequences were not detectable in the genomes of transformants.

O fungo Beauveria bassiana (Bals.) Vuill., isolado CG 306, foi testado contra o Triatoma infestans (Klug) através de aplicação indireta por contato do inseto com papel filtro tratado com conídios. O patógeno foi aplicado sobre papel filtro através de filtragem a vácuo de uma suspensão de conídios. Foram feitas estimativas do tempo médio de sobrevivência entre 15 e 21 dias nas densidades de 3x10(6) e 10(7) conídios/cm², respectivamente, sem diferenças significativas entre as concentrações. A concentração de 2,4x10(6) conídios/cm² de CG 306 foi necessária para matar 50% de ninfas de terceiro ínstar de T. infestans 25 dias após inoculação e incubação a 25°C e 50% de umidade relativa. A CL50 foi estatisticamente maior (2,0x10(7) conídios/cm²) quando os insetos foram expostos por uma hora aos conídios distribuídos sobre papel filtro. Um emulsificante à base de óleo mineral (2%) não afetou a germinação de conídios in vitro. Um número menor de conídios foi necessário para matar 50% dos insetos após exposição constante ao papel filtro tratado, em comparação com os conídios não formulados com o emulsificante. Quando a exposição foi limitada a 1 h, os conídios não formulados foram mais efetivos do que conídios formulados. Após aplicação de B. bassiana (10(7) conídios/cm²) em pequenas casas experimentais de madeira, seguida de liberação de ninfas de terceiro ínstar de T. infestans, o nível de infecção de insetos recuperados 25 dias após aplicação com o fungo foi significativamente inferior as encontrado na casa-testemunha. A mortalidade atribuída a infecção fúngica de insetos recuperados e mantidos em laboratório foi de 38,1 a 93,8%. A mortalidade de insetos expostos ao papel filtro tratado e mantido em copos cobertos com gaze dentro das casas, foi de 35 a 78,8% 25 dias após aplicação. A persistência dos conídios foi superior a 98% durante os experimentos de campo. Não houve desenvolvimento de B. bassiana sobre cadáveres originados de infecção provocada em laboratório e posteriormente expostos às condições de campo no interior das casas.

Beauveria bassiana (Bals.) Vuill., isolate CG 306, was assayed against Triatoma infestans (Klug) using indirect application by contact with a treated filter paper. The fungus was deposited on filter paper by vacuum-filtration of a conidial suspension. Estimates of 50% survival time of insects were between 15 and 21 days at 3x10(6) and 10(7) conidia/cm² of treated support, respectively, without significant difference between concentrations. A concentration of 2.4x10(6) conidia/cm² of CG 306 was necessary to kill 50% of T. infestans third instar nymphs 25 days after inoculation at 25°C and 50% relative humidity, when insects were continuously exposed to conidia. The LC50 was significantly higher (2.0x10(7) conidia/cm²) when insects were exposed for 1 h to the treated filter paper, than with continuous exposure. A mineral oil based emulsifier (2%) had no effect on germination of conidia in vitro. Fewer formulated conidia were necessary to kill 50% of insects after constant exposure to the treated surface, compared with unformulated conidia. After a 1 h exposure, unformulated conidia were more effective than formulated. After spraying B. bassiana (10(7) conidia/cm²) and releasing third instar nymphs of T. infestans in small wooden test houses, the rate of insect recovery after 25 days was significantly lower in the fungus treated houses compared to the control house. Mortality due to fungal infection of recovered insects transferred to the laboratory was between 38.1 and 93.8%, compared with no mortality in the control group. The rate of mortality of insects exposed to treated filter paper in gauze covered cups in the houses was between 35 and 78.8% after 25 days. Persistence of conidia on filter paper exposed inside the houses was > 98% during the field tests. There was no development of CG 306 on cadavers originating from laboratory infection and exposed to field conditions in the houses.

Foi avaliada a ação do inseticida deltametrina sobre a capacidade de germinação e virulência do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. contra ninfas de 3° estádio de Triatoma infestans (Klug) (Hemiptera: Reduviidae). Após 12 horas em cultura submersa, observou-se uma diminuição significativa da germinação de conídios de B. bassiana em proporção ao aumento da concentração do inseticida. Na mais alta dose aplicada, 550 mmg/ml, foi observado retardamento da germinação com 24 e 36 horas e interrupção do desenvolvimento do fungo após esse tempo. A exposição de ninfas de 3° estádio a concentrações subletais de deltametrina não alterou de forma significativa a virulência de B. bassiana.

Parasitóides de ovos (Hymenoptera: Scelionidae) do complexo de percevejos da soja (Glycine max L.) são candidatos potenciais a agentes de controle nos programas de manejo integrado de pragas da soja no Brasil. A correta identificação de espécies e/ou raças desses parasitóides é importante para implementação do uso do controle biológico. A técnica de "random amplified polymorphic DNA" (RAPD) foi usada para analisar indivíduos machos de Telenomus podisi Ashmead e Trissolcus spp. coletado em uma área de soja em Brasília em 1996. A análise de 18 oligonucleotídeos usados para os indivíduos de Trissolcus spp. revelou diferentes perfis de RAPD entre as espécies, indicando a possibilidade de utilizar esses marcadores para diferenciar T. teretis Johnson, T. urichi Crawford e T. basalis (Wollaston). Os 13 oligonucleotídeos usados para analisar 33 indivíduos de uma população de T. podisi produziram 103 bandas. Foram observados diferentes genótipos nessa população, que pela análise fenética com os dados de RAPD se agruparam com alta homogeneidade (similaridade >78,2%).

The solitary egg parasitoids (Hymenoptera: Scelionidae) of Pentatomidae species complex are potential candidates for soybean (Glycine max L.) integrated pest management programs in Brazil. The correct identification of species and strains of these parasitoids is necessary to implement the use of biological control. Polymerase chain reaction (PCR) was used to generate random amplification of polymorphic DNA (RAPD) from male individuals of Telenomus podisi Ashmead and Trissolcus spp. collected in a soybean field in Brasília, Brazil in 1996. The analysis of 18 primers used to screen Trissolcus spp. individuals revealed different patterns related to the species analyzed. These results indicate the potential of RAPD markers to differentiate T. teretis Johnson, T. urichi Crawford and T. basalis (Wollaston). The 13 selected primers used to analyze T. podisi individuals produced 103 clear polymorphic scorable markers. Different genotypes were observed within this population analyzed, although the cluster analysis applied to the RAPD data showed high homogeneity (similarity >78.2%) among individuals.

Foi investigada a variabilidade genética através de análise de RAPD entre 27 indivíduos de duas populações distintas (Rio Grande do Norte e Distrito Federal) do gafanhoto-praga Schistocerca pallens (Thunberg) e de oito isolados do seu patógeno natural, o fungo Metarhizium flavoviride Gams & Rozsypal. Para os gafanhotos, 79 caracteres binários gerados por dez primers foram selecionados para análise. A estimativa média da diversidade de nucleotídeos nas populações de S. pallens do Distrito Federal e do Rio Grande do Norte , feita através do programa RAPDDIP, indicou alta variabilidade genética intrapopulacional, com valores de 2,2 e 2,3% respectivamente. No entanto, o valor estimado de divergência de nucleotídeos de 0.004 revelou que praticamente não existe diferença entre essas populações estudadas. Com relação aos isolados de M. flavoviride, foram selecionados para análise 388 caracteres binários gerados por 31 primers. A análise fenética destes dados revelou uma alta homogeneidade (similaridade ≥ 79,5%) entre os isolados, principalmente entre os brasileiros (similaridade ≥ 98,3%), os quais foram obtidos de regiões geograficamente próximas e do mesmo hospedeiro, S. pallens.

The genetic variability of 27 individuals from two distinct populations (Northeast and Central Brazil) of the grasshopper Schistocerca pallens (Thunberg) and eight isolates of its natural pathogen, the fungus Metarhizium flavoviride Gams & Rozsypal, was investigated using RAPD analysis. For the grasshoppers, ten different 10-mer oligonucleotide primers of arbitrary sequence were selected for analysis, resulting in 79 scorable binary characters. The program RAPDDIP applied to S. pallens revealed nucleotide diversity of 2.3 and 2.2% for the populations from Rio Grande do Norte (Northeast Brazil) and Federal District (Central Brazil), respectively. These values indicate the presence of high genetic variability within these populations. Conversely, the value for nucleotide divergence (0.004) showed almost no distinction between the two populations. In the case of M. flavoviride, thirty-one 10-mer oligonucleotide primers of arbitrary sequence were selected for analysis, producing 388 scorable binary characters. A dendrogram obtained for M. flavoviride, using the program NTSYS, revealed high homogeneity (similarity ≥79.5%) among the 8 isolates analyzed. The Brazilian isolates, all from the same geographical area and host (S. pallens), were even more homogeneous (≥98.3%).