RESUMO Objetivo: Desenvolver um método rápido para analisar polifenóis, que são antioxidantes potencialmente ativos contra o estresse oxidativo neonatal, em pequenos volumes de leite humano (LH). Métodos: Foram comparadas extrações ácidas e alcalinas usando dois corantes: Folin-Ciocalteu e Fast Blue BB. Foram avaliadas variáveis como linearidade, sensibilidade, percentagem de recuperação, teor de polifenóis, precisão e estabilidade em 14 amostras de LH, comparadas usando o teste de Kruskal-Wallis H (p<0,05). A melhor técnica foi aplicada a 284 amostras de LH para determinar seu teor polifenólico e sua associação com a dieta materna por regressão linear multifatorial. Resultados: A extração ácida recuperou com sucesso o padrão de referência do ácido gálico, enquanto a extração alcalina o superestimou. As curvas de calibração para todos os métodos foram lineares (R2>0,96) até os 500 mg/L. Todos os métodos testados baseados em Folin-Ciocalteu com bicarbonato foram estáveis e repetíveis, enquanto as variantes baseadas em Fast Blue BB não. Os polifenóis do HM (média=94,68 mg/L) correlacionaram-se positivamente com a ingestão dietética de ácidos hidroxicinâmicos, a família de polifenóis mais consumida nesta população. Conclusões: Um micrométodo baseado em bicarbonato de Folin-Ciocalteu permitiu a determinação precisa de polifenóis no HM, o que pode ser útil para configurações de pesquisa translacional e bancos de HM. Objetivo neonatal LH. . (LH) Métodos corantes FolinCiocalteu Folin Ciocalteu linearidade sensibilidade recuperação 1 KruskalWallis Kruskal Wallis p<0,05. p005 p p<0,05 0 05 (p<0,05) 28 multifatorial Resultados gálico superestimou R2>0,96 R2096 R R2 96 (R2>0,96 50 mgL mg L mg/L repetíveis não média=94,68 média9468 média 94 68 (média=94,6 correlacionaramse correlacionaram se hidroxicinâmicos população Conclusões (LH p00 p<0,0 (p<0,05 2 R2>0,9 R209 9 (R2>0,9 5 média=94,6 média946 6 (média=94, p0 p<0, (p<0,0 R2>0, R20 (R2>0, média=94, média94 (média=94 p<0 (p<0, R2>0 (R2>0 média=94 média9 (média=9 p< (p<0 R2> (R2> média=9 (média= (p< (R2 média= (média (p (R
ABSTRACT Objective: To develop a rapid method for analysing polyphenols, which are potentially active antioxidants against neonatal oxidative stress, from small human milk (HM) volumes. Methods: Acid and alkaline extractions were compared using two dyes: Folin-Ciocalteu and Fast Blue BB. Linearity, sensitivity, recovery percentage, polyphenol content, precision, and stability were assessed in 14 HM samples and compared using the Kruskal-Wallis H test (p<0.05). The best technique was applied to 284 HM samples to determine their polyphenolic content and its association with maternal diet by multifactorial linear regression. Results: Acidic extraction successfully recovered the gallic acid reference standard, whereas alkaline extraction overestimated it. Calibration curves for all methods were linear (R2>0.96) up to 500 mg/L. All bicarbonate-based Folin-Ciocalteu methods assayed were stable and repeatable, whereas Fast Blue BB-based variants were not. HM polyphenols (mean=94.68 mg/L) positively correlated to the dietary intake of hydroxycinnamic acids, the most consumed polyphenolic family in this population. Conclusions: A bicarbonate-based Folin-Ciocalteu micromethod allowed the accurate determination of polyphenols in HM, which might be useful for translational research settings and HM banks. Objective stress (HM volumes Methods dyes FolinCiocalteu Folin Ciocalteu BB Linearity sensitivity percentage precision 1 KruskalWallis Kruskal Wallis p<0.05. p005 p p<0.05 . 0 05 (p<0.05) 28 regression Results standard it R2>0.96 R2096 R R2 96 (R2>0.96 50 mgL mg L mg/L bicarbonatebased bicarbonate based repeatable BBbased not mean=94.68 mean9468 mean 94 68 (mean=94.6 acids population Conclusions banks p00 p<0.0 (p<0.05 2 R2>0.9 R209 9 (R2>0.9 5 mean=94.6 mean946 6 (mean=94. p0 p<0. (p<0.0 R2>0. R20 (R2>0. mean=94. mean94 (mean=94 p<0 (p<0. R2>0 (R2>0 mean=94 mean9 (mean=9 p< (p<0 R2> (R2> mean=9 (mean= (p< (R2 mean= (mean (p (R