RESUMO O gênero Aeromonas compreende espécies consideradas importantes patógenos para os seres humanos, sendo que a principal ação patogênica delas corresponde às gastroenterites. Tendo em vista sua importância como patógeno de origem alimentar, a ocorrência de Aeromonas spp. foi estudada em carcaças bovinas e ambiente do abatedouro em uma indústria do Estado de São Paulo, com o intuito de definir a possível origem comum dessas bactérias no ambiente do frigorífico através de métodos moleculares. Foram colhidas 15 amostras de 19 pontos, totalizando 285 unidades. As amostras foram colhidas dos seguintes pontos: pele seca e úmida, superfície muscular das carcaças durante a toalete e das carcaças resfriadas, mãos dos funcionários antes e durante o trabalho na sala de abate e câmara de resfriamento, facas, parede e piso da câmara de resfriamento, água (clorada, não clorada e residuária da lavagem das carcaças), carne, conteúdo intestinal e ambiente da sala de abate. Foi realizada a caracterização do gênero e os isolados foram analisados pelas técnicas de REP (Repetitive Extragenic Palindromic) e ERIC (Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus)-PCR. Foi encontrada similaridade ? 99% somente entre um isolado de superfície muscular de uma carcaça resfriada com um isolado de mão. As técnicas moleculares não possibilitaram a identificação precisa da origem das bactérias na indústria, mas possibilitaram inferir que os manipuladores podem atuar como disseminadores delas no ambiente de abate.

ABSTRACT The genus Aeromonas comprises important human pathogens and the gastroenteritises are the most common infections attributed to these microorganisms. Considering their importance as foodborne pathogens, the occurrence of Aeromonas spp. was studied on bovine carcasses and in the environment of an abattoir in State of São Paulo, Brazil, with the aim of defining the possible origin of these bacteria in the abattoir environment using molecular methods. Fifteen samples from 19 points were collected, totaling 285 units. The collecting points were: dry and wet skin, muscle surface of the carcasses during trimming process and refrigerated carcasses, operatives’ hands from the slaughter room before and during the work and from refrigerated rooms, knives, wall and floor from refrigerated room, water (chlorinated, nonchlorinated and from carcass washing), meat, intestinal content and slaughter room environment. Characterization of the genus was performed and the isolates were analyzed with REP (Repetitive Extragenic Palindromic) and ERIC-PCR (Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus PCR) techniques. A similarity of ? 99% was found only between one isolate from the muscle surface of one refrigerated carcass with one isolate from a hand. The molecular techniques did not enable the precise identification of the bacteria’s origin within the industry, but they permitted the inference that the operatives can spread Aeromonas in the slaughter environment.

RESUMO Objetivando avaliar a presença de micro-organismos indicadores e de estafilococos em carcaças bovinas e a influência da refrigeração sobre a microbiota contaminante, foram analisadas amostras de regiões da superfície externa de meias carcaças tais como coxão, lombo e ponta-deagulha, logo após a lavagem e após 24 horas sob refrigeração. As médias das populações de microorganismos heterotróficos mesófilos, psicrotróficos e Staphylococcus sp. em UFC/cm2 obtidas imediatamente após a lavagem apresentaram valores respectivamente de 1,8 x 10, 6,4 x 10 e 3,5 x 10 UFC/cm2, enquanto que para as amostras colhidas após refrigeração os valores foram de 1,3 x 10, 1,6 x 102 e 5,2 x 10 UFC/cm2. As populações foram consideradas reduzidas, decorrentes de eficientes cuidados higiênicos sanitários durante as operações de abate, e as diferenças observadas entre as médias dos dois grupos de amostras não foram significativas do ponto de vista estatístico, o que permite concluir que não houve aumento considerável da população microbiana, demonstrando a eficiência do processo de refrigeração em seguida ao abate.

ABSTRACT With the aim of evaluating the presence of microorganisms in bovine carcasses and the influence of refrigeration on the contaminating microbiotics, some samples were collected from the outer surface of half-carcasses in these regions (rump, loin and rib), after washing and after 24 hours under refrigeration. The average of the mesophilic heterotrofic, psychrotrofic andStaphylococcusmicroorgarnisms, obtained immediately after the carcass washing were respectively 1.8 x 10, 6.4 x 10 and 3.5 x 10 CFU/cm2, while for the samples collected after refrigeration these values were 1.3 x 10, 1.6 x 102 and 5.2 x 10 CFU/cm2. The populations were considered low due to the hygienic practices during the slaughter process, and the differences observed between the averages of the two groups of samples were not statistically significant, leading to the conclusion that that was not an increase of the microorganism population, thus demonstrating the efficacy of the refrigeration process after the slaughter.

A total of 72 strains of Staphylococcus aureus were examined for the production of staphylococcal enterotoxins (SE) A, B, C, D and toxic shock syndrome toxin (TSST-1). The strains were isolated from milk samples from cows with mastitis in dairy herds of São Paulo State, Brazil. Off 72 isolates, 38 (52.8%) produced SEA, 38 (52.8%) SEB, 32 (44.4%) SED, 28 (38.9%) SEC and 27 (37.5%) TSST-1. From the 72 strains, 66 (91.7%) produced, at least, one or more toxin, including TSST-1.

RESUMO Este trabalho teve por objetivo analisar o uso da prensa francesa para se adquirir material genético de estafilococos e detectar possíveis genes de resistência cromossomais e plasmidiais aos antimicrobianos oxacilina, gentamicina, canamicina e vancomicina. O método da difusão de discos em ágar foi realizado, inicialmente, para 50 linhagens de estafilococos e a susceptibilidade antimicrobiana foi confirmada por meio de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Os resultados obtidos pelo antibiograma constataram alta susceptibilidade para gentamicina e canamicina (4%) e oxacilina (8%). Todas as linhagens foram susceptíveis à vancomicina. O DNA bacteriano foi obtido por lise física a partir da prensa francesa. Os genes mecA e aph3’IIIa foram detectados no cromossomo dos estafilococos e o gene aac(6’) Ie + aph (2") foi observado tanto no cromossomo como no plasmidio destas bactérias. Pelos resultados pode-se concluir que a metodologia utilizada para a extração de DNA genômico, por meio da prensa francesa, foi barata e eficiente, pois possibilitou a detecção por PCR e a localização, por ultracentrifugação, de genes de resistência em estafilococos.

ABSTRACT The main of the present study was analyze the use of a french press device to obtain genetic material from staphylococci and to detect genes involved with chromosomal and plasmid resistance to the following antimicrobial drugs: oxacillin, gentamicin, kanamycin and vancomycin. The agar disc diffusion method was conducted initially for 50 strains and the bacterial susceptibility was confirmed by means of PCR reactions. The results from the antibiogram method revealed high sensibility to gentamicin and kanamycin (4%) and oxacillin (8%). All strains were susceptible to vancomycin. The DNA from the bacteria was obtained by means of physical lyses using a french press device. The genes mecA and aph’3 – IIIa were detected on the staphylococci chromosome and the gene aac(6’)Ie + aph(2’’) was observed either in the chromosome and in the plasmid content of the staphylococci analyzed. Based on the obtained results one can conclude that the methodology used to extract the genomic genetic material using the french press device was efficient and allowed a simple method to detect by PCR and to locate by ultracentrifugation, the staphylococci antibiotic resistance genes.

RESUMO Com o objetivo de verificar a capacidade enterotoxigênica “in vivo” de cepas de Aeromonas spp. isoladas em diferentes produtos e locais da planta de processamento de frangos, foram submetidas aos testes de inoculação intragástrica em camundongos lactentes e inoculação em alça ileal ligada de coelhos 75 cepas isoladas de penas, fezes, carcaças não evisceradas, evisceradas e resfriadas e água do pré-resfriamento. Das 75 cepas testadas, 31 (41,3%) produziram enterotoxinas na prova de inoculação em alça ileal ligada de coelhos, sendo 9 (29%) da espécie Aeromonashydrophila, 9 (29%) A. sobria, 6 (19,4%) A. caviae, 4 (12,9%) A. veronii, 1 (3,2%) A. schubertii, 1 (3,2%) A. trota e 1 (3,2%) A. jandaei. Este estudo mostra que cepas de diferentes espécies de aeromonas são capazes de produzir enterotoxinas no teste in vivo, sugerindo riscos à saúde pública. O teste de inoculação intragástrica em camundongos lactentes não demonstrou a presença de cepas produtoras de enterotoxinas.

ABSTRACT With the aim of verifying the capacity of in vivo production of enterotoxins of Aeromonas spp. strains isolated from products and at different places of the processing poultry plant, 75 strains isolated from feather, stool, pre-evisceration, post-evisceration, cooled carcass and “chilling” water samples were assayed by the ligated ileal loop test in rabbits and intragastric inoculation in suckling mice. From 75 strains analyzed, 31 (41.3%) produced enterotoxins in the ligated ileal loop assay in rabbits, the breakdown being 9 (29.0%) A. hydrophila, 9 (29.0%) A. sobria, 6 (19.4%) A. caviae, 4 (12.9%) A. veronii, 1 (3.2%) A. schubertii, 1 (3.2%) A. trota and 1 (3.2%) A. jandaei. This study showed that strains of different species of aeromonas are able to produce enterotoxins in in-vivo tests, suggesting a danger to public health. The test of intragastric inoculation in suckling mice did not show evidence of enterotoxin production.

RESUMO Este trabalho teve por objetivo conhecer a sensibilidade antimicrobiana “in vitro” de 72 cepas de Staphylococcus aureus isoladas em amostras de leite de vacas com mastite clínica e subclínica, em 10 propriedades rurais do Estado de São Paulo. Os testes foram realizados pela da técnica de difusão em discos padronizada por Kirby-Bauer. Os principios ativos que apresentaram maior sensibilidade foram a gentamicina (98,6%) e a eritromicina (98,6%), seguidos pela estreptomicina (94,4%), oxacilina (84,7%), novobiocina (73,4%), vancomicina (72,2%), ampicilina (4,2%) e a penicilina (2,8%). Os resultados obtidos evidenciaram, ainda, que as 72 (100%) cepas estudadas apresentaram resistência a pelo menos 2 antibióticos ou quimioterápicos e que nenhum destes princípios ativos, agindo isoladamente, pode ser ativo contra qualquer das cepas experimentadas.

ABSTRACT The purpose of this study was to determine the in-vitro susceptibility pattern of 72 Staphylococcus aureus strains, isolated from bovine mastitic milk. The calves were reared on 10 dairy farms in the state of São Paulo, Brazil. These strains were tested by the standardized disc diffusion method. The highest susceptibility was to gentamicin (98.6%) and erytromycin (98.6%), followed by streptomycin (94.4%), oxacillin (84.7%), novobiocin (73.4%), vancomycin (72.2%), ampicillin (4.2%) and penicillin (2.8%). Results showed that 72 (100%) strains were resistant to at least 2 antibiotics and chemotherapeutics. None of the active principles, acting alone, was effective against any of the strains tested.

RESUMO O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência do uso do extrato de Moringa oleifera e da radiação solar na clarificação e desinfecção da água com diferentes níveis de turbidez. O experimento foi divido em duas etapas: (a) tratamento por exposição ao sol de amostras de água com diferentes níveis de turbidez e (b) utilização das sementes de M. oleifera para floculação e sedimentação clarificando a água e desinfecção da água clarificada por radiação solar. Nos dois protocolos foram realizados: colimetria, segundo substrato cromogênico; DBO, por medição manométrica; turbidez, por meio de turbidímetro. Os resultados comprovaram a eficiência da radiação solar na desinfecção da água com baixo e alto nível de turbidez, sendo que, para Escherichia coli, as maiores reduções ocorreram nas amostras com turbidez 30-40 UNT e após 12h de exposição. A adição do extrato de M. oleifera, nas amostras de baixa e alta turbidez, proporcionou elevadas reduções da turbidez em relação ao nível de turbidez inicial e potencializou a ação da luz solar na desinfecção da água. Propõe-se a adição de extratos de sementes de M. oleifera e radiação solar para maximizar a eliminação de E. coli das amostras de água turvas e assim minimizar o risco de transmissão hídrica de agentes patogênicos de origem intestinal.

ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the effectiveness of Moringaoleifera extract and solar radiation in the clarification and disinfection of water with different turbidity levels. The experiment had two stages: (a) treatment of water samples with different turbidity levels by exposure to solar radiation and (b) use of M. oleifera seeds for flocculation and sedimentation for water cleansing and disinfection of cleansed water by solar radiation. Colimetry, following chromogenic substrate; BDO by manometer; and turbidity by turbidity meter were deployed in the two protocols. The results show the effectiveness of solar radiation in low and high turbid water disinfection. In the case of Escherichia coli, the greatest decrease occurred in 30–40 UNT turbidity after a 12-h exposure. In low and high turbidity samples the addition of M. oleiferaextract resulted in a great decrease of turbidity when compared to initial turbidity and empowered the effect of solar radiation in water disinfection. The addition of M. oleifera seed extract and solar radiation are recommended to maximize the elimination of E. coli from turbid water samples and consequently minimize the risk of water-transmitted pathogenic agents originating from the intestines.

RESUMO Objetivando estudar as características microbiológicas do leite UAT (ultra alta temperatura) ao longo de sua industrialização, foram analisadas 60 amostras de leite cru, 60 de pasteurizado e 30 de UAT, colhidas em uma linha de produção. Verificou-se que as populações médias de microrganismos mesófilos, psicrotróficos e esporos diminuiram com o tratamento térmico, pois as contagens, respectivamente, da ordem de 108, 107 e 104 UFC/mL no leite cru, caíram para 104, 102 e 102 UFC/mL no pasteurizado e para inferior a 1,0, 10,0 e 1,0 UFC/mL no leite UAT. O mesmo foi verificado com a população de microrganismos termófilos, que no leite pasteurizado era da ordem de 103 UFC/mL e no UAT inferior a 1,0 UFC/mL. Os resultados permitem concluir que o processamento térmico aplicado à matéria-prima para a produção do leite UAT foi capaz de reduzir, mas não de eliminar a carga microbiana inicial.

ABSTRACT With the aim of studying microbiological characteristics of UHT milk (ultra high temperature) during the industrialization, the present study analysed 60 samples of raw milk, 60 of pasteurized and 30 of UHT process, collected ata a factory. It was seen that the population of mesophilic, psychrotrophic and sporulated microrganisms decreased with thermal threatment, because the number of microrganisms were 108, 107 and 104 CFU/mL in raw milk, and decreased to 104, 102 and 105 CFU/mL in pasteurized to less tham 1.0, 10.0 and 1.0 CFU/mL in UHT milk. The same was verified with the mesophilic population of thermophils, which, in the pasteurized milk were 103 CFU/mL and UHT 1.0 CFU/mL. The results allow for the conclusion that termal threatment applied to raw material in the production of UHT milk were able to reduce but not to eliminate the initial number of microrganisms.

RESUMO Com os objetivos de avaliar o risco que a qualidade da água utilizada na produção de leite pode representar para a qualidade do produto e para a saúde da glândula mamária foram analisadas amostras de água das fontes de abastecimento, saída do reservatório e do estábulo em 30 propriedades leiteiras. Verificou-se que 90,0% das amostras das fontes 86,7% dos reservatórios e 96,7% dos estábulos encontravam-se fora dos padrões microbiológicos de potabilidade. Os resultados mostraram o isolamento de Staphylococcus spp. em 80,0%, 63,3% e 66,7% das amostras de água das fontes, reservatórios e estábulo, respectivamente. Foram isolados Staphylococcus aureus nas amostras de água dos 3 pontos amostrados sendo que 100% das amostras isoladas da água utilizada no estábulo foram capazes de produzir enterotoxinas. Os resultados obtidos mostraram que a água utilizada em propriedades leiteiras pode representar risco a qualidade do leite e à saúde da glândula mamaria. abastecimento Verificouse Verificou se 900 90 0 90,0 867 86 7 86,7 967 96 96,7 encontravamse encontravam potabilidade spp 800 80 80,0% 633 63 63,3 667 66 66,7 respectivamente 100 enterotoxinas mamaria 9 90, 8 86, 96, 80,0 6 63, 66, 10 80, 1

ABSTRACT Water samples from supply sources, reservoir and stable outlets in 30 dairies were analyzed to evaluate risk in milk quality and in the health of the mammary gland which may depend on water quality in milk production. Ninety percent of water source, 86.7% of reservoir and 96.7% of stables samples failed to comply with microbiological standards. Results showed Staphylococcus spp. in 80.0%, 63.3% and 66.7% of water source, reservoir and stable samples respectively. Staphylococcus aureus was isolated in water samples from the 3 sites, and all samples (100%) of water from the stables were able to produce enterotoxins. Results showed that water used in dairies may be harmful to the health of the mammary gland and jeopardize milk quality. sources production source 867 86 7 86.7 967 96 96.7 standards spp 800 80 0 80.0% 633 63 63.3 667 66 66.7 respectively sites 100% 100 (100% enterotoxins 8 86. 9 96. 80.0 6 63. 66. 10 (100 80. 1 (10 (1 (

Com o objetivo de verificar o papel da água utilizada durante a produção do leite como via de transmissão de Staphylococcus sp., fez-se a contagem de Staphylococcus coagulase negativa e Staphylococcus aureus nas amostras de água das fontes, dos reservatórios e dos estábulos de 30 propriedades leiteiras situadas na região Nordeste do Estado de São Paulo. As maiores ocorrências de isolamentos (10,0 e 16,6%) e os maiores valores médios (4,3×10(4) e 2,5×10(4)) de contagens desses microrganismos foram encontrados nas amostras de água dos estábulos utilizada na obtenção de leite. Estes resultados são importantes pois evidenciam a possibilidade de contaminação do leite ou dos animais por cepas patogênicas.

With the objective to verify the role of the water in the transmission of Staphylococcus sp., the counting of coagulase negative staphylococci, and Staphylococcus aureus in the water samples of the sources, reservoirs, and stables of 30 dairy farms, located in the Northeast region of the State of São Paulo was carried out. The major occurrence of coagulase negative staphylococci and Staphylococcus aureus, respectively, 10.0%, and 16.6%, were found in the water used for milking, with the major average of counting of 4.3×10(4) and 2.5×10(4). The results show the risk of water as a vehicle for transmission of mastitis, and the possibility of milk contamination by strains responsible for foodborne diseases.

Analisaram-se 200 amostras de diferentes produtos e locais do fluxograma de abate de frangos com o objetivo de identificar os pontos de contaminação da carne de frango por Aeromonas. Das 25 amostras analisadas para cada um dos oito pontos estudados foram isoladas Aeromonas spp. em nove (36%) amostras de penas, em 14 (56%) de fezes, em 18 (72%) de carcaças não evisceradas, evisceradas e resfriadas e em 20 (80%) de água do pré-resfriamento. Não foram isoladas Aeromonas spp. da água de abastecimento da indústria e da água do tanque de escaldagem. Foram identificadas as espécies, Aeromonas hydrophila em 39 (15,2%) amostras, A. sobria em 69 (26,9%), A. caviae em 87 (34%), A. veronii em 18 (7%), A. schubertii em três (1,2%), A. trota em duas (0,8%) e A. jandaei em uma (0,4%). O resultado sugere que independente do controle higiênico-sanitário adotado na indústria, as carcaças de frangos podem se contaminar já a partir de sua obtenção, determinando o aparecimento de Aeromonas em carcaças resfriadas e prontas para a comercialização.

Two hundred samples of poultry meat were analyzed in order to evaluate contamination by Aeromonas spp. in eight sites of a slaughterhouse, with 25 samples obtained in each site. Aeromonas spp. was found in nine (36.0%) samples of feathers, 14 (56.0%) samples of stools, 18 (72.0%) carcasses after pre-evisceration, post-evisceration, and cooling, as well as in 20 (80.0%) samples of chilling water. The microorganism was not found in samples from either the supplying water or the tank for scalding water. Aeromonahydrophila was identified in 39 (15.2%) samples, whereas A. sobria, A. caviae, A. veronii, A. schubertii, A. trota, and A. jandaei were identified in, respectively, 69 (26.9%), 87 (34.0%), 18 (7.0%), three (1.2%), two (0.8%), and one (0.4%) samples. In addition, bacteria dissemination may occur during slaughtering and regardless the hygienic-sanitary control followed by the industry, poultry carcasses may be contaminated by Aeromonas spp. Therefore cooled carcasses may represent a potential risk for consumers.

Foram analisadas 160 amostras de queijo-de-minas frescal artesanal, adquiridas no comércio varejista dos municípios de Poços de Caldas - MG e Jaboticabal - SP, a fim de verificar a ocorrência de bactérias do gênero Aeromonas no produto. Oitenta e duas (51,2%) encontravam-se contaminadas pelos microrganismos, com populações que variavam de 5,0×10³ a 4,0×10(5) UFC/grama. Foram identificadas as espécies Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae, Aeromonas schubertii, além de cepas consideradas atípicas. Os resultados evidenciam que bactérias do gênero Aeromonas podem ser veiculadas através do queijo tipo minas frescal artesanal e devem servir de alerta aos serviços de saúde pública.

One hundred and sixty samples of homemade minas frescal cheese, obtained at the retail trade in the municipalities of Poços de Caldas-MG and Jaboticabal-SP, were analyzed for occurrence of the genus Aeromonas. Eighty two samples (51.2%) were contaminated by these microorganisms with populations that ranged from 5.0 x 10³ to 4.0 x 10(5) CFU/g. The species Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae, Aeromonas schubertii, were identified, along with atypical strains. The results show that Aeromonas bacteria genus can be transmitted through the homemade minas frescal cheese and they should serve of alert to the public health services.

Com o objetivo de verificar a capacidade enterotoxigênica de cepas de Aeromonas sp. isoladas em diferentes produtos e locais no fluxograma de abate bovino, foram testadas 102 cepas (18 da espécie A. hydrophila, 65 da espécie A. caviae e 19 atípicas) ante os testes de inoculação intragástrica em camundongo lactente e em alça intestinal ligada de coelho. Revelaram-se como produtoras de enterotoxinas três (16,7%) cepas da espécie A. hydrophila, originárias das mãos do manipulador antes que ele iniciasse seus trabalhos e da carne desossada pronta para o consumo, e uma (1,5%) da espécie A. caviae, também isolada das mãos. Os resultados são preocupantes pela presença de cepas enterotoxigênicas de bactérias do gênero Aeromonas em indústria de alto nível higiênico-sanitário.

With the objective of verifying the enterotoxigenic level of Aeromonas sp. strains, isolated from several products and points in the cattle slaughtering processing line, 102 strains were tested (18 from A. hydrophila, 65 from A. caviae and 19 atypical), using suckling-mouse intragastric inoculation test and rabbit bond ileal loop assay. Producers of enterotoxins were found in three (16.7%) strains of A. hydrophila, originated from meat handlers hands, before the person begin working, and from ready to consume deboned meat, and in one (1.5%) strain of A. caviae, which was also isolated from the hands. The results are worrisome based on the presence of Aeromonas enterotoxigenic strains on the hands of workers as well as in the meat sampled from an extremely hygienic processing plant. Such facilities may act as a transmitting vehicle of this important and relatively new food poisoning agent.