Two waterbucks from São Paulo Zoo Foundation exhibited respiratory symptoms in July 2004. After euthanasia, granulommas in lungs and mediastinic lymph nodes were observed. Acid-fast bacilli isolated were identified as Mycobacterium bovis spoligotype SB0121 by PRA and spoligotyping. They were born and kept in the same enclosure with the same group, without any contact to other species housed in the zoo. This is the first detailed description of M. bovis infection in Kobus ellipsiprymnus.

O objetivo do presente estudo foi aperfeiçoar a detecção de Brucella abortus pela PCR em homogeneizados de órgãos de fetos abortados por vacas infectadas, importante mecanismo para descobrir focos da doença na fase de erradicação. Assim, foram comparados diferentes protocolos de extração de DNA, visando à detecção de B. abortus pela PCR em amostras clínicas colhidas de abortos ou de bezerros oriundos de vacas desafiadas com a estirpe 2308 de B. abortus. Para tanto, foram construídos dois grupos padrão ouro com base na bacteriologia clássica, constituídos por: 32 pulmões (17 positivos), 26 baços (11 positivos), 23 fígados (8 positivos) e 22 linfonodos bronquiais (7 positivos). Todas essas amostras foram submetidas a três protocolos de extração de DNA, seguidos do mesmo processo de amplificação com os primers B4 e B5. Nos resultados acumulados por órgão, a proporção de positivos nos pulmões foi maior que a encontrada nos fígados (p=0,04) e nos linfonodos bronquiais (p=0,004), e igual a verificada nos baços (p=0,18). Nos resultados acumulados por método de extração de DNA, a proporção de positivos para o protocolo de Boom foi maior que a verificada para o PK (p<0,0001) e GT (p=0,0004). Não houve diferença entre os protocolos PK e GT (p=0,5). Algumas amostras positivas ao isolamento foram negativas à PCR e vice-versa. Assim, a melhor estratégia para se pesquisar B. abortus em tecidos de fetos abortados ou de bezerros nascidos de vacas infectadas é a utilização, em paralelo, do isolamento e da PCR, com extração do DNA pelo método do Boom.

The objective of the present study was to improve the detection of B. abortus by PCR in organs of aborted fetuses from infected cows, an important mechanism to find infected herds on the eradication phase of the program. So, different DNA extraction protocols were compared, focusing the PCR detection of B. abortus in clinical samples collected from aborted fetuses or calves born from cows challenged with the 2308 B. abortus strain. Therefore, two gold standard groups were built based on classical bacteriology, formed from: 32 lungs (17 positives), 26 spleens (11 positives), 23 livers (8 positives) and 22 bronchial lymph nodes (7 positives). All samples were submitted to three DNA extraction protocols, followed by the same amplification process with the primers B4 and B5. From the accumulated results for organ, the proportion of positives for the lungs was higher than the livers (p=0.04) or bronchial lymph nodes (p=0.004) and equal to the spleens (p=0.18). From the accumulated results for DNA extraction protocol, the proportion of positives for the Boom protocol was bigger than the PK (p<0.0001) and GT (p=0.0004). There was no difference between the PK and GT protocols (p=0.5). Some positive samples from the classical bacteriology were negative to the PCR and viceversa. Therefore, the best strategy for B. abortus detection in the organs of aborted fetuses or calves born from infected cows is the use, in parallel, of isolation by classical bacteriology and the PCR, with the DNA extraction performed by the Boom protocol.

RESUMO Foram avaliados soros de suínos provenientes de propriedades rurais que desenvolvem agricultura familiar no Município de Monte Negro, Rondônia, frente a agentes bacterianos e virais. Para a pesquisa de anticorpos contra Brucella spp., foram utilizados o Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), a Soroaglutinação Lenta em Tubos (SAL) e a prova do 2-Mercaptoetanol (2-ME). Para a pesquisa de Leptospira spp. utilizou-se a Soroaglutinação Microscópica (SAM) contra 24 sorovares de leptospira. Anticorpos contra Parvovírus Suíno (PVS) foram pesquisados pela Inibição da Hemaglutinação (IH), enquanto que o vírus da Peste Suína Clássica (PSC) e da Doença de Aukeszky (DA) por Ensaio Imunoenzimático (ELISA). Apenas uma (0,9%) das 104 amostras testadas foi reagente na AAT e nenhuma na SAL e 2-ME. Para Leptospira spp. foram testados 88 soros, sendo detectados anticorpos em 29 amostras (32,9%) e os sorovares mais freqüentes foram Castellonis, Bratislava e Canicola. Foram detectados anticorpos contra PVS em 7,7% (8/104) dos soros testados. Nenhuma amostra foi reagente para PSC e DA.

ABSTRACT Sera from swine fromfamily-employed farms in Monte Negro County, state of Rondônia, Brazil, were evaluated againstbacterial and viral agents. Brucellosis was evaluated by Rose-Bengal agglutination (RBA), standard tube agglutination (STA), and mercaptoethanol (ME); and leptospirosis by microscopic agglutination test (MAT) against 24 leptospira serovars. Anti-porcine parvovirus antibodies were tested by haemmaglutination inhibition assay, and ELISA technique was used for detection of antibodies against classical swine fever virus and Aujeszky disease virus. Only 1 (0.9%) from 104 tested sera reacted by RBA, and no samples reacted in STA and ME. Leptospira spp. antibodies were detected in 29 (32.9%) of 88 tested sera and the most frequent serovars detected were Castellonis, Bratislava and Canicola. Antibodies against porcine parvovirus were detected in 7.7% (8/104) of the sera. None of the examined samples reacted to classical swine fever virus or Aujeszky disease virus.

RESUMO Os rotavírus são importantes agentes virais envolvidos nas gastroenterite infantil e da diarréia dos animais neonatos. O objetivo deste trabalho foi otimizar o isolamento de rotavírus levando-se em conta o número de amostras, diferentes tratamentos com tripsina, número de passagens seriadas e monitoramento das mesmas através de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). Foram utilizadas 20 amostras fecais diarréicas, positivas para rotavírus por meio de ELISA e PAGE, oriundas de bezerros e leitões, as quais foram submetidas a quatro protocolos usando tripsina. No tratamento 1 o inóculo foi mantido e o meio de manutenção não continha tripsina; no tratamento 2 o inóculo foi dispensado e o meio de manutenção sem tripsina; no tratamento 3 o inóculo foi mantido e o meio de manutenção continha tripsina na concentração de 5 µg/mL; no tratamento 4 o inóculo foi mantido e o meio de manutenção continha tripsina na concentração de 10 µg/mL. Todos os inóculos continham tripsina na concentração de 5 mg/mL. Dentre as amostras estudadas, 15 foram isoladas com sucesso, o que representa uma eficiência de 75% (15/20). Dentre os protocolos, o tratamento 3 foi o que apresentou melhor desempenho, considerando-se o número de passagens seriadas, a ausência de citotoxidade e significância estatística (p < 0,001), quando se aplicou o teste de Freedman e o teste de Wilcoxon. neonatos levandose levando PAGE. PAGE . (PAGE) diarréicas leitões µg/mL µgmL µg mL mgmL mg mg/mL estudadas sucesso 75 15/20. 1520 15/20 (15/20) desempenho considerandose considerando p 0,001, 0001 0,001 , 0 001 0,001) Wilcoxon (PAGE 7 152 15/2 (15/20 000 0,00 00 15/ (15/2 0,0 (15/ 0, (15 (1 (

ABSTRACT Rotavirus is one of the most important etiological agents in infant gastroenteritis and diarrhea in neonatal animals. The purpose of this study was the optimization of isolation of rotaviruses in MA104 (fetal kidney Rhesus monkey) cells by the comparison of culture, taking into account the number of samples, different treatments with trypsin, number of serial passages, and positivity by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Twenty diarrheic fecal samples of calves and piglets from São Paulo, State, Brazil, all positive for rotavirus in ELISA and PAGE, were submitted to four isolation protocols: in treatment 1, the inoculum was left on the monolayer and the maintenance medium was trypsin-free; treatment 2 was the same as treatment 1 except that the inoculum was discarded; in treatment 3 the inoculum was left on the monolayer and the maintenance medium had 5 µg/mL of trypsin; treatment 4 was the same as the monolayer treatment 3, except that the maintenance medium had 10 µg/mL of trypsin. Fifteen samples were successfully isolated, representing an efficacy of 75% (15/20). Treatment 3 was the most suitable because the lower number of serial passages and lower cytotoxity to the cells, with statistical significance (p < 0.001) using Freedman's and Wilcoxon's tests. animals MA MA10 fetal monkey culture trypsin PAGE. PAGE . (PAGE) Paulo State Brazil protocols trypsinfree free trypsin-free discarded µgmL µg mL isolated 75 15/20. 1520 15/20 15 20 (15/20) p 0.001 0001 0 001 Freedmans Freedman s Wilcoxons Wilcoxon tests MA1 (PAGE 7 152 15/2 (15/20 0.00 000 00 15/ (15/2 0.0 (15/ 0. (15 (1 (

RESUMO O objetivo do presente trabalho foi estudar, pela técnica de Spoligotyping, 43 isolados de Mycobacterium bovis, provenientes de bovinos abatidos no Estado de São Paulo, em 12 diferentes espoligotipos. Destes isolados 35 foram classificados em 6 espoligotipos já conhecidos (SB0295, SB0121, SB0140, SB0120, AR28 e SB0122) e os outros 8 em 6 novos espoligotipos. Vinte e nove amostras foram classificados nos espoligotipos SB0295, SB0121 e SB0140, sendo o espoligotipo SB0140 majoritário na Argentina e presente no Paraguai e Uruguai. O espoligotipo SB0120 é o mais freqüente na França (26%), tendo sido encontrado na Bélgica, China, Dinamarca, Iran, Japão, Portugal, Rússia, África do Sul, Espanha, Sri Lanka e Holanda. O espoligotipo AR28, já foi encontrado na Argentina e no Brasil. O espoligotipo SB0122 foi referido apenas na Holanda. Dos novos espoligotipos encontrados no presente estudo, é importante ressaltar, que até o momento 6 deles são espoligotipos únicos, dois isolados como espoligotipo N7 e dois isolados como espoligotipo N8. Estes resultados mostram que existem no Brasil espoligotipos que parecem, até o momento, ser compartilhados entre Brasil, Argentina e Europa. Sendo assim a discriminação molecular de isolados de M. bovis através do Spoligotyping constitui-se numa ferramenta para sistemas de vigilância na detecção de focos de tuberculose bovina. estudar 4 Paulo 1 3 SB0295 SB (SB0295 AR AR2 SB012 SB014 Uruguai 26%, 26 26% , (26%) Bélgica China Dinamarca Iran Japão Portugal Rússia Sul Espanha Holanda estudo ressaltar únicos N N8 parecem Europa M constituise constitui se bovina SB029 (SB029 SB01 2 (26% SB02 (SB02 SB0 (26 (SB0 (2 (SB (

ABSTRACT This goal of this research was to study, by Spoligotyping, 43 Mycobacterium bovis isolates, from cattle slaughtered in the State of São Paulo, typed in 12 different spoligotypes. Among these isolates 35 were classified in 6 spoligotypes known already, and 8 isolates in 6 new spoligotypes. Within those, 29 isolates corresponded to the SB0295, SB0121 and SB0140 spoligotypes. The SB0140 spoligotype is the major type found in Argentina and is also present in Paraguay and Uruguay. The SB0120 spoligotype is the most frequently observed type in France (26%) and has also benn in Belgium, China, Denmark, Iran, Japan, Portugal, Russia, South Africa, Sri Lanka and the Netherlands. The AR28 spoligotype has also benn found in Argentina and Brazil. SB0122 was only cited in the Netherlands. It is important to emphasize that among the new spoligotypes found in the present study, at the moment, there are 6 unique spoligotypes, 2 of them isolated as N7 spoligotype and 2 isolated as the N8 spoligotype. The results show that there are in Brazil spoligotypes that, up to this moment, seem to be shared between Brazil, Argentina and Europe, and therefore the molecular discrimination of the M. bovis isolates by the Spoligotyping constitutes a tool for surveillance systems in detecting focuses of bovine tuberculosis. study 4 Paulo 1 3 already those SB0295 SB SB012 SB014 Uruguay 26% 26 (26% Belgium China Denmark Iran Japan Portugal Russia Africa Netherlands AR AR2 moment N Europe M tuberculosis SB029 SB01 (26 SB02 SB0 (2 (

RESUMO O Parvovírus suíno (PVS) vem sendo identificado em todo o mundo como um importante agente causal de distúrbios reprodutivos em suínos, sendo responsável por expressivas perdas econômicas. Este trabalho objetivou estudar a soroprevalência de anticorpos anti-PVS em suínos do Município de Uruará, Estado do Pará, determinada pela técnica de inibição de hemaglutinação. Foram testadas todas as amostras de soros (103 espécimes) provenientes de 36 propriedades de um total de 2.200 propriedades. Uma propriedade foi considerada positiva se possuísse pelo menos uma amostra reagente. Considerando positivos soros com título igual ou superior a 8, a prevalência estimada para propriedades foi superior a 79,9%, com nível de confiança de 99%. Considerando positivos soros com título superior a 80, o valor da prevalência estimada para propriedades está compreendido entre 60,9 e 89,1%, com nível de confiança de 95%. Independentemente do ponto de corte adotado, os intervalos de prevalência estimados demonstram a ampla disseminação do agente nas propriedades e indicam a possibilidade da participação deste agente em distúrbios reprodutivos em suínos. PVS (PVS econômicas antiPVS anti Uruará Pará hemaglutinação 103 (10 espécimes 3 2200 2 200 2.20 reagente 8 799 79 9 79,9% 99 99% 80 609 60 60, 891 89 1 89,1% 95 95% adotado 10 (1 220 20 2.2 7 79,9 6 89,1 ( 22 2. 79, 89,

ABSTRACT Porcine parvovirus has been identified worldwide as an important agent of reproductive disease in pigs, being responsible for large economic losses. This survey aimed to study the herd prevalence of serical antibodies against Porcine Parvovirus in small farms of Uruará county in Pará state, Northern Brazil by using Hemaglutination Inhibition assay. Sera from all pigs (103 specimens) from 36 farms were sampled from a total of 2,200 farms. Considering positive sera specimens with titer equal to or greater than 8, the herd prevalence of serical antibodies against porcine parvovirus was estimated to be greater than 79.9%, with 99% confidence level. Considering positive sera specimens with titer greater than 80, the herd prevalence ranges from 60.9 to 89.1% with 95% confidence level. The prevalence in the sampled region, whatever the cut-off adopted, denotes a widespread presence of porcine parvovirus infection among the farms, focusing the possibility of the participation of this agent in reproductive disorders in pigs. losses state assay 103 (10 3 2200 2 200 2,20 8 799 79 9 79.9% 99 level 80 609 60 60. 891 89 1 89.1 95 region cutoff cut off adopted 10 (1 220 20 2,2 7 79.9 6 89. ( 22 2, 79.