Abstract Plinia cauliflora is an important Brazilian species that produces highly appreciated fruits, with a great potential of commercialization. However, the high cost of seedlings is a bottleneck for the expansion of commercial orchards. The present study aimed to investigate somatic embryogenesis as a propagation method for P. cauliflora using seeds as explants. To induce embryogenic mass (EM) and somatic embryo (SE) development we evaluated the supplementation of culture medium with different concentrations of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), combined or not with activated charcoal (AC). For the embryo maturation, we investigated the effects of AC, polyethylene glycol (PEG), Gelzan®, 6-benzylaminopurine and gibberellin supplementation. For the EM induction, the best results were obtained in MS culture medium supplemented with 300 μM 2,4-D and 1 g L-1 AC. During the first maturation phase, the supplementation of 30 g L-1 PEG improved the somatic embryo formation at the torpedo and cotyledonary stages, whereas the maturation treatments did not result in the conversion of the embryos into plantlets. The anatomical analysis showed that the 2,4-D presence for 60 days may have been deleterious for embryonic development. These results represent the first report of P. cauliflora somatic embryogenesis and its feasibility for mass propagation. fruits commercialization However orchards P explants (EM SE (SE 2,4dichlorophenoxyacetic 24dichlorophenoxyacetic dichlorophenoxyacetic 2,4 2 4 2,4D, 24D D , (2,4-D) AC . (AC) PEG, (PEG) Gelzan Gelzan® 6benzylaminopurine benzylaminopurine 6 induction 2,4D L1 L L- phase 3 stages plantlets 4dichlorophenoxyacetic 24 2, 4D (2,4-D (AC (PEG

RESUMO: A pupunheira é uma palmeira comercialmente importante para a produção de palmito. A embriogênese somática, técnica efetiva para propagação massal, foi estabelecida com sucesso para essa espécie. Além disso, um sistema de imersão temporária aumentou a regeneração de plantas. Entretanto, a produção pode ser melhorada através da compreensão da dinâmica de crescimento e modificações do meio de cultura. O estudo objetivou avaliar o crescimento de plantas em diferentes meios de cultura em um sistema de imersão temporária e correlacionar os resultados com a absorção de nutrientes durante o período de crescimento. Plantas derivadas de embriões somáticos, com aproximadamente 1 cm de comprimento, foram cultivadas por 12 semanas em um sistema tipo frasco gêmeo contendo sais do MS, Y3 ou N6, vitaminas de Morel e Wetmore e 3% de sacarose, com renovação mensal do meio de cultura. O crescimento e os teores de nutrientes nas plantas foram determinados após 12 semanas de cultivo. Os sais do MS e Y3 foram os mais apropriados para o crescimento vegetal. O número e comprimento de raízes foi 52,52% e 40,42% maior no meio MS do que no meio N6, respectivamente, e o número de raízes no meio Y3 foi 37,74% maior que no meio MS, o que é importante para a sobrevivência após a aclimatização. K e Na foram os nutrientes mais importantes para a pupunheira. O N não foi requerido em altas concentrações como verificado na formulação do meio Murashige e Skoog. O meio de Chu (N6) não gerou plantas de boa qualidade, possivelmente devido à ausência dos micronutrientes Mo, Cu e Co.

ABSTRACT: Peach palm is a domesticated palm commercially important for the production of fruits and hearts of palm. Somatic embryogenesis, an effective technique for mass propagation, was successfully established for this species. Furthermore, a temporary immersion system improved plant regeneration. However, production can be further improved by understanding the peach palm’s growth dynamic and modifications of culture media. The aims of this study were to evaluate the growth of plantlets cultured in different culture media in a temporary immersion system and to correlate the results with nutrient uptake during the growth period. Somatic embryo-derived young plantlets approximately 1 cm in length were cultivated for 12 weeks in a twin flask system containing MS, Y3 or N6 salts, Morel and Wetmore vitamins and 3% sucrose, with a monthly medium refreshment. Growth was measured and mineral analysis of the plantlets was carried out after 12 weeks of culture. The Y3 and MS salts were the most appropriate for the plant growth. Number of roots was 52.52% higher and the root size was 40.42% between the N6 and MS medium and the root number in Y3 medium was 37.74% greater than in MS medium, which is important for post acclimatization survival. K and Na are important elements for peach palm. N is not required at such a high concentration as in Murashige and Skoog formulation. The Chu (N6) medium did not generate high quality plantlets, possibly due to the absence of some micronutrients, like Mo, Cu and Co.

ABSTRACT. Plinia peruviana is a species that is native to Brazil and is important due to the taste and medicinal properties of its fruits. Young leaves and split mature seeds were used as explants to initiate somatic embryogenesis to obtain a large number of plants in a short period of time. Leaf discs were cultured in MS medium containing various concentrations of 2,4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid) or picloram (4-amino-3,5,6-trichloro-2-pyridinecarboxylic acid). In the case of the mature seeds, various concentrations of glutamine, 2,4-D and a combination of auxin and BAP (6-benzylaminopurine) were tested for somatic embryogenesis induction. For somatic embryo maturation, several concentrations of PEG 6000 (polyethylene glycol; up to 90 g L-1) were tested. After 60 days of culture using leaf discs, callus formation occurred in all treatments, with the highest averages obtained with 10 μM 2,4-D. However, these calluses did not form somatic embryos. For the cultured seeds, the best treatment was the MS medium with 1,000 mg L-1 glutamine and 10 μM 2,4-D without BAP. The supplementation of 60 g L-1 PEG 6000 was sufficient to promote the maturation of the somatic embryos. Histological analyses of the calluses that were formed from leaf discs showed nonembryogenic characteristics. In contrast, the calluses that originated from mature seeds had small and round cells with little vacuolation, which are characteristics of embryogenic structures.

Resumo: O objetivo deste trabalho foi isolar bactérias endofíticas de cultura de tecidos e de folhas de jabuticabeira (Plinia peruviana) e avaliar seu potencial como bactérias promotoras de crescimento de plantas. As bactérias foram isoladas a partir de segmentos nodais cultivados in vitro e de folhas de árvore sob condições naturais, tendo totalizado 11 e 54 isolados, respectivamente. Os isolados foram caracterizados pela morfologia da colônia. Foram quantificados os compostos indólicos produzidos pelos isolados, na presença ou na ausência de 100 mg L-1 de triptofano. Os maiores produtores destes compostos foram identificados pelo sequenciamento do gene 16S rRNA e foram inoculados em sementes de jabuticaba, tendo-se utilizado Azospirillum brasilense (Ab-V6) como controle positivo. Também avaliou-se a sensibilidade das bactérias a oito antibióticos. Todas as bactérias avaliadas produziram compostos indólicos, especialmente Bacillus sp., com quantidade de 27,41 μg mL-1. A taxa de germinação das sementes inoculadas com Stenotrophomonas sp. foi elevada - 97,34% em comparação à de 74,67% do controle negativo. Bacillus sp. e Stenotrophomonas sp. também aumentaram a velocidade de germinação. O cloranfenicol limitou o crescimento de 82% dos isolados, seguido pelas amoxicilina, gentamicina, levofloxacina e tetraciclina, que limitaram 70%; a eritromicina foi eficaz apenas contra 35%. As bactérias endofíticas isoladas da jabuticaba apresentam características de bactérias promotoras de crescimento de plantas, e Bacillus sp. e Stenotrophomonas sp., provenientes da cultura de tecido, são capazes de aprimorar a germinação de sementes de jabuticaba.

Abstract: The objective of this work was to isolate endophytic bacteria from tissue culture and leaves of jaboticaba (Plinia peruviana) and to evaluate their potential as plant growth-promoting bacteria. The bacteria were isolated from nodal segments grown in vitro and from leaves from a tree under natural conditions, totaling 11 and 54 isolates, respectively. The isolates were characterized by colony morphology. The indolic compounds produced by the isolates, in the presence or absence of 100 mg L-1 tryptophan, were quantified. The greatest producers of these compounds were identified by sequencing the 16S rRNA gene and were inoculated on jaboticaba seeds, using Azospirillum brasilense (Ab-V6) as a positive control. The sensitivity of bacteria to eight antibiotics was also evaluated. All assessed bacteria produced indolic compounds, especially Bacillus sp., with a content of 27.41 μg mL-1. The germination rate of the seeds inoculated with Stenotrophomonas sp. was high - 97.34% compared with that of 74.67% of the negative control. Bacillus sp. and Stenotrophomonas sp. also sped up germination. Chloramphenicol limited the growth of 82% of the isolates, followed by amoxicillin, gentamicin, levofloxacin, and tetracycline, which limited 70%; erythromycin was only effective against 35%. The endophytic bacteria isolated from jaboticaba show characteristics of plant growth-promoting bacteria, and Bacillus sp. and Stenotrophomonas sp., obtained from tissue culture, are capable of enhancing jaboticaba seed germination.

RESUMO Na micropropagação de plantas, a etapa de estabelecimento é dificultada pela presença de micro-organismos em tecidos oriundos de matrizes do campo, especialmente para bambu. Objetivou-se estabelecer um protocolo eficiente de assepsia de explantes de Bambusa oldhamii oriundos de plantas em campo e efetuar a identificação molecular de um possível isolado bacteriano endofítico. Os explantes foram expostos subsequentemente a álcool 70 %, hipoclorito de sódio 1 % (NaOCl), cloreto de mercúrio 0,1 % (HgCl2), tiofanato-metílico (Cercobin®) e digliconato de clorexidina (Riohex® 2 %), em diferentes combinações, e introduzidos em meio Murashige and Skoog (sólido ou líquido), acrescido ou não de 4 mL L-1 de Plant Preservative Mixture (PPMTM), em sete tratamentos. A assepsia e imersão dos explantes no meio de cultura líquido contendo 4 mL L-1 de PPMTM inibiram visualmente o crescimento de bactérias e fungos, permitiram o desenvolvimento de brotações com comprimento médio de 2,2 cm e posteriores subcultivos, sendo o melhor tratamento usado para o estabelecimento in vitro de B. oldhamii. A identificação molecular da bactéria por meio do sequenciamento do 16S rDNA permitiu identificar o isolado bacteriano como Ralstonia sp., com 100 % de similaridade, e as análises filogenéticas o agruparam com Ralstonia pickettii. Além disso, a bactéria se mostrou sensível a 4 mL L-1 de PPMTM pelo teste de concentração mínima inibitória.

ABSTRACT In plant micropropagation, the establishment stage is difficult, due to the presence of microorganisms in tissues from field-grown matrices, especially for bamboo. This study aimed to establish an efficient asepsis protocol for Bambusa oldhamii explants from field plants, as well as to carry out the molecular identification of a possible endophytic bacterial isolate. The explants were exposed to 70 % alcohol, 1 % sodium hypochlorite (NaOCl), 0.1 % mercuric chloride (HgCl2), thiophanate-methyl (Cercobin®) and chlorhexidine digluconate (2 % Riohex®) in different combinations, and introduced into Murashige and Skoog culture medium (solid or liquid), supplemented or not with 4 mL L-1 of Plant Preservative Mixture (PPMTM), totaling seven treatments. The asepsis and immersion of the explants in the liquid culture medium containing 4 mL L-1 of PPMTM visually inhibited the bacterial and fungal growth, allowed the development of shoots with a mean length of 2.2 cm and posterior subcultures, being the best treatment used for the in vitro establishment of B. oldhamii. The molecular identification of an endophytic bacterium performed by 16S rDNA sequencing allowed to identify the bacterial isolate as Ralstonia sp., with 100 % of similarity, and the phylogenetic analysis grouped it with Ralstonia pickettii. In addition, the bacterial isolate showed to be sensitive to 4 mL L-1 of PPMTM by the minimum inhibitory concentration test.

RESUMO Bambusa oldhamii Munro é uma espécie de bambu lenhoso de crescimento rápido e com forte apelo comercial. No Brasil, o uso dessa espécie é limitado, devido, principalmente, à baixa disponibilidade de mudas para plantios comerciais. A micropropagação é uma técnica de produção de mudas em larga escala, porém, protocolos de estabelecimento de culturas assépticas são dificultados pela presença de contaminação endofítica. Objetivou-se desenvolver um protocolo de estabelecimento in vitro de B. oldhamii, bem como efetuar a identificação molecular de fungos associados aos explantes utilizados. Segmentos nodais de plantas adultas cultivadas a campo foram utilizados como explantes. Esse material foi submetido a dois experimentos, avaliando-se o efeito de 6-benzylaminopurine (BAP) na multiplicação e de Plant Preservative Mixture (PPMTM) na desinfestação. No primeiro, foram utilizadas concentrações de BAP de 10 µM, 15 µM ou 20 µM, combinadas com 1 mL L-1, 2 mL L-1 ou 3 mL L-1 de PPMTM, e, no segundo, 0 µM, 2,5 µM, 5 µM ou 7,5 µM de BAP, com 4 mL L-1 de PPMTM, ambos adicionados a meio de cultura MS. Após 21 dias de cultivo, o uso de 4 mL L-1 de PPMTM inibiu o crescimento bacteriano e reduziu a contaminação fúngica. A presença de BAP no meio de cultura acima de 10 µM inibiu a formação e o crescimento de brotos novos, enquanto as concentrações inferiores a 7,5 µM não tiveram efeito. A identificação molecular dos fungos endofíticos isolados durante a cultura in vitro indicou a presença de inúmeras espécies fúngicas, ampliando o conhecimento sobre a diversidade de fungos associados ao bambu.

ABSTRACT Bambusa oldhamii Munro is a fast-growing species of woody bamboo with strong commercial appeal. In Brazil, the use of this species is limited, mainly due to the low availability of seedlings for commercial plantations. Micropropagation is a technique used for the large scale production of seedlings, but protocols for the establishment of aseptic cultures are hampered by the presence of endophytic contamination. This study aimed to develop an in vitro establishment protocol for B. oldhamii, as well as to make the molecular identification of fungi associated with the explants used. Nodal segments of adult plants grown in the field were used as explants. This material was submitted to two experiments carried out to evaluate the effect of 6-benzylaminopurine (BAP) on multiplication and of Plant Preservative Mixture (PPMTM) as a disinfectant. In the first one, 10 µM, 15 µM or 20 µM of BAP were combined with 1 mL L-1, 2 mL L-1 or 3 mL L-1 of PPMTM; while the second one used 0 µM, 2.5 µM, 5 µM or 7.5 µM of BAP with 4 mL L-1 of PPMTM, both added to MS culture medium. After 21 days of culture, the use of 4 mL L-1 of PPMTM inhibited the bacterial growth and reduced fungal contamination. The addition of BAP to the culture medium above 10 µM inhibited the formation and growth of new shoots, while additions of less than 7,5 µM had no effect. The molecular identification of the endophytic fungi isolated during the in vitro culture indicated the presence of numerous fungal species, increasing the current knowledge about the diversity of fungi associated with bamboo.

RESUMO Esse trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de vários fatores que podem afetar a transformação genética de explantes cotiledonares de Eucalyptus saligna mediante co-cultura com a cepa EHA105 de Agrobacterium tumefaciens. Foi utilizado o vector pBI121 carregando o gene repórter gus sob controle do promotor 35SCaMV. Foi estudado o efeito dos fatores a seguir: pré-cultura dos explantes, uso de diferentes antibióticos e presença de acetosiringona (AS) nos meios de co-cultura. Uma solução contendo ácido ascórbico (250mg.L-1), ácido cítrico (25mg.L-1) e PVP-40 (1g.L-1) foi utilizada no momento da excisão dos explantes. A pré-cultura dos explantes antes da co-cultura com a bactéria foi de 4 dias, em meio de cultura MS suplementado de 4,4µM BAP e 2,7ìM ANA. Após a co-cultura três concentrações de canamicina (12,5; 25 e 50mg.L-1) combinadas com 300mg.L-1 de Augmentin® no meio de cultura foram testadas. O efeito do Augmentin® (300mg.L-1) nos explantes foi comparado ao da cefotaxima (500mg.L-1), em meio contendo 50mg.L-1de Km. Foi concluído que Augmentin® estimula a organogênese, em comparação com a cefotaxima, que a concentração de 12,5mg.L-1 de Km permite a seleção de explantes transformados com o gene gus e, finalmente, a adição de AS (50ìM) aos meios de co-cultura líquido e sólido tem efeito positivo sobre a expressão do gene gus. O uso de antioxidante não é necessário e a pré-cultura dos explantes antes da inoculação com A. tumefaciens não tem efeito na regeneração de gemas nem na expressão do gene gus. A eficiência de transformação foi de 1,5%.

ABSTRACT This study aimed to evaluate the effect of factors that may affect the genetic transformation of cotiledonary explants of Eucalyptus saligna mediated by EHA105 strain of Agrobacterium tumefaciens. The vector pBI121 carrying gus gene under control of 35S CaMV promoter was used. The effect of the following factors was evaluated: explant pre-culture, use of different antibiotics and presence of acetosyringone (AS) in co-culture media. An antioxidant solution was also used during excision, containing ascorbic acid (250mg.L-1), citric acid (25mg.L-1) and PVP-40 (1g.L-1). Pre-culture of the explants before the co-culture with bacteria was done over a 4-day period in MS culture medium supplemented with 4.4µM BAP and 2.7ìM NAA. After theco-culture period, three concentrations of kanamycin (12.5;25 and 50mg.L-1) combined with 300mg.L-1 Augmentin® in the culture medium were tested The influence of the antibiotic was also evaluated by keeping the explants in a medium containing 50mg.L-1 Km and 300mg.L-1 Augmentin® or 500mg.L-1 cefotaxime. It was concluded that Augmentin® stimulates organogenesis, that a Km concentration of 12.5mg.L-1 allows selection of explants transformed with gus gene and, finally, the addition of AS (50ìM) to the liquid and solid co-culture media has a positive effect on gus gene expression. Moreover, the use of an antioxidant solution during cotyledon excision is dispensable and the pre-culture of the explants has no effect on bud regeneration or gus gene expression. A transformation efficiency of 1.5% was reached.

RESUMO O híbrido interespecífico BRS Manicoré (E. guineensis x E. oleifera), tem características agronômicas superiores. Porém, a taxa de germinação é baixa (30%) e o processo demorado quando as sementes são semeadas de forma convencional. O objetivo deste trabalho foi otimizar a germinação in vitro de embriões zigóticos desse híbrido comparando os lotes de sementes. A viabilidade dos embriões zigóticos foi avaliada pelo teste de tetrazólio (0,075%) durante 4 horas. Os embriões foram cultivados nos meios de cultura MS e Y3, com e sem a adição de NaH2PO4, assim como MS, MS 1/2 e N6. No meio MS contendo NaH2PO4, a taxa de germinação é aumentada de 40 a 70% em comparação com o meio sem fosfato. A comparação entre os meios de cultura MS, MS 1/2, N6 e Y3 mostraram que 75% dos embriões zigóticos cultivados no meio Y3 formaram plantas completas (raiz e parte aérea definida), uma porcentagem maior que dos embriões cultivados nos meios MS, MS 1/2 e N6 (46; 35 e 17% respectivamente). No mesmo meio de cultura Y3, os embriões apresentaram tamanho maior (36% ≥ 2 cm e 30% ≥ 5 cm) que nos outros meios. Resultados obtidos pelo teste de tetrazólio foram semelhantes aos de germinação, mostrando o efeito do genótipo de cada lote de sementes. A adição de NaH2PO4 é fundamental para a germinação e o desenvolvimento das plântulas nos meios de cultura que não contêm fosfato ou com baixa concentração de fosfato.

ABSTRACT The interspecific oil palm hybrid BRS Manicoré (E. guineensis x E. oleifera) has superior agronomic characteristics. However, the germination rate is low (30%) and the process is slow when the seeds are sown in a conventional form. The purpose of this study was to optimize the in vitro germination of zygotic embryos of this hybrid comparing seed lots. The viability of zygotic embryos was evaluated by the tetrazolium test (0.075%) for 4 h. The embryos were cultured on MS and Y3 culture media, with and without the addition of NaH2PO4, as well as on MS, MS1/2 and N6 medium. In MS medium containing NaH2PO4, the germination rate was increased from 40 to 70% in comparison with the medium without sodium phosphate. The comparison between the culture media MS, MS 1/2, N6 and Y3 showed that 75% of zygotic embryos cultured in the Y3 medium formed whole plants (with roots and shoots defined), a higher percentage than embryos cultured on MS, MS 1/2 and N6 media (46, 35 and 17% respectively). In the same Y3 culture medium, the embryos were larger (36% ≥ 2 cm and 30% ≥ 5 cm) than in the other media. Results obtained by the tetrazolium test were similar to those of germination, showing the effect of the genotype of each seed lot. For the germination and development of plantlets it is essential to add NaH2PO4 to a culture medium containing no phosphate or with a low phosphate concentration.

Considering the necessity of Acrocomia aculeata propagation for large-scale production, the aim of this study was to establish a somatic embryogenesis protocol using the thin cell layer (TCL) technique. Aerial parts of in vitro plants were transversally cut at the base into eight TCLs and placed in a culture medium for callus induction. The induction medium was composed of Y3 salts and Morel´s vitamins and supplemented with 150, 300 or 600 μM picloram. After 12 weeks the calli were transferred to a medium supplemented with BAP or 2-iP (12.5 or 25 μM). After 18 weeks, the somatic embryo clusters were transferred to a conversion medium (plant growth regulator-free medium). Primary callus induction rate was higher in the first three TCLs and in media containing 150 or 300 µM picloram. The best maturation results were obtained in medium containing 12.5 μM 2-iP or 12.5 μM BAP. Few somatic embryos converted into plants. The histological analyses showed that callus induction started adjacent to vascular bundles after two days of culture, and somatic embryos arose in the periphery of nodular calli. This study showed that the TCL embryogenesis protocol is promising for in vitro multiplication of A. aculeata.

RESUMO Os objetivos deste trabalho foram avaliar diferentes meios de cultura na organogênese indireta e na multiplicação in vitro de brotos de Eucalyptus benthamii x Eucalyptus dunnii. Para organogênese, explantes foliares foram excisados no sentido transversal e cultivados in vitro, sendo os seguintes fatores testados: dois meios de cultura (MS N/2 e JADS) adicionados de 0,1 µM de ANA, duas concentrações de thidiazuron (0,1 e 0,5 μM) e presença ou não de PVP-40 (250 mg L-1). Após 70 dias de cultivo foram avaliadas as porcentagens de explantes oxidados totalmente, formando calo, produzindo antocianina, formando gema, formando brotações e o número de brotações formadas por explante regenerando. No experimento de multiplicação, brotações isoladas foram cultivadas em meio MS, JADS e WPM, adicionados de 1,11 μM de BAP. Foram realizados quatro subcultivos a cada 28 dias e em cada subcultivo foram avaliados: a porcentagem de oxidação, de explantes apresentando clorose total ou parcial, massa fresca e número médio de brotos por explante. O meio de cultura MS N/2 suplementado com 0,1 µM de ANA, 0,5 µM de TDZ e PVP-40 promoveu a maior taxa de organogênese (8,3%). No meio de cultura MS com 1,11 μM de BAP, a taxa de multiplicação foi maior que nos outros meios, no primeiro e segundo subcultivos (9,28 e 9,24 por mês), não havendo diferença entre os três meios nos demais subcultivos.

ABSTRACT The aims of this research were to evaluate different culture media for indirect organogenesis and shoot multiplication of Eucalyptus benthamii x Eucalyptus dunnii. For organogenesis, leaf explants were used to test the following treatments: two culture media (MS N/2 and JADS) supplemented with 0.1 µM 1-naphthaleneacetic acid (NAA) and thidiazuron (TDZ) (0.1 or 0.5 μM), with or without PVP- 40 (250 mg L-1). The percentage of oxidized explants, callus forming explants, explants with anthocyanin, buds, shoots and the shoot number per explant were evaluated. In the multiplication experiment, isolated shoots were cultivated in MS, JADS and WPM media, all supplemented with 1.11 μM BAP. Four subcultures were carried out every 28 days. In every subculture the explant oxidation, partial or total leaf chlorosis, fresh mass and mean number of shoot per explant were evaluated. The MS N/2 medium supplemented with 0.1 µM NAA and 0.5 µM TDZ promoted the highest rate of organogenesis (8.3%) and the culture media MS supplemented with 1.11 μM BAP the multiplication rate was higher than in the other media, in the first and the second subcultures (9.28 and 9.24, respectively), without differences between the three media in the following subcultures.

RESUMO Ocotea porosa apresenta sementes com forte dormência tegumentar, comportamento recalcitrante, baixa germinação e irregularidade, o que dificulta a propagação natural. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo de embriogênese somática para Ocotea porosa. Eixos embrionários zigóticos imaturos foram inoculados em meio de cultura WPM suplementado com 2,4-D (200 µM) combinado ou não com caseína hidrolisada ou glutamina (0,5 ou 1 g l-1) durante 90 dias. A embriogênese repetitiva foi induzida em meio contendo 2,4-D (22,62 µM) combinado com 2-iP (2,46 µM) seguido de transferência para meio de cultura com caseína hidrolisada ou glutamina (1 g l-1), durante 90 dias cada. A maturação dos embriões somáticos foi testada em meio de cultura contendo ANA (0,5 μM) e 2-iP (5, 10 ou 20 μM). A maior porcentagem de embriões somáticos induzidos (8,3%) foi observada em meio de cultura WPM contendo 200 µM de 2,4-D e 1 g l-1 de caseína hidrolisada e o desenvolvimento de embriões somáticos ocorreram de forma indireta. A embriogênese somática repetitiva foi promovida em meio de cultura WPM contendo caseína hidrolisada ou glutamina, no entanto, a caseína hidrolisada promoveu a manutenção da competência embriogênica por mais de dois anos. Na fase de maturação, houve baixa progressão dos embriões globulares para os estádios cordiforme e torpedo. Os diferentes estádios ontogenéticos de embriões somáticos de Ocotea porosa foram caracterizados pelo estudo histológico.

ABSTRACT Ocotea porosa seeds have strong tegument dormancy, recalcitrant behavior, low and irregular germination and that makes its natural propagation difficult. The aim of this study was to establish a protocol of regeneration of Ocotea porosa from somatic embryogenesis. Immature embryonic axes were inoculated on WPM culture medium supplemented with 2.4-D (200 µM) combined or not with hydrolyzed casein or glutamine (0.5 or 1 g l-1), during 90 days. The repetitive embryogenesis was induced on medium with 2.4-D (22.62 µM) combined with 2-iP (2.46 µM) followed by transfer to culture medium with hydrolyzed casein or glutamine (1 g l-1) during 90 days. The maturation of somatic embryos was tested in culture medium containing NAA (0.5 μM) and 2-iP (5; 10 and 20 μM). The highest percentage of somatic embryos induction (8.3%) was observed in WPM culture medium containing 200 µM 2.4-D and 1 g L-1 hydrolyzed casein and the development of somatic embryos occurred indirectly. Repetitive somatic embryogenesis was promoted in WPM medium containing hydrolyzed casein or glutamine. However, the culture medium containing hydrolyzed casein promoted the maintenance of embryogenic capacity for more than two years. During the maturity phase, there was a low progression of globular embryos to cordiform and torpedo stages. The different ontogenetic stages of somatic embryos of Ocotea porosa were characterized by histological studies.

RESUMO A espécie Erythrina falcata Benth. (Fabaceae) é usada em sistemas agroflorestais, na restauração de florestas de mata ciliar, em locais sujeitos à inundação e na recuperação de ecossistemas degradados. O objetivo deste trabalho foi avaliar os possíveis efeitos do estresse hídrico na germinação de sementes de Erythrina falcata. O experimento foi realizado no Laboratório de Sementes Florestais da Universidade Federal do Paraná (UFPR) Paraná, Brasil. As unidades experimentais consistiram em caixas do tipo gerbox, contendo duas folhas de papel filtro e 25 sementes por caixa. Às folhas foi acrescido de 10 ml de cada solução osmótica. As caixas foram vedadas com parafilme e colocadas em câmaras de germinação do tipo Mangelsdorf, sob luz contínua à temperatura de 25±2 ºC. Testaram-se os seguintes potenciais osmóticos: 0.0; -0,2; -0,4; -0,6; -0,8 e -1,0 MPa para NaCl, manitol e PEG (6000). As sementes foram transferidas a cada dois dias para os mesmos potenciais osmóticos. A menor tolerância ao estresse hídrico foi observada simulando-o com PEG 6000. O limite para germinação está entre -0,2 e -0,4 MPa de PEG, enquanto que os potenciais osmóticos testados com NaCl e manitol não influenciaram o processo germinativo.

ABSTRACT Erythrina falcata Benth. (Fabaceae) species is used in agroforestry, restoration of riparian vegetation in flooded areas, and in the recovery of degraded ecosystems. This work aimed to evaluate the possible effects of water stresses on germination of Erythrina falcata seeds. The study was carried out in The Forestry Seeds Laboratory, Universidade Federal do Paraná (UFPR), in Parana state, Brazil. The experimental units consisted in boxes gerbox (25 seeds on 2 filter papers) with 10 ml of osmotic solution. Gerbox was sealed with PVC plastic film and led to germinate in Mangelsdorf type chamber (under light continues at 25±2 ºC). Six osmotic potentials (0.0; -0.2; -0.4; -0.6; -0.8; and -1.0 MPa) were induced with NaCl, manitol and polyethylene glycol (PEG 6000).The lowest tolerance limit to water stress was observed in PEG solutions. The germination limit was -0.2 to -0.4 MPa of PEG, whereas the osmotic potentials tested with NaCl and mannitol did not affect the germination process.

O híbrido Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla apresenta alta produtividade e potencial para indústrias de papel, celulose e fibras. A organogênese de explantes foliares de dois clones de E. grandis × E. urophylla foi estudada para verificar fatores como tempo de repicagem das plântulas matrizes em meio de multiplicação; tipo de explantes, folhas inteiras e de meias-folhas (porções basais e apicais) e dos dias que os explantes foliares permaneceram em meio de regeneração. Foram observadas diferenças na capacidade organogênica dos dois clones testados. A parte basal das folhas, coletadas de brotações repicadas a cada 17 dias, apresentou superioridade organogênica. Explantes foliares devem ser transferidos para novo meio de indução de brotações a cada cinco dias. Este estudo também teve como objetivo avaliar fatores que afetam a transformação genética de explantes foliares com o gene uidA, via co-cultivo com Agrobacterium tumefaciens, tais como a pré-cultura, a duração da co-cultura e a adição da acetoseringona no meio de cultura. As melhores condições para a expressão do gene uidA foram a cada dois dias de pré-cultura de explantes foliares, três dias de co-cultura com a bactéria e a adição de acetoseringona nos meios de pré e co-cultura.

The hybrid Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla presents high levels of productivity and potential for use in paper, cellulose and fiber industries. The bud organogenesis from leaf explants of two clones of E. grandis × E. urophylla was studied in order to verify the effect of several factors: subculture duration on multiplication medium, type of explants, entire and half leaves: basal and apical portions, and duration of the culture on a regeneration medium. Differences in organogenic capacity of the two clones tested were observed. The explant most recommended for organogenesis is the basal section of the leaf collected from shoot clusters subcultured every 17 days. Moreover, the leaf explants must be transferred to a fresh bud induction medium every five days. This study also aimed at evaluating factors affecting the genetic transformation of leaf explants with the uidA gene, via co-cultivation with Agrobacterium tumefaciens, such as the pre-culture of the explants on a specific medium, the duration of their co-culture with the bacteria and the addition of acetosyringone to the culture media. The best conditions for the expression of the uidA gene were two days of pre-culture of the leaf tissues, three days of co-culture with the bacteria and the addition of acetosyringone in pre- and co-culture media.

O efeito de preparações de xiloglucanas (XG) de sementes de jatobá (Hymenaea courbaril var. stilbocarpa (Hayne) Y. T. Lee & Langenh.) no desenvolvimento do sistema radicular de Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. foi investigado. Os extratos de XG exerceram duplo efeito no sistema radicular, diminuindo o crescimento das raízes e aumentando a formação de raízes laterais. As alterações morfológicas observadas não foram causadas pelos oligossacarídeos que poderiam ter sido produzidos a partir da hidrólise do polímero de XG, já que o hidrolisado de XG induziu uma drástica inibição do processo de crescimento das plântulas de Arabidopsis thaliana. A análise histoquímica de expressão do gene GUS realizada com plantas de Arabidopsis thaliana transgênicas, com sete e 14 dias de idade, carregando a fusão CycB1;1-GUS, indicou que o melhor desenvolvimento das raízes laterais, com os extratos da XG de jatobá, não foi correlacionado com a expressão desse gene marcador do ciclo celular no sistema radicular. Uma potencial aplicação na agricultura dos extratos de XG de sementes de jatobá é discutida.

The effect of crude xyloglucan (XG) preparations from jatobá (Hymenaea courbaril var. stilbocarpa (Hayne) Y. T. Lee & Langenh.) seeds on Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. root system development was investigated. The XG extracts exerted a dual effect on root system development by slowing down root growth and improving lateral root formation. These observed morphological changes were not due to oligosaccharides that could be generated following hydrolysis of the XG polymers, since XG hydrolysate induced a drastic inhibition of the overall growth process of the Arabidopsis thaliana seedlings. Histochemical test of GUS gene expression assay performed on seven and 14-days-old transgenic Arabidopsis thaliana plants carrying the CycB1;1-GUS fusion indicated that the improvement of the lateral root development by jatobá XG extracts was not correlated with the expression of this cell cycle marker gene in the root system. A potential agricultural application of jatobá seeds XG extract is discussed.

O abacaxi ornamental (Ananas bracteatus Schult. f.) é bastante utilizado em composições paisagísticas para delimitar áreas ou canteiros. A micropropagação permite obter altas taxas de multiplicação, podendo ser uma alternativa viável e vantajosa de propagação vegetativa, visto que a demanda por esta espécie vem aumentando, tanto no mercado nacional quanto no internacional. Neste trabalho objetivou-se avaliar a influência de diferentes irradiâncias e concentrações de sacarose durante o enraizamento in vitro, sobre a sobrevivência das mudas na fase de aclimatização. Para tanto, foram testadas diferentes concentrações de sacarose (0, 10, 20 e 30 g L-1) no meio de enraizamento, bem como duas irradiâncias (22,9 e 66,9 mmol m-2 s-1) em sala de crescimento. O melhor resultado em termos de enraizamento foi obtido no meio de cultura contendo 30 g L-1 de sacarose sob irradiância de 66,9 mmol m-2 s-1. Após a fase de enraizamento in vitro, as plantas foram transferidas para casa de vegetação e mantidas sob nebulização intermitente por 60 dias. Os resultados de sobrevivência aos 30 e 60 dias não diferiram estatisticamente para os dois níveis de irradiância testados. Entretanto, para concentrações de sacarose, a testemunha apresentou sobrevivência inferior (50%) diferindo estatisticamente dos demais tratamentos que foram semelhantes entre si (95 a 100%).

Ornamental pineapple (Ananas bracteatus Schult. f.) is often used in landscape compositions in order to limit areas or borders. Micropropagation allows high multiplication rates and may be an interesting technique of vegetative propagation in order to meet the need of plants of this species that is rising on national and international markets. The objective of this study was to determine the effect of several light irradiances and sucrose concentrations during in vitro rooting on survival during the acclimatization stage. Several concentrations of sucrose (0, 10, 20 or 30 g L-1) in the rooting medium and two light irradiances (22.9 and 66.9 mmol m-2 s-1) in the culture room were tested. The best results of rooting were obtained on culture medium containing 30 g L-1 sucrose under an irradiance of 66.9 mmol m-2 s-1 . The plants were then transferred to the greenhouse and cultured under intermittent mist for 60 days. There was no significant difference among the results of survival under the two irradiances tested. However, for sucrose concentrations, the survival rate of the control (50%) was statistically inferior to that of the other treatments that were similar among them (95 and 100%).