Twenty-eight strains isolated from dog clinical samples identified as Staphylococcus pseudintermedius by mass spectrometry (MALDI-TOF) were studied to assess antimicrobial susceptibility by the diffusion method and clonal relationship by pulsed field gel electrophoresis (PFGE). Methicillin resistance (3/28 isolates; 10,7 %) was evaluated by mecA PCR. Fifteen strains (53.6 %) were resistant to at least one of the antibiotics tested, and eleven of them (39.3 %) showed multiple resistance (3 or more antimicrobial families). Eleven isolates (39.3 %) were resistant to erythromycin due to the presence of ribosomal methylase ermB, whereas clindamycin inducible resistance was not detected. Twenty-seven (27) clonal types were differentiated by PFGE, suggesting high clonal diversity. We emphasize that the finding of multiresistant S. psedintermedius strains is an emerging problem to be considered in veterinary diagnostic laboratory treatment of canine infections and in public health settings.

Se estudiaron 28 aislamientos obtenidos de muestras clínicas de perros e identificados por espectrometría de masas (MALDI-TOF) como Staphylococcus pseudintermedius; el objetivo fue evaluar la sensibilidad a los antimicrobianos por el método de difusión y establecer la relación clonal entre aislamientos por electroforesis en campo pulsado (PFGE). La resistencia a meticilina se evaluó mediante PCR por amplificación del gen mecA y se observó en 3/28 aislamientos (10,7 %). Quince aislamientos (53,6 %) presentaron resistencia a alguno de los antibióticos ensayados y 11 de ellos (39,3 %) presentaron resistencia múltiple (resistencia a 3 o más familias de antibióticos). Once aislamientos (39,3 %) presentaron resistencia a eritromicina, debido a la presencia de metilasa ribosomal ermB, y no se detectó resistencia inducible a clindamicina. Por PFGE se pudieron diferenciar 27 tipos clonales, lo cual demuestra gran diversidad clonal. Se destaca el hallazgo de aislamientos de S. pseudintermedius multirresistentes como una eventual problemática a considerar en el diagnóstico veterinario de laboratorio, el tratamiento de las infecciones caninas y el ámbito de la salud pública.

From August 2008 to December 2011, six metallo-ß-lactamase-producing isolates, four Enterobacter cloacae, one Klebsiella oxytoca and one Citrobacter freundii, were detected at Hospital Interzonal General de Agudos "Evita" in Lanús. All six isolates showed multiresistant profiles and the presence of the blaIMP-8 gene. Five isolates also expressed PER-2 extended spectrum ß-lactamase. The blaIMP-8 gene was found as the first cassette in a class 1 integron. However, the 3´ conserved sequence could not be detected in three isolates. In all cases, blaIMP-8 was transferred by conjugation to azide-resistant Escherichia coli J53. PFGE analysis revealed that the four E. cloacae isolates were not genetically related. These are the first metallo-ß-lactamases detected in this institution and our results suggest a possible intra- and inter-species horizontal dissemination of blaIMP-8.

Entre agosto de 2008 y diciembre de 2011 se detectaron en el Hospital Interzonal General de Agudos «Evita» de Lanús 6 aislamientos de enterobacterias productoras de metalo-ß-lactamasas, distribuidos en tres especies: Enterobacter cloacae (4), Klebsiella oxytoca (1) y Citrobacter freundii (1). Los seis aislamientos presentaron un perfil de multirresistencia y se confirmó la presencia del gen blaIMP-8. Cinco aislamientos además expresaron la ß-lactamasa de espectro extendido PER-2. El gen blaIMP-8 fue hallado como primer casete de un integrón de clase 1. Sin embargo, la secuencia 3´ conservada no pudo detectarse en tres aislamientos. En todos los casos, el gen blaIMP-8 fue transferido por conjugación a Escherichia coli resistente a azida. Mediante PFGE se observó que los cuatro aislamientos de E. cloacae no estuvieron genéticamente relacionados. Estos son los primeros hallazgos de metalo-ß-lactamasas en la institución, que sugieren una posible diseminación horizontal del gen blaIMP-8 intra e interespecies.

OBJECTIVE: To evaluate the capability of 17 national reference laboratories participating in the Latin American Quality Control Program in Bacteriology and Antibiotic Resistance (LA-EQAS) to detect emerging resistance mechanisms- namely: resistance of enterobacteria to carbapenems due to the presence of Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) and metallo-beta-lactamase (MBL) type IMP, and intermediate resistance of Staphylococcus aureus isolates to vancomycin (vancomycin-intermediate resistant S. aureus-VISA). METHODS: The following three isolates were sent to the 17 participating LA-EQAS laboratories: KPC -producing Klebsiella pneumoniae PAHO-161, IMP-producing Enterobacter cloacae PAHO-166, and S. aureus PAHO-165 with intermediate resistance to vancomycin. Performance of each of the following operations was evaluated: interpretation of sensitivity tests, detection of the resistance mechanism, and assessment of either inhibition halo size (disk diffusion method) or minimum inhibitory concentration (MIC). RESULTS: Concordance in the detection of resistance mechanisms was 76.4%, 73.3%, and 66.7% for the K. pneumoniae PAHO-161, E. cloacae PAHO-166, and S. aureus PAHO-165 strains, respectively. Concordance between the inhibition areas observed by the participating laboratories and the ranges established by the coordinating laboratory was acceptable for all three isolates, at 90.8%, 92.8%, and 88.9%, respectively. CONCLUSIONS: Overall concordance in on the detection of KPC, MBL, and VISA resistance mechanisms was 72.1%. We consider the national reference laboratories in Latin America capable of recognizing these emerging resistance mechanisms and expect that maximum levels of concordance will be reached in the future.

OBJETIVO: Evaluar la capacidad de 17 laboratorios nacionales de referencia que participan en el Programa Latinoamericano de Control de Calidad en Bacteriología y Resistencia a los Antimicrobianos (LA-EQAS) para detectar mecanismos de resistencia emergentes, a saber: resistencia de enterobacterias a carbapenemes por presencia de Klebsiella pneumoniae carbapenemasa (KPC); resistencia de enterobacterias a carbapenemes por presencia de metalobetalactamasas (MBL) tipo IMP, y resistencia intermedia a vancomicina de aislamientos de Staphylococcus aureus (VISA). MÉTODOS: Se enviaron los siguientes tres aislamientos a los 17 laboratorios participantes del LA-EQAS: Klebsiella pneumoniae OPS-161 productor de KPC, Enterobacter cloacae OPS-166 productor de IMP y S. aureus OPS-165 con resistencia intermedia a vancomicina. Se evaluó la interpretación de las pruebas de sensibilidad y detección del mecanismo de resistencia y el tamaño de los halos de inhibición (método de difusión por discos) o valor de la concentración inhibitoria mínima (CIM). RESULTADOS: La concordancia en la detección de los mecanismos de resistencia fue de 76,4%, 73,3% y 66,7% con respecto a la cepas K. pneumoniae OPS-161, E. cloacae OPS-166 y S. aureus OPS-165, respectivamente. La concordancia entre las zonas de inhibición obtenidas por los laboratorios participantes y los rangos establecidos por el laboratorio coordinador fue aceptable en los tres aislamientos, ya que alcanzó 90,8%, 92,8% y 88,9%, respectivamente, para cada cepa. CONCLUSIONES: La concordancia global en la detección de los mecanismos de resistencia KPC, MBL y VISA fue de 72,1%. Consideramos que los laboratorios nacionales de referencia de América Latina son capaces de reconocer estos mecanismos de resistencia emergentes y se espera que en el futuro la concordancia alcance su nivel máximo.

This document contains the recommendations for antimicrobial susceptibility testing of the clinically relevant non-fermenting gram-negative bacilli (NFGNB), adopted after conforming those from international committees to the experience of the Antimicrobial Agents Subcommittee members and invited experts. This document includes an update on NFGNB classification and description, as well as some specific descriptions regarding natural or frequent antimicrobial resistance and a brief account of associated resistance mechanisms. These recommendations not only suggest the antimicrobial drugs to be evaluated in each case, but also provide an optimization of the disk diffusion layout and a selection of results to be reported. Finally, this document also includes a summary of the different methodological approaches that may be used for detection and confirmation of emerging b-lactamases, such as class A and B carbapenemases.

En este documento se dan a conocer una serie de recomendaciones para el ensayo, la lectura, la interpretación y el informe de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos para los bacilos gram negativos no fermentadores (BGNNF) que se aíslan en humanos. Se adoptaron como base las recomendaciones internacionales, las de la Subcomisión de Antimicrobianos de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas y las de un grupo de expertos invitados. Se incluye, además, la nomenclatura actualizada de los BGNNF y la descripción de algunas de sus características individuales, de sus resistencias naturales o habituales a los antimicrobianos de uso clínico y de los mecanismos responsables de tales resistencias. También se indican los agentes antimicrobianos que se deberían ensayar frente a las distintas especies, con la especificación de cuáles deberían ser informados, y su ubicación estratégica en las placas de cultivo para poder detectar los mecanismos de resistencia más frecuentes y relevantes. Por último, se detallan los métodos de detección y de confirmación fenotípica de la presencia de b-lactamasas emergentes en Argentina, como las carbapenemasas clases A y B.

Objective: To elucidate the mechanisms involved in the transmission and antimicrobial resistance of Klebsiella pneumoniae and Enterobacter cloacae nosocomial isolates. Materials and methods: Genetic diversity was determinated for 10 bacterial isolates from hospitalized patients and environmental samples from a neonatal intensive care unit of a Lima hospital, using ribosomal and plasmidic DNA fingerprinting. Afterwards, the antimicrobial resistance was characterized as well as major factors using isofocusing electrophoresis. This was confirmed with Southern Blotting and PCR. Finally the resistance transfer ability was assessed using bacterial conjugation assays. Results: All K. pneumoniae and E. cloacae isolates displayed a unique plasmidic profile. E. cloacae isolates displayed the same genetic profile but, on the contrary, four K. pneumoniae genotypes highly related were found. In addition, it was established that all isolates produced extended spectrum ß-lactamase SHV-5-like transferable to other strains. Conclusions: This study suggests that the bacterial dissemination in neonates can be favored by the inadequate assistance in handling, by defective storage of milk for neonatal use and because of the indiscriminate use of antimicrobial agents, which contributed to the active transmission of genes responsible for antimicrobial resistance.

Objetivo: Determinar los mecanismos implicados en la transmisión y resistencia antimicrobiana de aislamientos hospitalarios de Klebsiella pneumoniae y Enterobacter cloacae. Materiales y métodos: Se determinó la diversidad genética de 10 aislamientos bacterianos provenientes de pacientes hospitalizados y muestras ambientales procedentes de una unidad de cuidados intensivos de neonatos de un hospital de Lima utilizando el patrón de banda de ADN ribosomal y plasmídico. Posteriormente, se caracterizó la resistencia antimicrobiana y sus principales factores utilizando electroforesis de punto isoeléctrico, Southern Blotting y PCR. Finalmente se evaluó la capacidad de transferencia de la resistencia mediante ensayos de conjugación bacteriana. Resultados: Todos los aislamientos de K. pneumoniae y E. cloacae presentaron el mismo perfil plasmídico. Los aislamientos de E. cloacae presentaron un mismo patrón genético, por el contrario se encontraron cuatro genotipos distintos de K. pneumoniae altamente relacionados. Todos los aislamientos produjeron ß-lactamasa de especto extendido Tipo SHV-5 transferible a otras especies. Conclusiones: El estudio sugiere que la diseminación de estas bacterias en los neonatos pudo haber sido favorecida por un inadecuado manejo asistencial, una defectuosa conservación de leche para el consumo neonatal y el indiscriminado uso de antibióticos, el cual generó una activa transmisión de genes responsables de la resistencia antimicrobiana.