RESUMO Os vírus herpes simplex tipo 1 (HSV-1) e tipo 2 (HSV-2) têm ampla ocorrência global. As infecções causadas por esses vírus têm grande importância em saúde pública devido à crescente resistência ao fármaco de primeira linha, aciclovir, principalmente em pacientes imunossuprimidos. Alcaloides derivados de espécies de Annonaceae têm sido relatados como agentes antivirais contra o HSV e outros vírus. Neste contexto, nós avaliamos a atividade antiviral da fração alcaloide total (TAF) dos ramos de Fusaea longifolia (Aubl.) Saff. (Annonaceae), uma espécie nativa da região amazônica, contra os vírus HSV-1 e HSV-2. A atividade antiviral foi avaliada através do ensaio de redução em placa e o modo de ação foi investigado por um conjunto de ensaios. O TAF foi ativo contra a cepa HSV-2 333 e contra as cepas HSV-1 KOS e 29R (resistente ao aciclovir), com valores de índice de seletividade (IS = 50% concentração citotóxica/50% concentração efetiva) de 5, 4 e 3, respectivamente. No estudo preliminar do modo de ação da atividade anti-HSV-2, o TAF inibiu a replicação viral quando adicionados até 12 h pós-infecção, apresentou atividade virucida e não apresentou inibição viral no pré-tratamento. Nossos resultados mostraram que o TAF exibiu atividade anti-HSV. Em relação ao HSV-2, o TAF atuou após a infecção viral e apresentou atividade virucida. Uma análise do TAF por espectrometria de massas identificou a presença de nove alcaloides, incluindo liriodenina, lisicamina e isoboldina, que já foram descritos como potenciais agentes anti-HSV-1. HSV1 (HSV-1 HSV2 (HSV-2 global linha aciclovir imunossuprimidos contexto (TAF Aubl. Aubl (Aubl. Saff Annonaceae, , (Annonaceae) amazônica HSV- HSV2. 2. ensaios 33 R resistente aciclovir) IS 50 citotóxica50 citotóxica citotóxica/50 efetiva 5 3 respectivamente antiHSV2, antiHSV2 antiHSV anti 2, anti-HSV-2 pósinfecção, pósinfecção pós infecção, pós-infecção prétratamento. prétratamento pré tratamento. tratamento pré-tratamento antiHSV. HSV. anti-HSV HSV2, alcaloides liriodenina isoboldina antiHSV1. antiHSV1 1. anti-HSV-1 (HSV- (Aubl (Annonaceae citotóxica5 citotóxica/5 anti-HSV- (HSV citotóxica/

ABSTRACT The herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and type 2 (HSV-2) occur worldwide. Infections caused by these viruses have great public health importance due to the growing resistance to the first-choice drug, acyclovir, especially in immunosuppressed patients. Alkaloids derived from species of Annonaceae have been reported as antiviral agents against HSV and others viruses. Within this context, we evaluated the antiviral activity of the total alkaloid fraction (TAF) extracted from the branches of Fusaea longifolia (Aubl.) Saff. (Annonaceae), a species native to the Amazon region, against the HSV-1 and HSV-2 viruses. The antiviral activity was evaluated through the plate reduction assay and the mode of action was investigated by a set of other assays. The TAF was active against the HSV-2 strain 333 and against the HSV-1 strains KOS and 29R (acyclovir resistant), with selectivity index values (SI = 50% cytotoxic concentration/50% effective concentration) of 5, 4 and 3, respectively. In the preliminary study of the anti-HSV-2 mode of action, TAF showed viral inhibitory effects if added up to 12 h post-infection, had virucidal activity and did not present viral inhibition in pre-treatment. Our results showed that the TAF exhibited anti-HSV activity. Regarding HSV-2, TAF acted after the viral infection and had virucidal activity. A mass spectrometry analysis revealed the presence of nine alkaloids in the TAF that had previously been reported for Annonaceae, including liriodenine, lysicamine and isoboldine, which have been described as potential anti-HSV-1 agents. HSV1 (HSV-1 HSV2 (HSV-2 worldwide firstchoice first choice drug acyclovir patients context (TAF Aubl. Aubl (Aubl. Saff , (Annonaceae) region HSV- assays 33 R resistant, resistant resistant) SI 50 concentration50 concentration concentration/50 5 3 respectively antiHSV2 antiHSV anti anti-HSV- postinfection, postinfection post infection, post-infection pretreatment. pretreatment pre treatment. treatment pre-treatment HSV2, 2, liriodenine isoboldine antiHSV1 (HSV- (Aubl (Annonaceae concentration5 concentration/5 (HSV concentration/