Abstract Antimicrobial resistance in bacteria isolated from horses represents a threat to global health due to the close relationship of these animals with humans. This study aimed to elucidate the antimicrobial susceptibility profiles of bacteria with pathogenic and zoonotic potential, isolated from the respiratory and genital tracts of horses in Mayabeque, Cuba. Nasal and genital exudates were collected from twenty-three horses, and the isolates obtained were identified using the analytical profile index and mass spectrometry. The minimum inhibitory concentration (MIC) of thirteen antibiotics was determined for the isolates. Twenty-three bacterial isolates, including one Streptococcus uberis, sixteen Enterococcus spp., three Staphylococcus sciuri, one Morganella morganii, and two Stenotrophomonas maltophilia, were obtained. S. uberis showed resistance to gentamicin, enrofloxacin, and doxycycline, while enterococci isolates displayed resistance to doxycycline (n=16), rifampicin (n=8), erythromycin (n=7), enrofloxacin (n=3), and chloramphenicol (n=1). All S. sciuri isolates were resistant to at least six antibiotics, including methicillin, with high MIC values for erythromycin (>8192 µg/ml), doxycycline (128 µg/ml), and gentamicin (64 µg/ml). M. morganii isolate was resistant to three antibiotics, with MICs of 128 μg/ml and 256 μg/ml for cefquinome and doxycycline, respectively. S. maltophilia isolates exhibited resistance to cefquinome, with MIC values of 512 μg/ml and 128 μg/ml, respectively. The 91.3% of the isolates were multiresistant to antimicrobials, which represents the first detection in Cuba of bacteria with multiresistance phenotypes, isolated from samples of the nasal and genital mucosa of horses.

Resumen La resistencia a antimicrobianos en bacterias aisladas de caballos representa una amenaza para la salud mundial debido al estrecho vínculo de estos animales con los humanos. El objetivo de este estudio fue describir los perfiles de susceptibilidad a antimicrobianos de bacterias con potencial patogénico y zoonótico, aisladas de los tractos respiratorio y genital de caballos procedentes de Mayabeque, Cuba. Se recopilaron exudados nasales y genitales de veintitrés caballos, y se utilizó el índice de perfil analítico y espectrometría de masas para realizar la identificación de los aislados obtenidos. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) de trece antibióticos, frente a los aislados. Se obtuvieron veintitrés aislados bacterianos (un Streptococcus uberis, dieciséis Enterococcus spp., tres Staphylococcus sciuri, un Morganella morganii y dos Stenotrophomonas maltophilia). S. uberis mostró resistencia a gentamicina, enrofloxacina y doxiciclina. Los aislados de enterococci fueron resistentes a doxiciclina (n=16), rifampicina (n=8), eritromicina (n=7), enrofloxacina (n=3) y cloranfenicol (n=1). Todos los aislados de S. sciuri fueron resistentes al menos a seis antibióticos incluyendo meticilina, con altos valores de CMI para eritromicina (>8192 µg/ml), doxiciclina (128 µg/ml) y gentamicina (64 µg/ml). El aislado de M. morganii fue resistente a tres antibióticos con CMIs de 128 μg/ml y 256 μg/ml para cefquinoma y doxiciclina, respectivamente. Los aislados de S. maltophilia mostraron resistencia a cefquinoma con valores de CMI de 512 y 128 μg/ml respectivamente. El 91,3% de los aislados resultaron multirresistentes a antimicrobianos, lo cual representa la primera detección en Cuba de bacterias con fenotipos de multirresistencia, aisladas de muestras de la mucosa nasal y genital de caballos.

ABSTRACT Introduction: Hemotropic mycoplasmas are widely distributed in several regions of the world. The aim of the present work was to determine the presence of hemotropic mycoplasma species in cattle, buffaloes, dogs and ticks in Cuba. Methods: They were analyzed thirty-nine buffalo and 41 cattle blood samples to investigate the presence of Mycoplasma wenyonii and 'Candidatus Mycoplasma haemobos'. They were analyzed and 391 dog blood samples and 247 tick pools to detect the presence of Mycoplasma haemocanis and 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum'. In all cases it was used the species-specific TaqMan® real-time PCR assay. Results: For M. wenyonii 53 animals were positive and 33 for 'Ca. Mycoplasma haemobos'; in coinfection with M. wenyonii, with similar prevalence in cattle and buffalo. 17.9% of dog samples were positive for at least one hemoplasma species, with 15.1% positive for M. haemocanis, 4.4% for 'Ca. Mycoplasma haematoparvum', and 1.5% co-infected. The ticks were identified as Rhipicephalus sanguineus sensu lato; none of the pools were positive for the canine mycoplasma species under study. It was demonstrated he presence of five different haplotypes for M. haemocanis and four haplotypes for 'Ca. M. haematoparvum'; one of these haplotypes showed 100 % identity with one isolated from Grenada, which was associated with cases of zoonotic exposure. Conclusions. These results constitute the first molecular evidence of infection by hemoplasma species in cattle and buffaloes in Cuba and the Caribbean and the first molecular report of the occurrence of single infections and co-infections caused by M. haemocanis and 'Ca. M. haematoparvum' in dogs in Cuba. For the first time is evident the circulation of a genotype of ‘Ca. M. haematoparvum' with zoonotic potential, common between the Greater and Lesser Antilles of the Caribbean.

RESUMEN Introducción: Los micoplasmas hemotrópicos se encuentran ampliamente distribuidos en varias regiones del mundo. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la presencia de especies de micoplasmas hemotrópicos en bovinos, bufalinos, perros y garrapatas de Cuba. Métodos: Se analizaron 39 muestras de sangre de búfalos y 41 bovinos para investigar la presencia de Mycoplasma wenyonii y 'Candidatus Mycoplasma haemobos'; 391 muestras de sangre de perros y 247 pools de garrapatas para detectar la presencia de Mycoplasma haemocanis y 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum' mediante ensayos de PCR en tiempo real TaqMan® (especie específicos). Resultados: Para M. wenyonii 53 animales fueron positivos y 33 para 'Ca. Mycoplasma haemobos'; en coinfección con M. wenyonii, con prevalencias similares en bovinos y bufalinos. El 17,9 % de las muestras de perros fueron positivas para al menos una especie de hemoplasma, con el 15,1 % positivo para M. haemocanis, el 4,4 % para 'Ca. Mycoplasma haematoparvum', y el 1,5 % coinfectados. Las garrapatas se identificaron como Rhipicephalus sanguineus sensu lato; y ninguno de los pools fue positivo a las especies de micoplasmas caninos en estudio. Se demostró la presencia de 5 haplotipos diferentes para M. haemocanis y 4 haplotipos para 'Ca. M. haematoparvum'; uno de estos haplotipos mostró 100 % de identidad con un aislado de Granada, que se asoció con casos de exposición zoonótica. Conclusiones: Estos resultados constituyen la primera evidencia molecular de la infección por especies de hemoplasmas en bovinos y bufalinos de Cuba y el Caribe y el primer reporte molecular de la ocurrencia de infecciones simples y coinfecciones causadas por M. haemocanis y 'Ca. M. haematoparvum' en perros de Cuba. Por primera vez se evidencia la circulación de un genotipo de 'Ca. M. haematoparvum' con potencial zoonótico, común entre las Antillas mayores y menores del Caribe.

RESUMEN Con el objetivo de evaluar el estado de salud en cerdas de una unidad de producción, se realizó la exploración clínica y análisis de sangre a partir del conteo de leucocitos, indicadores de la serie roja y extendido sanguíneo como estudio complementario. El análisis hematológico en la categoría zootécnica de cerdas reproductoras evidenció el 26,08 % de los animales (6/23) con presencia de anemia y el 47,82 % (11/23) con leucopenia, mientras el estudio del extendido sanguíneo evidenció estructuras compatibles con hemoplasmas en 65,21 % (15/23) de los animales y en el 66,66 % (4/6) de los animales con anemia. Los resultados constituyen un punto de partida para investigaciones futuras encaminadas a la detección de hemoplasmas patógeno mediante ensayos de PCR.

ABSTRACT In order to study the health status of sows in a production unit, clinical examination and blood analysis were carried out based on leukocytes count, red blood cell indicators and blood smear as a complementary study. The hematological analysis of the zootechnical category of breeding sows showed 26.08 % of the animals (6/23) with anemia and 47.82 % (11/23) with leukopenia. The study on the blood smear showed structures compatible with hemoplasmas in 65.21 % (15/23) of the animals studied and in 66.66 % (4/6) of the animals with anemia. The results represent a starting point for future research aimed at the detection of the pathogenic hemoplasmas using PCR assays.

RESUMEN Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (S. zooepidemicus) es un patógeno oportunista capaz de causar diversas infecciones en los tractos respiratorio, genital y urinario en caballos y otros animales. Esta especie se considera responsable de muchas enfermedades zoonóticas emergentes. Recientemente, existe una creciente circulación de cepas de S. zooepidemicus multirresistentes a antimicrobianos en caballos, sin embargo, no existe información sobre S. zooepidemicus y su perfil de susceptibilidad a antimicrobianos, en caballos cubanos. Por tanto, los objetivos de este estudio fueron reportar el aislamiento de S. zooepidemicus en un caballo y determinar su perfil de susceptibilidad a antimicrobianos. Se muestreó una yegua perteneciente a un productor privado de Melena del Sur, Mayabeque, con mucosas pálidas y se tomó un hisopado del tracto genital. El aislado obtenido se identificó mediante el índice de perfil analítico y espectrometría de masas. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) de 11 antibióticos (penicilina G, ampicilina, amoxicilina-clavulanato, cefquinoma, imipenem, gentamicina, enrofloxacina, doxiciclina, eritromicina, cloranfenicol y vancomicina) para el aislado. El aislado se identificó como S. zooepidemicus y fue sensible a todos los betalactámicos, eritromicina, cloranfenicol y vancomicina. Presentó un perfil de multirresistencia a gentamicina, enrofloxacina y doxiciclina con valores de CMI de 16 μg/mL, 2 μg/mL y 2 μg/mL, respectivamente. Por primera vez en Cuba se detecta S. zooepidemicus multirresistente a antimicrobianos en la mucosa genital de una yegua. La estrecha interacción entre humanos y caballos, aumenta el riesgo de adquirir estos microorganismos multirresistentes o favorecer su diseminación, por lo que este resultado debe ser considerado en la capacitación del personal con vínculo ocupacional.

ABSTRACT Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (S. zooepidemicus) is an opportunistic pathogen capable of causing various infections in the respiratory, genital, and urinary tracts of horses and other animals. This species is considered responsible for many emerging zoonotic diseases. There has been an increasing circulation of multidrug-resistant S. zooepidemicus strains in horses, however, there is no information on S. zooepidemicus and its antimicrobial susceptibility profile in Cuban horses. Therefore, the objectives of this study were to report the isolation of S. zooepidemicus in a horse and to determine its antimicrobial susceptibility profile. A mare with pale mucous membranes, owned by a private producer in Melena del Sur, Mayabeque, was sampled, and a swab was taken from the genital tract. The isolate obtained was identified using the analytical profile index and mass spectrometry. The minimal inhibitory concentration (MIC) of 11 antibiotics (penicillin G, ampicillin, amoxicillin-clavulanate, cefquinome, imipenem, gentamicin, enrofloxacin, doxycycline, erythromycin, chloramphenicol, and vancomycin) was determined for the isolate. The isolate was identified as S. zooepidemicus and it was susceptible to all β-lactam, erythromycin, chloramphenicol, and vancomycin. The isolate presented a multidrug resistance profile to gentamicin, enrofloxacin, and doxycycline with MIC values of 16 μg/mL, 2 μg/mL, and 2 μg/mL, respectively. For the first time in Cuba, multidrug-resistant S. zooepidemicus was detected in the genital mucosa of a mare. The close interaction between humans and horses increases the risk of acquiring these multiresistant microorganisms or favoring their dissemination, thus this result should be considered in staff training.

RESUMEN La mastitis bovina es un desafío sanitario y económico para la producción animal, no solo porque afecta la salud y bienestar de los animales, sino también por la amenaza que representa para la salud pública, sin descontar las pérdidas millonarias que ocasionan los costos de tratamiento y el descarte de leche, un alimento por demás imprescindible para una población en plena expansión a nivel global. En Zamora-Chinchipe se demostró previamente Mollicutes en leche de tanque y vacas individuales. Para analizar los factores de riesgo asociados a esta problemática se aplicaron cuestionarios semi-estructurados a los rebaños previamente investigados. Las variables con p-valor<0,2 en el análisis univariado se seleccionaron e incluyeron en el modelo multivariado respectivo, que finalmente se ajustó manualmente mediante el procedimiento de eliminación hacia atrás (backward) para retirar las variables no significativas (p<0,05). Son factores de riesgo de Mollicutes en los rebaños un número mayor de categorías zootécnicas en la finca (RP=1,691; IC95%: 1,293 - 2,210), la presencia de ganado Holstein (RP=15,89; 1,44 - 175,45), fuentes de abasto de agua diferentes al acueducto (río, pozo, presa) (RP=4,37; 1,306 - 14,620) y las fincas que compran animales dentro de la misma provincia (RP=4,28; 1,416 - 12,939). En tanto, el lavado de las manos del ordeñador entre vacas o entre grupos mostró una prevalencia 57% y 67,6% menor, respectivamente, que en hatos donde esta medida no se cumple. Además, el secado de los cuartos con papel previo al ordeño (prevalencia 69,6% menor) es también un factor de protección de Mollicutes en vacas individuales.

ABSTRACT Bovine mastitis is a sanitary and economic challenge for animal production, not only because it affects animal health and welfare, but also because of the threat it represents to public health, as well as the millions of losses caused by treatment costs and the milk discarded, indispensable food to the expanding population globally. Mycoplasma spp. were previously identified in tank milk and individual cows in Zamora-Chinchipe province. To analyze the risk factors associated with this problem, semi-structured questionnaires were applied to the herds previously tested. The variables with p-valor<0,2 in regression analysis were selected and included in the multivariate model, finally handle adjusted by backward procedure elimination variables with no significance (p<0,05). The risk factors for mollicutes in herds were the higher quantity number of zoothecnic categories (RP=1,691, IC95%: 1,293 – 2,210), the presence of Holstein race (RP=15,89; 1,44 – 175,45), no drinkable water use (RP=4,37; 1,306 – 14,620) and animal purchase into the province (RP=4,28; 1,416 – 12,939). Meanwhile, hand washing by the milker between cows or between groups showed a 57% and 67.6% lower prevalence, respectively, compared to herds where this practice is not followed. Additionally, drying the udders with paper before milking (with a 69.6% lower prevalence) is also a protective factor against Mollicutes in individual cows.

RESUMEN El crecimiento de la población mundial demanda disponibilidad de suficientes alimentos nutritivos e inocuos, y la mastitis bovina es una enfermedad que aún causa grandes pérdidas económicas, además de otros riesgos a la salud de los rebaños y el público en general, pese a los avances tecnológicos y la profundización en el conocimiento de factores decisivos en su comportamiento, dependientes tanto de los hospederos, como de los patógenos involucrados y del ambiente donde su interación tiene lugar. Para profundizar en la asociación de Mollicutes, en los procesos de mastitis en Zamora-Chinchipe se investigaron 386 vacas, de 99 rebaños, de las que 126 resultaron positivas (32,6 %) mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), en tanto 340 (88,1 %) se constataron con mastitis subclínica mediante Prueba de California para mastitis. Aunque no se evidenció Mycoplasma bovis, otros micoplasmas también patogénicos pudieron estar presentes y complicar la recuperación de los rebaños afectados por la reconocida resistencia de estos microorganismos a la antibioterapia tradicional, entre otros peligros. La no asociación entre los resultados de los métodos de diagnóstico empleados evidenció que otros patógenos estuvieron involucrados en el mosaico etiológico de la mastitis en la provincia y reveló la necesidad de su indispensable profundización para orientar adecuadamente las estrategias de control.

ABSTRACT World population growth demands availability of sufficient nutritious and healthy food. Bovine mastitis is a disease that still causes great economic losses, besides other risks to the health of herds and people in general, in spite of the technological advances and the deepening of the knowledge of crucial factors in its behavior, which depend on the hosts and pathogens involved and the environment where they interact.To further research Mollicutes association with mastitis disease in Zamora-Chinchipe province, 386 cows from 99 herds were tested. From them, 126 were positive to Mollicutes (32.6 %) by Polymerase Chain Reaction (PCR), while 340 (88.1 %) were found to have subclinical mastitis by California Mastitis Test. Although Mycoplasma bovis was not detected, other pathogenic mycoplasmas could also be present affecting the recovery of the infected herds due to the recognized resistance of those microorganisms to the traditional antibiotic therapy, among other risks. The lack of association among the results of the diagnostic methods used showed that other pathogens were involved in mastitis etiology and revealed the need for further studies in order to adequately guide control strategies.

ABSTRACT The aim of this study was to determine the occurrence of mutations in the quinolone resistance-determining regions (QRDRs) of the genes gyrA and parC in M. gallisepticum positive field samples from broiler flocks in Ecuador. DNA was extracted from 24 M. gallisepticum PCR-positive samples from 22 commercial broiler flocks. The genes gyrA and parC were amplified by PCR. PCR products were sequenced by Sanger technology to analyze the genetic characteristics. To identify the mutations involved in fluoroquinolone resistance (FQR), the sequences obtained were processed and analyzed using the tools Geneious R11, BLASTn, MAFFT, ExPASy MBWS, and BioEdit. All samples had mutations in both gyrA and parC genes, resulting in changes at amino acid positions Ser-83→Ile and Ile-157→Val in GyrA, and Ser-80→Trp in ParC. In addition, a change at position His-59→Tyr in GyrA was also found in one sample. The results showed that alterations in both genes have been commonly linked to FQR in mutants of other Mycoplasma species, including M. gallisepticum. This is the first study on M. gallisepticum positive samples from chickens in Ecuador which revealed the occurrence of mutations resulting in amino acid changes previously linked to FQR.

RESUMEN El objetivo de este estudio fue investigar la ocurrencia de mutaciones en las regiones determinantes de resistencia a quinolonas (QRDR de sus siglas en Inglés) de los genes gyrA y parC en muestras de campo positivas para M. gallisepticum, procedentes de parvadas de pollos de Ecuador. Se extrajo el ADN de 24 muestras positivas por PCR a M. gallisepticum de 22 parvadas de pollos de engorde de crianza comercial. Los genes gyrA y parC se amplificaron por PCR. Para analizar las características genéticas, los productos de PCR se secuenciaron por tecnología Sanger. Para identificar mutaciones involucradas en resistencia a fluoroquinolonas (FQR), las secuencias obtenidas se procesaron y analizaron utilizando las herramientas Geneious R11, BLASTn, MAFFT, ExPASy MBWS y BioEdit. Todas las muestras presentaron mutaciones, tanto en los genes gyrA como parC, lo que resultó en cambios en las posiciones de aminoácidos Ser-83→Ile e Ile-157→Val en GyrA, y Ser-80→Trp en ParC. Además, también se encontró en una muestra un cambio en la posición His-59→Tyr en GyrA. Los resultados mostraron que las alteraciones en ambos genes se han relacionado comúnmente con FQR en mutantes de otras especies de Mycoplasma, incluido M. gallisepticum. Este es el primer estudio en muestras positivas de M. gallisepticum de pollos en Ecuador que reveló la aparición de mutaciones que resultaron en cambios en aminoácidos, previamente vinculados a FQR.

ABSTRACT The presence of polymerase chain reaction (PCR) inhibitory substances in cell cultures and raw materials used in the manufacture of monoclonal antibodies could limit the usefulness of this method to detect mycoplasma contamination. The objective of this research was to determine the sensitivity and specificity of a PCR method to detect mycoplasma deoxyribonucleic acid (DNA) in MDCK and HeLa cell lines, hybridoma cells, ascitic fluid and cell supernatant containing monoclonal antibodies. The effect of a thermal shock-based mycoplasma DNA extraction method on PCR sensitivity, as well as the performance of two mycoplasma DNA purification methods: silica/guanidinium thiocyanate and a commercial DNA purification kit, were evaluated. In addition, an internal amplification control (IAC) was optimized to detect inhibitory samples from these matrices after thermal shock treatment. PCR-IAC was specific for the amplification of mycoplasma DNA. The inclusion of IAC plasmid at the concentration selected did not decrease the sensitivity of PCR in mycoplasma-spiked matrices. Seventy-eight samples were analyzed; all represented the matrices under study. As a result, all matrices showed PCR inhibition after thermal shock. The inhibitory effect decreased when silica/guanidinium thiocyanate or commercial DNA purification kit was used. PCR-IAC detected 65 % of inhibitory samples and revealed differential susceptibility to inhibitors among different samples of the same matrix.

RESUMEN La presencia de sustancias inhibitorias de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en cultivos celulares y materias primas usadas en la fabricación de anticuerpos monoclonales podría limitar la utilidad de esta técnica para detectar la contaminación por micoplasmas. El objetivo de esta investigación fue determinar la sensibilidad y la especificidad de un método de PCR para detectar ácido desorribunucleico (ADN) de micoplasma en las líneas celulares MDCK y HELA, en células de hibridoma, en líquido ascítico y en sobrenadante celular que contenía un anticuerpo monoclonal. Se evaluaron el efecto de un método de extracción de ADN micoplásmico, basado en choque térmico sobre la sensibilidad de la PCR, así como el desempeño de dos métodos de purificación de ADN micoplásmico: sílice / tiocianato de guanidinio y un kit comercial de purificación de ADN. Además, se optimizó un control de amplificación interno (CAI) para detectar muestras inhibitorias de estas matrices después del tratamiento de choque térmico. La PCR-CAI fue específica para la amplificación del ADN de micoplasma; la inclusión del plásmido CAI a la concentración seleccionada no disminuyó la sensibilidad de la PCR en las matrices experimentalmente contaminadas con micoplasma. Se analizaron 78 muestras; todas representaron las matrices en estudio. Como resultado, todas las matrices mostraron inhibición de la PCR después del choque térmico. El efecto inhibitorio disminuyó cuando se utilizó sílice / tiocianato de guanidinio o el kit comercial de purificación de ADN. La PCR-CAI detectó 65 % de muestras inhibitorias y puso en evidencia una susceptibilidad diferencial a los inhibidores entre diferentes muestras de una misma matriz.

ABSTRACT Dogs can be affected by several species of the genus Babesia causing important diseases in different regions of the world. Among these species are Babesia canis, B. vogeli, B. rossi, B. gibsoni, and B. vulves. The aim of this study was to detect the presence of Babesia spp. in stray dogs from Havana province. Sixty dogs were studied and subjected to haematological examination, blood smear and PCR, which amplified 18S rRNA. Three animals (5 %) showed hematocrit values higher than reference values while 23 (38.3 %) showed lower hematocrit values, indicating the presence of an anemic syndrome in those dogs. According to the leukogram analysis, five dogs (8.3 %) had leukocytosis and 7 (11.6 %) had leukopenia. Thirty-one animals were infested with Rhipicephalus sanguineus sensu lato ticks and 10 were co-infested with Rhipicepahalus microplus ticks. Twenty percent of the samples tested positive by PCR, while microscopic examination revealed Babesia spp. merozoites in only 13.3 % of the samples. A relationship was observed between PCR-positive animals and the decrease in hematocrit value. There was no association between the presence of ticks and sex in animals positive to Babesia spp. The present study demonstrates the presence of Babesia spp. in stray dogs from Havana province.

RESUMEN Los perros pueden ser afectados por varias especies del género Babesia que causan enfermedades importantes en diferentes regiones del mundo. Dentro de estas especies se encuentran Babesia canis, B. vogeli, B. rossi, B. gibsoni y B. vulves. El presente trabajo tuvo como objetivo detectar la presencia de Babesia spp. en perros sin dueño de La Habana. Se estudiaron 60 perros, a los que se les realizó examen hematológico, frotis sanguíneo y PCR, que amplifica el ARNr 18S. Tres animales (5 %) presentaron valores de hematocrito superiores a los valores de referencia y 23 (38,3 %) mostraron valores de hematocrito inferiores, lo que indica la presencia de un síndrome anémico en estos perros. Como resultado del leucograma, cinco perros (8,3 %) tenían leucocitosis y 7 (11,6 %) leucopenia; 31 animales estaban infestados con garrapatas Rhipicephalus sanguineus sensu lato y 10 estaban coinfestados con Rhipicepahalus microplus. El 20 % de las muestras fueron positivas por PCR, mientras que en la examinación microscópica solo en el 13,3 % de las muestras se observaron merozoitos de Babesia spp. Se observó relación entre los animales positivos por PCR y la disminución del valor del hematocrito. No existió asociación entre la presencia de garrapatas y el sexo en los animales positivos a Babesia spp. El presente estudio demuestra la presencia de Babesia spp. en perros sin dueño de La Habana.

ABSTRACT Toxoplasmosis is an important zoonosis due to its impact on human and animal health. Toxoplasma gondii is the causal agent of this disease. This protozoan has a complex biological cycle in which felines are the definitive hosts. The objective of this study was to evaluate the seropositivity to T. gondii in cats from Güines municipality, Mayabeque province, as well as to characterize the breeding practices of their owners and determine the main clinical symptoms in seropositive cats. . Thirty cats (19 females and 11 males) were studied. A total of 96.7 % (29/30) were seropositive to T. gondii, with no significant differences between sexes. The survey showed that 86.6 % (26/30) of the animals lived with other cats and went out on the streets daily. In addition, 52.6 % females and 100 % males were not sterilized. Paleness of visible mucous membranes was the most frequently observed sign (12/29, 41.37 %) in seropositive cats. It is concluded that there is a high frequency of positivity to Toxoplasma gondii in cats from Güines municipality, favored by certain breeding practices which increase the risk of exposure to T. gondii, benefit the dispersion of the protozoan and even represent the insufficient knowledge of their owners to adopt preventive measures against zoonosis. From the clinical signs observed, there is a need to improve tenure systems with implications for human and animal health and welfare, based on the One Health approach.

RESUMEN La toxoplasmosis es una importante zoonosis debido a su impacto en la salud humana y animal. Toxoplasma gondii es el agente causal de esta enfermedad. Este protozoo presenta un ciclo bilógico complejo en el cual los felinos constituyen los hospederos definitivos. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la seropositividad a T. gondii en gatos del municipio Güines, provincia Mayabeque, así como caracterizar las prácticas de crianza de sus propietarios y determinar las manifestaciones clínicas en los gatos seropositivos. Se estudiaron 30 gatos, 19 hembras y 11 machos. El 96,7 % (29/30) resultaron seropositivos a T. gondii, sin diferencias significativas entre sexos. En la encuesta realizada se obtuvo que el 86,6 % (26/30) de los animales convivían con otros gatosy acudían a la calle diariamente. Además, el 52,6 % de las hembras y el 100 % de los machos no estaban esterilizados. La palidez de las mucosas visibles fue el signo observado con mayor frecuencia (41,37 %) 12/29 en los gatos seropositivos. Se concluye que existe una alta frecuencia de seropositividad a Toxoplasma gondii en gatos de Güines, favorecida por determinadas prácticas de crianza que aumentan el riesgo de exposición a T. gondii, benefician la dispersión del protozoo y constituyen un reflejo de la insuficiencia de conocimiento de sus propietarios para adoptar medidas de prevención ante esta zoonosis. A partir de los signos clínicos observados, se considera la necesidad de mejorar el sistema de tenencia con implicaciones en el bienestar y la salud humana y animal, con el enfoque de Una Salud.

ABSTRACT Canine hemoplasmosis is a disease caused by hemotrophic mycoplasmas (hemoplasmas) that affects dogs regardless of breed or age. These agents (formerly belonging to the genera Haemobartonella and Eperythrozoon) are obligate eperythrocytic bacteria that can induce anemia in the infected host and are recognized for their zoonotic potential. The objective of the present study was to detect the presence of hemoplasma compatible structures in populations of non-domiciled dogs in Havana province, Cuba. Samples were collected from 124 dogs from 11 municipalities of this province. Diagnosis was carried out by observation of blood smears stained with Giemsa and by polymerase chain reaction (PCR), amplifying a region of the 16S rRNA gene of the class Mollicutes. Hemoplasma compatible structures were detected in 23 % of the dogs tested and Mollicutes was diagnosed in 41 % of the samples processed by PCR. No association was found between the presence of hemoplasma compatible structures and anemia in the animals. The spatiotemporal pattern of hemoplasma compatible structures was identified, indicating that dogs infected with them were detected in all the municipalities included in this study. No association was found between hemoplasma infection and the presence of anemia. The spatiotemporal pattern of hemoplasma infection was identified, indicating that dogs infected with it were detected in all the municipalities included in this study. This result is the first study of this type to be carried out in Cuba and evidences the need to confirm, by other molecular assays, the identification of hemoplasma and the development of a prevention and control strategy for this entity.

RESUMEN La hemoplasmosis canina es una enfermedad causada por micoplasmas hemotróficos (hemoplasmas) que afectan a los canes sin distinción de raza o edad. Estos agentes (antiguamente pertenecientes a los géneros Haemobartonella y Eperythrozoon) son bacterias epieritrocitarias obligadas que pueden inducir anemia en el huésped infectado y que se reconocen por su potencial zoonótico. El objetivo del presente estudio fue detectar la presencia de estructuras compatibles con hemoplasmas (ECHM) en poblaciones de perros no domiciliados de la provincia La Habana, Cuba. Se colectaron muestras de 124 perros procedentes de 11 municipios de esta provincia. El diagnóstico se realizó a través de la observación de frotis sanguíneos teñidos con Giemsa y por reacción en cadena de la polimerasa (PCR), amplificando una región del gen ARNr 16S de la clase Mollicutes. En el 23 % de los perros analizados se detectó la presencia de ECHM y en el 41% de las muestras, procesadas por PCR, se diagnosticó Mollicutes. No se encontró asociación entre la presencia de ECHM y la anemia que tenían los animales. Se identificó el patrón espaciotemporal de ECHM, el cual indica que en todos los municipios incluidos en este estudio se detectaron canes infectados con ECHM. Este resultado constituye el primer estudio de este tipo que se realiza en Cuba y evidencia la necesidad de confirmar, por otros ensayos moleculares, la identificación de hemoplasma y el desarrollo de una estrategia de prevención y control sobre esta entidad.

ABSTRACT Human health is increasingly interconnected with that of the animals in the environment they share, while the threat of emerging diseases arising at that interface increases as a result of the multiple and growing driving forces which propitiate that greater human-animal-environmental interrelationship. COVID-19 is an emerging zoonosis caused by SARS-CoV-2, a new coronavirus whose primary source is associated with bats. Its rapid global expansion led the World Health Organization (WHO) to consider the disease as a Public Health Emergency of International Concern (PHEIC), for which the cross-sectoral approach is necessary. The "One Health" strategy, promoted by the international organizations FAO, OIE and WHO, promotes collaborative efforts at all levels across multiple disciplines and sectors to achieve optimal health for people, animals and the environment, thus providing a conceptual framework for the development of cross-sectoral and multidisciplinary solutions to global health challenges. This approach reviews the latest research reports on crucial aspects in the epidemiology of this new zoonosis, such as the characteristics of coronaviruses, their hosts, factors after crossing the interspecies barrier, and the undefined aspects of SARS-CoV-2 with potential implications for its prevention and control, as well as the lack of knowledge of the intermediate host of the virus, an important link in the epidemiological chain and the role that wild and domestic animal species, including pets, can have in the persistence of the virus in the environment and its potential re-emergence. It also addresses the necessary cooperation between human and animal health services in activities to face COVID-19, while pointing out its negative economic impact on the entire food production and distribution chain. This is an example of the importance of the holistic vision proposed by the "One Health" approach in the prevention and control of zoonoses, benefiting the achievement of the Sustainable Development Goals by all countries, by proposing that healthy people and animals live in a healthy planet. There is a need of strengthening capacity building and cooperation between the human and animal health sectors, as well as their preparedness to face future health emergencies.

RESUMEN La salud humana está cada vez más interconectada con la de los animales en el ambiente que ellos comparten, en tanto aumenta la amenaza de las enfermedades emergentes que surgen en esa interfaz producto de las múltiples y crecientes fuerzas motrices que propician esa mayor interrelación hombre-animal-ambiente. La COVID-19 es una zoonosis emergente ocasionada por SARS-CoV-2, un nuevo coronavirus cuya fuente primaria se asocia a murciélagos. Su rápida expansión global determinó que la Organización Mundial de la Salud (OMS) considerara la enfermedad como una Emergencia de Salud Pública de Importancia Internacional, para cuyo enfrentamiento es necesario el enfoque intersectorial. La estrategia “Una Salud”, que promueven las organizaciones internacionales FAO, OIE, OMS, aboga por los esfuerzos colaborativos a todos los niveles entre múltiples disciplinas y sectores, para lograr la salud óptima de las personas, los animales y el ambiente, con lo cual provee un marco conceptual para el desarrollo de soluciones intersectoriales y multidisciplinarias ante los desafíos de salud globales. Con este enfoque se revisan los últimos reportes de las investigaciones sobre aspectos cruciales en la epidemiología de esta nueva zoonosis, como son las características de los coronavirus, sus huéspedes, los factores tras el cruce de la barrera interespecie y los aspectos sin dilucidar de SARS-CoV-2 con implicaciones potenciales para su prevención y control, como el desconocimiento del huésped intermediario del virus, eslabón importante de la cadena epidemiológica y el papel que pueden tener las especies animales silvestres y domésticas, incluidas las mascotas, en la persistencia del virus en el ambiente y su potencial reemergencia. También se aborda la necesaria cooperación entre los servicios de salud humana y animal en las actividades de enfrentamiento a la COVID-19, a la vez que se señala su impacto económico negativo en toda la cadena de la producción y distribución de alimentos, como un ejemplo de la importancia de la visión holística que propone el enfoque “Una Salud” en la prevención y control de las zoonosis, en beneficio del logro de los Objetivos de Desarrollo Sostenible por todos los países, al proponer que las personas y los animales sanos vivan en un planeta saludable. Se concluye en la necesidad del fortalecimiento de las capacidades y la cooperación entre los sectores de la salud humana y animal, así como su preparación para enfrentar emergencias sanitarias futuras.

ABSTRACT Mollicute contamination in cell cultures is common. Species such as Mycoplasma arginini, Mycoplasma salivarium, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma orale, and Acholeplasma laidlawii are identified as causing 95 % of the contaminations. The present work is aimed at developing species-specific PCRs for the identification of the most frequent contaminating mycoplasma species in cell cultures. The critical parameters of PCR were optimized and the analytical sensitivity and specificity were determined. The optimum temperature for hybridization was set at 55ºC; magnesium concentration at 1,5 mM. A range of 0,3-0,5 µM was selected for the primers. The analytical sensitivity of PCR was 1 pg/µL, while its analytical specificity was 100 %. Species-specific PCR was performed on 58 cell culture samples where the presence of Mollicutes was previously detected. As a result, Mycoplasma orale was detected as the most frequent species, followed by Mycoplasma fermentans, Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma arginini, Mycoplasma hyorhinis, and Mycoplasma salivarium. The results of this study confirm that the species-specific PCR assays developed are feasible to use for the identification of mycoplasma species in cell cultures.

RESUMEN La contaminación por Mollicutes en los cultivos celulares es frecuente. Especies como Mycoplasma arginini, Mycoplasma salivarium, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma orale y Acholeplasma laidlawii se identifican como causantes del 95 % de las contaminaciones. El presente trabajo tuvo como objetivo desarrollar PCR especie-específicos para la identificación de las especies de micoplasmas contaminantes más frecuentes en cultivos celulares. Se optimizaron los parámetros críticos de la PCR y se determinaron la sensibilidad y especificidad analítica. Se estableció como valor óptimo de temperatura de hibridación 55ºC; concentración de magnesio 1,5 mM y de cebadores se seleccionó un rango 0,3-0,5 µM. La sensibilidad analítica de la PCR fue de 1 pg/µL, mientras que su especificidad analítica fue 100 %. Se realizó la PCR especie-específico a 58 muestras de cultivo celulares donde previamente se detectó la presencia de Mollicutes. Como resultado se detectó Mycoplasma orale como la especie más frecuente, seguida de Mycoplasma fermentans, Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma arginini, Mycoplasma hyorhinis y Mycoplasma salivarium. Los resultados de este estudio confirman que los ensayos PCR especie-específicos desarrollados son factibles de emplear para la identificación de especies de micoplasmas en cultivos celulares.

ABSTRACT Antibiotics are used in the control of mycoplasma contaminations in cell cultures. The antimicrobial resistance of these microorganisms has increased considerably in recent years and the antibiotics of choice, such as quinolones, aminoglycosides and tetracyclines, have become less effective. The aim of this work was to determine the susceptibility patterns in strains of mycoplasma contaminants in cell cultures. Eleven mycoplasma strains, derived from the diagnosis of contamination in cell cultures and previously characterized by biochemical and genetic tests, were used for this purpose. It was determined the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of strains against nine antimicrobial agents used in the routine work with cell cultures and against contaminating mycoplasma species. Isolates showed susceptibility to tetracyclines: minocycline (MIC range: 0.25-0.5 μg/mL) and oxytetracycline (MIC range: 1-2 μg/mL), and to macrolide: tylosine (MIC range: 0.25-1 μg/mL); while they showed moderate resistance to quinolones: enrofloxacin (MIC range: 4-8 μg/mL) and ciprofloxacin (MIC range: 4-8 μg/mL). A total of 10/11 strains showed resistance to aminoglycosides: neomycin (MIC range: 8-16 μg/mL), gentamicin (MIC range: 8-32 μg/mL), kanamycin (MIC range: 8-32 μg/mL), and streptomycin (MIC range: >64 μg/mL). The antimicrobial resistance of mycoplasmas should be continuously monitored with a view to minimizing changes in susceptibility and maintaining antimicrobial efficacy against contamination.

RESUMEN En los cultivos celulares, los antibióticos se utilizan en el control de las contaminaciones por micoplasmas. La resistencia antimicrobiana de estos microorganismos aumentan considerablemente en los últimos años y los antibióticos de elección, como las quinolonas, los aminoglucósidos y las tetraciclinas, disminuyen su efectividad. El objetivo de este trabajo fue determinar los perfiles de susceptibilidad en cepas de micoplasmas contaminantes en cultivos celulares. Para esto se utilizaron 11 cepas de micoplasma, obtenidas del diagnóstico de contaminaciones en cultivos celulares y caracterizadas previamente por pruebas bioquímicas y genéticas. Se determinó la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de las cepas frente a nueve agentes antimicrobianos que se utilizan en el trabajo rutinario con cultivos celulares y contra especies de micoplasma contaminantes. Los aislados mostraron susceptibilidad a tetraciclinas: minociclina (rango de CMI: 0,25-0,5 μg/mL) y oxitetraciclina (rango de CMI: 1-2 μg/mL) y al macrólido: tilosina (rango de CMI: 0,25-1 μg/mL); mientras que evidenciaron moderada resistencia a quinolonas: enrofloxacina (rango de CMI: 4-8 μg/mL) y ciprofloxacina (rango de CMI: 4-8 μg/mL). Un total de 10/11 cepas mostraron resistencia a los aminoglucósidos: neomicina (rango de CMI: 8-16 μg/mL), gentamicina (rango de CMI: 8-32 μg/mL), kanamicina (rango de CMI: 8-32 μg/mL) y estreptomicina (rango de CMI: >64 μg/mL). La resistencia antimicrobiana de los micoplasmas debe ser continuamente monitoreada con vista a minimizar los cambios en la susceptibilidad y mantener eficacia antimicrobiana frente a la contaminación.