Anticorpos monoclonais (AcMs) produzidos com uma amostra brasileira do herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) foram utilizados na adaptação e padronização de técnicas rápidas para o diagnóstico de infecções pelo BHV-1 e BHV-5. A detecção de antígenos virais por imunofluorescência em células descamativas (IFCD) foi comparada com o isolamento viral, em secreções nasais de 16 bezerros, sendo 6 inoculados com o BHV-1 e 10 com o BHV-5. De 203 amostras testadas, 182 (89,6%) apresentaram resultados concordantes nos dois testes (143 positivas; 39 negativas). Comparando-se com o isolamento, a IFCD apresentou sensibilidade de 96,6%, especificidade de 70,9%, e precisão de 89,6%. Os AcMs também foram utilizados para detectar antígenos do BHV-5 em impressões frescas do cérebro de bezerros acometidos de enfermidade neurológica e em células de cultivo utilizadas na técnica de soroneutralização (SN), permitindo a obtenção dos resultados em 24 horas. A técnica, denominada de soroneutralização rápida (SNR), apresentou sensibilidade de 97,3%; especificidade de 95,5% e precisão de 96,2% em comparação com a SN tradicional; e sensibilidade de 94,7%, especificidade de 97,3% e precisão de 96,1% em comparação com um ELISA comercial. Esses resultados demonstram que esses AcMs podem ser muito úteis para uso em técnicas rápidas de diagnóstico de infecções suspeitas de BHV-1 ou de BHV-5, sobretudo em situações de surto, quando a tomada de decisões adequadas depende de um diagnóstico rápido e confiável.

Monoclonal antibodies (mAbs) produced to a Brazilian isolate of bovine herpesvirus type 5 (BHV-5) were used to standardize rapid tests for the diagnostic of BHV-1 and BHV-5 infections. The detection of viral antigens by immunofluorescence in descamative cells (IFDC) was compared to virus isolation in nasal secretions of 16 calves inoculated with BHV-1 (n=6) or BHV-5 (n=10). One hundred and sixty two out of 203 specimens (89.6%) had identical results in both assays (143 positive; 39 negative); the IFDC assay showing a sensitivity of 96.6%, specificity of 70.9% and precision of 89.6%. The mAbs were also used to detect BHV-5 antigens in fresh brain smears of calves from outbreaks of neurological disease; and in cell cultures used in a virus neutralizing (VN) test, allowing the obtention of results in 24 hours. The rapid virus neutralizing test (RVN) showed a sensitivity of 97.3%, specificity of 95.5% and precision of 96.2% comparing to the standard VN test; and a sensitivity of 94.7%, specificity of 97.3% and precision of 96.1% as compared to a commercial ELISA. These results demonstrate that these mAbs are useful in rapid diagnostic tests, which may be very important in field outbreaks, when taking adequate decisions depends on rapid and reliable diagnostic tests.

Bezerros foram imunizados com duas vacinas contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1; vacina A, n=28; B, n=28) ou com uma vacina contendo antígenos do BHV-1 e BHV-5 (n=32) e a atividade neutralizante sérica antiBHV-1 e BHV-5 foi testada após três doses vacinais. Todos os animais (n=88) produziram anticorpos com atividade neutralizante antiBHV-1 (títulos médios geométricos [GMT] de 13,1; 14,8 e 34,3 para as vacinas A, B e C, respectivamente) e 82 animais (93,2%) desenvolveram atividade neutralizante antiBHV-5 (GMTs: 10,6; 11,5 e 29,8, respectivamente). Nos três grupos vacinais, os títulos médios antiBHV-1 não diferiram dos títulos antiBHV-5. No entanto, comparando-se os títulos médios entre as vacinas, os títulos neutralizantes para o BHV-1 e BHV-5 foram superiores nos animais do grupo C (p<0,01 ). Esse grupo também apresentou a maior proporção de reagentes ao BHV-5 (96,9%; contra 85,7% da vacina A e 92,9% da vacina B). Esses resultados demonstram que a vacina C induziu títulos neutralizantes superiores contra os dois vírus e que anticorpos induzidos por antígenos do BHV-1 (vacinas A e B) possuem atividade neutralizante relevante também contra o BHV-5.

Calves were immunized with two vaccines against bovine herspevirus type 1 (BHV-1; vaccine A, n=28; B, n=28) or with a vaccine containing BHV-1 and BHV-5 antigens (vaccine C, n=32) and the serum neutralizing activity against BHV-1 and BHV-5 was measured after three vaccine administrations. Neutralizing activity to BHV-1 was detected in sera of 100% (n=88) of the animals (geometric mean titers [GMT] of 13.1; 14.8 and 34.3 for vaccines A, B and C, respectively) whereas 82 sera (93.2%) reacted to BHV-5 (GMTs: 10.6; 11.5 and 29.8). In all three groups, the mean BHV-1 titers did not differ from BHV-5 titers. However, comparison among the vaccines demonstrated that the mean titers to BHV-1 and BHV-5 were higher in animals receiving vaccine C (p<0.01). This vaccine also induced a higher proportion of reagents to BHV-5 (96.9%; against 85.7% for vaccine A and 92.9% for vaccine B). These results demonstrate that vaccine C induced higher neutralizing antibody titers against both viruses; and that antibodies induced by BHV-1 antigens (vaccines A and B) cross-reacted and displayed relevant neutralizing activity against BHV-5.

A resposta sorológica e proteção fetal conferida por três vacinas inativadas contra o vírus da diarréia viral bovina (BVDV) (vacinas A, B e C) foram avaliadas através de vacinação e posterior desafio de ovelhas prenhes com amostras brasileiras de BVDV-1 e BVDV-2. Níveis baixos a moderados de anticorpos neutralizantes anti-BVDV-1 foram detectados na maioria dos animais (45/47) aos 30 dias após a segunda dose vacinal (títulos médios geométricos [GMT] de 124,7; 74,6 e 26,7 para as vacinas A, B e C, respectivamente). Em contraste, atividade neutralizante anti-BVDV-2 não foi detectada em vários animais (12/47) e foi de magnitude inferior nos três grupos vacinais (GMTs 19,1; 14,1 e 15,1). Os títulos médios de anticorpos reduziram-se significativamente no dia 180, sendo que vários animais já não apresentavam atividade neutralizante detectável frente ao BVDV-1 (grupo B=1/19; C=8/14) e principalmente frente ao BVDV-2 (A=7/14; B=13/19; C=13/14). Nessa data, os títulos médios de anticorpos contra as amostras utilizadas no desafio eram de 91,9; 15,1 e 60,6 (SV-126.8, BVDV-1) e de 10; <10 e 28,3 (SV-260, BVDV-2) nos grupos A, B e C, respectivamente. Nos três grupos vacinais, os níveis de anticorpos neutralizantes contra essas amostras não foram suficientes para prevenir a replicação, disseminação virêmica e transmissão transplacentária dos vírus aos fetos. O vírus foi detectado no sangue e nos fetos de todas as ovelhas vacinadas com as vacinas A (10/10), B (9/9) e C (8/8). Esses resultados demonstram que as vacinas testadas induziram níveis moderados a baixos de anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 e, principalmente contra o BVDV-2 na maioria dos animais; e que esses níveis não foram suficientes para prevenir a infecção fetal frente ao desafio com amostras de BVDV-1 e BVDV-2. Adicionalmente, os resultados confirmam a adequação de ovelhas prenhes para estudos de proteção fetal por vacinas contra o BVDV.

The serological response and fetal protection conferred by three bovine viral diarrhea virus (BVDV) inactivated vaccines (vaccines A, B and C) were evaluated through immunization followed by challenge of pregnant ewes with Brazilian BVDV-1 and BVDV-2 field isolates. Moderate to low levels of anti-BVDV-1 neutralizing antibodies were detected in most animals (45/47) 30 days after the second vaccine administration (geometric mean titers [GMT] 124.7, 74.6 and 26.7 for vaccines A, B and C, respectively). In contrast, neutralizing activity to BVDV-2 was not detected in several vaccinated animals (12/47) and was significantly lower than to BVDV-1 in all three vaccine groups (GMT 19.1, 14.1 and 15.1). The antibody levels declined significantly by day 180, such that some animals from groups B (1/19) and C (8/14) had no detectable neutralizing activity against BVDV-1; and several animals from groups A (7/14), B (13/19) and C (13/14) did not react against BVDV-2. At this time, the mean antibody titers against the challenge viruses were 91.9; 15.1 and 60.6 (SV-126.8, BVDV-1); and 10; <10 and 28.3 (SV-260, BVDV-2) for vaccines A, B and C, respectively. The antibody levels to the homologous viruses were not sufficient to prevent virus replication, viremia and transplacental transmission of the virus upon challenge. Infectious virus was detected in the blood of all vaccinated ewes and in their fetuses. These results demonstrate that the vaccines tested induced low to moderate titers of antibody against BVDV-1 and even lower titers against BVDV-2 in most animals. The antibody levels declined progressively and were not sufficient to prevent fetal infection upon challenge with BVDV-1 and BVDV-2 at day180. In addition, these findings demonstrate that pregnant sheep represent an adequate model to study fetal protection by BVDV vaccines.