RESUMO Objetivos: Investigar a reprodutibilidade intra-laboratorial dos fenótipos clínicos e avaliar anisotropias ópticas em córneas de coelhos com deficiência de células tronco limbais. Métodos: Lesões ao limbo foram feitas no olho direito de 23 coelhos adultos da Nova Zelândia Branco, usando um protocolo altamente agressivo, que envolveu peritomia limbal em 360 graus, ceratolimbectomia, cauterização por álcali, e remoção mecânica de epitélio remanescente. Os olhos foram clinicamente avaliados por 28 dias, inclusive por citologia de impressão corneal. As córneas que manifestaram um conjunto de alterações típicas de deficiência de células tronco limbais foram coletadas e submetidas à estudos em histopatologia e em anisotropias ópticas. Córneas saudáveis foram usadas como controles. Diferenças de caminho óptico de birrefringência relacionada à organização do colágeno estromal, e dicroísmo linear relacionado à expressão e à orientação das cadeias de glicosaminoglicanos dos proteoglicanos estromais, foram quantificados por microscopia de luz polarizada. Resultados: Um olho apresentou hipópio e foi excluído do estudo. Todos os olhos estudados (n=22) apresentaram sinais de inflamação ocular. A citologia de impressão não detectou células caliciformes na superfície corneal. Doze de 22 córneas manifestaram alterações clínicas típicas de deficiência de células tronco limbais, caracterizado por defeitos epiteliais, infiltrados inflamatórios, opacidade de moderada à severa, e neovascularização. Estudos por microscopia de luz polarizada mostraram que a deficiência de células tronco limbais aumentou a diferenças de caminho óptico corneal em 24,4% (versus controles). As córneas com deficiência de células tronco limbais foram menos dicroicas do que as córneas controle. Conclusões: Coelhos com deficiência de células tronco limbais, para aplicações em estudos pré-clínicos, devem ser rigorosamente selecionados para assegurar homogeneidade experimental, pois há evidências de que protocolos utilizados para indução de deficiência de células tronco limbais não estão associados com boa reprodutibilidade intra-laboratorial de fenótipos clínicos. A deficiência de células tronco limbais, como induzida aqui, alterou as propriedades ópticas anisotrópicas do estroma corneal. Tais alterações são indicativas de mudanças no empacotamento de colágeno e na orientação das cadeias de glicosaminoglicanos dos proteoglicanos. Conhecimentos nessas alterações são importantes para potencializar estratégias que visam a restabelecer a integridade morfofuncional do estromal corneal acometido pela deficiência de células tronco limbais.

ABSTRACT Purposes: To investigate the intra-laboratory reproducibility of clinical features and to evaluate corneal optical anisotropies in a rabbit model of limbal stem cell deficiency. Methods: Limbal injury was induced in the right eye of 23 adult New Zealand White rabbits using a highly aggressive protocol that combined 360 degrees limbal peritomy, keratolimbectomy, alkaline chemical burn, and mechanical removal of the epithelium. Clinical evaluation of the injured eyes was performed for 28 days and included corneal impression cytology. Corneas with a severe clinical outcome set typical of limbal stem cell deficiency were then collected, subjected to a histopathological examination, and examined for optical anisotropies. Corneas from healthy rabbit eyes were used as controls. Differences in optical path due to stromal collagen birefringence, as well as linear dichroism related to the expression and spatial orientation of glycosaminoglycan chains from proteoglycans, were measured from cross-sections under a quantitative polarized light microscope. Results: One eye showed signs of hypopyon and was excluded. Signs of ocular inflammation were observed in all eyes studied (n=22). Corneal impression cytology did not detect goblet cells. Twelve of the 22 corneas presented a clinical outcome set typical of limbal stem cell deficiency, which is characterized by the presence of epithelial defects, inflammatory cells, moderate-to-severe opacity, and neovascularization. Microscopic studies under polarized light revealed that relative to controls, limbal stem cell deficiency caused a 24.4% increase in corneal optical path differences. Further, corneas with limbal stem cell deficiency were less dichroic than controls. Conclusions: These results suggest that rabbit models of limbal stem cell deficiency must be rigorously screened for use in preclinical studies to ensure experimental homogeneity because protocols used to create limbal stem cell deficiency could be not associated with good intra-laboratory reproducibility of clinical features. Limbal stem cell deficiency, as induced herein, altered the optical anisotropic properties of the corneal stroma. Such alterations are indicative of changes in collagen packing and the spatial orientation of glycosaminoglycan chains from proteoglycans. Knowledge of these changes is important to potentiate strategies aimed at restoring the morphofunctional integrity of the corneal stroma affected by limbal stem cell deficiency.

Abstract Purpose: To establish and compare protocols of alkaline cauterization for inducing corneal angiogenesis in murine models. Methods: Twenty-four adult Wistar rats were distributed into four groups (G1, G2, G3, and G4). The right eye cornea from each rat was cauterized using filter paper (3 mm), soaked in a solution of silver and potassium nitrates (3:1). Cauterization times were 10 (G1 and G4), or 20 seconds (G2 and G3). Cauterized corneas were washed with Ringer’s lactate solution. The filter paper was either removed before washing (G1 and G2), or kept on the corneas (G3 and G4). Corneas were photographed at multiple time points (2, 4, 6, 8, 11, 13, and 15 days after the procedure), and neovascularization parameters were assayed. Results: Neovascularization was observed in 66% of G1 corneas, and 100% of G2, G3, and G4 corneas. On day 15, G1 corneas showed smaller vascularized areas (12.63 ± 12.59%) compared to those in the G3 (41.95 ± 17.32%) and G4 (33 ± 11.74%) (P < 0.05) groups. Conclusions: The silver and potassium nitrate solution effectively induced corneal angiogenesis. The G2, G3, and G4 protocols showed excellent reproducibility, and induced vascularization in 100% of corneas.

RESUMO: Objetivou-se avaliar a presença de membrana pupilar persistente (MPP) em ratos. Foram oftalmicamente avaliados, 30 ratos com idade entre três e quatro meses, e peso entre 300 e 500 gramas, fornecidos pelo Biotério Central da Universidade Estadual Paulista (UNESP), campus de Botucatu, SP, Brasil. Todos os animais passaram por inspeção à biomicroscopia, teste da fluoresceína e também pela tonometria de rebote. Encontrou-se MPP em 15 dos animais (50%), cuja origem pode estar associada à herdabilidade.

ABSTRACT: The aim of this research was to evaluate the presence of persistent pupillary membrane (PPM) in rats. Thirty rats between three and four months of age and weighing 300-500 grams, provided by the biothery section of the General Administration at Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu, SP, Brazil, were subjected to ophthalmological examination by slit lamp biomicroscopy, fluorescein eye stain test and rebound tonometry. We found PPM with possible hereditary origin in 15 animals (50%).

RESUMO: O estudo examinou a eficácia de um dispositivo intravítreo de liberação de dexametasona para o controle da inflamação ocular em cães, após facoemulsificação. Um dispositivo de copolímero poli (ácido lático-co-glicólico) foi implantado via pars plana na câmera vítrea, imediatamente antes da facoemulsificação (grupo dispositivo [GD], n=20). Após a cirurgia, o grupo controle (GC) recebeu terapia esteroide, midriático e antibiótico. O mesmo protocolo de tratamento foi adotado no GD, exceto pelos esteroides. Todos os olhos foram examinados antes do procedimento e em diferentes tempos após a facoemulsificação. A ultrassonografia mostrou que o dispositivo diminuiu em tamanho, sendo observado, apenas, remanescentes aos 60 dias de pós-operatório (DPO). Sinais de uveíte foram observados em 35% do GD no DPO 7, entretanto, no DPO 14, 50% dos olhos tiveram sinais de uveíte e requereram terapia esteroide local. A pressão intraocular (PIO) foi maior no GD, comparativamente ao GC, imediatamente após a cirurgia. A PIO não diferiu no DPO 7 e no DPO 14, entretanto foi menor nos momentos pós-operatórios mais tardios (DPO 30 a 90). Valores de flare foram maiores no GD que no GC, imediatamente após a cirurgia, mas não mostraram diferenças nos momentos subsequentes. Em suma, o dispositivo intravítreo de dexametasona não controlou adequadamente a inflamação intraocular em cães submetidos à facoemulsificação.

ABSTRACT: This study examined the efficacy of an intravitreal dexamethasone-loaded device for the control of postoperative ocular inflammation in dogs following phacoemulsification. Twenty dogs with bilateral mature senile cataracts were prepared for surgery using routine protocols. A biodegradable poly (lactic-co-glycolic acid) copolymer device was inserted through the pars plana into the vitreous chamber immediately before phacoemulsification (device group [DG], n=20). Following surgery, a conventional group (CG) received local and systemic steroids, mydriatics, and antibiotic therapy. The same treatment protocol was adopted in DG, except for steroids. All eyes were examined before surgery and at various times after phacoemulsification. Ultrasonography showed gradual device shrinkage, with only remnants remaining at postoperative day (POD) 60. Signs of uveitis were observed in 35% of the DG on POD 7, but by POD 14, 50% of eyes showed signs of uveitis and these eyes required local steroid therapy. The intraocular pressure (IOP) was higher in the DG than in the CG immediately after surgery. IOP did not differ on POD 7 and POD 14, but was lower during the late postoperative period (POD 30 to 90). Flare values were greater in the DG than in the CG immediately following surgery, but showed no subsequent differences. In summary, the intravitreal dexamethasone device did not adequately control intraocular inflammation in dogs undergoing phacoemulsification.

RESUMO Objetivo: Estudaram-se os efeitos da instilação de morfina 1% sobre parâmetros clínicos, turbidez do humor aquoso e expressão de fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), de interleucina-1 beta (IL-1beta), de prostaglandina E2 (PGE2) e de mieloperoxidase (MPO), em olhos de coelhos com uveíte induzida por endotoxina. Material e Métodos: Vinte e quatro coelhos da raça Nova Zelândia Branco foram distribuídos em quatro grupos (n=6, em cada): grupo controle (GC), morfina (GM), naloxona (GN) e morfina-naloxona (GMN). Sob anestesia dissociativa, injetou-se 0,1 mL de solução contendo 0,2 µg de lipossacarídeo (LPS) endotóxico da parede celular de Salmonella typhimurium na câmara vítrea. Realizou-se avaliação clínica (hiperemia conjuntival, quemose, blefaroespasmo e secreção ocular) e a flaremetria a “laser” antes (basal) e após 10 e 20 horas da indução da uveíte. No final, os coelhos foram submetidos à eutanásia e os olhos com uveíte foram enucleados para a quantificação dos níveis de TNF-alfa, IL-1 beta, PGE2 e MPO. Diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05. Resultados: Os grupos da pesquisa não diferiram quanto aos parâmetros clínicos e os valores de “flare”. Observou-se elevação significativa nos níveis de TNF-alfa e de IL-1 beta, comparativamente ao basal, nos grupos GC, GM, GN e GMN (p<0,05). Valores de PGE2 variaram entre os grupos GM e GNM (p<0,05). A atividade de MPO aumentou após a indução da uveíte, porém, sem significância estatística (p>0,05). Conclusões: A morfina não atuou sobre parâmetros clínicos, “flare” e expressão dos mediadores inflamatórios estudados, quando instilada em olhos de coelhos com uveíte induzida por injeção intravítrea de LPS.

ABSTRACT Purpose: To evaluate the effects of 1% morphine instillation on clinical parameters, aqueous humor turbidity, and expression levels of tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin-1 beta (IL-1beta), prostaglandin E2 (PGE2), and myeloperoxidase (MPO) in rabbits with endotoxin-induced experimental uveitis. Methods: Twenty four New Zealand white rabbits were divided into four groups (n=6 each): control (CG), morphine (MG), naloxone (NG), and morphine-naloxone (MNG) groups. Under dissociative anesthesia, 0.1 mL of solution containing 0.2 µg of lipopolysaccharide (LPS) endotoxin from the Salmonella typhimurium cell wall was injected in the vitreous chamber. Clinical evaluations (conjunctical hyperemia, chemosis blepharospasm, and ocular discharge) and laser flaremetry were performed before (baseline), and 10 and 20 hours after induction of uveitis. Rabbits were subsequently euthanized and eyes were enucleated to quantify expression levels of TNF-α, IL-1 beta, PGE2, and MPO. Results: No significant differences in clinical parameters and flare values were observed between the study groups. TNF-α and IL-1 beta levels increased significantly in the CG, MG, NG, and MNG groups compared to baseline (P<0.05). Significant differences in PGE2 levels were observed between the MG and NMG groups (P<0.05). A trend toward increased MPO activity was observed in response to uveitis induction; however, this trend did not reach statistical significance (P>0.05). Conclusions: Morphine has no effect on clinical parameters, flare, or expression levels of inflammatory mediators in a rabbit model of uveitis induced by intravitreal injection of LPS.

Afecções da superfície ocular são frequentes em cães braquicefálicos. Dentre as raças comumente acometidas, tem-se a Shih Tzu, cujos parâmetros oftálmicos não são conhecidos em sua plenitude e o foram, em parte, avaliados nesta pesquisa. Sob contenção física, empregou-se o teste lacrimal de Schirmer, o de ruptura do filme lacrimal, a estesiometria, a biomicroscopia, a microscopia especular de não contato, a flaremetria a laser, a tonometria de aplanação, a ecografia e a oftalmoscopia. Foram estudados 48 olhos de 24 indivíduos machos ou fêmeas, com idades variando entre dois a quatro anos e peso entre cinco a 10kg. Aos dados, aplicou-se a estatística descritiva. Relativamente às médias e aos erros padrão, encontraram-se, quanto ao teste lacrimal de Schirmer, 26,145±0,803mm min-1 e, quanto à ruptura do filme lacrimal, 13,668±0,538s. À estesiometria, encontraram-se 2,395±0,071cm. À biomicroscopia, observaram-se 70,83% dos olhos com entrópio de canto medial, 42% apresentaram pelos em carúncula medial, 33% distiquíase, 27% opacidade paracentral e 13% melanose corneal. Médias e erros padrão, no que concerne à densidade de células endoteliais, foram de 2221,591±20,161céls mm-2. Quanto à hexagonalidade, foram de 63,770±1,805%; quanto à área, foram de 451,895±4,179mm2; em relação à espessura corneal, foram de 0,490±0,007mm. À flaremetria a "laser", encontraram-se 1,720±0,216PC ms-1. À tonometria, 16,118±0,460mmHg. As médias e os erros padrão, à ultrassonografia, foram de 20,255±0,134mm para diâmetro axial horizontal; de 6,624±0,031mm, para espessura da lente; de 4,064±0,109mm, para profundidade da câmara anterior; e de 9,565±0,054mm, para a câmara vítrea. O padrão de imagens à oftalmoscopia não divergiu do já reportado em cães de outras raças. De consoante com os resultados obtidos, há como admitir que parâmetros de referência para cães adultos da raça Shih Tzu, estudados na presente pesquisa, não divergiram sobremaneira dos conhecidos para outras raças de cães, à exceção do tempo de ruptura do filme lacrimal, cujos valores ficaram aquém da média para a espécie, e os da estesiometria de Cochet-Bonnet, que foram superiores.

Ocular surface diseases are often diagnosed in brachycephalic dogs. The ophthalmic parameters of the Shih Tzu dogs are evaluated in this study since this breed is among the most commonly affected by these diseases. In this study, ophthalmic parameters of this breed were partly studied under physical restraint. Schirmer tear test, breakup time test, aesthesiometry, biomicroscopy, non-contact specular microscopy, laser flaremetry, applanation tonometry, ultrasonography and ophthalmoscopy were carried in 48 eyes of 24 male and female dogs, aged from two to four years, weighing between 5 and 10kg. All dogs were from a breeding kennel. Descriptive statistics were applied to the data. Mean and standard error for Schirmer tear test was 26.145±0.803mm min-1; breakup time test, 13.668±0.538s; and aesthesiometry, 2.395±0.071cm. The biomicroscopy evaluation showed that 70.83% of the eyes had medial entropion; 42% caruncular trichiasis; 33% distichiasis, 27% mild paracentral corneal opacity; and 13% corneal melanosis. Mean and standard error for endothelial cell density was 2221.591±20.161cells mm-2; endothelial cell hexagonality, 63.770±1.805%; endothelial cell area, 451.895±4.179mm2; central corneal thickness, 0.490±0.007 mm; laser flaremetry, 1.720±0.216PC ms-1; applanation tonometry, 16.118±0.460mmHg; axial length, 20.255±0.134mm; lens thickness, 6.624±0.031mm; anterior chamber, 4.064±0.109mm; and vitreous chamber, 9.565±0.054mm. Ophthalmoscopy findings were not different from previous reports for other breeds. The results showed that the ophthalmic Shih Tzu parameters did not differ from other breeds according to data in the literature, except for the breakup time and Cochet-Bonnet aesthesiometry.

A catarata está entre as afecções oculares mais frequentes em cães, sendo a facoemulsificação o método que melhor se adequa à sua terapia. A opacidade de cápsula posterior (OCP) encontra-se entre as complicações mais comuns e se manifesta em semanas ou meses após a facectomia. Lentes intraoculares, empregadas na correção da hipermetropia pós-cirúrgica, contribuem para a prevenção das OCPs, especialmente as acrílicas dobráveis, com bordas truncadas ou quadradas. Entretanto, a sua implantação pode resultar na perda de células endoteliais. Com a pesquisa, propuseram-se avaliar a morfologia e a celularidade endoteliais, a microscopia especular de não contato, em pacientes afácicos e em pseudofácicos. Foram analisados a densidade celular, a área celular, o coeficiente de variação e o percentual de células hexagonais inter e entre os grupos. Ao longo dos momentos da avaliação, a densidade das células endoteliais não se alterou significativamente dentro dos grupos. Na comparação entre os grupos, ela foi maior nos pseudofácicos, em períodos que variaram de 7 a 30 dias, entretanto retornaram a valores próximos aos iniciais, tornando a diferença entre os dois grupos não significativa ao final da avaliação. Relativamente à área celular e ao coeficiente de variação, não houve diferença significativa, inter e entre os grupos. Houve diferença dentro dos grupos relativamente à hexagonalidade, com diminuição percentual após a facoemulsificação. As condições retornaram ao basal. Na comparação entre pacientes pseudofácicos e afácicos, houve diminuição nos pseudofácicos imediatamente à cirurgia.

Cataract is one of the most common ocular diseases in dogs, and phacoemulsification is considered its treatment of choice. Posterior capsular opacity (PCO) is a frequent complication and may occur weeks or months after the surgery. It is known that intraocular lenses (IOL) used for the correction of post-operative hypermetropia are an adjunctive aid in the prevention of PCOs, mainly the foldable acrylics designs with square and truncated edges. However, IOL placement may result in endothelial cell loss. This study evaluated the morphology and cellularity of the endothelium by non-contact specular microscopy in aphakic and pseudophakic dogs. Endothelial cell density, endothelial cell area, coefficient of variation and hexagonal cells percent were analyzed for each group and between groups. During all evaluation periods, endothelial cell density did not alter in any group. From days 7 to 30, endothelial cell density was higher in pseudophakic dogs. However, values returned to normal and, by the end of the study, no significant difference was observed. Cell area and variation coefficient did not differ in each group or between groups. Hexagonal cells percent significantly reduced after phacoemulsification in both groups. With time, this condition returned to initial values. When both groups were compared, hexagonal cells percent were decreased in the pseudophakic group, immediately after the surgeries.