ABSTRACT Introduction: The identification of the wide tropism of SARS-CoV-2 can be critical for viral pathogenesis, and it is therefore relevant to determine the infection mechanisms and identify new therapeutic targets. This study consists of two experimental blocks: a) isolation and characterization of the SARS-CoV-2 virus, and b) pathogenesis, tropism, and targets, both molecular and therapeutic. Methods: The procedures used were the following: a) clinical samples were obtained from the nasopharyngeal cavity of COVID-19 positive patients, which were inoculated in Vero E6 cells and analyzed by Scanning Electron Microscopy 72 h after infection. b) They were obtained visceral organ samples (lung, liver, kidney and brain) from patients dyed from COVID-19. Cryocuts were prepared and evaluated by Masson's Trichrome Staining, Electron Microscopy and Confocal Microscopy. Results: Results show a) Extensive damage in infected Vero E6 cells where virus particles and extracellular virions are observed, displaying a cytopathic effect; b) They were identified Physio pathological processes using Masson's Trichrome Staining, detecting a predominance of the most advanced stages of Diffuse Alveolar Damage. Using Electron Microscopy, we found a profuse loss of alveolar epithelial cells in the lung. Confocal Microscopy was able to detect the presence of the SARS-CoV-2 nucleocapsid co-localized with key molecules such as Fibronectin, Vimentin, and PPARγ, together with NLRP3 Inflammasome in the brain cortical tissues. Conclusions. The isolation of the SARS-CoV-2 virus was performed for the first time in Cuba in nasopharyngeal exudates of patients with COVID-19 in the Vero E6 cell line. We identified for the first time novel cellular and pathophysiological processes involved in the infection of SARS-CoV-2, as well as potential therapeutic targets that reveal promising drugs to combat COVID-19 and its sequelae.

RESUMEN Introducción: La identificación del amplio tropismo del SARS-CoV-2 puede ser crítico para la patogénesis viral, por lo que es relevante conocer los mecanismos de infección e identificar nuevas dianas terapéuticas. Esta investigación consta de 2 bloques experimentales: aislamiento y caracterización del virus SARS-CoV-2 y patogénesis, tropismo, dianas moleculares y terapéuticas. Métodos: Se realizaron los siguientes procederes a) de la cavidad nasofaríngea de pacientes positivos al COVID-19, se obtuvo muestras clínicas que se inocularon en las células Vero E6 y se analizaron mediante microscopía electrónica de barrido a las 72 h postinfección; b) se obtuvo muestras de órganos viscerales de fallecidos por COVID-19: pulmón, hígado, riñón y cerebro. Los criocortes o cortes ultra finos se evaluaron mediante la tinción de tricrómica de masson, microscopía electrónica y la microscopia confocal. Resultados: Se obtuvo los siguientes resultados principales: a) se identificó un extenso daño en las células Vero E6 infectadas en las cuales se pudieron observar partículas de virus y viriones extracelulares, evidenciando un efecto citopático; b) se identificaron procesos fisiopatológicos: por tinción de tricrómica de Masson, se identificó un predominio de las etapas más avanzadas del daño alveolar difuso, al microscopio electrónico en pulmón, se evidenció la pérdida abundante de las células epiteliales alveolares. A través de microscopia confocal, se detectó la presencia de la nucleocápside del SARS-CoV-2 colocalizada con las moléculas claves tales como: fibronectina, vimentina, PPARγ conjuntamente con el inflamasoma NLRP3 en tejidos corticales cerebrales. Como conclusiones, en esta investigación: a) se realizó por primera vez el aislamiento del virus SARS-CoV-2 en Cuba en exudados nasofaríngeos de pacientes con COVID-19 en la línea celular Vero E6. b) Se identificó por primera vez; novedosos procesos celulares y fisiopatológicos involucrados en la infección del virus SARS-CoV-2 y potenciales dianas terapéuticas que revelan fármacos prometedores para combatir la COVID-19 y sus secuelas.

ABSTRACT Introduction: Intralesional infiltration of epidermal growth factor (EGF) has emerged as a therapeutic alternative for diabetic foot ulcer (DFU) healing. The objectives of this research were: to determine the molecular profile of patients with DFU and to characterize the systemic effects of EGF intralesional treatment in such patients, taking into account redox balance markers, components of the advanced glycation end-product (AGE) pathway, factors related to the extracellular matrix (ECM) stability and pro-inflammatory markers. Methods: Thirteen patients with DFU were characterized in comparison with diabetic patients without ulcers (compensated and non-compensated) and non-diabetic subjects, attending to redox balance markers, components of the AGE pathway, and elements related to the stability of the ECM. The systemic response of patients with DFU to the intralesional treatment with EGF was evaluated according to the same parameters, in addition to other pro-inflammatory markers. Results: Patients with DFU exhibited the most disheveled biochemical profile, with elevated oxidative stress, low antioxidant reserves, increased glycoxidation products and matrix metalloproteases (MMP), with respect to non-ulcerated diabetic patients and to non-diabetic subjects. The intralesional administration of EGF was associated with a significant recovery of the parameters studied and with the systemic attenuation of several pro-inflammatory markers. Conclusions: These results indicate that intralesional infiltration of EGF translates into systemic antioxidant, anti-inflammatory, anti-degradative and anti-AGE effects, which contribute to restoring homeostasis in the diabetic patient.

RESUMEN Introducción: La infiltración intralesional con factor de crecimiento epidérmico (EGF) ha emergido como alternativa terapéutica para la cicatrización de las úlceras de pie diabético (UPD). Los objetivos de esta investigación fueron: determinar el perfil molecular de los pacientes con UPD y caracterizar los efectos sistémicos del tratamiento intralesional con EGF en tales pacientes atendiendo a marcadores de balance redox, componentes de la vía de los productos avanzados de glicación (AGE), factores relacionados con la estabilidad de la matriz extracelular (MEC) y marcadores pro-inflamatorios. Métodos: Se caracterizaron 13 pacientes con UPD en comparación con diabéticos sin úlceras (compensados y no compensados) e individuos no diabéticos, atendiendo a marcadores de balance redox, componentes de la vía de los AGE y elementos relacionados con la estabilidad de la MEC. La respuesta sistémica de los pacientes con UPD al tratamiento intralesional con EGF se evaluó atendiendo a los mismos parámetros, además de otros marcadores pro-inflamatorios. Resultados: Los pacientes con UPD exhibieron un perfil bioquímico muy alterado, con elevado estrés oxidativo, bajas reservas antioxidantes, aumento de los productos de glicoxidación y de las metaloproteasas de la matriz (MMP), con respecto a los diabéticos sin úlceras y a los no diabéticos. La administración intralesional de EGF estuvo asociada a una recuperación significativa de los parámetros estudiados y a la atenuación sistémica de varios marcadores pro-inflamatorios. Conclusiones: Los resultados indican que la infiltración intralesional con EGF se traduce en efectos sistémicos antioxidantes, anti-inflamatorios, anti-degradativos y anti-AGE, que contribuyen a restaurar la homeostasia del paciente diabético.

ABSTRACT Introduction: CIGB-258 is a peptide, whose mechanism of action has been associated with the inhibition of inflammation. This paper aims to demonstrate that CIGB-258 reduces hyperinflammation in COVID-19 patients. Methods: Pharmacokinetic and biodistribution profiles of the peptide labeled with iodine 125 [125I] were studied in Lewis rats. Thirteen critical COVID-19 patients and nine severe ones were included and treated, according to the protocol established (RPCEC00000313). Serum samples were obtained before and after treatment with CIGB-258, for the determination of biomarkers of inflammation. Results: Maximum concentration of peptide in blood from rats was at 0,5 to 1 h; and the half-life (t½) was calculated to be 6,3 to 6,9 hours. 48 h after the treatment with CIGB-258, clinical, radiological, and ventilation improvement was observed in all patients. C-reactive protein (CRP) levels significantly decreased after 72 h. CRP levels were inversely associated with oxygen uptake efficiency in the mechanical ventilation cohort in critical patients. Laboratory tests associated with hyperinflammation included white blood cell count with differential, ferritin, lactate dehydrogenase and calprotectin, which were gradually normalized. CIGB-258 led to a significant reduction of IL-6, TNF α and IL-10. Conclusion: CIGB-258 induced a clinical and radiological improvement in the patients, according with its pharmacokinetic and biodistribution profile. This improvement was associated with a decrease in biomarkers of systemic inflammation.

RESUMEN Introducción: El CIGB-258 es un péptido, cuyo mecanismo de acción se ha asociado con la inhibición de la inflamación. El presente trabajo tiene como objetivo demostrar que el CIGB-258 reduce la hiperinflamación en los pacientes con COVID-19. Métodos. Se estudió el perfil de farmacocinética y biodistribucion del péptido marcado con yodo 125 [125I], en ratas Lewis. Se analizaron 13 pacientes críticos y 9 pacientes graves con COVID-19 de acuerdo al protocolo establecido (RPCEC00000313). Se obtuvieron muestras de suero antes y después del tratamiento con el CIGB-258, para la determinación de los biomarcadores de la inflamación. Resultados: El péptido alcanzó la máxima concentración en sangre a la media hora y su aclaramiento ocurrió aproximadamente en 6 h. Después de 48 h de tratamiento con el CIGB-258, hubo una mejoría clínica, radiológica y ventilatoria (P/F) en los pacientes. La Proteína C Reactiva (PCR) disminuyó significativamente en los pacientes, a partir de las 72 h de tratamiento. Hubo una correlación inversamente significativa entre P/F y la PCR en los pacientes críticos. Otros biomarcadores de la inflamación como: ferritina, lactado deshirogenasa y calprotectina disminuyeron significativamente. La terapia con el CIGB-258 redujo el cociente neutrófilos/linfocitos a valores normales. Las interleucinas (IL)-6, IL-10 y el TNF-α disminuyeron significativamente a las 96 h del tratamiento. Conclusiones: El CIGB-258 indujo una mejoría clínica y radiológica en los pacientes, en correspondencia con su perfil de farmacocinética y biodistribución. Dicha mejoría estuvo asociada con la disminución de biomarcadores de la inflamación sistémica.

Abstract BACKGROUND Diabetic foot ulcers are a common diabetic complication leading to alarming figures of amputation, disability, and early mortality. The diabetic glucooxidative environment impairs the healing response, promoting the onset of a ‘wound chronicity phenotype’. In 50% of ulcers, these non-healing wounds act as an open door for developing infections, a process facilitated by diabetic patients’ dysimmunity. Infection can elicit biofilm formation that worsens wound prognosis. How this microorganism community is able to take advantage of underlying diabetic conditions and thrive both within the wound and the diabetic host is an expanding research field. OBJECTIVES 1) Offer an overview of the major cellular and molecular derangements of the diabetic healing process versus physiological cascades in a non-diabetic host. 2) Describe the main immunopathological aspects of diabetics’ immune response and explore how these contribute to wound infection susceptibility. 3) Conceptualize infection and biofilim in diabetic foot ulcers and analyze their dynamic interactions with wound bed cells and matrices, and their systemic effects at the organism level. 4) Offer an integrative conceptual framework of wound–dysimmunity–infection–organism damage. EVIDENCE AQUISITION We retrieved 683 articles indexed in Medline/PubMed, SciELO, Bioline International and Google Scholar. 280 articles were selected for discussion under four major subheadings: 1) normal healing processes, 2) impaired healing processes in the diabetic population, 3) diabetic dysimmunity and 4) diabetic foot infection and its interaction with the host. DEVELOPMENT The diabetic healing response is heterogeneous, torpid and asynchronous, leading to wound chronicity. The accumulation of senescent cells and a protracted inflammatory profile with a pro-catabolic balance hinder the proliferative response and delay re-epithelialization. Diabetes reduces the immune system’s abilities to orchestrate an appropriate antimicrobial response and offers ideal conditions for microbiota establishment and biofilm formation. Biofilm–microbial entrenchment hinders antimicrobial therapy effectiveness, amplifies the host's pre-existing immunodepression, arrests the wound’s proliferative phase, increases localized catabolism, prolongs pathogenic inflammation and perpetuates wound chronicity. In such circumstances the infected wound may act as a proinflammatory and pro-oxidant organ superimposed onto the host, which eventually intensifies peripheral insulin resistance and disrupts homeostasis. CONCLUSIONS The number of lower-limb amputations remains high worldwide despite continued research efforts on diabetic foot ulcers. Identifying and manipulating the molecular drivers underlying diabetic wound healing failure, and dysimmunity-driven susceptibility to infection will offer more effective therapeutic tools for the diabetic population.

ABSTRACT Introduction: Infection with SARS-CoV-2 induces a prothrombotic state in patients, by the combination of hyperinflammatory response and hypoxia. In Cuba, the drug called Jusvinza, based on an immunomodulatory peptide, is used for the treatment of patients with COVID-19, who present signs and symptoms of hyperinflammation. Objectives: To describe the clinical course and behavior of various biomarkers associated with the inflammation and coagulation, in a group of critically ill patients with COVID-19 treated with Jusvinza, compared to a group of patients who did not receive treatment with this peptide. Methods: 40 critically ill patients with COVID-19 were included. The patients were divided into 2 groups: 20 patients were treated with Jusvinza and 20 were not treated with this peptide (control group). Demographic characteristics, comorbidities, vital signs, respiratory parameters and inflammation and coagulation biomarkers were obtained from the medical records of each patient. Results: Treatment with Jusvinza induced a clinical improvement in the patients, associated with the decrease of several inflammation and coagulation biomarkers. Patients treated with Jusvinza had a significantly higher survival than patients not treated with this peptide. Conclusions: Jusvinza is able to control hyperinflammation and hypercoagulation in critical ill patients with COVID-19.

RESUMEN Introducción: La infección con el SARS-CoV-2 induce un estado protrombótico en los pacientes, atribuible a la combinación de la respuesta hiperinflamatoria y la hipoxia. En Cuba, se usa el fármaco Jusvinza, basado en un péptido inmunomodulador, para el tratamiento de los pacientes con la COVID-19, que presenten signos y síntomas de hiperinflamación. Objetivos: Describir la evolución clínica y las variaciones de biomarcadores asociados con la inflamación y la coagulación, en un grupo de pacientes críticos con la COVID-19, tratados con Jusvinza, en comparación con un grupo de pacientes que no recibieron tratamiento con este péptido. Métodos: Se incluyeron 40 pacientes críticos con la COVID-19; se dividieron en 2 grupos: 20 pacientes tratados con Jusvinza y 20 no fueron tratados con dicho péptido (grupo control). Las características demográficas, comorbilidades, signos vitales, parámetros respiratorios, biomarcadores de la inflamación y de la coagulación se obtuvieron a partir de las historias clínicas de cada paciente. Resultados: El tratamiento con Jusvinza indujo una mejoría clínica en los pacientes, asociada con la disminución de varios biomarcadores de la inflamación y la coagulación. La sobrevida de los pacientes tratados con Jusvinza fue significativamente superior a la sobrevida de los pacientes no tratados con este péptido. Conclusiones: Jusvinza es capaz de controlar la hiperinflamación y la hipercoagulación en pacientes críticos con la COVID-19.

ABSTRACT Introduction: CIGB-258 is an immunomodulatory peptide with anti-inflammatory properties. Objectives: To establish the therapeutic schedule with CIGB-258 peptide for COVID-19 critically ill patients. In addition, to define the criteria for use and schedule of this peptide for COVID-19 seriously ill patients. Methods: 9 critically ill patients and 3 seriously ill patients were included in this study. Clinical, radiological and laboratory evaluations were recorded according to the established protocol. Serum samples were obtained before and after treatment with CIGB-258, for the determination of the inflammation biomarkers. Results: The therapeutic protocol was established with the CIGB-258 peptide, which consists of intravenous administration of 1 mg of peptide every 12 hours for critically ill patients. The dose should be increased to 2 mg every 12 hours, for patients who do not show clinical and radiological improvement in 24 hours. After extubation, patients should receive 1 mg of CIGB-258 daily, for another three days. Seriously ill patients should receive 1 mg of CIGB-258 every 12 hours, until their clinical condition resolves. Conclusions: CIGB-258 showed an excellent safety profile. The established therapeutic protocol contributed to all critically ill patients recovering from respiratory distress and being extubated. Seriously ill patients improved considerably. The levels of the biomarkers associated with hyperinflammation and cytokines decreased significantly during treatment.

RESUMEN Introducción: El CIGB-258 es un péptido inmunomodulador con propiedades antiinflamatorias. Objetivos: Establecer la frecuencia de dosis y el tiempo de tratamiento con el péptido CIGB-258, para pacientes críticos con COVID-19. Además, definir los criterios de uso y el esquema terapéutico del péptido, para pacientes graves con COVID-19. Métodos: Se incluyeron 9 pacientes críticos y 3 pacientes graves. Las evaluaciones clínicas, radiológicas y de laboratorio se registraron de acuerdo al protocolo establecido. Se obtuvieron muestras de suero antes y después del tratamiento con la CIGB-258, para la determinación de los biomarcadores de la inflamación. Resultados: Se estableció el protocolo de actuación con el péptido CIGB-258, el cual consiste en la administración intravenosa de 1 mg del péptido cada 12 horas a los pacientes críticos. La dosis debe aumentarse a 2 mg cada 12 horas, para los pacientes que no muestren mejoría clínica y radiológica en 24 horas. Después de la extubación, los pacientes deben recibir 1 mg de CIGB-258 al día, durante otros tres días. Los pacientes graves deben recibir 1 mg de CIGB-258 cada 12 horas, hasta que resuelvan su condición clínica. Conclusiones: CIGB-258 mostró un buen perfil de seguridad. El protocolo de actuación establecido contribuyó a que todos los pacientes críticos se recuperaran de la dificultad respiratoria y fueran extubados. Los pacientes graves mejoraron considerablemente. Los niveles de los biomarcadores asociados con hiperinflamación y las citocinas disminuyeron significativamente durante el tratamiento.

Abstract Lower-extremity diabetic ulcers are responsible for 80% of annual worldwide nontraumatic amputations. Epidermal growth factor (EGF) reduction is one of the molecular pillars of diabetic ulcer chronicity, thus EGF administration may be considered a type of replacement therapy. Topical EGF administration to improve and speed wound healing began in 1989 on burn patients as part of an acute-healing therapy. Further clinical studies based on topically administering EGF to different chronic wounds resulted in disappointing outcomes. An analysis of the literature on unsuccessful clinical trials identified a lack of knowledge concerning: (I) molecular and cellular foundations of wound chronicity and (II) the pharmacodynamic requisites governing EGF interaction with its receptor to promote cell response. Yet, EGF intra- and perilesional infiltration were shown to circumvent the pharmacodynamic limitations of topical application. Since the first studies, the following decades of basic and clinical research on EGF therapy for problem wounds have shed light on potential uses of growth factors in regenerative medicine. EGF’s molecular and biochemical effects at both local and systemic levels are diverse: (1) downregulation of genes encoding inflammation mediators and increased expression of genes involved in cell proliferation, angiogenesis and matrix secretion; (2) EGF intervention positively impacts both mesenchymal and epithelial cells, reducing inflammation and stimulating the recruitment of precursor circulating cells that promote the formation of new blood vessels; (3) at the subcellular level, upregulation of the EGF receptor with subsequent intracellular trafficking, including mitochondrial allocation along with restored morphology of multiple organelles; and (4) local EGF infiltration resulting in a systemic, organismal repercussion, thus contributing to attenuation of circulating inflammatory and catabolic reactants, restored reduction-oxidation balance, and decreased toxic glycation products and soluble apoptogenic effectors. It is likely that EGF treatment may rearrange critical epigenetic drivers of diabetic metabolic memory.

This paper describes for the first time the generation of the K88ab-GnRH hybrid fimbriae, the fusion of N. meningitidis P64k protein (P64k-GnRH), and its evaluation as vaccine candidates to control fertility in mammals. Twenty hybrid male pigs were randomly distributed in four groups: placebos and immunized with K88ab-GnRH, P64k-GnRH and a GnRH analogue (GnRHm1), linked to a tetanus toxoid (TT) T-helper epitope (positive control), respectively. The pigs were immunized at 9-10 weeks of age, using a two-dose scheme, and were sacrificed sixteen weeks later. K88ab-GnRH, P64k-GnRH, and GnRHm1-TT induced higher, similar, and lower testosterone levels in the serum, compared to the placebo, respectively. In the K88ab-GnRH group, the pigs underwent a reduction in testicle size and weight (P 0.01), and the weight of epididymes compared to the placebo; none of them was able to ejaculate. In the P64k-GnRH group, the pigs had a reduction in testicle weight (P 0.05), and only one of them was able to ejaculate. The testicles of the pigs immunized with K88ab-GnRH and P64k-GnRH showed structural and functional damage; spermatogenesis was also affected. The accessory sexual glands of the P64k-GnRH group were normal, in contrast to K88ab-GnRH, where interstitial fibrosis was observed. The damage caused by K88ab-GnRH and P64k-GnRH in the target organs evaluated were in all cases lower than the affectations caused by the GnRHm1-TT peptide.

En este trabajo se describe, por primera vez, la obtención de la fimbria híbrida K88ab-GnRH, la fusión de la GnRH a la proteína P64k de N. meningitidis (P64k-GnRH) y su evaluación como candidatos vacunales para controlar la fertilidad en mamíferos. Veinte cerdos machos híbridos fueron asignados al azar a cuatro grupos: placebo e inmunizados con K88ab-GnRH, P64k-GnRH y con un péptido análogo de GnRH (GnRHm1), unido a un epítopo T cooperador del toxoide tetánico (TT) (control positivo), respectivamente. Los cerdos se inmunizaron con 9-10 semanas de edad, en un esquema de 2 dosis y se sacrificaron 16 semanas después. K88ab-GnRH, P64k-GnRH y GnRHm1-TT indujeron niveles de testosterona en suero, mayor, similar y menor, comparados con el placebo, respectivamente. En el grupo K88ab-GnRH los cerdos disminuyeron (P 0,01) el largo y peso de los testículos y el peso de los epidídimos, comparado con el placebo y ninguno llegó a eyacular. En el grupo P64k-GnRH los cerdos disminuyeron el peso de los testículos (P 0,05), y sólo uno llegó a eyacular. Los testículos de los cerdos inmunizados con K88ab-GnRH y P64k-GnRH mostraron daños estructurales, funcionales y afectación de la espermatogénesis. Las glándulas sexuales accesorias del grupo P64k-GnRH estaban normales a diferencia de K88ab-GnRH, en las que se observó fibrosis intersticial. Los daños provocados por K88ab-GnRH y P64k-GnRH en los órganos diana evaluados, resultaron inferiores en todos los casos, a las afectaciones que generó el péptido GnRHm1-TT.

In this study is described the effect of different doses of the gonadotropin releasing hormone (GnRH) mimetic peptide GnRHm1-TT, administered in three immunization schemes to define the most effective alternative combination for the treatment of prostate cancer. The design elements of the peptide immunogens are the GnRH-m1 linked to a T helper epitope of tetanus toxoid (TT) by chemical synthesis. Three doses of peptide GnRHm1-TT: 125, 300 and 750 µg were formulated in oil-based emulsions and tested in Copenhagen rats. Three immunization schemes (weekly, fortnightly and monthly) were used. As a result, the 750 µg dose generated a specific anti-GnRH antibody response in the fortnightly and monthly schemes, in contrast to 125 µg and 300 µg doses. The anti-GnRH seroconversion in the best responders corresponded with a decline, both in the testosterone levels down to castration and the size and weight of reproductive organs, an effect absent for the remaining doses of the three immunization schemes. The best variant corresponded to the 750 µg dose in a monthly regime. These findings demonstrated a marked immune-neutralization of the GnRH hormone for a subsequent immunological castration.

Se describe el efecto de diferentes dosis y esquemas de inmunización de un péptido mimético basado en la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH), con el objetivo de definir la variante más efectiva en el tratamiento del cáncer de próstata. Este péptido utilizado como inmunógeno, se sintetiza mediante la unión del decapéptido GnRHm1 con un epitopo del toxoide tetánico (GnRHm1-TT), por síntesis química. Fueron utilizadas tres dosis de tratamiento: 125, 300 and 750 µg, formuladas como emulsión oleosa y se evaluaron tres esquemas de tratamiento en ratas Copenhagen: semanal, quincenal y mensual. Como resultado, la dosis experimental de 750 µg generó una mayor respuesta humoral específica anti-GnRH al ser comparado con las restantes dosis, utilizando los esquemas de inmunización quincenal y mensual, y los mejores resultados en el último. Los niveles de seroconversión anti-GnRH de los mejores respondedores se correspondieron con la reducción de niveles de testosterona hasta niveles de castración y a la reducción máxima del peso y la talla de los organos reproductores. Estos hallazgos demostraron que hubo una inmuno-neutralización marcada de la hormona GnRH con la consiguiente castración inmunológica.

The historical tag of the epidermal growth factor (EGF) as carcinogenesis promoter has not been uniformly reproduced, since, in some experiments, malignant cells are bound to growth inhibition and apoptosis. The present study intends to obtain additional data on the interaction of EGF with cancer cells by analyzing its effect in vitro on the growth of cultured A431 cells, and in vivo on nude mice xenotransplanted with this cell line; identifying, in addition, the gene expression patterns for a selected group of genes related to EGF and cancer pathways in the solid tumor. EGF-treated animals showed significantly smaller tumor volumes than controls, suggesting cellular growth inhibition mediated by this factor. Similar results were obtained regarding the proliferation of cultured A431 when treated with 2.2, 33 and 165 nM of EGF. These results may imply a common mechanism for the EGF-mediated growth inhibition of A431 cells in both biological conditions (in vivo and in vitro). The action of EGF at nanomolar concentrations may trigger a transient recovery of the tumor suppressor ability of tumor cells through the reduction of the biological action of mutated TP53, cell cycle arrest due to a decrease in Cdk4 expression levels and the initiation of caspase through the activation of CASP9.

El carácter de promotor de la carcinogénesis atribuido al factor de crecimiento epidérmico (FCE) no se ha reproducido uniformemente, pues las células malignas tratadas con esta molécula en algunos experimentos han mostrado inhibición del crecimiento y apoptosis. Se ofrecen datos adicionales de la interacción del FCE con células cancerosas, mediante el análisis de su efecto en el crecimiento de la línea celular A431 in vitro y en ratones atímicos xenotrasplantados con esta línea. Se estudiaron además los patrones de expresión de un grupo de genes relacionados con el FCE y el cáncer en los tumores sólidos de A431. Este estudio reveló que los animales tratados con FCE humano recombinante (FCEhr) desarrollaron volúmenes tumorales inferiores que los animales controles. Ello sugiere una inhibición del crecimiento celular mediada por el FCE. Resultados similares se obtuvieron in vitro al tratar las células A431 con FCEhr a 2.2, 33 y 165 nM. A estas concentraciones, el FCE recobra la propiedad supresora tumoral en las células cancerosas, posiblemente por la reducción de la acción biológica de la TP53 mutada, la inhibición del ciclo celular al disminuir la expresión del gen cdk4, y la iniciación de la vía de las caspasas mediante la activación de la expresión del gen CASP9. Tales hallazgos sugieren mecanismos comunes de inhibición del crecimiento de las células A431 in vitro e in vivo, mediados por el FCE.

Tissue fibrosis is a leading cause of morbidity and mortality. Current treatments for conditions such as hepatic fibrosis have been unsuccessful. The growth hormone relasing peptide 6 (GHRP6) is endowed with cardioprotective actions but its antifibrotic effect had not been anticipated. We examined the GHRP6 ability to prevent and revert liver cirrhosis after induction in Wistar rats by a subcutaneous administration of CCl4. GHRP6 effects were examined after concomitant and delayed administration to toxic respectively. The percentages of hepatic fat, fibrosis, nodularity and septae thickness were histologically and morphometrically determined. Ascitis and portal dilation were judged by ultrasound and serum biochemical profile and oxidative stress parameters determined. Mechanistic involvement of selective gene/proteins was assessed by RT-PCR and immunohistochemistry. Microarrays showed gene expression profiles of GHRP6-treated liver samples on CapitalBio Rat Genome Oligo Array. GHRP6 concomitant intervention prevented in more than 85% parenchymal fibrotic induration (p < 0.0001) and therapeutic administration for only 15 days allowed for 37% fibrotic clearance (p = 0.0004) with more than 30% reduction of septae thickness (p = 0.0011). The 60 days GHRP6 administration scheme produced a 75% reduction of the fibrotic area with more than 60% reduction of nodularity. GHRP6 reduced oxidative damage enhancing the activity of antioxidant enzymes. Vimentin and alpha smooth muscle actin immunodetection profile indicated GHRP6 reduced the number of activated stellate cells. GHRP6 administration reduced fibrogenic factors as TGF-ß and CTGF on Kupffer cells. Differentially expressed genes in the microarray experiment indicated GHRP6 modulate the redox balance and parenchymal cells response to injury. These evidences suggest GHRP6 may control the liver's fibroplastic response.

La fibrosis es causa fundamental de morbilidad y mortalidad. Los tratamientos actuales han fracasado. El péptido liberador de la hormona de crecimiento-6 (GHRP6) ejerce efectos cardioprotectores, pero no se ha descrito su acción antifibrótica. Se examinó la propiedad del GHRP6 para prevenir y revertir la cirrosis hepática, luego de su inducción en ratas mediante la administración de CCl4. Se evaluó el porcentaje de grasa hepática, fibrosis, nodularidad y grosor septal mediante estudios histomorfométricos y la ascitis o dilatación portal por ultrasonido. Se determinó el perfil bioquímico y los parámetros de estrés oxidativo en suero, así como la participación de genes y proteínas, mediante reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa e inmunohistoquímica. Se utilizó un microarreglo de oligonucleótidos del genoma de rata para estudiar el perfil de expresión de los genes inducidos por el GHRP6. La intervención concomitante con GHRP6 previno la induración fibrótica en más del 85% (p < 0.0001). La administración terapéutica durante 15 días permitió la remoción fibrótica del 37% (p = 0.0004), la reducción del grosor septal superó el 30% (p = 0.0011). La administración durante 60 días redujo las áreas fibróticas en 75%, y la reducción de la nodularidad fue de más del 60%. El GHRP6 redujo el daño oxidativo porque aumentó la actividad de las enzimas antioxidantes y las células estrelladas activadas positivas a vimentina y actina alfa de músculo liso. También redujo la expresión de factores fibrogénicos sobre las células Kupffer. El perfil de expresión de genes indicó que el GHRP6 modula el balance redox y la respuesta al daño tisular en las células parenquimales. Estas evidencias sugieren que el GHRP6 pudiera controlar la respuesta fibroplásica del hígado.