RESUMO: Neosporose é uma doença parasitária causada pelo protozoário Neospora caninum e resulta em grandes perdas econômicas para a bovinocultura, o que se deve a abortos e outras desordens reprodutivas. Gerbils (Meriones unguiculatus) são comumente utilizados como modelos experimentais para neosporose, devido a sua alta susceptibilidade à infecção por N. caninum, seja pela ingestão de oocistos ou pela inoculação parenteral de taquizoítos/bradizoítos. Porém, o risco de transmissão pela ingestão de taquizoítos não está totalmente elucidado. Neste estudo, foram avaliadas a infecção de gerbils neonatos por taquizoítos de N. caninum (cepa NC-1) inoculados por via oral e a distribuição do parasita nos tecidos desses gerbils, através da detecção de DNA do protozoário. Dezessete gerbils neonatos, com idade de 4-5 dias, foram inoculados com 4x105 taquizoítos por via oral e um gerbil foi mantido como controle não-infectado. DNA de N. caninum foi detectado em 100% dos gerbils inoculados, demonstrando a eficácia da via oral como potencial rota de infecção de neonatos por taquizoítos de N. caninum. DNA de N. caninum foi encontrado, em diferentes frequências, em todos os órgãos avaliados (coração, pulmões, rins, fígado, baço e cérebro). Esses resultados demonstraram infecção sistêmica dos gerbils neonatos após a inoculação oral de taquizoítos.

ABSTRACT: Neosporosis is a parasitic disease caused by the protozoan Neospora caninum which results in major economic losses for cattle breeding due to abortion and other reproductive disorders. Gerbils (Meriones unguiculatus) are commonly used as experimental models for neosporosis due to their high susceptibility to N. caninum infection, both by oocysts ingestion as by tachyzoites/bradyzoites parenteral inoculation. However, the risk of transmission by tachyzoites ingestion is not fully elucidated. In this study, infection of neonate gerbils by N. caninum (NC-1 strain) tachyzoites inoculated by the oral route and the parasite distribution in gerbils' tissues were evaluated by protozoan DNA detection. Seventeen neonate gerbils, aged 4-5 days, were inoculated with 4x105 tachyzoites by the oral route and one gerbil was kept as uninfected control. N. caninum DNA was detected in 100% of the inoculated gerbils, showing that the oral route is effective as a potential route of infection of neonates by N. caninum tachyzoites. N. caninum DNA was reported in all organs evaluated (heart, lungs, kidneys, liver, spleen and brain), with different frequencies. These results showed systemically distributed infection of neonate gerbils after oral inoculation of tachyzoites.

RESUMO: O diagnóstico de gestação é uma ferramenta importante no manejo da propriedade. A ultrassonografia é a principal técnica utilizada no diagnóstico de prenhez em ovelhas. Como alternativa, o radiomunoensaio (RIA) permite acurácia e a detecção precoce de proteínas associadas à prenhez (PAGs) no sangue. No entanto, as técnicas radioativas, como o RIA, têm sido cada vez mais desaconselháveis, devido ao risco ambiental. A homologia entre PAGs de ovinos e bovinos é alta, e os kits de ELISA utilizados para a detecção de PAGs em bovinos são mais seguros do que RIA. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade de detecção de PAGs no soro ovino para diagnóstico de gestação em soro ovino, utilizando um kit de ELISA produzido para bovinos. A sensibilidade e a especificidade do kit de ELISA foram de 93,5% e 98,9%, respectivamente, enquanto que os valores preditivos positivo e negativo foram de 99,0% e 93,1%, respectivamente, em comparação com a ultrassonografia (utilizada como referência). As PAGs atingiram concentrações consistentemente detectáveis no soro ovino em torno de 33 dias após o acasalamento. A acurácia do teste de ELISA foi de 96,1% a partir de 33 dias de gestação até o parto. As PAGs ainda eram detectáveis sete dias pós-parto. No entanto, a partir de 21 dias após o parto, as PAGs da prenhez anterior já não eram detectadas no soro. Em conclusão, o kit de ELISA bovino pode detectar a prenhez com precisão em ovelhas a partir de 33 dias após o acasalamento, e os níveis de PAGs da gestação anterior não são detectados a partir de 21 dias pós-parto. O teste de ELISA avaliado é uma ferramenta confiável para o diagnóstico de gestação em ovelhas em estágios aleatórios e como exame complementar no início da gestação.

ABSTRACT: Pregnancy diagnosis is an important tool for farm management. Ultrasonography is the main technique used for pregnancy diagnosis in ewes. As an alternative, radioimmunoassay (RIA) allows accurate and early detection of pregnancy-associated glycoproteins (PAGs) in sheep blood. However, radioactive-based techniques, as RIA, have been increasingly inadvisable due to environmental risk. Homology between ovine and bovine PAGs is high, and ELISA kits used for PAGs detection in cattle are safer than RIA. Thus, this study aimed to evaluate the feasibility of PAGs detection for pregnancy diagnosis in sheep serum samples using an ELISA kit produced for cattle. The sensitivity and specificity of the ELISA kit were 93.5% and 98.9%, respectively, whereas positive and negative predictive values were 99.0% and 93.1%, respectively, in comparison to ultrasonography diagnostic (control). PAGs reached consistently detectable concentrations in ovine serum around 33 days after mating. Accuracy of the ELISA test was 96.1% from 33 days of pregnancy until lambing. After parturition, PAGs were still detectable seven days post-lambing. However, from 21 days post-parturition, PAGs from the previous pregnancy were no longer detected in serum samples. In conclusion, the bovine ELISA kit can accurately detect pregnancy in sheep 33 days following mating, while PAGs levels from the previous gestation are no longer detected from 21 days post-partum. The evaluated ELISA test is a reliable tool for pregnancy diagnosis in sheep at random stages and as a complementary exam at early gestation.

A terapia celular traz perspectivas encorajadoras à medicina humana e veterinária. Experimentalmente, a manipulação genética permite a marcação e a localização de células alogênicas. Porém, isso torna seu genótipo/fenótipo diferente daquelas usadas clinicamente, sem marcação. Alternativamente, a presença do cromossomo Y possibilita detectar células de doadores machos no organismo de fêmeas. Todavia, a concentração de células transplantadas pode ser mínima em certos tecidos, pela distribuição sistêmica. Neste estudo, foi desenvolvida uma nested-PCR multiplex, visando a aumentar a sensibilidade do diagnóstico de presença/ausência de células derivadas do tecido adiposo (CDTA-Y) e derivadas da fração mononuclear da medula óssea (CFMO-Y) de camundongos machos, em amostras de sangue e de pulmões de camundongos fêmeas, após transplante endovenoso. Quatro fêmeas receberam placebo; quatro fêmeas receberam CDTA-Y de dois machos; e quatro fêmeas receberam CFMO-Y de dois machos. A primeira fase da PCR teve dois pares de primers (multiplex): um para amplificação de fragmento do cromossomo Y (SRYout; 300pb); outro para amplificação de fragmento do cromossomo X (gene DXNds3). Na segunda fase da PCR, foi usado um par de primers para amplificação de fragmento de 110pb (SRYinn) interno ao produto amplificado pelo SRYout. O controle interno da reação (gene DXNds3) foi detectado em todas as amostras de DNA testadas, enquanto que o fragmento externo do gene SRY (300pb) foi detectado apenas nas amostras puras de DNA de CDTA-Y e CFMO-Y. O fragmento interno do gene SRY (110pb) foi detectado no sangue e nos pulmões de 100% das receptoras de CDTA-Y e CFMO-Y. A técnica de nested-PCR aumentou a sensibilidade e a segurança do diagnóstico molecular de presença ou ausência de células de camundongos machos em fluidos e tecidos de receptoras fêmeas após transplante endovenoso.

Cell therapy has shown encouraging perspectives for human and veterinary medicine. Experimentally, genetic manipulation allows to mark and locate allogeneic cells. However, this makes their genotype/phenotype different from non-marked cells used clinically. Alternatively, the presence of the Y-chromosome enables male donor cells detection in female organisms. However, the concentration of engrafted cells may be minimal in tissues, due to systemic distribution. In this study, a nested-PCR multiplex test was developed, aiming to increase the sensitivity of the presence/absence diagnosis of male mice adipose-derived (ADSC-Y) and bone marrow mononuclear (BMNC-Y) cells in samples of blood and lungs from females, after endovenous transplantation. Four females received placebos; four females received ADSC-Y from two males; and four females received BMNC-Y from two males. The PCR first-step included two primer sets (multiplex): one for amplification of a Y-chromosome fragment (SRYout; 300bp); the other for amplification of an X-chromosome (DXNds3 gene) fragment. In the PCR second-step, one primer set (SRYinn) was used for amplification of a 110bp fragment, restrained in the SRYout amplification product. The PCR internal control (DXNds3 gene) was detected in all DNA samples, whereas the SRY gene external fragment (300bp) was detected exclusively in ADSC-Y and BMNC-Y pure DNA samples. The SRY gene internal fragment (110bp) was detected in 100% of the blood and lung samples from the ADSC-Y and BMNC-Y female recipients. The nested-PCR technique increased sensitivity and reliability for molecular diagnostic of presence or absence of male mice cells in body fluids and tissues of female recipients after endovenous transplantation.

O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito da Ang-(1-7) e de seu receptor (MAS) na regulação da ovulação. No experimento I, utilizando um modelo in vitro de cultivo de células foliculares, foi avaliado o efeito do tratamento com Ang-(1-7) ou do bloqueio do receptor MAS através do inibidor d-Ala7-Ang-(1-7) (A-779) na expressão de RNAm para epirregulina (Ereg; um marcador inicial do processo de ovulação) em células da granulosa. No experimento II, foi utilizado um modelo in vivo de injeção intrafolicular no qual vinte vacas tiveram o ciclo estral sincronizado e, quando os folículos atingiram um diâmetro mínimo de 12mm, foi realizada a injeção intrafolicular de A-779 ou solução salina 0,9%. No momento da injeção intrafolicular, foi realizada uma aplicação IM de análogo de GnRH. A suplementação com Ang-(1-7) ou o bloqueio de seu receptor MAS em sistema de cultivo de células da granulosa não alteraram o padrão de expressão de RNAm para Ereg. A aplicação intrafolicular de A-779 (10-5M) não bloqueou a ovulação quando realizada antes do início do pico esperado de LH (100% das vacas ovularam nos grupos A-779 e controle), sugerindo que a Ang-(1-7) não possui papel relevante no início da cascata ovulatória em bovinos.

This study aimed to evaluate the effect of Ang-(1-7) and its receptor (MAS) in the regulation of the ovulatory cascade. In the experiment I, the effect of Ang-(1-7) or d-Ala7-Ang-(1-7) (A-779; Ang-(1-7) antagonist) on the epirregulin (Ereg; initial marker of ovulation process) mRNA expression in granulosa cells was assessed using an in vitro model of follicular cell culture. In experiment II, it was used an in vivo intrafollicular injection model, in which twenty cows had their follicular waves synchronized and the ovarian follicular size was daily monitored by ultrasound. Follicles that reached a minimum diameter of 12mm were injected with A-779 or saline 0.9%. At the time of the intrafollicular injection, cows were challenged with an intramuscular application of GnRH analogue. Ang-(1-7) or the blockade of its receptor MAS had no effect in Ereg mRNA expression in granulosa cells cultured in vitro. Likewise, the intrafollicular injection of MAS receptor inhibitor (10-5M of A-779) did not block ovulation before the expected time of LH peak (100% of the cows ovulated after GnRH challenge in the treatment and control groups), suggesting that Ang-(1-7) has no role in the early ovulatory cascade in cattle.

Neospora caninum é um agente envolvido em perdas reprodutivas em bovinos. O diagnóstico dessa infecção é de grande importância, principalmente para programas de erradicação e controle. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram: (1) adaptar uma reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-N. caninum no leite, a partir de uma RIFI padronizada para a detecção desses anticorpos no soro sanguíneo, (2) analisar a concordância entre a detecção desses anticorpos pela RIFI no soro sanguíneo e no leite de fêmeas bovinas, (3) avaliar a viabilidade da RIFI para a detecção de anticorpos anti-N. caninum em amostras coletivas de leite. Foram testadas amostras de soro sanguíneo e de leite, coletadas de 112 vacas em lactação, e seis amostras coletivas de leite, correspondentes a cada uma das propriedades avaliadas. Encontrou-se 78% de concordância entre a detecção de anticorpos no soro sanguíneo (com título de anticorpos >50) e no leite, com sensibilidade de 90% e especificidade de 100% para a RIFI nas amostras de leite. Entretanto, para as vacas com títulos de anticorpos >100 no soro sanguíneo, tanto a concordância como os valores de sensibilidade e especificidade da RIFI no leite foram de 100%. Todas as amostras coletivas de leite foram positivas na RIFI. Isso demonstra que, conforme a propriedade pode-se eleger com segurança qual a melhor abordagem diagnóstica a ser adotada em relação à coleta de soro sanguíneo ou de leite para a pesquisa de N. caninum pela RIFI. Além disso, a determinação da presença de anticorpos em amostras coletivas de leite pode servir para diagnóstico e triagem de rebanhos com animais infectados.

Neospora caninum is a major causative agent of reproductive losses in cattle and the diagnosis of neosporosis is essential for control and eradication programs. Therefore, this study aimed to: (1) standardize an indirect immunofluorescence assay (IFAT) for detection of antibodies against N. caninum in bovine milk, starting from a standard IFAT used for blood serum samples; (2) check the agreement between antibodies detection by IFAT in blood serum and in milk of cows; (3) evaluate the suitability of IFAT for detection of anti-N. caninum antibodies in bulk milk samples. We tested samples of blood serum and milk collected from 112 lactating cows for detection of antibodies against N. caninum, furthermore, six bulk milk samples, each one corresponding to each dairy farm studied. Agreement between the detection of antibodies in blood serum (with antibody titer >50) and in milk, with 90% of sensitivity and 100% of specificity for the IFAT in milk samples were found in 78% of the animals. However, for cows with antibody titers >100 in blood serum, the agreement, the sensitivity and the specificity of the IFAT in milk were of 100%. It is shown that, considering the dairy farm conditions. The most appropriate diagnostic approach to be adopted regarding the collection of blood serum or milk can elect for search anti-N. caninum antibodies by IFAT. Moreover, detection of antibodies in bulk milk samples can serve for diagnosis and screening of herds with infected animals.

O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de anticorpos contra Neospora spp. e o herpesvírus equino (EHV) em soros de cavalos de tração de Santa Maria, RS, Brasil. Os soros sanguineos provenientes de 91 animais do projeto de extensão da Universidade Federal de Santa Maria "Programa de Ação Social Amigos do Carroceiro" (PASAC) foram colhidos no período de março de 2006 a maio de 2008 e submetidos ao teste de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos anti-Neospora spp. e à técnica de soro neutralização para anticorpos anti-EHV. Constatou-se que 15,4% (14/91) das amostras foram reagentes para o Neospora spp. e não se verificou a presença da infecção pelo herpesvírus equino. Sugere-se a circulação do coccídeo na população equina estudada. Salienta-se a necessidade de estudos adicionais sobre o potencial risco zoonótico e a importância sanitária desse protozoário nos cavalos de tração.

This study aimed to investigate the prevalence of antibodies against Neospora spp and equine herpesvirus (EHV) among carter horses in Santa Maria, RS, Brazil. Serum samples from 91 horses, involved in the extension project "Programa de Ação Social Amigo do Carroceiro" at Universidade Federal de Santa Maria, were collected from March of 2006 to May of 2008. Immunofluorescence assay was used to detect Neospora spp. and virus neutralization assay to EHV. This research showed 15.4% (14/91) samples were positive to Neospora spp. and no antibodies against EHV were detected. These results suggest the presence of Neospora spp. in carter horses of Santa Maria. Additional studies are needed to determine the zoonotic potential risk and the sanitary importance this protozoan in the population analyzed.

Este estudo foi realizado com o objetivo de encontrarem-se tratamentos anti-helmínticos eficazes sobre uma população de nematódeos gastrintestinais de ovinos, a qual desenvolveu resistência a todas as classes de drogas com ação nematicida disponíveis para ruminantes no mercado brasileiro. Valendo-se da eficácia calculada de tratamentos convencionais a partir de um estudo prévio e, assim, conhecendo-se sua ação sobre diferentes gêneros de nematódeos presentes no rebanho, selecionaram-se drogas as quais, utilizadas em combinações ou em altas doses, pudessem aumentar significativamente a eficácia dos tratamentos. Utilizou-se o percentual de redução da contagem de ovos nas fezes e as culturas de larvas para avaliar a ação anti-helmíntica dos tratamentos testados. A combinação de moxidectina 1% + disofenol 20% apresentou 99% de eficácia, e as combinações de moxidectina 1% + triclorfon 10% e de moxidectina 1% + fosfato de levamisol 22,3% superaram os 90% de eficácia. A utilização de combinações de princípios ativos, com diferentes mecanismos de ação, pode promover a recuperação da eficácia dos tratamentos anti-helmínticos sobre populações multirresistentes de nematódeos gastrintestinais de ovinos.

This study was conducted to find effective anthelmintic treatments on a multi-resistant population of gastrointestinal nematodes of sheep, which was found resisting to all the classes of nematicidal drugs available in the Brazilian market. We took as a starting point the data obtained in a previous study performed in the targeted flock, in which were tested conventional treatments. Thus, using the calculated efficacy of the drugs (tested previously) for the genera of nematodes found in the flock, we selected drugs which, combined or used in higher doses, could improve the efficacy of the treatments. We evaluated the anthelmintic action of each treatment using the percentage of reduction of eggs in the feces, along with larvae cultures. A combination of moxidectin 1% + disophenol 20% showed 99% of efficacy, and combinations of moxidectin 1% + trichlorphon 10% and moxidectin 1% + levamisole phosphate 22.3% showed efficacy over 90%. Combinations of drugs, with different mechanisms of action, can provide effective anthelmintic treatments on multidrug-resistant populations of gastrointestinal nematodes of sheep.

As lactonas macrocíclicas (LMs) (avermectinas e milbemicinas) são endectocidas amplamente utilizados em animais e em algumas parasitoses humanas. Em bovinos, a resistência parasitária às LMs é emergente, e o surgimento de formulações que diferem nas suas propriedades farmacológicas tornou complexa a escolha da droga mais indicada a cada caso. Com o objetivo de avaliar possíveis alternativas para recuperar a eficácia de LMs sobre cepas resistentes de nematódeos gastrintestinais, testaram-se, neste estudo, dez diferentes tratamentos a base de LMs sobre uma população de nematódeos gastrintestinais de bovinos a qual, sabidamente, sofrera pressão de seleção por avermectinas a 1%. Adicionalmente, testou-se um benzimidazol. A eficácia das drogas foi calculada com base na redução de ovos por grama de fezes (OPG) dos bovinos. A resistência de cada gênero foi avaliada por meio de identificação de larvas, obtidas de cultivos nas fezes, pré- e pós-tratamentos. Não se obteve a eficácia desejada com o emprego de avermectinas de longa ação - com alta concentração e em associação - ou mesmo, com a aplicação de superdoses. Os gêneros Cooperia spp., Haemonchus spp. e Trichostrongylus spp. foram resistentes às avermectinas, e Ostertagia spp. à ivermectina. Observou-se que, uma vez estabelecida a resistência parasitária a LMs a 1%, a aplicação de fármacos, deste mesmo grupo químico, ainda que em formulações mais concentradas, asso-ciações ou superdoses, pode não resultar na eficácia esperada.

The macrocyclic lactones (MLs) (avermectins and milbemycins) are endectocides broadly used in livestock and in some parasitic diseases of humans. In cattle, parasite resistance to MLs is emerging, and the appearance of formulations that differ in their pharmacological properties become complex the choice of the most appropriate drug to each case. In order to evaluate possible alternatives to restore the effectiveness of MLs on resistant strains of gastrointestinal nematodes, were tested, in this study, ten different treatments based on the MLs on a population of gastrointestinal nematodes of cattle which, known, was under pressure of selection by 1% avermectins. Additionally, was tested a benzimidazole. The efficacy of the drugs was calculated with basis on the reduction of eggs per gram of feces (EPG) of cattle. The resistance of each genus was evaluated by identification of the larvae, obtained from culture in the feces, pre- and post-treatments. The desired efficacy was not obtained using long action avermectins - with high concentration and in association - even with the application of high doses. The genera Cooperia spp., Haemonchus spp. and Trichostrongylus spp. were resistant to avermectins, and Ostertagia spp. to ivermectin. It was observed that, once established parasite resistance to the 1% MLs, the application of drugs, of this same chemical group, even in formulations of high concentration, association or in high doses, may not result in the expected efficacy.

O controle anti-helmíntico tem vital importância na produtividade de bovinos de leite e, para sua melhor aplicação, devem ser considerados fatores como a sustentabilidade, o custo/benefício e as práticas de manejo utilizadas em cada rebanho. Este estudo foi realizado com o objetivo de estabelecer critérios para o tratamento anti-helmíntico de bovinos de leite de categorias distintas com base em contagens de ovos por grama de fezes (OPG). Para isso, analisaram-se amostras fecais de 100 bovinos de leite, em diferentes faixas etárias, de pequenas propriedades da região Centro do Rio Grande do Sul, Brasil. Considerando-se os resultados obtidos neste estudo, são indicados os tratamentos seletivos, com base na contagem de OPG, para as fêmeas jovens (até os três meses de vida) e para as vacas lactantes, e o controle estratégico para os bezerros (dos quatro aos 24 meses).

The control of helminth infections has an essential role in the productivity of dairy cattle. Sustainability, cost/benefit and feasibility of the chosen control measures, must be taking into account for each production system. This study aimed to establish criteria for anthelmintic treatment of dairy cattle, in different categories, based on eggs per gram of feces (EPG) counting. For this purpose, it were analyzed fecal samples from 100 dairy cattle, in different age groups, from small farms of the Central region of Rio Grande do Sul state, Brazil. Based on these results, the selective treatments, based on EPG, are indicated to female calves (until three months old) and lactating cows, and the strategic control to male and female calves, from four to 24 months old.

Infecções por nematódeos gastrintestinais causam prejuízos significativos à produção de ruminantes. A intensificação do processo produtivo tende a agravar os efeitos das parasitoses. O fácil acesso do produtor a anti-helmínticos, aliado à falta de orientação profissional adequada, tem levado ao uso indiscriminado destes fármacos e, conseqüentemente, à resistência parasitária, reduzindo a eficácia do tratamento. Soma-se a isso, a tendência pela valorização dos produtos orgânicos, originários de sistemas de produção em que o uso dos quimioterápicos é restrito ou proibido. Este contexto aumenta a importância do controle alternativo baseado em: manejo do rebanho e das pastagens, controle biológico dos parasitas, estímulo à resposta imunológica do hospedeiro e fitoterapia. Há alguns métodos promissores para utilização futura e outros viáveis para aplicação imediata, os quais, combinados com os anti-helmínticos convencionais, podem garantir sucesso e sustentabilidade no controle das nematodíases.

Infections by gastrointestinal nematodes cause significant losses in the production of ruminants. Intensification of production process tends to enhance the effects of parasitosis. Easy access for producers to anthelmintics, in addition to poor professional assistance, has led to indiscriminate use of these chemicals and, consequently, to parasite resistance, reducing the effectiveness of treatment. Compounding the issue there is a trend towards valorization of organic products, originating from production systems where the use of chemotherapics is restricted or prohibited. This context emphasizes the importance of alternative approaches based on: management of livestock and pastures, biological control of parasites, stimulation of immunological response of host and phytotherapy. There are some promising methods by future utilization and others viable by immediate application, which, combined with conventional anthelmintics, can guarantee success and sustainability in controlling the nematodiasis.