A separação imunomagnética (IMS) é uma técnica que tem sido associada a diferentes métodos de detecção de Salmonella em alimentos para aumentar a sensibilidade e a especificidade e diminuir o tempo de análise. Neste trabalho é comunicada a obtenção de microesferas magnéticas sensibilizadas com anticorpos anti-Salmonella e seu uso em associação com a metodologia de cultivo convencional para desenvolver um método de detecção de salmonelas em cortes de frango (IMS-plaqueamento). Inicialmente, microesferas cobertas com proteína A foram sensibilizadas com anticorpos policlonais contra lipopolissacarídeo e flagelo de salmonelas e usadas na padronização de um procedimento que captura Salmonella Enteritidis em cultivo puro e faz posterior detecção em ágar seletivo. A seguir, amostras de carne de frango experimentalmente contaminadas com S. Enteritidis foram analisadas imediatamente após a contaminação e após 24h de refrigeração utilizando três protocolos de enriquecimento. O limite de detecção foi cerca de 2x10 UFC/mL. O protocolo que incluiu enriquecimento não-seletivo por 6-8h, enriquecimento seletivo por 16-18h e pós-enriquecimento por 4h foi o que proporcionou melhor resultado na detecção de S. Enteritidis em carne de frango experimentalmente contaminada. Este protocolo foi comparado à metodologia convencional em estudo de detecção de salmonelas em cortes de frango naturalmente contaminados e obteve 100% de sensibilidade e 94% de especificidade. O método desenvolvido foi capaz de diminuir em pelo menos um dia o tempo de detecção de salmonelas em cortes de frango pela metodologia convencional.

The immunomagnetic separation (IMS) is a technique that has been used to increase sensitivity and specificity and to decrease the time required for detection of Salmonella in foods through different methodologies. In this work we report on the development of a method for detection of Salmonella in chicken cuts using in house antibody-sensitized microspheres associated to conventional plating in selective agar (IMS-plating). First, protein A-coated microspheres were sensitized with polyclonal antibodies against lipopolysacharide and flagella from salmonellae and used to standardize a procedure for capturing Salmonella Enteritidis from pure cultures and detection in selective agar. Subsequently, samples of chicken meat experimentally contaminated with S. Enteritidis were analyzed immediately after contamination and after 24h of refrigeration using three enrichment protocols. The detection limit of the IMS-plating procedure after standardization with pure culture was about 2x10 CFU/mL. The protocol using non-selective enrichment for 6-8h, selective enrichment for 16-18h and a post-enrichment for 4h gave the best results of S. Enteritidis detection by IMS-plating in experimentally contaminated meat. IMS-plating using this protocol was compared to the standard culture method for salmonellae detection in naturally contaminated chicken cuts and yielded 100% sensitivity and 94% specificity. The method developed using in house prepared magnetic microespheres for IMS and plating in selective agar was able to diminish by at least one day the time required for detection of Salmonella in chicken products by the conventional culture method.

A produção de verotoxinas foi investigada em 1.127 isolamentos de Escherichia coli feitos a partir de 243 bovinos de leite, de água de consumo humano e animal e de amostras de leite de 60 propriedades da bacia leiteira de Pelotas, no período de dezembro de 1999 a dezembro de 2000, com o objetivo de determinar a prevalência de E. coli verotoxigênicas (VTEC) nas propriedades e no rebanho, de detectar a presença de sorotipos ligados a infecções humanas e de identificar, nas propriedades e na região de Pelotas, potenciais fatores de risco de infecção para os animais. A detecção das toxinas em sobrenadante de culturas de E. coli isoladas foi realizada através do ensaio de citotoxicidade em células Vero. VTEC foi isolada em 95% (57/60) das propriedades estudadas, em 49% (119/243) dos animais testados, em 5% (3/60) das amostras de água de consumo humano, em 8,35% (5/60) das amostras de água de consumo animal e em 5% (3/60) das amostras de leite. A prevalência de bovinos infectados em cada propriedade variou de 0 a 100%. Em 2,9% (7/243) dos animais testados, foram isoladas VTEC pertencentes aos sorogrupos O157, O91 e O112, que incluem cepas responsáveis por casos de colite hemorrágica e síndrome urêmica hemolítica em humanos. Fatores de risco de contaminação, como a precipitação pluviométrica, a temperatura, o tamanho da propriedade e a concentração de animais, apresentaram evidências de influenciarem a prevalência de VTEC nos animais. Estes resultados sugerem que o grupo VTEC está amplamente distribuído na bacia leiteira de Pelotas e inclui organismos pertencentes a sorogrupos patogênicos para humanos.

The production of verotoxin was investigated in 1127 Escherichia coli isolated from 243 dairy cattle, water for human and animal consumption, and milk samples from 60 dairy farms from Pelotas-Brazil, from December of 1999 to December of 2000, to determine the prevalence of verotoxigenic E. coli (VTEC) in farms, to detect the presence of serotypes involved in human infections and to identify potential risk factors for animal infection. Vero cell assay was used to detect toxins in culture supernatants from E. coli isolated. VTEC was isolated in 95% (57/60) from farms and in 49% (119/243) from cattle, 5% (3/60) from water of human consumption, in 8.35% (5/60) from water animal consumption and 5% (3/60) from milk samples. The prevalence of cattle infected for each farm ranged from 0 to 100%. VTEC belonging to serogroups O157, O91 and O112, which include strains responsible for cases of hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome in humans, were isolated from 7 (2.9%) out of 243 cattle. Risk factors for contamination, such as amount of rain, farm size and cattle number, influenced cattle prevalence rate. These results suggest that VTEC is widely distributed among dairy cattle in the region surveyed and includes organisms from serogroups pathogenic for humans.

Foi investigado um surto de intoxicação alimentar ocorrido em um restaurante institucional. Cinqüenta e seis pessoas, de um total de 88, foram acometidas de vômitos, diarréia, dores abdominais, prostração, febre e cefaléia após ingerirem uma refeição composta de sanduíche de galinha, refresco de laranja e pudim de leite. Os sintomas apareceram entre uma hora e meia e 12 horas após a ingestão da refeição e duraram 24 a 36 horas. As taxas de ataque específico foram de 64% para o sanduíche de galinha, de 61% para o refresco de laranja e de 60% para o pudim. A contagem de Staphylococcus aureus secretores de enterotoxina A no sanduíche de galinha foi de 2 X 10(8)UFC.g-1. Estes resultados, juntamente com os obtidos nos questionários aplicados às pessoas que ficaram doentes, forneceram provas circunstanciais que permitiram concluir que ocorreu uma intoxicação alimentar provocada pelo sanduíche de galinha contaminado com enterotoxina A de Staphylococcus aureus.

An outbreak of foodbome intoxication in an institutional restaurant was investigated. Fifty-six people, out of 88, had vomiting, diarrhea, abdominal pain, prostration, fever and headache after eating a meal that included chicken sandwich, orange drink and milk pudding. Symptoms appeared between one and a halfhour and 12 hours after eating the meal and lasted from 24 to 36 hours. Specifíc attack rates were 64% for chicken sandwich, 61% for orange drink and 60% for milk pudding. Enterotoxin A secreting Staphylococcus aureus count in chicken Sandwich was 2 X 10(8)CFU.g-1. Results of the questionnaire appleied to patrons, and results of bacteriological analysis of food items, provided circunstantial evidence to conclude that an outbreak of foodbome intoxication caused by the chicken sandwich contaminated with Staphylococcus aureus enterotoxin A has ocurred.

O comércio de alimentos prontos para o consumo por vendedores ambulantes pode constituir um alto risco para a saúde dos consumidores, visto que as pessoas envolvidas nesta atividade geralmente não tem preparo para a manipulação correta de alimentos. Neste trabalho foram investigadas as condições de preparo e a qualidade higiênico-sanitária de lanches comercializados por vendedores ambulantes em Pelotas. Foram colhidas de 60 estabelecimentos, uma amostra de água, uma da superfície de manuseio e um lanche (cachorro-quente). Nos cachorros-quentes foram realizadas contagens de bactérias aeróbias mesófilas (BAM), Staphylococcus coagulase positiva (STA), coliformes totais (CT), coliformes a 45ºC (CF), e investigada a presença de Salmonella sp. Na água e superfície foram realizadas contagens de BAM, CT e CF. Entre as 60 amostras de cachorros-quentes analisadas, 53%, 48%, 37% e 25% estavam fora do padrão para CT, BAM, STA e CF, respectivamente. Em nenhuma amostra foi detectada a presença de Salmonella. As amostras de água apresentaram apenas 3 (5%) amostras fora do padrão para BAM, e 27% e 23% fora do padrão para CT e CF, respectivamente. Em relação às superfícies, 70% foram consideradas insatisfatórias para contagem de BAM e 68% e 67% para CT e CF. Os resultados sugerem que as condições higiênicas existentes em muitos estabelecimentos não são adequadas, o que se reflete em uma proporção relativamente alta de lanches com qualidade microbiológica insatisfatória para o consumo.

Street-vending of ready-to-eat (RTE) foods can be a risk to the consumers health, since people usually involved in this activity does not have proper knowledge in safe handling of foods. Despite this, only a few studies have been made on the microbiological quality of these foods and places where they are prepared. In this paper we report on the higienic-sanitary quality of hot-dogs sold by street-vendors from Pelotas,RS. Samples of hot-dogs, water and work surfaces, were collected from 60 street-vending places and taken to the laboratory for analysis. Counts of aerobic mesophilic bacteria (TPC), Staphylococcus coagulase positive (SCP), total coliforms (TC) and coliforms at 45ºC (FC) were made on samples of hot-dogs. SPC, TC and FC counts were made on the water and surface samples. Among the 60 samples of hot-dogs 53%, 48%, 37% and 25% were found unsatisfactory for TC, TPC, STA and FC, respectively. Only 3 (5%) water samples were found unsatisfactory according to the TPC standard used, and 27% and 23% did not read the standards for TC and FC. Regarding the surfaces, 70% were found unsatisfactory for TPC, 68% for TC and 67% for FC. Salmonella sp was not detected in any of the samples tested. These results suggest that the hygiene practices of many food street-vending places are not adequate, resulting in a high proportion of read-to-eat RTE) foods with microbiological quality unsatisfactory for consumption.

A prevalência de Salmonella em produtos de frangos e ovos de galinhas, os sorovares mais freqüentes e sua sensibilidadea a antimicrobianos, foram investigados em Pelotas, Brasil, no período de maio de 1997 a outubro de 1998. Um total de 124 amostras de produtos de frangos obtidas em supermercados e açougues e 94 amostras de 6 unidades de ovos de galinhas obtidas em supermercados e feiras-livres foram analisadas através do método convencional de cultivo. Entre as amostras de produtos de frangos analisadas, 13 (10,48%) continham salmonelas. Os 13 isolamentos de salmonelas realizados foram sorotipificados como S. enteritidis (10), S. anatum (1) e S. enterica subespécie enterica sorovar 3,10:e,h:- (2). Todas as cepas isoladas foram resistentes à penicilina G e sensíveis aos demais antimicrobianos testados. Em amostras de ovos, não foram detectadas salmonelas.

The prevalence of Salmonella in chicken products and hen's eggs, the most frequent serovars and their antimicrobial sensitivity, were investigated in the city of Pelotas, Brazil from May 1997 through October 1998. A total of 124 samples of chicken products obtained from local supermarkets and butcher shops, and 94 samples of eggs (6 units each) obtained from supermarkets and street vendors, were examined through standard cultivation procedures. Salmonella were detected in 13 (10,48%) samples of chicken products. Among the 13 strains of salmonellae isolated, 10 were serotyped as S. enteritidis, 1 was S. anatum and 2 were S. enterica subsp. enterica sorovar 3,10:e,h:-. All strains isolated were resistant to penicillin G and susceptible to the others antimicrobial drugs tested. Hen's eggs were not found contaminated with salmonellae.