ABSTRACT Introduction: Dengue is the most important arbovirus worldwide, it has a wide clinical spectrum, from asymptomatic infections to serious forms. It is caused by dengue virus and transmitted mainly by Ae. aegypti. In Cuba, despite the efforts made, it has not been possible to reverse the constant risk of activation of transmission, hence the need to carry out operational investigations that characterize the epidemiological situation of dengue, identify contributions in the study and control of outbreaks and evaluate selected attributes of the dengue surveillance system. Methods: It is an investigation in health services and systems of an operational nature, inserted in the process of surveillance actions, structured in five investigations: descriptive study of the circulation of the dengue virus; description of the dengue outbreaks of 2000 and 2001; a population seroprevalence to dengue; a prevalence of febrile syndromes; and a retrospective cohort study in patients admitted for suspected dengue. The combination of the designs made it possible to evaluate the performance of surveillance in Havana between 1997 and 2019. Results: The monitoring of the dengue virus made it possible to identify its reintroduction and the current situation of hyperendemicity. In addition, it was proven that it is possible to control dengue transmission by combining political will, implementation of intersectoral actions, and community participation. The overall sensitivity of the system turned out to be low, while the World Health Organization case definition showed high sensitivity. Conclusions. The actions of the surveillance system made it possible to identify the transition from the endemic transmission phase to the current hyperendemicity; It was provided evidence on the possibility of controlling an outbreak when political will, intersectorality and community participation are combined. Finally, the system showed gaps in the location of cases.

RESUMEN Introducción: El dengue es la más importante arbovirosis a nivel global, tiene un amplio espectro clínico, desde infecciones asintomáticas hasta formas graves. Es causada por virus del dengue y trasmitida principalmente por Ae. aegypti. En Cuba, a pesar de los esfuerzos realizados no ha sido posible revertir el riesgo constante de activación de la transmisión, de ahí la necesidad de realizar investigaciones operacionales que proporcionen evidencias científicas y caractericen la situación epidemiológica del dengue; identifiquen aportes en el estudio y control de los brotes y evalúen atributos seleccionados del sistema de vigilancia del dengue. Métodos: Es una investigación en servicios y sistemas de salud de tipo operacional, insertada en el funcionamiento de las acciones de vigilancia, estructurada en 5 investigaciones: estudio descriptivo de la circulación de virus dengue; descripción de los brotes epidémicos de dengue de 2000 y 2001; una seroprevalencia a virus dengue; una prevalencia de síndromes febriles; y estudio de cohorte retrospectiva en pacientes ingresados por sospecha de dengue. La combinación de los diseños permitió evaluar el desempeño de la vigilancia en La Habana entre 1997y 2019. Resultados: El monitoreo del virus dengue, permitió identificar su reintroducción y la actual situación de hiperendemicidad. Además, se probó que es posible controlar la transmisión del dengue al combinar voluntad política, implementación de acciones intersectoriales y participación de la comunidad. La sensibilidad general del sistema resultó ser baja, mientras que la definición de caso de la organización de la salud, mostró tener una alta sensibilidad. En conclusiones las acciones de vigilancia permitieron identificar el paso a la fase de transmisión endémica a la actual hiperendemicidad; se aportaron evidencias sobre la posibilidad de controlar un brote cuando se combinan voluntad política, intersectorialidad y participación comunitaria. Finalmente, el sistema evidenció brechas en la localización de casos.

ABSTRACT Introduction: In the face of the COVID-19 pandemic caused by the new SARS CoV-2 coronavirus, Cuba early established a strategic plan for its confrontation, confirming the first cases in March 2020. The objective of this work was to identify the variants of SARS CoV-2 that circulated in Cuba from March 2020 to September 2022 and their relationship with certain sociodemographic and clinical-epidemiological variables. Methods: It was carried out a descriptive cross-sectional study. They were included 2,105 positive patient samples from all over the country. They were performed viral RNA extraction, amplification and sequencing of the N (nucleocapsid) and S (spicule) genes. They were performed mutation profiles and variant assignment using the GISAID database. Results: During the year 2020, the D614G variant (84.2%) and the wild strain from Wuhan (5.2%) circulated. In 2021, they were detected 18 variants, among them Alpha, Beta, Gamma, Delta and Omicron (of concern). The most frequent were Beta (34.77%), Delta (24.89%), D614G (19%) and Omicron (7.6%). Delta was associated with a higher incidence of the disease and Beta with clinical severity. The Omicron variant displaced Delta at the end of 2021, with no increase in lethality. During 2022 circulated the variants of Omicron, BA.1, BA.2 and BA.5. Conclusions: Genomic surveillance made it possible to demonstrate the circulation of multiple variants in Cuba and their relationship with clinical severity and transmissibility. The relatively milder behavior of the disease caused by the Omicron variant could be influenced by the high vaccination coverage and the natural immunity acquired during the Delta wave.

RESUMEN Introducción: Ante la pandemia de COVID-19 causada por el nuevo coronavirus SARS CoV-2, Cuba estableció tempranamente un plan estratégico para su enfrentamiento, confirmando los primeros casos en marzo de 2020. El objetivo es identificar las variantes de SARS CoV-2 que circularon en Cuba desde marzo 2020 a septiembre 2022 y su relación con determinadas variables sociodemográficas y clínico epidemiológicas. Métodos: Se realizó un estudio descriptivo de corte transversal. Se incluyeron 2105 muestras de pacientes positivos procedentes de todo el país. Se realizó extracción del ácido ribonucleico viral, amplificación y secuenciación de los genes N (nucleocápsida) y S (espícula). Los perfiles de mutaciones y la asignación de variantes se realizaron utilizando la base de datos GISAID. Resultados: Durante el año 2020 circuló la variante D614G (84,2 %) y la cepa salvaje de Wuhan (5,2 %). En el 2021 se detectaron 18 variantes; entre ellas Alpha, Beta, Gamma, Delta y Omicrón (de preocupación). Las más frecuentes fueron Beta (34,77 %), Delta (24,89 %), D614G (19 %) y Omicrón (7,6 %). Delta se asoció con mayor incidencia de la enfermedad y Beta con la gravedad clínica. La variante Omicrón desplazó a Delta a finales del 2021, sin incremento de la letalidad. Durante el 2022 circularon las variantes de Omicrón, BA.1, BA.2 y BA.5. Conclusiones: La vigilancia genómica permitió demostrar la circulación de múltiples variantes en Cuba y su relación con la gravedad clínica y la transmisibilidad. El comportamiento relativamente más leve y la menor incidencia de la enfermedad causada por Omicrón podría estar influenciado por las altas coberturas de vacunación y la inmunidad natural adquirida durante la ola de la variante Delta.

ABSTRACT Introduction: Dengue is a serious and growing health problem worldwide, without a specific antiviral treatment that allows early control of the infection. There are few transcriptomic analyzes of dengue and none in tissues. Our objective was to identify effective drugs against dengue disease by applying in silico investigation from a transcriptomic study in blood cells of individuals with dengue hemorrhagic fever and in liver and spleen cells of individuals who died from dengue. Methods: It was used Next Generation Sequencing for the transcriptome study. It was assessed differentiated gene expression using the R DESeq2 package. They were analyzed modified molecular pathways using the gene interaction pathway bases Gene Ontology and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome. For the in silico analysis of drug repositioning, it was used the CMap Touchstone database containing perturbation data of 2837 compounds evaluated in 9 human cell lines. Results: The genes and biological pathways overexpressed in splenic and blood liver cells were those associated with inflammation, cell destruction, apoptosis and viral replication processes; they were underexpressed those associated with cellular metabolism, antiviral response, and response to pathogens. They were identified 203 compounds with potential impact on the effects of dengue infection, and 4 differently expressed mechanisms of action between cases and controls in the 3 tissues studied. Conclusions: the present work constitutes the first transcriptome study in tissues of deceased patients due to dengue and the first in silico analysis for drug repositioning; it also allowed the identification of an important number of known drugs that constitute possible candidates to be evaluated in the future in the treatment of dengue disease.

RESUMEN Introducción: El dengue constituye un grave y creciente problema de salud a nivel mundial, sin que exista un tratamiento antiviral específico que permita controlar tempranamente la infección. Existen pocos análisis transcriptómicos de dengue y ninguno en tejidos. Nuestro objetivo fue identificar fármacos efectivos contra la enfermedad del dengue mediante la aplicación de una investigación in silico a partir de un estudio transcriptómico en células sanguíneas de individuos con fiebre hemorrágica por dengue; y en células hepáticas y esplénicas de individuos fallecidos por dengue. Métodos: Para el estudio de transcriptoma se empleó secuenciación de última generación. La expresión diferenciada de genes se evaluó empleando el paquete R DESeq2. La modificación de las vías moleculares modificadas se analizó empleando las bases de vías de interacción de genes Gene Ontology y Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome. Para los análisis in silico de reposicionamiento de fármacos se trabajó con base de datos CMap Touchstone, conteniendo datos de perturbación de 2837 compuestos evaluados en 9 líneas celulares humanas. Resultados: Los genes y vías biológicas sobre expresados en células hepáticas esplénicas y sanguíneas fueron los asociados a la inflamación, la destrucción celular y la apoptosis, y los procesos de replicación viral; y se subexpresaron aquellos asociados al metabolismo celular, la respuesta antiviral, y la respuesta a patógenos. Se identificaron 203 compuestos con impacto potencial en los efectos de la infección por dengue, y 4 mecanismos de acción diferenciadamente expresados entre casos y controles en los 3 tejidos estudiados. Como conclusiones el presente trabajo constituye el primer estudio de transcriptoma en tejidos de casos fallecidos por dengue y el primer análisis in silico para reposicionamiento de drogas, y permitió identificar un importante número de fármacos conocidos que constituyen posibles candidatos para ser evaluados en el futuro en el tratamiento de la enfermedad por dengue.

ABSTRACT Introduction: Collection media of clinical samples with the capacity to denature viruses reduce the risk of contagion during transportation and processing. Objective: To use the nucleic acids transport media (NATM) in nasopharyngeal swab samples collected for the diagnosis of SARS-CoV-2. Methods: An experimental study was conducted to demonstrate the medium capacity to inactivate viral infectivity. Zika virus (ZIKV), of biosafety level 2, was used as an enveloped virus model. The clinical performance of the NATM for the diagnosis of SARS-CoV-2 was evaluated. A ZIKV strain propagated in the Vero cell line was used and, prior to cells infection, ZIKV was in contact at different intervals (2; 15, and 30 min) with pure NATM; subsequently, serial dilutions (10-1-10-4) were performed. Viral inactivation was evaluated by RT-PCR in the supernatant and the collected cells when the propagation period was completed. CITOSWAB® VTM was used as reference to estimate the clinical performance of the NATM in 30 nasopharyngeal swabs collected for the diagnosis of SARS-CoV-2 infection. Results: ZIKV remained infectious at inoculum dilutions of ≥ 10-2, regardless of contact time. Clinical specificity and sensitivity of the NATM for the diagnosis of SARS-CoV-2 were 100%, respectively. Conclusions: Results suggest that ZIKV positive clinical samples at dilutions ≤ 10-1 of the NATM can be safely handled, which could potentially be applied to the molecular diagnosis of SARS-CoV-2.

RESUMEN Introducción: Los medios de colecta de muestras clínicas con capacidad de desnaturalizar virus reducen los riesgos de contagio durante el transporte y procesamiento. Objetivo: Emplear el medio de transporte de ácidos nucleicos (TAN) en muestras de exudado nasofaríngeo colectadas para el diagnóstico de SARS-CoV-2. Métodos: Se realizó un estudio experimental para demostrar la capacidad del medio de inactivar la infectividad viral. Se tomó como modelo de virus envuelto el virus Zika (VZk), cuyo nivel de bioseguridad es 2. Se evaluó el desempeño clínico del medio TAN para el diagnóstico de SARS-CoV-2. Se empleó una cepa del VZk propagada en la línea celular Vero y, previo a la infección de las células, el VZk se puso en contacto a intervalos de tiempo diferentes (2; 15 y 30 min) con el medio TAN puro; y luego se realizaron diluciones seriadas (10-1-10-4). La inactivación viral se evaluó por RT-PCR, en el sobrenadante y células colectadas, al culminar el periodo de propagación. El desempeño clínico del medio TAN se estimó tomando como referencia el CITOSWAB® VTM, en 30 exudados nasofaríngeos colectados para diagnóstico de la infección por SARS-CoV-2. Resultados: El VZk preservó su infectividad a diluciones del inóculo ≥ 10-2, independientemente del tiempo de contacto. La sensibilidad y especificidad clínica del medio TAN para el diagnóstico de SARS-CoV-2 fueron del 100 %, respectivamente. Conclusiones: Los resultados sugieren que muestras clínicas positivas a VZk en diluciones ≤ 10-1 del medio TAN pueden ser manipuladas de forma segura, lo que pudiera aplicarse potencialmente al diagnóstico molecular del SARS-CoV-2.

ABSTRACT Introduction: A preliminary evaluation is presented of the antiviral activity of Ageratina havanensis extracts (stem ethanolic, AH-T-EtOH; leaf butanolic, AH-H-ButOH; and leaf ethyl acetate, AH-H-AcEtO) using two enzyme immunoassays, cellular ELISA (C-ELISA) and immunoperoxidase technique. Objective: Evaluate the antiviral activity of Ageratine havanensis extracts using two enzyme immunoassays. Methods: C-ELISA and immunoperoxidase technique were standardized for use in the preliminary evaluation of the antiviral activity of three Ageratina havanensis extracts at different concentrations and addition times through detection of the expression of the E protein of dengue virus. Results: C-ELISA achieved the following optimal parameters: Vero cell line, viral antigen in cell culture, protein E expression time 96 h, methanol-acetone fixation compound and 1% skimmed milk blocker. The smallest expression of protein E (greatest inhibition over viral replication) was achieved at addition of extract AH-T-EtOH at its highest concentration and 1 h before inoculating dengue-2 virus strain A15 (VDEN-2 A15). Extract AH-H-ButOH at concentrations of 125 µg/ml and 250 µg/ml presented a slight limitation in the expression of E 1 h after viral inoculation. Extract AH-H-AcEtO at the concentrations used did not show any difference when added before and after inoculation. The immunoperoxidase assay exhibited similar results for the extracts. Conclusions: The greatest inhibition of viral replication was obtained with extract AH-H-ButOH at its highest concentration and at both addition times. The enzyme immunoassays applied are useful tools to evaluate Ageratine havanensis extracts with potential antiviral activity.

RESUMEN Introducción: Se presenta la evaluación preliminar de la actividad antiviral de extractos de Ageratina havanensis (etanólico de tallo, AH-T-EtOH; butanólico de hoja, AH-H-ButOH y acetato de etilo de hoja, AH-H-AcEtO) utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos, un ELISA celular (ELISAc) y la técnica de inmunoperoxidasa. Objetivo: Evaluar la actividad antiviral de los extractos de Ageratina havanensis utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos. Métodos: Se normalizó y empleó un ELISAc y la técnica de inmunoperoxidasa en evaluar de forma preliminar la actividad antiviral de tres extractos de Ageratina havanensis a diferentes concentraciones y tiempos de adición mediante la detección de la expresión de la proteína E del virus dengue. Resultados: El ELISAc logró como parámetros óptimos: línea celular Vero, antígeno viral en cultivo de células, tiempo de expresión de la proteína E de 96 h, compuesto fijador metanol-acetona y bloqueador leche descremada al 1 %. La menor expresión de la proteína E (mayor inhibición sobre la replicación viral), fue al adicionar el extracto AH-T-EtOH a su mayor concentración y 1 h antes de inocular el virus dengue-2 cepa A15 (VDEN-2 A15). El extracto AH-H-ButOH a concentraciones de 125 µg/mL y 250 µg/mL presentó una ligera limitación de expresión de E 1 h después de la inoculación viral. El extracto AH-H-AcEtO a las concentraciones empleadas, no mostró difererencia añadido antes y después de la inoculación. El ensayo de inmunoperoxidasa exhibió resultados análogos para los extractos. Conclusiones: La mayor inhibición de la replicación viral fue obtenida con el extracto AH-H-ButOH, a su mayor concentración y ambos tiempos de adición. Los ensayos inmunoenzimáticos aplicados son herramientas útiles para evaluar extractos de Ageratina havanensis con posible actividad antiviral.

ABSTRACT Introduction: Dengue is one of the most important emerging diseases transmitted by mosquitoes; only one vaccine has been approved and licensed in 20 countries against DENV. This vaccine cannot be administered to children younger than 9 years, due to the increased risk of hospitalization observed in this age group. For this reason, the development of new vaccine candidates and/or immunization strategies continue to be a priority to the World Health Organization and the scientific community. Objectives: This work describes the results in prime-boost immunization schedules combining two different vaccine candidates: recombinant proteins and live attenuated vaccines. Firstly, we evaluated the capacity of Tetra DIIIC vaccine candidate to boost a memory immune response generated in DENV-immune monkeys and as a second study, we also evaluated in monkeys the combination of Tetra DIIIC with the LATV vaccine developed by NIAID and licensed to the Vietnamese company Vabiotech under the codename TV005. Methods: Macaca mulatta non-human primates were used in the studies. The tetravalent vaccine candidate Tetra DIIIC consists of recombinant proteins DIIIC-1-DIIIC4, corresponding to the four dengue virus serotypes, in adjuvant aluminum oxide. Tetravalent formulation of attenuated live viruses TV005 by Vabiotech included the virus strains DENV-1 Nauru/74 (WP), DENV-2 Tonga/74, DENV-3 Sleman/78, and DENV-4 Dominica/81. Results: Our results demonstrate that administration of Tetra DIIIC eight months after the infection was able to recall DENV specific memory B- and T-cell response. In addition, we demonstrate that animals primed with Tetra DIIIC (one or two doses) and later immunized with TV005 develop a neutralizing, protective antibody response against the four DENV serotypes, and that the immune response generated by Tetra DIIIC reduces LATV viremia significantly, which might reduce the reactogenicity that has afflicted the latter during clinical trials. Results described here highlight the possibility to combine our vaccine candidate Tetra DIIIC with live-attenuated tetravalent vaccine in a prime/boost strategy for immunizations. The present study supports the prime-boost strategies as alternative and promissory approaches solving the troubles associated with each individual antigen included in the combination.

RESUMEN Introducción: El dengue es una de las enfermedades más importantes trasmitida por mosquitos; sin embargo, solo existe una vacuna licenciada, la cual está registrada en 20 países. Sin embargo, la vacuna no podrá ser administrada en niños menores de nueve años de edad, dado el elevado riesgo de hospitalización observado en este grupo etario. Por lo tanto, el desarrollo de nuevos candidatos vacunales y estrategias de inmunización continúan siendo una prioridad para la Organización Mundial de la Salud y la comunidad científica. Objetivos: el presente trabajo describe los resultados obtenidos de la combinación en esquemas complementarios de dos tipos de candidatos vacunales: las proteínas recombinantes y los virus vivos atenuados. En un primer acercamiento, el candidato vacunal tetravalente Tetra DIIIC se administró en primates no humanos previamente infectados con virus dengue. En un segundo estudio se evaluó la combinación de Tetra DIIIC y la formulación tetravalente de virus vivos atenuados por vía molecular TV005, desarrollada por el Instituto de Salud de los Estados Unidos y licenciada a la compañía vietnamita Vabiotech. Métodos: Se utilizaron en los estudios primates no humanos sanos de la especie Macaca mulatta. El candidato vacunal tetravalente Tetra DIIIC, consiste en las proteínas recombinantes DIIIC-1-DIIIC4, correspondientes a los cuatro serotipos del virus dengue, adyuvadas en alúmina. La formulación tetravalente de virus vivos atenuados TV005 por Vabiotech incluyó las cepas virales DENV-1 Nauru/74 (WP), DENV-2 Tonga/74, DENV-3 Sleman/78 y DENV-4 Dominica/81. Resultados: Los resultados demuestran que la administración de Tetra DIIIC ocho meses después de la infección pudo activar la respuesta específica de las células B y T contra el DENV. Además, se demostró que los animales inoculados con Tetra DIIIC (una o dos dosis) y luego inmunizados con TV005 desarrollan una respuesta de anticuerpos protectora contra los cuatro serotipos del DENV y que la respuesta inmunológica generada por la Tetra DIIIC reduce la viremia LATV significativamente, lo cual pudiera reducir la reactogenicidad que ha afectado a este último durante los ensayos clínicos. Los resultados aquí descritos resaltan la posibilidad de combinar nuestro candidato vacunal Tetra DIIIC con la vacuna tetravalente del virus vivo atenuado en una estrategia reforzada de inmunización. El presente estudio respalda las estrategias reforzadas como alternativa y enfoques promisorios que solucionan los problemas asociados a cada antígeno individual incluido en la combinación.

ABSTRACT Arboviruses are one of the leading causes of health emergencies due to their morbidity and mortality and the sanitary stress they bring about. Cuba has not been free from risk, and the response first to dengue fever and then to other arboviruses has been and still is a priority for the country's top authorities. Laboratory surveillance of dengue fever was implemented in the 1970s, though its aims and strategies have evolved in keeping with the national and regional epidemiological situation, and the available diagnostic technology. Four stages stand out in the development of dengue laboratory surveillance. The present paper summarizes the strategies developed for laboratory surveillance of dengue fever and other arboviruses in the period 1970-2017. A description is also provided of the role played by Pedro Kourí Tropical Medicine Institute (IPK) as a national reference laboratory.

RESUMEN Los arbovirus constituyen una de las principales causas de emergencia en salud por la morbilidad y mortalidad que producen y el estrés sanitario que conllevan. Cuba no ha estado excenta de riesgo, y el enfrentamiento del dengue inicialmente y de otros arbovirus después, ha sido, y es, una prioridad de las máximas autoridades del país. La vigilancia de laboratorio de dengue se estableció desde inicios de la década del 70 aunque sus objetivos y estrategias han cambiado según la situación epidemiológica nacional y regional y la tecnología de diagnóstico disponible. Se destacan cuatro etapas en su desarrollo. En este trabajo se resumen las estrategias desarrolladas para la vigilancia de laboratorio de dengue y de otros arbovirus en el periodo de 1970 a 2017. Se describe además el papel desempeñado por el Instituto de Medicina Tropical, ¨Pedro Kouri¨ (IPK) como Laboratorio Nacional de Referencia.

Introduction: the identification of viral serotypes is an important issue for dengue diagnosis. Despite the existence of other identification methods, the viral isolation in cell cultures and determination by immunofluorescent technique remain as the most used. Therefore the search for more sensitive cellular systems has been a repeated topic during many years for dengue virus and other agents. Objective: to obtain a cell subline from CLA-1 clone (Aedes pseudoscutellaris), that grows at 28 °C, capable of multiplying at 33 °C (CLA-HT)and to evaluate its usefulness for Dengue virus isolation and identification. Methods: by using a CLA-1 clone of the AP-61(Aedes pseudoscutellaris) cell line, it was possible to obtain a strain or cell subline CLA-HT capable of growing at 33 oC (CLA-HT) through a temperature selection method. Its sensitivity for the multiplication of the 4 dengue virus serotypes and its efficiency for direct virus isolation from acutely ill patients' sera were studied in comparison to C6/36 HT cell line (A. albopictus). Results: four dengue virus serotypes grew in CLA-HT cell subline but some serotypes were detected later in CLA-HT than in C6/36 HT. For dengue isolation from serum samples taken in acutely ill patients, the CLA-HT subline detected 40 % positive samples whereas C6/36 HT did 50 %. Discussion: CLA-HT is able to detect all dengue virus serotypes from 96 hours on post inoculation. It makes the new cell line useful for research as an alternative system and the direct isolation efficiency is good to be applied in large outbreaks. The most important advantage of CLA-HT is the possibility of giving rapid answer in emergency situations in low resource laboratories since it does not require special incubation conditions with CO2. Conclusions: a CLA-HT subline was obtained from CLA-1 line and it grows at 33 oC and capable of detecting 4 dengue virus serotypes. Its isolation efficiency is slightly lower than that of C6/36 HT subline, but it may be used as an alternative system for dengue virus isolation, mainly in resource-poor laboratories that do not have the optimal conditions for incubation.

Introducción: en el diagnóstico de dengue es importante la determinación del serotipo viral. A pesar de existir otros métodos, el aislamiento viral en cultivos de células y la identificación por la técnica de inmunofluorescencia siguen siendo muy utilizados. Por lo tanto, la búsqueda de sistemas celulares más sensibles ha sido un tema reiterado durante muchos años para el virus dengue y otros agentes. Objetivo: obtener una sublínea celular a partir del clon CLA-1 (Aedes pseudoscutellaris) que crece a 28 ºC, capaz de multiplicarse a 33ºC (CLA-HT) y evaluar su utilidad para el aislamiento y la identificación de los virus del dengue. Métodos: a partir del clono CLA-1 de la línea celular AP-61(Aedes pseudoscutellaris) se obtuvo por selección una cepa o sublínea celular CLA-HT capaz de crecer a 33 °C. Se estudió su sensibilidad para la multiplicación de los 4 serotipos del virus del dengue y su eficiencia para el aislamiento directo de sueros de pacientes en fase aguda de la enfermedad, ambos comparativamente con la línea C6/36HT (A. albopictus). Resultados: la sublínea CLA-HT permitió el crecimiento de los 4 serotipos del virus dengue aunque para algunos requirió más tiempo que la C6/36 HT. Para el aislamiento a partir de muestras de sueros colectadas de individuos en fase aguda, la sublínea CLA-HT detectó el virus en el 40 % de las muestras, mientras que C6/36 detectó el virus en el 50 %. Discusión: CLA-HT es capaz de detectar todos los serotipos del virus dengue a partir de las 96 horas pos inoculación, por lo que es útil para la investigación como sistema alternativo y su eficiencia de aislamiento directo es buena para aplicar en grandes brotes. Además, la principal ventaja es que es posible utilizarla para proporcionar una respuesta rápida a situaciones emergentes en laboratorios de escasos recursos, ya que no precisa de condiciones de incubación con CO2. Conclusiones: se obtuvo una sublínea CLA-HT a partir de la línea CLA-1 capaz de crecer a 33ºC, la cual detecta los 4 serotipos del virus dengue. Su eficiencia de aislamiento es ligeramente menor que la sublínea C6/36 HT, pero se puede utilizar como sistema alternativo para el aislamiento de los virus dengue sobre todo en laboratorios con bajos recursos que no cuenten con condiciones óptimas de incubación.

Introduction: dengue is considered to be the most important arthropod-borne human disease worldwide, with an estimated 100 million new cases per year and more than 20 000 deaths. The pathogenesis of severe dengue is not fully understood. However, certain studies have associated it with sequential infections by different viral serotypes, memory T cell activation and cytokine hyperproduction. Objectives: determine the qualitative expression of genes of cytokines IFNγ and TNFα in spleen and liver tissues from dengue 3 and 4 fatal cases, detecting RNAm and verifying their role in the pathogenesis of the disease. Methods: the study was conducted by retrotranscription and polymerase chain reaction (RT-PCR) using specific primers. Results: expression of IFNγ predominated over that of TNFα, and was more evident in spleen than in liver tissues. Conclusions: results support the pathogenic role of the Th1 response pattern in severe dengue. This is the first study of its type about dengue infection.

Introducción: el dengue es considerada la enfermedad viral transmitida por artrópodos de mayor importancia en el humano a nivel global, con un estimado de 100 millones de infecciones anuales y más de 20 000 muertes. La patogénesis de la enfermedad grave por dengue no está totalmente esclarecida. Sin embargo, existen estudios que la asocian con infecciones secuenciales por diferentes serotipos virales, activación de células T de memoria e hiperproducción de citocinas. Objetivos: determinar la expresión cualitativa de genes de las citoquinas IFNγ y TNFα en tejidos de bazo e hígado de casos fatales por dengue 3 o dengue 4 mediante la detección de ARNm y comprobar su papel en la patogénesis de la enfermedad. Métodos: El estudio se realizó a través de un método de retro-transcripción y reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) con el uso de cebadores específicos. Resultados: la expresión de IFNγ predominó a la de TNFα, y fue más evidente en los tejidos de bazo que del hígado. Conclusiones: los resultados obtenidos apoyan el papel patogénico del patrón de respuesta Th1 en el dengue grave y constituye el primer estudio realizado de este tipo en la infección por dengue.

Introduction: host immunity plays an important role in determining the development of dengue infections and the severe form of the disease. However, other factors, such as the variation between viral strains, are also involved in this complex pathogenesis mechanism. Objectives: evaluate the neutralizing capacity of a number of sera from post-convalescing patients against two dengue 4 strains from the same genotype. Methods: examination was conducted of sera from 68 individuals with dengue fever and 35 with dengue hemorrhagic fever. Results: neutralizing antibody titers were low in the sera analyzed. Different neutralizing capacity was found between the two dengue 4 strains from genotype II. Significant differences were observed between neutralizing antibody titers in sera from individuals with secondary infection and with the severe form of the disease. Conclusions: results reveal the complex nature of the neutralizing antibodies produced after a dengue infection with different strains of the same serotype, leading to diverse results by this technique, which could be the cause of the continued transmission of multiple dengue strains.

Introducción: la inmunidad del hospedero desempeña un papel importante en determinar el desarrollo de las infecciones por dengue y del cuadro severo de la enfermedad. Sin embargo, otros factores intervienen en el complejo mecanismo de la patogénesis, como la variación entre las cepas virales. Objetivos: evaluación de la capacidad neutralizante de un grupo de sueros de posconvalescientes frente a 2 cepas de dengue 4 pertenecientes a un mismo genotipo. Métodos: se emplearon sueros de 68 individuos con un cuadro de fiebre del dengue y 35 con un cuadro clínico de fiebre hemorrágica del dengue. Resultados: los títulos de anticuerpos neutralizantes en los sueros estudiados fueron bajos y se observó una capacidad neutralizante diferente entre las 2 cepas de dengue 4 del genotipo II. Se observaron diferencias significativas en los títulos de anticuerpos neutralizantes de los sueros procedentes de individuos con infección secundaria y con la forma severa de la enfermedad. Conclusiones: estos resultados demuestran la complejidad de los anticuerpos neutralizantes, que se producen después de una infección por el virus dengue con diferentes cepas de un mismo serotipo, lo cual conduce a obtener resultados diversos por esta técnica que podría ser la causa de la trasmisión continuada de múltiples cepas de dengue.

Introduction: during dengue epidemics in Cuba, an increase in clinical severity with the epidemics progression in time, particularly in secondary infections, have been frequently observed. It is considered that this increase could be related with genetic changes in the circulating virus. Objective: to study some biological attributes related to strains isolated at different points of time during the dengue epidemic occurred in Havana city, 2001-2002. Methods: nine DENV-3 strains were studied. Cytopathogenic effect, viral growth in C6/36 HT and Vero cell lines, viral plaque sizes, temperature sensitivity, neurovirulence in newborn mice and pH influence in the binding of the virus and the cell as well as in the multiplication medium were evaluated. Results: DENV-3 strains were more cytopathogenic in Vero Cells. However, higher titres were obtained in C6/36 HT cells. All the strains showed reduction of viral titres and plaque size with temperature increasing and low neurovirulence. Basic pH favoured virus-cell binding whereas acid pH was only permissive for some strains isolated at the end of the epidemic. On the other hand, at pH 6.5-7, the viral multiplication medium favoured the growth of strains isolated at the beginning of the epidemic whereas the growth of those isolated at the endof the epidemic was noticeable at pH 7-8. Conclusions: this study proved the phenotypical changes among strains isolated at different points of time in the epidemic. They might be related to differences in viral fitness or in virulent potential. Nevertheless, some of the studied biological properties suggest that dengue virus-3 strains are less virulent than the Cuban dengue virus 2 strains isolated in 1997.

Introducción: durante epidemias de dengue ocurridas en Cuba se ha observado de forma reiterada, un incremento de severidad clínica con la progresión de las epidemias en el tiempo, particularmente en infecciones secundarias. Se considera que este incremento pudiera estar relacionado con cambios genéticos del virus circulante. Objetivo: estudiar algunas propiedades biológicas de cepas aisladas en diferentes momentos de la epidemia de La Habana, 2001-2002. Métodos: se estudiaron 9 cepas de dengue virus-3, se evaluó el efecto citopatogénico y el crecimiento viral en las líneas celulares C6/36 HT y Vero, tamaño de las placas virales, sensibilidad a la temperatura, neurovirulencia en ratones lactantes y la influencia del pH en la unión del virus a la célula, así como en el medio de multiplicación de este. Resultados: las cepas de dengue virus-3 resultaron más citopatogénicas en células Vero, sin embargo, en C6/36 HT se obtuvieron títulos superiores. El conjunto de cepas mostró reducción del título viral y del tamaño de placa al aumentar la temperatura y fueron poco neurovirulentas. En cuanto a la unión del virus a la célula, a pH básico se observaron los mejores títulos, mientras que a pH ácido solo se observó el crecimiento de algunas cepas aisladas al final de la epidemia. El medio de multiplicación del virus a pH 6,5-7 favoreció el crecimiento de las cepas del inicio de la epidemia, mientras que las cepas del final tuvieron títulos superiores a pH 7-8. Conclusiones: se pudo comprobar la existencia de cambios fenotípicos entre cepas de diferentes momentos de la epidemia, que pudieran estar asociados con diferencias en cuanto a su adecuación viral o en su potencial virulento. No obstante, algunas de las propiedades biológicas estudiadas sugieren que las cepas de dengue virus-3 son menos virulentas que las cepas cubanas de dengue virus-2 de 1997.

Introduction: several dengue outbreaks have taken place in Santiago de Cuba province in the last few years, in which pregnant women have been involved. Objectives: to determine the immunity and to describe the role of dengue infection and its sequence. Methods: an observational and descriptive study was conducted to characterize dengue immunity in mothers and children after 10 and 12 months of birth and to determine the influence of certain viral infection sequences in pregnant women who suffered this disease during the dengue 3 epidemics in Santiago de Cuba. To this end, serum samples from 25 females tested dengue 3-positive and from children born to them after 10 and 12 months of childbirth were studied. IgG titers and viral infection sequences were determined and analyzed according to the World Health Organization dengue classification criteria. Results: the children did not present with the antibodies and the viral infection sequences associated to mothers; in order of frequency, the same percentage was observed in DEN2/DEN3, DEN1/DEN2/DEN3 (21,74 %); but lower percentage in DEN1/DEN3 (17,39 %). Conclusions: the children did not develop humoral immunity (IgG) despite some manifestations inherent to the disease. The secondary infections prompted the most serious forms of the disease.

Introducción: en la provincia Santiago de Cuba se han producido diferentes epidemias de dengue en los últimos años, donde han estado incluidas mujeres en estado de gravidez. Objetivo: conocer la inmunidad y describir el papel de la infección con dengue, así como su secuencia. Métodos: se realizó un estudio observacional y descriptivo para caracterizar la inmunidad a dengue en las madres e hijos después de 10 y 12 meses de nacidos y conocer la influencia de determinadas secuencias de infección virales en las mujeres embarazadas que sufrieron la enfermedad, durante la epidemia de dengue 3, en Santiago de Cuba. Para ello se estudiaron las muestras de suero de 25 mujeres confirmadas de dengue 3 y de los niños nacidos de estas, al cabo de los 10 y 12 meses de nacidos. Se determinaron los títulos de IgG y las secuencias virales de infección; se analizaron según la clasificación del dengue de acuerdo con el criterio de la Organización Mundial de la Salud. Resultados: los niños no presentaron anticuerpos y las secuencias virales de infección asociadas a las madres en orden de frecuencia resultaron con igual porcentaje el DEN2/DEN3, DEN1/DEN2/DEN3 (21,74 %) y en menor porcentaje por último el DEN1/DEN3 (17,39 %). Conclusiones: los niños no desarrollaron inmunidad humoral (IgG), a pesar de que algunos presentaron manifestaciones propias de la enfermedad. Las infecciones secundarias favorecieron las formas graves de la entidad.