RESUMO: O tecido adiposo pode ser uma fonte de células estromais/tronco mesenquimais bovinas (MSCs). No entanto, a maioria dos estudos não incorpora a coleta post-mortem ou a diferenciação in vitro dessas células a partir de gordura bovina e outras fontes em três linhagens mesodérmicas. O objetivo deste estudo foi caracterizar e criopreservar MSCs derivadas de tecido adiposo bovino (AD-MSCs) coletadas post-mortem. As células foram isoladas de bovinos (Bos taurus) e cultivadas sob condições padrão para expansão ex vivo e criopreservação. A cinética de crescimento celular foi determinada pelo tempo de duplicação celular após passagens celulares consecutivas. A capacidade clonogênica foi determinada usando o ensaio de fibroblastos de unidades formadoras de colônias (CFU-F). O ensaio de diferenciação de trilinhagem foi realizado para determinar sua multipotência in vitro. A proliferação in vitro e a capacidade clonogênica das AD-MSCs bovinas foram mantidas através de passagens sucessivas (P2-P6). Maior capacidade clonogênica foi encontrada em células frescas do que em células pós-criopreservadas. As células mostraram capacidade multipotencial nas linhagens adiposa, cartilaginosa e óssea. Concluindo, não foram observadas alterações na cinética de crescimento e na capacidade de formação de colônias das sucessivas passagens avaliadas. A capacidade clonogênica foi maior em células frescas do que em células pós-criopreservadas. RESUMO estromaistronco estromais tronco MSCs. . (MSCs) entanto postmortem post mortem mesodérmicas ADMSCs AD (AD-MSCs postmortem. mortem. Bos taurus criopreservação consecutivas CFUF. CFUF CFU F (CFU-F) P2P6. P2P6 PP P2 P6 P (P2-P6) póscriopreservadas. póscriopreservadas pós criopreservadas. criopreservadas pós-criopreservadas adiposa óssea Concluindo avaliadas (MSCs (CFU-F P2P (P2-P6 (P2-P

ABSTRACT: Adipose tissue can be a source of bovine mesenchymal stromal/stem cells (MSCs). However, most studies do not incorporate post-mortem collection or in vitro differentiation of these cells from bovine fat and other sources into three mesodermal lineages. This study characterized and cryopreserved bovine adipose tissue-derived MSCs (AD-MSCs) collected post-mortem. Cells were isolated from cattle (Bos taurus) and cultured under standard conditions for ex vivo expansion and cryopreservation. Cell growth kinetics was determined by cell doubling time after consecutive cellular passages. Clonogenic capacity was determined using the colony-forming unit fibroblast (CFU-F) assay. The trilineage differentiation assay was performed to determine its in vitro multipotency. The in vitro proliferation and clonogenic capacity of bovine AD-MSCs was maintained across successive passages (P2-P6). Greater clonogenic capacity was found in fresh than post-cryopreservation cells. Cells showed multipotential capacity in adipose, cartilage and bone lineages. In conclusion, no changes were observed in the growth kinetics and colony-forming capacity of the successive passages evaluated. Clonogenic capacity was higher in fresh than post-cryopreserved cells. ABSTRACT stromalstem stromal stem MSCs. . (MSCs) However postmortem post mortem lineages tissuederived derived ADMSCs AD (AD-MSCs postmortem. mortem. Bos taurus cryopreservation colonyforming colony forming CFUF CFU F (CFU-F multipotency P2P6. P2P6 PP P2 P6 P (P2-P6) postcryopreservation conclusion evaluated postcryopreserved (MSCs P2P (P2-P6 (P2-P

Resumen Las células madre mesenquimales (CMM) presentan gran interés en veterinaria por su potencial uso en medicina regenerativa. Este interés se debe a que presentan dos atractivas características, una es el poder promover la regeneración tisular y la segunda es poseer la capacidad de inmunomodulación, además, se pueden extraer fácilmente de animales adultos. El objetivo del presente trabajo fue el aislamiento y caracterización in vitro de las CMM derivadas de tejido adiposo (TA) provenientes de las especies canina, equina y felina. Se consiguió aislar CMM-TA provenientes de 5 caninos, 4 equinos y 6 felinos. Las células de las tres especies mostraron capacidad de formar colonias fibroblastoides y tridiferenciación in vitro y fue posible criopreservarlas. En conclusión, se logró el aislamiento y caracterización de las CMM de las tres especies. Además, se generó un banco de CMM de origen animal criopreservadas con el propósito de futuras aplicaciones terapéuticas en medicina veterinaria y/o para otros estudios in vitro.

Summary Mesenchymal stem cells (MSCs) are of great interest in veterinary medicine due to their potential use in regenerative medicine. The attractive characteristics are the ability to promote tissue regeneration, to immunomodulate and easiness of extraction from adult animals. The objective of the present work was the isolation and in vitro characterization of adipose tissue-derived MSCs (AD-MSCs) of canine, equine and feline species. The AD-MSCs from 5 canines, 4 equines and 6 felines, were isolated. The cells of each species showed the capacity of forming fibroblast colonies, tridifferentiation in vitro and cells were cryopreserved. In conclusion, it was possible to isolate and in vitro characterize AD-MSCs. A bank of cryopreserved animal MSCs was created, for future therapeutic applications in veterinary medicine and other in vitro studies.