O objetivo deste trabalho foi avaliar a sobrevivência de dois co-transformantes de Trichoderma harzianum, TE 10 e TE 41, expressando o gene da proteína de fluorescência verde (egfp) e resistência a benomil, por um período de quatro semanas em microcosmo de solo, sob condições controladas. Foi utilizado um meio seletivo para detecção de material fúngico viável, o qual foi confirmado por observação quanto ao fenótipo de fluorescência em microscópio de epifluorescência direta. O fungo transformado foi detectado por PCR "nested", utilizando-se dois pares de primers específicos para o gene egfp. Foram utilizados meios líquidos enriquecidos no cultivo de amostras de solo, permitindo uma detecção consistente de co-transformantes de T. harzianum, uma vez que não foi possível a detecção do gene egfp por PCR de amostras de DNA extraídas diretamente de solo.

The objective of this work was to evaluate the survival of two Trichoderma harzianum co-transformants, TE 10 and TE 41, carrying genes for green fluorescent protein (egfp) and for resistance to benomyl, during four weeks in a contained soil microcosm. Selective culture media were used to detect viable fungal material, whose identity was confirmed by the observation of the fluorescent phenotype by direct epifluorence microscopy. PCR using two nested primer pairs specific to the egfp gene was also used to detect the transformed fungi. Although it was not possible to reliably detect the egfp gene directly from soil extracts, an enrichment step involving selective culture of soil samples in liquid medium prior to DNA extraction enabled the consistent detection of the T. harzianum co-transformants by nested PCR for the duration of the incubation period.

Dois isolados de Trichoderma os quais reduzem a incidência da doença "vassoura-de-bruxa", causada em plantações de cacau pelo fungo Crinipellis perniciosa, foram avaliados quanto ao seu potencial de produção de hidrolases em meio líquido. Na ausência de qualquer substrato nenhuma atividade hidrolítica foi produzida. As atividades de quitinase, N-acetilglicosaminidase, beta-1,3-glucanase, celulase total, endoglucanase, aril-beta-glucosidase, beta-glucosidase, protease e amilase aumentaram significativamente durante o crescimento dos isolados em meio líquido contendo os respectivos substratos. As maiores atividades foram encontradas nos tempos de 72 a 120 horas de crescimento. Com exceção das enzimas N-acetilglicosaminidase e beta-glucosidase, os maiores níveis de hidrolases foram encontrados nas culturas do isolado 1051 de Trichoderma harzianum. O possível envolvimento destas enzimas na interação antagonística entre Trichoderma e C. perniciosa é discutido.

Two isolates of Trichoderma, which reduce the incidence of witches'broom disease caused in cocoa by Crinipellis perniciosa, were evaluated for their potential to produce hydrolases in liquid medium. Very low or no hydrolytic activity was produced in the absence of any substrate. The activities of chitinase, N-acetylglucosaminidase, beta-1,3-glucanase, total cellulase, endoglucanase, aryl- beta-glucosidase, beta-glucosidase, protease and amylase increased dramatically within 72-120 h of growth in the presence of specific substrates. Except for N-acetylglucosaminidase and beta-glucosidase Trichoderma harzianum isolate 1051 produced the largest amounts of hydrolases. The possible involvement of these enzymes in the antagonistic interaction between Trichoderma and C. perniciosa is discussed.

Extracellular proteases have been shown to be factors of virulence in fungal entomopathogenicity. We examined the production of the cuticle-degrading extracellular proteases chymoelastase (Pr1) and trypsin (Pr2) in isolates of the fungus Metarhizium flavoviride. Fungal growth was in a mineral medium (MM) containing nitrate, and in MM supplemented with either cuticle from Rhammatocerus schistocercoides or with the non-cuticular substrate casein. The substrates used for growth influenced the expression of both analyzed proteases, the highest protease activities of nearly all isolates having been observed in the medium containing insect cuticle, with more Pr1 than Pr2 being produced. There was a natural variability in the production of cuticle-degrading proteases among isolates, although this was less evident for Pr2. Our data support the hypothesis that the production of Pr1 on insect cuticle is a useful characteristic for the analysis of intraspecific variability of M. flavoviride isolates.

A eletroforese de campo pulsado foi usada para separar cromossomos de quatro isolados de Metarhizium anisopliae procedentes do Brasil. Isolados de M. anisopliae procedentes do Japão foram descritos como possuindo sete cromossomos. Variações em relação aos isolados brasileiros foram observadas, tendo sido claramente detectadas oito bandas no isolado CG46. A análise densitométrica da intensidade dos cromossomos sugere que, sob as condições utilizadas, os outros isolados brasileiros também apresentam oito cromossomos, com dois cromossomos migrando conjuntamente, como duplos. O tamanho do genoma foi estimado como variando entre 23.39 e 31.88 Mb, não incluindo os cromossomos possivelmente resolvidos como duplos.

Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) was used to separate chromosome-sized DNA molecules of four strains of Metarhizium anisopliae from Brazil. Metarhizium anisopliae isolates from Japan have been reported as possessing seven chromosomes. Variation was observed among the Brazilian strains and the chromosomal DNA was resolved into eight bands for strain CG46. Densitometric analysis of PFGE gels suggested that the other three Brazilian strains also possess eight chromosomes, with two chromosomes migrating as doublets under the electrophoretic conditions used. The genome size was estimated as varying between 23.39 to 31.88 Mb, not including possible doublet chromosomes.