O objetivo deste trabalho foi avaliar a resistência de clones geneticamente modificados de batata ao Potato virus Y (PVY) em condições de campo. As plantas geneticamente modificadas foram comparadas com plantas não modificadas da mesma cultivar. As parcelas foram delimitadas com plantas infectadas com as estirpes PVYº e PVY N (linhas disseminadoras), para tornar disponível, na área experimental, a fonte de inóculo de vírus, que foi naturalmente disseminada pela população nativa de afídeos. O experimento foi monitorado semanalmente por inspeção visual e por DAS-Elisa nas plantas produzidas a partir dos tubérculos colhidos, para avaliar a resistência de plantas transgênicas ao longo do ciclo de crescimento. Ao final do terceiro ano, nenhum sintoma de infecção foi observado no clone 1P; o clone 63P apresentou 1% de infecção, em contraste com cerca de 90% de plantas-controle infectadas. A expressão estável da resistência ao PVY, conferida pelo gene da capa proteica, foi obtida em clones de batata geneticamente modificados da cultivar Achat, em condições de campo, durante três anos consecutivos.

The objective of this work was to evaluate the resistance of genetically modified clones of potato to Potato virus Y (PVY) under field conditions. Genetically modified plants were compared with nontransformed plants of the same cultivar. The plots were flanked with potato plants infected with both PVYº and PVY N strains (spread lines), in order to provide the experimental area with the source of virus, which was naturally spread by the native aphid population. The experiment was weekly monitored by visual inspections and by DAS-Elisa in the plants produced from the harvested tubers, in order to evaluate the resistance of transgenic plants throughout the plant growth cycle. By the end of the third year, no infection symptoms were observed in the 1P clone; clone 63P showed 1% of infection, in contrast to about 90% of nontransformed plants infected. The stable expression of resistance to PVY provided by the coat protein gene was obtained in genetically modified clones of potato plants cultivar Achat under field conditions, during three consecutive years.

O melhoramento genético da batata é complexo e requer uma grande demanda de tempo e energia. A tecnologia do DNA recombinante, com sua capacidade potencial de isolar e transferir genes a partir de qualquer organismo, permite incorporar nas plantas novos caracteres de interesse agrícola. No entanto, as conseqüências da inserção de determinados genes em relação às características fisiológicas da planta são, muitas vezes desconhecidas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar as características fotossintéticas de plantas de batata cultivar Baronesa modificadas geneticamente com genes de resistência a vírus. Para isso, tubérculos de batata cultivar Baronesa e seu respectivo genótipo transformado foram plantados em vasos e mantidos em casa de vegetação. Durante o ciclo de vida das plantas foram avaliados parâmetros da fluorescência das clorofilas, fotossíntese líquida e fotossíntese potencial. As plantas de batata cv. Baronesa transformadas com genes de resistência ao vírus PVY apresentaram maior eficiência fotoquímica máxima e maior taxa de liberação de oxigênio do que plantas da mesma cultivar não modificadas geneticamente, embora tivessem mantido os demais parâmetros de fluorescência das clorofilas e a taxa de fotossíntese líquida iguais.

Potato breeding is difficult and requires a great deal of time and energy. The use of recombinant DNA technology, with its potential capacity of isolating and transferring genes from any organism, allows incorporating in plants new characters of agricultural interest. However, consequences of the incorporation of determined genes on physiological characteristics are sometimes unknown. In this study we evaluated photosynthetic characteristics of potato plants genetically modified with resistance genes to PVY. Potato tubers of cv. Baronesa and its respective transformed genotype were planted in pots and kept in greenhouse. During the plant life cycle, parameters of chlorophyll fluorescence, net photosynthesis and potential photosynthesis were evaluated. Plants transformed with PVY resistant genes showed higher maximum photochemical efficiency and higher oxygen evolution rate, however the parameters of chlorophyll fluorescence and net photosynthesis were the same.

O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da adição de benzilaminopurina (BAP), em combinação com o ácido naftalenoacético (ANA), e dos períodos de subcultivo, na formação de brotações in vitro de abacaxizeiro ornamental. O meio básico líquido consistiu de sais minerais MS e vitaminas. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, em esquema fatorial 6x2x4, com seis concentrações de BAP (0, 0,125, 0,25, 0,5, 1 e 2 mg L-1) e duas de ANA (0 e 0,1 mg L-1), e quatro períodos de subcultivo (30, 60, 90 e 120 dias). Os explantes consistiram de brotações individuais de 1 cm de comprimento, oriundas da cultura in vitro. A formação de novas brotações foi observada em meio suplementado com BAP, em todos os períodos de subcultivo. O maior número médio de brotos por explante foi obtido em meio com a concentração de 1,2 mg L-1 de BAP e 120 dias de subcultivo.

The objective of this work was to evaluate the effect of benzylaminopurine (BAP) additions, in combination with naphthaleneacetic acid (NAA), and of subcultures periods on in vitro shoot formation of ornamental pineapple. The basal liquid medium consisted of MS salts and vitamins. The experiment was a completely randomized design, in a factorial arrangement 6x2x4, with six concentrations of BAP (0, 0.125, 0.25, 0.5, 1, e 2 mg L-1) and two of NAA (0 and 0.1 mg L-1), and four subculturing periods (30, 60, 90 e 120 days). The explants consisted of individualized shoots with 1 cm length from in vitro cultures. Shoot formation was observed in medium supplemented with BAP in all subculturing periods. The greatest average number of shoots per explant was obtained with BAP concentration of 1.2 mg L-1 and 120 days of subcultive.

Embriões provenientes de frutos maturos de Heliconia rostrata Ruiz & Pavon foram excisados e inoculados em meio de cultura contendo os sais básicos MS, vitaminas e sacarose. A adição de sacarose foi essencial para o desenvolvimento dos embriões. Em meio desprovido de sacarose os embriões morreram em cultura. Concentrações de 1%, 2% e 3% (p/v) de sacarose favoreceram o desenvolvimento dos embriões. Concentrações de 6%, 9% e 12% (p/v) de sacarose inibiram o crescimento dos embriões. A adição de cinetina, isopentenil adenina e zeatina não favoreceram o crescimento e o desenvolvimento dos embriões.

Embryos from mature fruits of Heliconia rostrata were excised and cultured in basal medium containing MS salts, vitamins and sucrose. Sucrose was essential for embryo development. In meclium without sucrose the embryos died in culture. Sucrose concentrations of 1%, 2% and 3% (w/v) were beneficial for embryo development. Sucrose concentrations of 6%, 9% and 12% (w/v) inhibited embryo growth. The addition of kinetin, isopentenyl adenine and zeatin did not improve embryo growth and development.

Infecções virais em alho são normalmente causadas por um complexo viral. Neste estudo, um complexo viral de alho, coletado em campo, em três regiões geográficas, foi testado com anti-soros monoclonais específicos para Garlic virus A (GarV-A), Garlic virus B (GarV-B), Garlic virus C (GarV-C) e um anti-soro policlonal capaz de detectar os três vírus mencionados e Garlic virus D (GarV-D). Procedeu-se à amplificação por transcriptase reversa-reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) usando oligonucleotídeos sintetizados a partir de regiões específicas de genes de proteínas capsidiais de allexivirus japoneses e disponíveis no GeneBank (National Center of Biotechnology Information - NCBI). Por esse procedimento, vírus individuais foram isolados e seqüenciados. Os vírus detectados foram biologicamente isolados por meio de sucessivas inoculações em Chenopodium quinoa. A análise das seqüências de nucleotídeos, de aminoácidos e os resultados sorológicos revelaram a presença de três espécies distintas de allexivirus GarV-C, GarV-D e Garlic mite-borne filamentous virus (GarMbFV) no Brasil.

Garlic viruses often occur in mixed infections under field conditions. In this study, garlic samples collected in three geographical areas of Brazil were tested by Dot-ELISA for the detection of allexiviruses using monoclonal specific antibodies to detect Garlic virus A (GarV-A), Garlic virus B (GarV-B), Garlic virus C (GarV-C) and a polyclonal antiserum able to detect the three virus species mentioned plus Garlic virus D (GarV-D). The detected viruses were biologically isolated by successive passages through Chenopodium quinoa. Reverse Transcriptase Polimerase Chain Reaction (RT-PCR) was performed using primers designed from specific regions of the coat protein genes of Japanese allexiviruses available in the Genetic Bank of National Center of Biotechnology Information (NCBI). By these procedures, individual garlic virus genomes were isolated and sequenced. The nucleotide and amino acid sequence analysis and the one with serological data revealed the presence of three distinct allexiviruses GarV-C, GarV-D and a recently described allexivirus, named Garlic mite-borne filamentous virus (GarMbFV), in Brazil.

Glifosato é um herbicida sistêmico, não seletivo, aplicado em pósemergência que inibe o crescimento de plantas daninhas e cultivadas. Uma vez na planta esse herbicida interfere com a biossíntese de aminoácidos aromáticos (fenilalanina, tirosina e triptofano) mediante inibição da atividade da enzima 5-enolpiruvilshiquimato-3-fosfato sintase (EPSPS), enzima-chave na rota do shiquimato. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método simples, barato e efetivo para o rastreamento de soja transgênica com tolerância ao glifosato. Este sistema consistiu em usar papel de filtro umedecido com solução de 100 a 200 miM do herbicida glifosato como substrato de germinação de sementes de soja. Sementes transgênicas de soja tolerantes ao glifosato germinaram normalmente nessa solução e, entre 7 e 10 dias, desenvolveram um sistema radicular normal, enquanto nas sementes de soja não-transgênicas ocorreram paralisações do crescimento da raiz primária e da emissão de raízes secundárias.

Glyphosate is a systemic, nonselective, postemergence herbicide that inhibits growth of both weeds and crop plants. Once inside the plant, glyphosate interferes with biosynthesis of aromatic amino acids phenylalanine, tyrosine, and tryptophan, by inhibiting the activity of 5enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EPSPS), a key enzyme of the shikimate pathway. The objective of this work was to develop a simple, effective and inexpensible method for identification of transgenic soybean tolerant to glyphosate. This technique consisted in germinating soybean seeds in filter paper moistened with 100 to 200 muM of glyphosate. Transgenic soybean seeds tolerant to glyphosate germinated normally in this solution and, between 7 and 10 days, started to develop a primary root system. However non-transgenic seeds stopped primary root growth and emission of secondary roots.

Promotores tecido-específico controlam a transcrição de genes em diferentes tecidos vegetais bem como em diferentes estádios de desenvolvimento da planta, levando à indução de distintos níveis de atividade transiente e/ou estável do gene. Tais promotores podem ser empregados para a expressão seletiva de genes de interesse. O promotor rol A de Agrobacterium rhizogenes, por exemplo, é floema-específico, sugerindo que possa ser empregado em estratégias de defesa de plantas que são infectadas por vírus com replicação restrita ao floema. A expressão do gene marcador da ß-glucuronidase (gus) dirigido pelo promotor rol A (pBRA3) foi observada em plantas transgênicas de batata (cvs. Macaca e Baronesa). Entrenós e secções de folhas foram submetidos ao cocultivo com A. tumefaciens. A atividade do gene gus avaliada em brotações resistentes à canamicina não se restringiu ao floema (alto nível de expressão do gene), mas também se manifestou no xilema dos caules. As expressões transiente e estável são, no entanto, tecido-específicas, localizadas sobretudo no sistema vascular de entrenós e ausente em raízes e folhas. As plantas gus positivas foram micropropagadas, plantadas em casa de vegetação e avaliadas por PCR, utilizando-se 'primers' específicos para o gene npt II. Nenhuma alteração fenotípica foi observada em plantas transgênicas, em relação às não transformadas.

Tissue-especific promoters allow the modulation of gene transcription in different tissue types as well as in different stages of plant development, leading different levels of transient and stable activity of the gene product. These promoters have been employed for selective gene expression. The Agrobacterium rhizogenes rol A gene promoter (BRA3) controls phloem-specific expression indicating that this promoter might have an important role in plant defense strategies against virus which replicated only in the phloem. The expression of ß-glucuronidase (gus) activity drived by BRA3 promoter was observed in transgenic potato plants (cvs Macaca and Baronesa). Entrenodes and leaf explants were infected and cocultivated with A. tumefaciens. The regeneration of putative transformants was in medium with 50 mg.L-1 of kanamycin. High frequency of transformants based upon kanamycin resistance and gus expression was obtained. All gus positive plants showed blue staining in vascular bundle (phloem and xylem). PCR analysis showed the amplification of npt II. No conspicuous phenotipic alteration was observed when comparing transgenic vs non-transgenic plants.

A cultura de ápices caulinares de alho, associada à termoterapia a seco (exposição dos bulbilhos a temperatura de 37°C, por um período de 35 dias) foi essencial para recuperação de plantas livres de vírus das cultivar de alho Amarante. Nestas condições, 70% dos explantes inoculados se desenvolveram in vitro e produziram plantas, das quais 77% não apresentaram partículas virais quando indexadas por ISEM. Isto resulta em um índice de aproveitamento de 54% dos bulbilhos submetidos à termoterapia. O aumento da temperatura na termoterapia para 40°C reduziu a regeneração in vitro para 20%, e 90% dessas plantas estavam livres de vírus, com um índice final de aproveitamento de 18%.

Garlic shoot tip culture associated with dry heat thermotherapy (cloves exposed to 37°C for 35 days) were essential for recovering virus free plants of the cv Amarante. In this condition 70% of the explants developed in vitro and produced plants. A total of 77% of those plants was virus free when indexed by ISEM, which resulted in a final index of 54% of virus free plants from treated cloves. The percentage of regeneration decreased to 20% as the temperature increased up to 40°C. However 90% of those plants were virus free, leading to a final index of 18% virus free plants out of treated cloves.

Explantes de segmentos nodais de batata (Solanum tuberosum L.) cultivar Achat provenientes da cultura in vitro foram transformados, via Agrobacterium tumefaciens, estirpe LBA4404, contendo o vetor binário pBI121 com os genes npt II e o gus-intron. A regeneração de potenciais transformantes foi feita em meio seletivo contendo 50 mg.L-1 de canamicina. Foram obtidas plantas expressando resistência à canamicina e atividade da b-glucuronidase. Pela análise molecular nas plantas gus+, via PCR, constatou-se a amplificação dos genes npt II. A hibridização por Southern blotting demonstrou a inserção de pelo menos uma cópia do gene introduzido.

Nodal segment explants of potato (Solanum tuberosum L.) cv Achat were excised from in vitro growing plants, and transformed with Agrobacterium tumefaciens LBA4404 carrying the binary vector pBI121 with npt II and gus-intron genes. The regeneration of putative transformants was done in medium supplemented with 50 mg.L-1 of kanamycin. Putative transformants expressing kanamycin resistance and b-glucuronidase activity were identified. PCR analysis of these plants showed amplification of the npt II in gus+ plants. Southern blotting hybridization revealed the insertion of at least one copy of the npt II gene.

Foi estudada a absorção dos micronutrientes B, Cu, Fe, Mn e Zn em explantes de bananeira (Musa sp.), cultivar Prata Anã em meio básico de Murashige & Skoog suplementado com 30g/L de sacarose e 3,5mg/L de BAP. O experimento foi realizado em delineamento completamente casualizado, com três repetições. Na matéria seca dos propágulos inteiros, rizomas, pseudocaules e folhas foram avaliadas a concentração e extração de nutrientes, e, no meio de cultivo, a quantidade remanescente aos 0, 10, 20, 30, 40, 50 e 60 dias. A maior quantidade de micronutrientes extraída pelos propágulos foi observada nos primeiros 20 dias, exceto no tocante ao Mn, que foi aproximadamente constante durante todo o período. O Fe e o Cu foram os micronutrientes absorvidos em maior e menor quantidade, respectivamente. As concentrações de B, Zn, Mn, e Cu remanescentes no meio de cultivo aos 60 dias foram de 52, 61, 77 e 78%, respectivamente, o que sugere que podem ser reduzidas no meio básico MS para o cultivo de explantes de bananeira.

The absorption of the micronutrients B, Cu, Fe, Mn and Zn by banana (Musa sp.) cultivar "Prata Anã" explants on the basic medium of Murashige & Skoog supplemented with BAP (3.5 mg/L) and sucrose (30 g/L) were evaluated at 0, 10, 20, 30, 40, 50 and 60 days after the inoculation. The experiment was arranged on a completely randomized design with three replications. Concentration of the micronutrients in the medium and in dry matter of the whole propagule and in the rhizome, pseudostem and leaves was also evaluated. Absorption of Mn was approximately constant during all the period of the experiment, while the other micronutrients had their higher absorption observed on the first 20 days. At the end of the experiment concentrations of B, Zn, Mn and Cu in the medium were 52, 61, 77 and 78%, respectively. These results point out that it is possible to reduce the concentration of these micronutrients on the basic medium MS for banana explants culture.

Com o objetivo de estudar a absorção de macronutrientes (N, P, K, Ca, Mg e S) em explantes de bananeira cv. Prata Anã, foram utilizados explantes de plantas estabelecidas in vitro, inoculados em meio básico de Murashige & Skoog (1962) contendo sacarose (30 g/L), e BAP (3,5 mg/L) com sete tratamentos, representados pelos períodos de 0, 10, 20, 30, 40, 50 e 60 dias de cultivo e três repetições. As quantidades de macronutrientes totais absorvidas pelos explantes seguiram a ordem: K > N > Ca > ou = P > Mg <FONT FACE=Symbol>@</FONT> S. O P foi o nutriente absorvido mais rapidamente pelos explantes, com 75% extraído do meio de cultivo nos primeiros 30 dias, cessando sua absorção aos 50 dias, restando ainda 9% no meio de cultivo. A absorção do S cessou também aos 50 dias, quando 66% deste nutriente ainda permanecia no meio de cultivo. Este resultado sugere haver uma relação, quanto à absorção, entre esses dois nutrientes. As maiores taxas de absorção de todos os nutrientes foram verificadas nos primeiros 20 dias. O rizoma, o pseudocaule e as folhas, se diferenciaram quanto à concentração e extração ou acúmulo de nutrientes.

The absorption of the nutrients (N, P, K, Ca, Mg and S) by banana (Musa sp.) cv. Prata Anã explants on the basic medium of Murashige & Skoog (1962) supplemented with sucrose (30 g/L) and BAP (3.5 mg/L) were evaluated at 0, 10, 20, 30, 40, 50 and 60 days after inoculation. The seven treatments were arranged on a completely randomized design with three replicates. The sequence of nutrient absorption by the explants was K > N > Ca > or = P > Mg <FONT FACE=Symbol>@</FONT> S. The P was the nutrient with the fastest absorption rate and at the 30th day the explants had already absorbed 75% of the P from the medium. The P absorption stopped by the 50th day. The S absorption stopped at the 50th day with 66% of it remaining in the medium. The results suggested a close relationship between these two nutrients. The highest rates of nutrient absorption were observed during the first 20 days of culture. The rhizome, pseudostem and leaves behaved differently to the extraction and accumulation of nutrients.