Resumo Cento e sessenta e seis gatos de dois abrigos foram submetidos ao diagnóstico de Leishmania spp. por ensaio imunoenzimático (ELISA), imunofluorescência indireta (RIFI), reação em cadeia pela polimerase convencional (cPCR) e quantitativa (qPCR) e métodos parasitológicos (PA). Destes, 15% (25/166), 53,6% (89/166), 3,6% (06/166) e 1,8% (03/166) foram positivos por ELISA, RIFI, as duas PCRs e PA, respectivamente. O sequenciamento dos produtos amplificados da PCR ITS-1 foi 100% idêntico à Leishmania infantum. Após o inquérito, 12 gatos foram selecionados para compor dois grupos para análises de hematologia e bioquímica: 6 gatos positivos para L. infantum (G1) e 6 gatos Leishmania spp. negativos (G2). Todos os gatos foram negativos para o vírus da imunodeficiência felina (FIV) e o da leucemia felina (FeLV). Foi observada uma diminuição na contagem de plaquetas e uma hiperproteinemia e hipoalbuminemia significativas em gatos positivos (p<0,05). Esses resultados sugerem que, em áreas endêmicas, os gatos com sinais clínicos de leishmaniose felina (tais como lesões dermatológicas, perda de peso e/ou linfonodos aumentados), associados a alterações hematológicas e bioquímicas, como contagem reduzida de plaquetas e hiperproteinemia com hipoalbuminemia, devem ser testados para leishmaniose felina. spp ELISA , (ELISA) RIFI (RIFI) cPCR (cPCR qPCR (qPCR PA. PA . (PA) Destes 15 25/166, 25166 25/166 25 166 (25/166) 536 53 53,6 89/166, 89166 89/166 89 (89/166) 36 3 3,6 06/166 06166 06 (06/166 18 1 8 1,8 03/166 03166 03 (03/166 respectivamente ITS1 ITS ITS- 100 inquérito bioquímica L G1 G (G1 G2. G2 (G2) FIV (FIV FeLV. FeLV (FeLV) p<0,05. p005 p p<0,05 0 05 (p<0,05) que endêmicas tais dermatológicas eou ou aumentados, aumentados aumentados) bioquímicas (ELISA (RIFI (PA 2516 25/16 2 16 (25/166 5 53, 8916 89/16 (89/166 3, 06/16 0616 (06/16 1, 03/16 0316 (03/16 10 (G (G2 (FeLV p00 p<0,0 (p<0,05 251 25/1 (25/16 891 89/1 (89/16 06/1 061 (06/1 03/1 031 (03/1 p0 p<0, (p<0,0 25/ (25/1 89/ (89/1 06/ (06/ 03/ (03/ p<0 (p<0, (25/ (89/ (06 (03 p< (p<0 (25 (89 (0 (p< (2 (8 ( (p

Abstract One hundred and sixty-six cats from two animal shelters were subjected to enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), indirect immunofluorescence antibody test (IFAT), conventional polymerase chain reaction (cPCR), quantitative PCR (qPCR) and parasitological tests (PA) for the diagnosis of Leishmania spp. Among them, 15% (25/166), 53.6% (89/166), 3.6% (06/166) and 1.8% (03/166) were positive by ELISA, IFAT, both PCRs and PA, respectively. The sequencing of ITS-1 PCR amplicons revealed a 100% match with Leishmania infantum. After the Leishmania spp. survey, 12 cats were selected and divided into two groups for clinical, hematological, and biochemical analysis: six L. infantum positive cats (G1) and six Leishmania spp. negative cats (G2). All the cats were negative for feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV). A statistical analysis indicated significantly low platelet counts and significant hyperproteinemia associated with hypoalbuminemia in positive cats (p<0.05). Our results suggest that in endemic areas, cats with clinical signs of feline leishmaniosis (such as skin lesions, weight loss and/or enlarged lymph nodes) and that exhibit hematological and biochemical changes, such as low platelet counts and hyperproteinemia with hypoalbuminemia, should be tested for Leishmania spp. infection. sixtysix sixty enzymelinked enzyme linked ELISA , (ELISA) IFAT (IFAT) cPCR, cPCR (cPCR) qPCR (qPCR PA (PA spp them 15 25/166, 25166 25/166 25 166 (25/166) 536 53 6 53.6 89/166, 89166 89/166 89 (89/166) 36 3 3.6 06/166 06166 06 (06/166 18 1 8 1.8 03/166 03166 03 (03/166 respectively ITS1 ITS ITS- 100 survey L G1 G (G1 G2. G2 . (G2) FIV (FIV FeLV. FeLV (FeLV) p<0.05. p005 p p<0.05 0 05 (p<0.05) areas lesions andor or nodes changes infection (ELISA (IFAT (cPCR 2516 25/16 2 16 (25/166 5 53. 8916 89/16 (89/166 3. 06/16 0616 (06/16 1. 03/16 0316 (03/16 10 (G (G2 (FeLV p00 p<0.0 (p<0.05 251 25/1 (25/16 891 89/1 (89/16 06/1 061 (06/1 03/1 031 (03/1 p0 p<0. (p<0.0 25/ (25/1 89/ (89/1 06/ (06/ 03/ (03/ p<0 (p<0. (25/ (89/ (06 (03 p< (p<0 (25 (89 (0 (p< (2 (8 ( (p

Resumo A leishmaniose visceral (LV) é uma doença causada pelo protozoário Leishmania infantum e pode causar uma reação inflamatória no trato gastrointestinal, entretanto o papel das células granulocíticas (neutrófilos, eosinófilos e mastócitos) no intestino de cães infectados não é totalmente compreendido. Neste estudo realizamos uma análise quantitativa dessas células na parede intestinal de cães com LV. Vinte cães foram distribuídos em três grupos: grupo 1 (G1, n=8), cães com LV e amastigotas de L. infantum no intestino; grupo 2 (G2, n=9), cães com LV, mas sem amastigotas intestinais; e grupo 3 (G3, n=3), não infectados (grupo controle). Células granulocíticas foram contadas na unidade cripta-vilo (mucosa), submucosa e camada muscular da mucosa intestinal. Observamos hiperplasia dessas células na parede intestinal de cães do G2, seguidas das G1 em relação ao G3 (p≤0,05). No G1, houve uma correlação inversa baixa entre a carga parasitária do intestino delgado e a contagem de granulócitos (r= -0,1; p≤0,01). No entanto, nos cães do G2, os números de mastócitos e eosinófilos apresentaram correlação positiva (r=0,85; p≤0,01). A hiperplasia de células granulocíticas observada no intestino de cães infectados por L. infantum sugere que essas células podem estar envolvidas na resposta imune mediada por células para a eliminação do parasita.

Abstract Visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by the protozoa Leishmania infantum and can cause an inflammatory reaction in the gastrointestinal tract, however the role of granulocytic cells (neutrophils, eosinophils, and mast cells) in the intestine of dogs infected is not fully understood. We performed a quantitative analysis these cells in the intestinal wall of dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL). Twenty dogs were assigned to one of three groups: group 1 (G1, n=8), dogs with CVL and L. infantum amastigotes in the intestine; group 2 (G2, n=9), dogs with CVL but without intestinal amastigotes; and group 3 (G3, n=3), uninfected dogs (control group). Granulocytic cells were counted in the crypt-villus unit (mucosa), submucosa, and muscle layer of the intestinal mucosa. Cell counts were higher in the intestinal wall of dogs from G2 followed by G1 and G3 (p≤0.05). In G1, there was a low inverse correlation between parasite burden of the small intestine and granulocyte counts (r= -0.1, p≤0.01). However, in G2 dogs, mast cell and eosinophil numbers showed positive correlation (r=0.85, p≤0.01). The granulocytic cell hyperplasia observed in the intestine of L. infantum-infected dogs suggests that these cells may be involved in the cell-mediated immune response for parasite elimination.

Resumo Este estudo foi uma análise semi-quantitativa de linfócitos T (CD4+, CD8+ e regulatórios - Treg FoxP3+) e macrófagos na parede intestinal de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum. Treze cães foram divididos em três grupos: grupo 1 (G1, n=5) continha cães com leishmaniose visceral canina (LVC) e com amastigotas intestinais; grupo 2 (G2, n=5) continha cães com LVC, mas sem amastigotas intestinais e o grupo 3 (G3, n=3) continha cães não infectados (grupo controle). Verificou-se que não houve diferença significativa (p ≤ 0.05) no número de células CD4+ e de Treg entre os grupos, mas o número de células T CD8+ e macrófagos foi significativamente superior nos cães do grupo G1 em relação ao G2 e ao G3 (p ≤ 0,05), especialmente nos segmentos intestinais com altas cargas parasitárias. As altas cargas parasitarias correlacionaram positivamente com os números de CD8+ e macrófagos (p ≤ 0,05), mas negativamente com as células CD4+ e Treg. Em conclusão, no intestino dos cães com LVC, o aumento das populações de células T CD8+ e de macrófagos associado a altas cargas parasitárias, mas nenhuma alteração de células T CD4+ e células Treg FoxP3+ sugerem uma possível imunorregulação pelo parasita não dependente de células Treg.

Abstract This study was about a semi-quantitative analysis of T lymphocytes (CD4+ and CD8+, FoxP3+ regulatory T cells), and macrophages in the gut wall of dogs naturally infected with Leishmania infantum. Thirteen dogs were divided into three groups: group 1 (G1, n=5), dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL) and infected with L. infantum amastigotes in the intestine; group 2 (G2, n=5), dogs with CVL but without intestinal amastigotes; and group 3 (G3, n=3), uninfected dogs (control group). There was no significant difference (p ≥ 0.05) on CD4+ and Treg cell numbers among the groups, whereas the levels of CD8+ T cells and macrophages were significantly higher in dogs from G1 group than in G2 and G3 (p ≤ 0.05), especially in intestinal segments with high parasite burden. Parasite burden correlated positively with levels of CD8+ T cells and macrophages (p ≤ 0.05), but was inversely correlated to levels of CD4+ T lymphocytes and FoxP3+ Treg cells. In conclusion, in the intestine of dogs with CVL, the increase of CD8+ T cells and macrophages population associated with high parasite burdens, but no changes of CD4+ T cells and FoxP3+ Treg cells suggest a possible immunoregulation by the parasite not dependent on Treg cells.