Antisoros foram desenvolvidos em animais em resposta à injeção de antígenos intracelulares de Candida albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis. A presença de catalase nos microrganismos tem sido relacionada à virulência, resistência a drogas e imunogenicidade. A catalase intracelular está sempre presente nas cepas de leveduras do gênero Candida e neste trabalho, sua atividade enzimática foi analisada por PAGE, após exposição aos antisoros obtidos. Verificou-se que as catalases de C. albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis foram imunogênicas e apresentaram diferenças quanto à sua ligação aos anticorpos específicos produzidos nos coelhos. Testes de reação cruzada mostraram que quando o antisoro obtido do animal imunizado com C. albicans foi incubado com os extratos intracelulares de cada uma das três espécies, a atividade da catalase intracelular foi neutralizada em todos os casos. Entretanto, os antisoros obtidos da imunização com C. parapsilosis e C. tropicalis não afetaram a atividade da catalase de C. albicans; a catalase de C. albicans foi neutralizada somente pelo antisoro específico. O antisoro anti-C. tropicalis foi espécie-específico e não reagiu com as catalases de C. albicans e C. parapsilosis. As atividades das catalases bovina e de Aspergillus niger não foram afetadas por nenhum dos antisoros produzidos contra Candida sp. Este trabalho é uma análise preliminar de antisoros específicos reagentes com a catalase intracelular de Candida sp., capazes de neutralizar a atividade enzimática. Novos estudos são importantes para o desenvolvimento de anticorpo espécie-específico, uma vez que diferentes espécies de Candida apresentam diferente susceptibilidade aos antifúngicos de uso corrente.

Antisera were developed in rabbits after challenge with intracellular antigens of Candida albicans, C. tropicalis and C. parapsilosis. Microorganism catalase has been correlated with virulence, resistance to drugs and immunogenicity. The intracellular catalase is consistently present in strains of Candida and in this paper, the enzyme activity was analysed by PAGE after exposition to antisera. The catalases of C. albicans, C. parapsilosis and C. tropicalis were immunogenic and differed in their binding to specific antibodies raised in rabbits. Tests of cross-reactivity between different Candida species showed that when antiserum from C. albicans immunized rabbit was incubated with intracellular extracts of these three Candida species, the catalases activities were abolished. However, the antisera from C. parapsilosis or C. tropicalis immunized rabbits did not affect the catalase activity of C. albicans; the enzyme of C. albicans was inactivated only by the antiserum to the catalase of own C. albicans. The antiserum to the catalase of C. tropicalis was species-specific and did not cross-react with catalases of C. albicans and C. parapsilosis. The activities of Aspergillus niger and bovine catalases were not affected by the antiserum from any Candida immunized rabbits. This report is a preliminary study of specific antisera that react against intracellular catalase of Candida sp. and neutralize the enzymatic activity. Further study is necessary to develop species-specific antibody once differences in the susceptibility of the Candida species to commonly used antifungal drugs make identification to the species level important.

Durante a extração de própolis foram variados alguns fatores para determinar como eles afetam o rendimento e o teor de fenóis totais. Seis amostras diferentes da região sudeste do Brasil foram testadas. Os resultados indicam que os maiores rendimentos de extratos de própolis obtidos por maceração, que também apresentam o maior número de componentes, foram aqueles usando 70% (v/v) ou maior proporção de etanol no solvente. A extração em Soxhlet resultou em um maior rendimento. Não foram observadas diferenças entre extratos de macerações com ou sem luz. Um aumento no rendimento da extração foi observado entre os extratos obtidos por maceração durante 10 e 30 dias, porém o teor de fenóis não variou significativamente nesses extratos. O teor de fenóis totais de todos os extratos variou entre 6,41 e 15,24% mas nenhuma correlação direta foi encontrada com qualquer um dos fatores testados.

During the extraction of propolis several factors were varied in order to determine how they affected the yield and phenolic composition of the obtained extracts. Six samples of green propolis from the Southeastern region of Brazil were tested. The results indicate that the highest yield of propolis extracts obtained by maceration, which also had the greatest number of components, were those using 70% (v/v) ethanol or more as a solvent. The Soxhlet extraction procedure resulted in even higher yields. No differences were observed between extracts macerated in the presence or absence of light. An increase in yield was observed between extracts macerated for 10 and 30 days although the phenolic content did not vary significantly. The total phenolic content of all extracts varied from 6.41 to 15.24 % but no direct correlation could be found between any of the factors tested.

Própolis brasileira, proveniente do estado de São Paulo, foi submetida à extração usando vários solventes, resultando em extratos com diferentes composições. Estes extratos foram submetidos à Cromatografia em Camada Delgada (CCD). Análise bioautográfica das placas de CCD permitiu identificar as frações com atividade antimicrobiana, que foram então analisadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Ensaios in vitro freqüentemente utilizados para avaliar a atividade de própolis frente a bactérias Gram-positivas foram comparados para determinar qual renderia os resultados mais consistentes. A atividade bactericida destes extratos foi analisada por Diluição Seriada em Tubos e por testes de Difusão em Agar. O método de Diluição em Tubos permitiu obter os resultados mais consistentes e a Concentração Bactericida Mínima dos extratos variou entre 2,5 e 20,0 mg/mL, para as espécies de bactérias Gram-positivas testadas. Os resultados do método de Difusão em Agar foram diretamente proporcionais à hidrossolubilidade dos extratos, e não avaliaram a atividade bactericida corretamente. A atividade bactericida desta amostra resultou da combinação de vários componentes, identificados por CLAE, que foram extraídos preferencialmente usando etanol 50% como solvente.

Brazilian propolis from São Paulo state was submitted to extraction using several solvents, resulting in extracts with different composition. These extracts were submitted to Thin Layer Chromatography (TLC). Bioauthographic analysis of the TLC plates identified fractions with inhibitory activity, which were then analysed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). In vitro assays, commonly used to evaluate the activity of propolis against Gram-positive bacteria, were compared to determine which rendered the most consistent results. The bactericidal activity of these extracts were analysed by Serial Dilution in Tubes and Agar Plate Diffusion. Serial Dilution in Tubes obtained the most consistent results, with the Minimal Bactericidal Concentration of the extracts ranging between 2.5 and 20.0 mg/mL, for the species of Gram-positive bacteria tested. The results of the Agar Plate Diffusion were directly proportional to the hydro-solubility of the extracts and did not evaluate their bactericidal activity correctly. The bactericidal activity of this sample of propolis was due to the combined effect of several components that were identified by HPLC and were best extracted using 50% ethanol as a solvent.