ABSTRACT: This study identified and monitored the population fluctuations of insect vectors of Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) in experimental orchards in the North and Northwest Regions of the State of Paraná. The experiments were conducted in the cities of Londrina and Paranavaí at the Experimental Research Stations of the Instituto de Desenvolvimento Rural do Paraná-IAPAR-EMATER (IDR-Paraná), Brazil. The study period was from September 2019 to March 2021. In the experiments conducted in Londrina and in Paranavaí, yellow passion fruit plants were grown in trellis systems. Moericke traps were used to capture insects, and collections were performed weekly. Aphids were identified using a taxonomic identification key. The numbers of aphids present in each region were compared, and the populations were correlated with the climate and local precipitation. A total of 1522 and 1340 winged aphids were observed in the experiments in Londrina and Paranavaí, respectively. In Londrina, moderate positive correlations were observed between the number of insects and the maximum and average temperatures, while negative correlations were observed between the number of insects and the minimum temperature and precipitation. In contrast, in Paranavaí, the correlation between aphids and abiotic factors was negative, where maximum temperature was strongly correlated. In both regions, the following seven species of aphid vectors of CABMV were detected: Aphis fabae, Aphis gossypii, Toxoptera citricida, Acyrthosiphon pisum, Brevicoryne brassicae, Macrosiphum euphorbiae and Uroleucon ambrosiae. The population fluctuations of these species were influenced by variations in temperature and precipitation. ABSTRACT aphidborne borne (CABMV Paraná ParanáIAPAREMATER IAPAR EMATER IDRParaná, IDRParaná IDR , (IDR-Paraná) Brazil 201 2021 systems weekly key compared precipitation 152 134 respectively temperatures contrast regions detected fabae gossypii citricida pisum brassicae ambrosiae (IDR-Paraná 20 202 15 13 2 1

RESUMO: O objetivo deste estudo foi identificar e monitorar as flutuações populacionais de insetos vetores do Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) em pomares experimentais nas Regiões Norte e Noroeste do Estado do Paraná. Os experimentos foram conduzidos nas cidades de Londrina e Paranavaí nas Estações de Pesquisa Experimental do Instituto de Desenvolvimento Rural do Paraná-IAPAR-EMATER (IDR-Paraná), Brasil. O período de estudo foi de setembro de 2019 a março de 2021. Nos experimentos realizados em Londrina e em Paranavaí, plantas de maracujá amarelo foram cultivadas em sistema de latada. Foram utilizadas armadilhas Moericke para captura dos insetos e as coletas foram realizadas semanalmente. Os pulgões foram identificados por meio de uma chave de identificação taxonômica. Os números de pulgões presentes em cada região foram comparados e as populações correlacionadas com o clima e a precipitação local. Foram observados 1.522 e 1.340 pulgões alados nos experimentos de Londrina e Paranavaí, respectivamente. Em Londrina, foram observadas correlações positivas moderadas entre o número de insetos e as temperaturas máxima e média, enquanto correlações negativas foram observadas entre o número de insetos e a temperatura mínima e precipitação. Em contrapartida, em Paranavaí, a correlação entre pulgões e fatores abióticos foi negativa, onde a temperatura máxima estava fortemente correlacionada. Em ambas as regiões foram detectadas as seguintes sete espécies de pulgões vetores do CABMV: Aphis fabae, Aphis gossypii, Toxoptera citricida, Acyrthosiphon pisum, Brevicoryne brassicae, Macrosiphum euphorbiae e Uroleucon ambrosiae. As flutuações populacionais dessas espécies foram influenciadas pelas variações de temperatura e precipitação. RESUMO aphidborne aphid borne CABMV (CABMV Paraná ParanáIAPAREMATER IAPAR EMATER IDRParaná, IDRParaná IDR , (IDR-Paraná) Brasil 201 2021 latada semanalmente taxonômica local 1522 1 522 1.52 1340 340 1.34 respectivamente média contrapartida negativa correlacionada fabae gossypii citricida pisum brassicae ambrosiae (IDR-Paraná 20 202 152 52 1.5 134 34 1.3 2 15 5 1. 13 3

RESUMO O Citrus tristeza virus (CTV) causa significativas perdas na produtividade de laranja doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e seu controle tem sido realizado principalmente com a premunização. O trabalho teve como objetivo analisar a variabilidade de isolados fortes e fracos de CTV provenientes de plantas de citros inoculadas e mantidas em casa de vegetação e amostras de campo, coletadas em pomar comercial situado no município de Rolândia, PR. Para a determinação da variabilidade e diversidade genética dos isolados foi realizada avaliação dos sintomas e empregadas as técnicas de RT– PCR e RFLP, utilizando os oligonucleotídeos específicos HCP1/HCP2 e posterior sequenciamento dos fragmentos amplificados. Na avaliação de canelura, os isolados mantidos em casa de vegetação induziram sintomas leves, com exceção do isolado severo Capão Bonito. Os sintomas mais severos ocorreram em amostras situadas no campo. De acordo com as análises multivariadas os isolados de CTV tendem a se agrupar conforme a severidade dos sintomas e condições ambientais as quais foram expostas formando agrupamentos distintos entre amostras provenientes do campo e casa de vegetação. O dendrograma gerado a partir do sequenciamento dos isolados e as análises multivariadas revelaram que o isolado proveniente da amostra “Forte Arapongas” apresentou maior similaridade com o controle padrão forte proveniente de Capão Bonito. Os isolados identificados como fracos e provenientes das amostras Pêra IAC e Rolândia 5 apresentaram maior similaridade. Pode-se aferir que plantas hospedeiras mantidas em campo possuem maior variabilidade de isolados.

ABSTRACT Citrus tristeza virus (CTV) causes significant yield losses to sweet orange [Citrus sinensis (L.) Osbeck] and its control has been carried out especially with premunization. The aim of this study was to analyze the variability of severe and mild CTV isolates from citrus plants inoculated and kept in a greenhouse and field samples collected from a commercial orchard located in the city of Rolândia, Paraná State (PR). To determine the variability and the genetic diversity of isolates, symptoms were evaluated and the techniques RT-PCR and RFLP were employed, using the specific oligonucleotides HCP1 / HCP2 and subsequent sequencing of the amplified fragments. In the evaluation of stem pitting, the isolates kept in greenhouse induced mild symptoms, except for the severe isolate Capão Bonito. The most severe symptoms occurred in samples located in the field. The multivariate analyses showed that CTV isolates tend to cluster according to the severity of symptoms and the environmental conditions to which they were exposed, forming distinct groupings among samples from the field and the greenhouse. The dendrogram generated from the sequencing of isolates and the multivariate analyses revealed that the isolate from the sample “Forte Arapongas” presented greater similarity with the severe pattern control from Capão Bonito. The isolates identified as mild and from the samples Pêra IAC and Rolândia 5 presented greater similarity. Host plants maintained in the field can be considered to have more variability of isolates.

RESUMO: A bactéria Xylella fastidiosa, agente causal da clorose variegada dos citros, é dependente da ação de insetos vetores para sua disseminação e infecção em plantas cítricas hospedeiras. Os insetos cigarrinhas (Hemiptera: Cicadellidae) transmitem a bactéria para plantas sadias depois de se alimentarem das plantas contaminadas. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e comparar métodos de extração de DNA genômico de cigarrinhas a fim de detectar a bactéria X. fastidiosa. A extração de DNA foi realizada de acordo com protocolo à base de fenol-clorofórmio em conjunto com dois kits comerciais: Dneasy® Plant Mini Kit and Blood & Tissue Dneasy® Handbook (Qiagen Inc., Valencia, CA, USA). Utilizou-se a cabeça das seguintes espécies de cigarrinhas: D. costalimai, A. citrina, O. facialis, B. xanthophis, M. leucomelas e H. ignorata. Com base nas diferenças numéricas entre as amostras independentes, os resultados mostraram o uso do método de extração fenol-clorofórmio (36/50 positivos) e o kit comercial DNeasy® Plant Mini Kit (33/50) resultando nas maiores detecções de X. fastidiosa nas amostras de cigarrinhas. Como esses dois métodos detectaram a presença de X. fastidiosa no maior número de amostras infectadas, eles podem ser mais eficientes para o uso na detecção em cigarrinhas.

ABSTRACT: The bacterium Xylella fastidiosa, the causal agent of citrus variegated chlorosis (CVC), is dependent on vector insects for its spread and infection of citrus hosts. The insects, leafhoppers (Hemiptera: Cicadellidae) transmit the bacteria to healthy plants after feeding on infected plants. The objective of this study was to develop and compare methods for extracting genomic DNA from sharpshooters to detect X. fastidiosa. The DNA extraction from insects was performed according to a phenol-chloroform based DNA extraction in conjunction with two commercial kits, Dneasy® Plant Mini Kit and blood & tissue Dneasy® Handbook (Qiagen Inc., Valencia, CA, USA). The heads of the following species of sharpshooter were used: Dilobopterus costalimai, Acrogonia citrina, Oncometopia facialis, Bucephalogonia xanthophis, Macugonalia leucomelas and Homalodisca ignorata. Based on the numeric differences between independent samples, the results showed the use of the phenol:chloroform extraction method (36/50 positives) and the DNeasy® Plant Mini Kit (33/50) resulting in the most detections of X. fastidiosa from leafhopper samples. As these two methods detected Xylella in the greatest number of infected samples, they may be more efficient to use for detection purposes in leafhoppers.