ABSTRACT: The main transmission route of bovine coronavirus (BCoV) is direct contact with secretions and feces, and potentially also via contaminated surfaces. Following PRISMA guidelines, a systematic review was conducted to evaluate the presence of BCoV on environmental surfaces. A literature search, conducted between March and April 2023, utilized databases including Web of Science, PubMed, Scopus, Science Direct, and Springer. The review adhered to the PEO structure: Population - environmental surfaces; Exposure - contact with BCoV; Outcome - identification of presence or infectivity. Primary data were recorded using an extraction form organizing methods for detecting BCoV presence, assessing BCoV infectivity, types of surfaces evaluated, and study type. Search terms “Bovine coronavirus” and “BCoV” yielded 2703 articles. After removing 964 duplicates and excluding 1546 articles not mentioning BCoV in titles, 193 studies underwent abstract reading. Following exclusion criteria not addressing BCoV presence in the environment, three articles were selected for comprehensive review. These articles identified BCoV presence on various types of surfaces, with detection possible up to 81 hours after contamination, depending on surface type. Despite limited studies on BCoV presence on surfaces, findings suggested potential transmission via contaminated surfaces due to the virus’s ability to remain infectious for up to 24 hours on fomites. This review underscores the need for further research on BCoV persistence in farm environments, an area currently lacking focused studies. ABSTRACT (BCoV feces guidelines search 2023 PubMed Scopus Direct Springer structure infectivity evaluated type Bovine “BCoV 270 96 154 titles 19 reading environment 8 contamination viruss virus s 2 fomites environments 202 27 9 15 1 20

RESUMO: A principal via de transmissão do coronavírus bovino (BCoV) é o contato direto com secreções e fezes, podendo ocorrer também por meio de superfícies contaminadas. Uma revisão sistemática, seguindo as recomendações PRISMA, foi realizada para avaliar a presença de BCoV em superfícies ambientais. A busca na literatura foi realizada em março e abril de 2023 e as bases de dados utilizadas foram Web of Science, PubMed, Scopus, Science Direct e Springer. A revisão sistemática seguiu a estrutura PEO: População - superfícies ambientais; Exposição - contato com BCoV; Resultado - identificação da presença ou infectividade de BCoV. As informações primárias foram registradas por meio de um formulário de extração, organizando métodos para detectar a presença de BCoV, avaliar a infectividade de BCoV, tipos de superfícies avaliadas e tipo de estudo. Os termos de pesquisa “coronavírus bovino” e “BCoV” resultaram em 2703 artigos. Após remover 964 duplicatas e excluir 1546 artigos que não mencionavam o BCoV nos títulos, 193 estudos foram submetidos à leitura de resumos. Seguindo os critérios de exclusão, que não abordavam a presença do BCoV no ambiente, três artigos foram selecionados para revisão abrangente. Nestes artigos foi identificada a presença de BCoV em vários tipos de superfícies, sendo possível a detecção até 81 horas após a contaminação, dependendo do tipo de superfície. Apesar do número limitado de estudos que investigam a presença de BCoV em superfícies, os resultados sugerem o potencial de transmissão de BCoV por meio de superfícies contaminadas, devido à capacidade do vírus permanecer infeccioso por até 24 horas em fômites. Esta revisão destaca a necessidade de mais pesquisas sobre a persistência de BCoV em locais de criação de bovinos, uma área atualmente carente de estudos específicos. RESUMO (BCoV fezes contaminadas PRISMA ambientais 202 PubMed Scopus Springer PEO extração estudo “BCoV 270 96 154 títulos 19 resumos exclusão ambiente abrangente 8 contaminação superfície 2 fômites bovinos específicos 20 27 9 15 1

Abstract The Amblyomma genus (Arachnida: Ixodidae) is widely distributed in South America, with 34 species occurring in Brazil. Amblyomma nodosum Neumann 1889 is a species that predominantly feeds on Passeriformes during immature stages (larvae and nymphs) and anteaters (Myrmecophagidae) during adult stages. The aim of the present study is to report, for the first time, an unusual case of parasitism by adults of A. nodosum on a yellow cururu toad (Rhinella icterica) captured in the city of Nossa Senhora da Glória, Sergipe state (Northeastern Brazil) in the Caatinga biome, and also investigate the presence of DNA of Rickettsia in the collected material. DNA was extracted from all specimens collected (N=8) and subjected to PCR assays based on the tick 16S rRNA endogenous gene and gltA gene for Rickettsia sp. All samples (8/8; 100%) were positive for the 16S rRNA endogenous gene and two amplicons (obtained from one male and one female) were purified and sequenced. The BLASTn analysis of the sequences revealed a high degree of similarity (95-100%) with A. nodosum sequences previously deposited on GenBank, while the phylogenetic analysis clustered the sequences obtained in the same clade as A. nodosum sequences from Brazil. Arachnida (Arachnida Ixodidae America 3 Brazil 188 larvae nymphs Myrmecophagidae (Myrmecophagidae report time A Rhinella icterica Glória Northeastern biome material N=8 N8 N 8 (N=8 S sp 8/8 88 (8/8 100% 100 female sequenced 95100% 95100 95 (95-100% GenBank 18 N= (N= 8/ (8/ 10 9510 9 (95-100 1 (N (8 951 (95-10 ( (95-1 (95- (95 (9

Resumo O gênero Amblyomma (Arachnida: Ixodidae) é amplamente distribuído na América do Sul, com 34 espécies ocorrendo no Brasil. Amblyomma nodosum Neumann 1889 é uma espécie que se alimenta predominantemente de Passeriformes, durante os estágios imaturos (larvas e ninfas), e de tamanduás (Myrmecophagidae) durante os estágios adultos. O objetivo do presente estudo é relatar, pela primeira vez, um caso incomum de parasitismo por adultos de A. nodosum em um Sapo-cururu (Rhinella icterica), capturado na cidade de Nossa Senhora da Glória, estado de Sergipe (Nordeste do Brasil) na Caatinga, e também investigar a presença de DNA de Rickettsia no material coletado. DNA foi extraído de todos os espécimes (N=8) coletados e submetidos a ensaios de cPCR baseados no gene endógeno 16S rRNA de carrapatos e no gene gltA de Rickettsia sp. Todas as amostras (8/8; 100%) foram positivas para o gene endógeno 16S rRNA e dois amplicons (obtidos de um macho e uma fêmea) foram purificados e sequenciados. A análise BLASTn das sequências revelou um alto grau de similaridade (95-100%) com sequências de A. nodosum previamente depositadas no GenBank, enquanto a análise filogenética agrupou as sequências obtidas no mesmo clado das sequências de A. nodosum do Brasil. Arachnida (Arachnida Ixodidae Sul 3 Brasil 188 Passeriformes larvas ninfas, ninfas , ninfas) Myrmecophagidae (Myrmecophagidae relatar vez Sapocururu Sapo cururu Rhinella icterica, icterica icterica) Glória Nordeste Caatinga coletado N=8 N8 N 8 (N=8 S sp 8/8 88 (8/8 100% 100 obtidos fêmea sequenciados 95100% 95100 95 (95-100% GenBank 18 N= (N= 8/ (8/ 10 9510 9 (95-100 1 (N (8 951 (95-10 ( (95-1 (95- (95 (9

Abstract A male of Pteronura brasiliensis (Carnivora: Mustelidae) was found dead on the banks of the Rio Negro, in the Pantanal wetlands of Mato Grosso do Sul state, Aquidauana municipality. Two ticks found attached to its skin were morphologically identified as a second-instar nymph of Ornithodoros rostratus (Argasidae) and a male of Amblyomma sculptum (Ixodidae). In order to complement the morphological identification, these tick specimens were subjected to DNA extraction, and tested using PCR assays to confirm the molecular identity the specimens. Also, the tick DNA samples were tested and were negative in the PCR assays for all the pathogens tested. We also examined 30 batches, consisting of 174 individuals of O. rostratus deposited in the Acari Collection of the Butantan Institute, and we found material from four Brazilian states, including one batch containing 2 males and 2 females from Aquidauana, of Mato Grosso do Sul state, collected from the soil. This was therefore the first record of O. rostratus parasitizing P. brasiliensis and the first locality record (Aquidauana). Likewise, A. sculptum is commonly found in the Pantanal and is reported here for the second time parasitizing the giant otter, which is a host little studied regarding the ectoparasites. Carnivora (Carnivora Mustelidae Negro state municipality secondinstar instar Argasidae (Argasidae Ixodidae. Ixodidae . (Ixodidae) identification extraction Also 3 batches 17 O Institute states soil P Aquidauana. (Aquidauana) Likewise otter ectoparasites (Ixodidae 1 (Aquidauana

Resumo Um macho de Pteronura brasiliensis (Carnivora: Mustelidae) foi encontrado morto às margens do Rio Negro, no Pantanal do estado de Mato Grosso do Sul, município de Aquidauana. Dois carrapatos encontrados aderidos à sua pele foram identificados, morfologicamente, como uma ninfa de segundo ínstar de Ornithodoros rostratus (Argasidae) e um macho de Amblyomma sculptum (Ixodidae). Para complementar a identificação morfológica, esses espécimes de carrapatos foram submetidos à extração de DNA e testados por meio de ensaios de PCR, para confirmar a identidade molecular dos espécimes. Além disso, os extraídos dos carrapatos foram testados e revelaram-se negativos nos ensaios de PCR para todos os patógenos testados. Também foram examinados 30 lotes, compostos por 174 indivíduos de O. rostratus, depositados na Coleção Acari do Instituto Butantan, e encontramos material de quatro estados brasileiros, incluindo-se um lote contendo 2 machos e 2 fêmeas de Aquidauana, estado de Mato Grosso do Sul (MS), coletado do solo. Este foi, portanto, o primeiro registro de O. rostratus parasitando P. brasiliensis e o primeiro registro de localidade (Aquidauana). Da mesma forma, A. sculptum é comumente encontrado no Pantanal e relatado aqui, pela segunda vez, parasitando a ariranha, hospedeiro pouco estudado em relação a ectoparasitas. Carnivora (Carnivora Mustelidae Negro Aquidauana identificados morfologicamente Argasidae (Argasidae Ixodidae. Ixodidae . (Ixodidae) morfológica disso revelaramse revelaram se 3 lotes 17 O Butantan brasileiros incluindose incluindo MS, MS , (MS) solo portanto P (Aquidauana) forma A aqui vez ariranha ectoparasitas (Ixodidae 1 (MS (Aquidauana

Resumo Este estudo avaliou a proteína recombinante (aquaporina) do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus como antígeno em vacina contra Rhipicephalus sanguineus. Cinco cães foram imunizados com RmAQP1 (10 µg) + adjuvante (G1) e cinco foram inoculados apenas com adjuvante (G2), três vezes. 21 dias após a última imunização todos os animais foram desafiados com larvas, ninfas e adultos de R. sanguineus, e potencial biótico dos carrapatos foi comparado. Amostras de sangue foram coletadas antes de cada imunização e a cada 28 dias após a última imunização, durante 10 semanas. Títulos de anticorpos dos soros dos cães foram avaliados por ELISA. Resultados: o período de ingurgitamento das fêmeas do G1 foi 12% mais curto que o período de ingurgitamento de G2; o período de ingurgitamento das larvas do G1 8,7% foi mais longo e o peso 7,2% menor que no caso de G2; o período de ingurgitamento das ninfas do G1 4,5% foi mais curto e peso 3,6% menor que no caso do G2; aumento dos títulos de anticorpos do G1 após a segunda imunização e declínio após a terceira imunização. Os resultados indicaram baixo potencial de imunoproteção de RmAQP1 contra R. sanguineus adultos, e possível eficácia contra larvas e ninfas, na dose testada. Sugere-se desenvolver novos estudos para melhor avaliação da eficácia de RmAQP1 contra R. sanguineus em cães.

Abstract This study evaluated a recombinant aquaporin 1 protein of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (RmAQP1) as antigen in a vaccine against R. sanguineus. Five dogs were immunized with RmAQP1 (10 µg) + adjuvant (Montanide) (G1), and five were inoculated with adjuvant only (G2), three times. Twenty-one days after the last immunization, animals of both groups were challenged with R. sanguineus larvae, nymphs and adults, and their biotic potential was compared. Blood samples were collected before each immunization and every 28 days after the last immunization for 10 weeks. Serum antibody titers (IgG) were assessed by ELISA. We observed that: engorgement period of adult females from G1 was 12% shorter than G2; larvae from G1 had 8.7% longer engorgement period than G2 and weighed 7.2% less; nymphs from G1 had 4.5% shorter engorgement period than G2 and weighed 3.6% less; although the antibody titers increased following the second immunization, they rapidly decreased after the third immunization. Results indicated low immunoprotection of RmAQP1 against adult R. sanguineus ticks, and possible efficacy on larvae and nymphs fed on immunized dogs. Further studies should be performed for a full evaluation of the immunoprotection of RmAQP1 against R. sanguineus infestations in dogs.

O presente estudo apresenta infestações de carrapatos em aves silvestres em fragmentos de reflorestamento com espécies nativas e fragmentos de reflorestamento com Eucalyptus tereticornis no município de Rio Claro, São Paulo. No total foram capturadas 265 aves, sendo 137 indivíduos de 33 espécies nas áreas de reflorestamento com espécies nativas e 128 indivíduos de 37 espécies nas áreas reflorestadas com Eucalyptus tereticornis. Ninfas de duas espécies de carrapatos foram registradas: Amblyomma calcaratum e Amblyomma longirostre, sendo a primeira mais abundante na área nativa e a segunda na área de Eucalyptus tereticornis. Novos registros de hospedeiros para A. calcaratum são apresentados.

In the present study, we report tick infestations on wild birds in plots of the Atlantic Forest reforested fragments with native species and plots reforested with Eucalyptus tereticornis in the municipality of Rio Claro, State of Sao Paulo, Brazil. A total of 256 birds were captured: 137 individuals of 33 species, in planted native forest; and 128 individuals of 37 species, in planted Eucalyptus tereticornis forest. Nymphs of two tick species were found on the birds: Amblyomma calcaratumand Amblyomma longirostre, the former was more abundant in the fragments reforested with Atlantic forest native species, and the latter in the fragment reforested with E. tereticornis. New host records were presented for A. calcaratum.

Os estágios imaturos dos carrapatos Neotropicais são pouco conhecidos e, em muitos casos, não estão descritos. Este trabalho apresenta uma descrição morfológica das larvas (F1) e redescrição das ninfas (F1) do carrapato Amblyomma brasiliense, relatado como um dos ixodídeos mais agressivos ao homem no Brasil. Para este fim, carrapatos imaturos de uma colônia iniciada com espécimes adultos do Parque Estadual de Intervales, São Paulo, Brasil foram analisados sob microscopia eletrônica de varredura, microscopia de luz e lupa estereoscópica. Observou-se que larvas têm a base do capítulo retangular, palpos curtos e idiossoma arredondado, coxa I com dois espinhos, sendo o externo mais longo que o interno e coxas II e III com um espinho. Ninfas têm a base do capítulo retangular com córnua pontiaguda, idiossoma oval, coxa I com dois espinhos evidentes, sendo o externo mais longo que o interno, coxas II e III com um espinho curto em cada uma e coxa IV com um espinho muito pequeno, presença de tubérculos quitinosos na superfície interna da borda posterior do idiosoma. Estas características, associadas à quetotaxia e porotaxia, poderão tornar possível a identificação dos estágios imaturos de carrapatos do gênero Amblyomma.

The immature stages of Neotropical ticks are poorly known and in many cases have not been described. This work presents a morphological description of Amblyomma brasiliense larvae (F1) and a redescription of nymphs (F1). A. brasiliense is reported as one of the most aggressive ticks to humans in Brazil. Immature ticks obtained from a laboratory colony initiated from adult specimens collected in the Parque Estadual Intervales (24º 18' S and 48º 24' W), São Paulo, Brazil, were analyzed under scanning electron microscope, and also under light and stereoscopic microscopes. A. brasiliense larvae present basis capituli rectangular; short palpi; rounded idiosoma; coxa I with two spurs, the external one being longer than the internal one; and coxae II and III each with one short spur. Nymphs present basis capituli rectangular with a sharp pointed cornua; oval idiosoma with scutum reaching coxa III; coxa I with two evident spurs, the external one being longer than the internal one; coxae II-III each with one short spur; and coxa IV with a very short spur and chitinous tubercles on internal surface of posterior border of idiosoma. These morphological features, in association with chaetotaxy and porotaxy, should make possible the identification of immature Amblyomma ticks.