Abstract The therapeutic potential of medicinal plants is known as an alternative in treatment of human affections; in effect, the conventional application of these medicinal sources has several limitations like low bioavailability, solubility and stability, which affect its pharmacological efficacy. In recent decades, extraordinary advances have been made in new drug delivery systems using nanocarriers. This work consisted in determining the in vitro antifungal activity of the methanolic extract of Euphorbia tirucalli formulated in polymeric nanoparticles. The antifungal activity was determined by the microdilution method in 96-well microplates, applying nanoparticles loaded with plant extract (NP-Ext) obtained by nanoprecipitation on clinical isolates of Trichophyton rubrum and T. interdigitalis. Regarding the nanoparticles, the lots used did not present significant differences in their physicochemical characteristics, with a size of 91.885 ± 1.621nm, polydispersity index of 0.152 ± 0.025 and Z-potential of -6.047 ± 0.987. The quantification of the extract in the polymeric matrix was determined by infrared spectroscopy (FTIR), where an efficiency and encapsulation percentage of 22.15 ± 0.82 and 2.95 ± 0.11, respectively, were obtained. The in vitro antifungal activity of the crude and formulated extract was obtained calculating the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of each one; a MIC of 125 µg/mL was obtained against T. rubrum and T. interdigitalis with the crude extract, while a MIC value of 55.55 and 0.1 µg/mL was obtained with NP-Ext, respectively, against these same. Conclusions: biological activity is closely linked to the phytochemical profile of the extract; while the improvement of said potential with the NP-Ext with the dosage form was directly related to the physicochemical characteristics of the nanocarrier. affections effect bioavailability stability efficacy decades nanocarriers 96well well 96 microplates NPExt NP Ext (NP-Ext T 91885 91 885 91.88 1621nm nm 1 621nm 1.621nm 0152 0 152 0.15 0025 025 0.02 Zpotential Z 6.047 6047 6 047 -6.04 0987 987 0.987 FTIR, FTIR , (FTIR) 2215 22 15 22.1 082 82 0.8 295 2 95 2.9 011 11 0.11 respectively (MIC one 12 µgmL µg mL 5555 55 55.5 01 0. NPExt, Ext, same Conclusions nanocarrier 9 9188 88 91.8 015 002 02 0.0 6.04 604 04 -6.0 098 98 0.98 (FTIR 221 22. 08 8 29 2. 555 5 55. 918 91. 00 6.0 60 -6. 09 0.9 6. -6 -

Resumo O potencial terapêutico das plantas medicinais é conhecido como alternativa para o tratamento das afecções humanas. Com efeito, a aplicação convencional dessas fontes medicinais apresenta diversas limitações, como baixa biodisponibilidade, solubilidade e estabilidade, que afetam sua eficácia farmacológica. Nas últimas décadas, avanços extraordinários foram feitos em novos sistemas de liberação de fármacos usando nanocarreadores. Este trabalho consistiu na determinação da atividade antifúngica in vitro do extrato metanólico de Euphorbia tirucalli, formulado em nanopartículas poliméricas. A atividade antifúngica foi determinada pelo método de microdiluição em microplacas de 96 poços, aplicando-se nanopartículas carregadas com extrato vegetal (NP-Ext) obtido por nanoprecipitação sobre isolados clínicos de Trichophyton rubrum e Trichophyton interdigitalis. Em relação às nanopartículas, os lotes utilizados não apresentaram diferenças significativas em suas características físico-químicas, com tamanho de 91,885 ± 1,621 nm, índice de polidispersão de 0,152 ± 0,025 e potencial Z de -6,047 ± 0,987. A quantificação do extrato na matriz polimérica foi determinada por espectroscopia de infravermelho (FT/IR), em que foram obtidas eficiência e porcentagem de encapsulamento de 22,15 ± 0,82 e 2,95 ± 0,11, respectivamente. A atividade antifúngica in vitro do extrato bruto e formulado foi calculada por meio da Concentração Inibitória Mínima (CIM) de cada um. Obteve-se uma CIM de 125 µg/mL contra T. rubrum e T. interdigitalis com o extrato bruto, enquanto o valor de CIM com NP-Ext contra estes mesmos fungos foi de, respectivamente, 55,55 e 0,1 µg/mL. Conclusões: a atividade biológica está intimamente ligada ao perfil fitoquímico do extrato, enquanto a melhora desse potencial com o NP-Ext com a forma farmacêutica esteve diretamente relacionada às características físico-químicas do nanocarreador. humanas efeito limitações biodisponibilidade estabilidade farmacológica décadas nanocarreadores tirucalli poliméricas 9 poços aplicandose aplicando se NPExt NP Ext (NP-Ext físicoquímicas, físicoquímicas físico químicas, químicas 91885 91 885 91,88 1621 1 621 1,62 nm 0152 0 152 0,15 0025 025 0,02 6,047 6047 6 047 -6,04 0987 987 0,987 FT/IR, FTIR FT/IR , FT IR (FT/IR) 2215 22 15 22,1 082 82 0,8 295 2 95 2,9 011 11 0,11 respectivamente (CIM um Obtevese Obteve 12 µgmL µg mL T 5555 55 55,5 01 0, Conclusões nanocarreador 9188 88 91,8 162 62 1,6 015 002 02 0,0 6,04 604 04 -6,0 098 98 0,98 (FT/IR 221 22, 08 8 29 2, 555 5 55, 918 91, 16 1, 00 6,0 60 -6, 09 0,9 6, -6 -

An alternative to solve dormancy problems, in vitro clonal propagation and interesting biomolecules isolation, is the tissue culture technique, objective of this work was to induce germination and establish of callus culture of Rubus adenotrichus. Three scarification methods were tested: 1) inmersion in sulfuric acid (30 and 60 min), 2) inmersion in sodium hipoclorite for 72 h, and 3) removal of seed coat. The cover removal was the best scarification treatment, it obtained the highest germination percentage (68%) in media MS without regulators, the developed plants have the morphologic characteristics of wild plants. For callus induction explants of leaves MS and WPM (Woody Plant Medium) media were used. Both, MS (with α-naphthalene-acetic acid 1 mg/L and kinetin 0.5 mg/L) and WPM (with 2,4-dichlorophenoxiacetic acid 0.5 mg/L and kinetin 0.75 mg/L) developed friable and pigmented callus. In this species the scarification process is essential for germination. MS and WPM media and plant growth regulators added are promoter of callus friable.

Una alternativa para resolver problemas de dormancia, obtención masiva de plantas y biomoléculas de interés es el cultivo in vitro, el objetivo de este trabajo fue inducir la germinación y establecer el cultivo de callo de Rubus adenotrichus. Se probaron tres métodos de escarificación: 1) inmersión en ácido sulfúrico (30 y 60 min), 2) inmersión en hipoclorito de sodio (72 h) y 3) remoción de la cubierta de la semilla, este último tratamiento fue el mejor, generando un 68% de porcentaje de germinación, en medio Murashige Skoog (MS) sin reguladores. Las plántulas obtenidas tuvieron un desarrollo similar al de las plantas silvestres. Para la inducción de callo, se emplearon hojas de plantas silvestres como explantes y fueron colocadas en dos tipos de medio: MS, con 1 mg/L de ácido naftalenacético y 0.5 mg/L cinetina) y Woody Plant Medium (WPM) con 0.5 mg/L de ácido 2,4-diclorofenoxiacético y 0.75 mg/L de cinetina. En ambos medios se desarrolló un callo friable y pigmentado. El proceso de escarificación es fundamental para la germinación de esta especie. El empleo de los medios MS y WPM, con los reguladores adicionados son promotores de la producción de callos friables.

Four dynamic conditions to evaluate the effects of stress on production of biomass, essential oils, Tymol, carvacrol and proline accumulation in Lippia graveolens H.B.K. were investigated under greenhouse conditions. A bifactorial design assessed four environmental conditions (factor B): commercial nutritive solution (B0); Water (B1); moderate stress (B2), and intermediate (B3) stress nested under (Factor A) salinity (NaCl) and ion concentration (Cu2+) and (Fe2+) stresses. Average production of fresh weight and number of leaves were reduced under NaCl and both ion concentration conditions. However, there were no significant differences on average for the four environments. The amounts of essential oils were significantly higher under the stressful environments with Fe2+ and Cu2+ at both concentrations. The average percentages of Tymol and carvacrol were higher under both study concentrations of Cu2+ and Fe2+ than under NaCl. The greater values for Tymol and carvacrol were observed under moderate stress intensity. Accumulation of proline was greater in the root than in the foliage. Stressful conditions of ionic elements at both intensities determine greater proline accumulation. High proline accumulation, however, was also observed under non-stressful conditions. A positive correlation (r = 0.997) between production of essential oils and proline accumulation was shown. The stress induced with salinity and ions Cu2+ and Fe2+ led to a greater accumulation of secondary metabolites.

Se investigaron cuatro condiciones de manejo para evaluar los efectos de estrés sobre la producción de biomasa, aceites esenciales, timol y carvacrol, y acumulación de prolina en Lippia graveolens H.B.K. bajo condiciones de invernadero. En un diseño bifactorial se evaluaron cuatro condiciones o ambientes (Factor B): Solución nutritiva comercial (B0); Agua (B1); estrés moderado (B2) e intermedio (B3), anidados en condiciones estresantes (Factor A): salinidad (NaCl) y concentración iónica (Cu2+) y (Fe2+). La producción de peso fresco y número de hojas fue reducida por el NaCl y las concentraciones de Cu2+ y Fe2+. Sin embargo, en el promedio de los cuatro ambientes no se observaron diferencias significativas. La cantidad de aceites esenciales fue significativamente mayor en el ambiente de estrés con Fe2+ y Cu2+ en ambas concentraciones. Los porcentajes promedio de timol y carvacrol fueron superiores en las concentraciones de Cu2+ y Fe2+ estudiadas. Los valores más altos para timol y carvacrol se observaron en los ambientes de inducción de estrés en intensidad moderada. La acumulación de prolina fue mayor en la raíz que en el follaje. Las condiciones estresantes de los elementos en ambas intensidades expusieron valores superiores en la acumulación de prolina. Sin embargo, los ambientes de no estrés también acumularon altas cantidades. Se mostró una correlación positiva (r = 0,997) entre la producción de aceites esenciales y prolina acumulada. El estrés inducido con salinidad y iones (Cu2+) y (Fe2+) derivó en mayor acumulación de metabolitos secundarios.

The antifungal activity of methanolic extracts from Ariocarpus kotschoubeyanus and A. retusus, two native xerophytes of northeastern Mexico, was determined on the fungal dermatophytes Trichophyton tonsurans, Microsporum canis and Microsporum cookei. Putative active metabolites were identified by phytochemical screening using evidence for functional groups; determination of antifungal activity was conducted by the disk-diffusion plate method as part of the process of understanding the chemistry and efficacy of these plant products. Doses tested were 125, 250 y 500 mg/mL. Extracts were positive for carbonyl groups, phenolic oxhidrils, sterols and methyl sterols, coumarins, sesquiterpenlactones, saponins, flavonoids and alkaloids. Extract from A. retusus (stem) yielded the greatest activity against Trichophyton tonsurans and Microsporum cookei. Univariate analysis of variance revealed that with regard to antifungal activity there were significant differences between fungi, culture media and analyzed doses with respect to positive control of ketoconazole. These results served to validate empirical knowledge about these plants in traditional medicine. These studies form a basis for further research in the search for bioactive compounds and the discovery of potential herbal medicaments.

Se determinó la actividad antifúngica in vitro de extractos metanólicos de Ariocarpus kotschoubeyanus y Ariocarpus retusus, plantas xerófitas del noreste del país, usadas en la medicina tradicional, sobre los hongos dermatofitos Trichophyton tonsurans, Microsporum canis y Microsporum cookei. Los metabolitos presentes se identificaron por tamizaje fitoquímico empleando pruebas para grupos funcionales, la determinación de actividad antifúngica se realizó por el método de difusión en placa empleando microdiscos, con la finalidad de entender la química y eficacia de estos productos vegetales, las dosis evaluadas de estos extractos fueron 125, 250 y 500 mg/mL. Los extractos resultaron positivos para grupos carbonilo, oxidrilos fenólicos, esteroles y metilesteroles, cumarinas, sesquiterpenlactonas, saponinas, flavonoides y alcaloides. El extracto que presentó mayor actividad fue el de Ariocarpus retusus (tallo) contra Trichophyton tonsurans y Microsporum cookei. El análisis estadístico de varianza univariante reveló que en cuanto a la actividad antifúngica, existe diferencia significativa entre hongos, medios de cultivo y dosis evaluadas de los extractos con respecto al control positivo de ketoconazol. Estos resultados sirvieron para validar el conocimiento empírico que se tiene acerca de estas plantas en la medicina tradicional. Siendo estos estudios una base para nuevas investigaciones sobre la búsqueda de compuestos bioactivos y el descubrimiento de medicamentos potenciales de productos herbales.

Methanolic extracts were obtained from both in vitro and ex vitro tissues of Astrophytum myriostigma to develop a phytochemical profile, probe antioxidant activity (DPPH 2, 2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) and evaluate amoebicid activity against Entamoeba histolytica HM1-IMSS. The phytochemical profile results indicate the presence of different secondary metabolites in callus and stem; whereas the callus has phenolic oxidrils and flavonoids, these are not present in the stem, which may cause the difference in the antioxidant activity between callus with an IC50 of 199.19 μg/mL and stem with 3961.39 μg/mL. The amoebicid activity was satisfactory with an IC50 of <100μg/mL for both extracts. The presence of these metabolites in callus of Astrophytum myriostigma is probably due to conditions and nutrients present in media.

Se determinó la actividad amebicida, antioxidante y perfil fitoquímico de extractos metanólicos de callo cultivado in vitro y secciones de tallo de planta ex vitro de Astrophytum myriostigma. Se obtuvieron extractos metanólicos de ambos tejidos para evaluar la actividad amebicida sobre Entamoeba histolytica HM1-IMSS, la actividad antioxidante (DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) y su perfil fitoquímico. Para ambos extractos, la actividad amebicida resultó satisfactoria con una concentración inhibitoria media menor de 100 μg/mL. Los resultados del perfil fitoquímico indican la presencia de metabolitos secundarios diferentes en callo y tallo, mientras que el callo, posee oxidrilos fenólicos y flavonoides, en tallo no están presentes, lo que puede ocasionar la diferencia en los resultados de la actividad antioxidante, para callo una concentración efectiva media de 199.19 μg/mL y para tallo de 3961.39 μg/mL. La presencia de estos metabolitos en callo de Astrophytum myriostigma, se debe probablemente a las condiciones y a los nutrientes presentes en el medio in vitro.

Culture media formulation has a direct influence on growth, morphology and physiology of cells. In this work, a mammalian cell culture medium was formulated based on peptone and yeast extract with an industrial reagent level. Three different mammalian cell lines, OK, CHANG y LLCPK-1 were successfully grown in a 25:75 mix of MEM:MD (MEM = control medium; MD = house medium) as determined by comparing cell growth parameters, cellular morphology and susceptibility to HgCl2 with those obtained from cells grown in MEM medium. A greater amount of MD in the mix 5:95 produced nuclear morphological changes, altered nucleus-cytoplasm relationship and did not support cell growth, which was possibly due to a toxic concentration of metals in the peptone and yeast extract and also to the low concentration of zinc in the yeast extract.

La composición de los medios de cultivo celular influye en la proliferación, morfología y fisiología de las células que se propagan en ellos. En el presente trabajo se diseñó un medio de cultivo a base de peptona y extracto de levadura grado industrial para adaptar las líneas celulares OK, CHANG y LLCPK-1. Las tres líneas celulares se cultivaron exitosamente en una mezcla 25:75 de MEM:MD (MEM = medio testigo; MD = medio diseñado) determinado por la comparación de los parámetros de crecimiento, morfología celular y susceptibilidad a HgCl2 con el medio testigo MEM. Una proporción mayor de MD en la mezcla 5:95 produjo alteraciones morfológicas del núcleo, en la relación núcleo-citoplasma y una disminución en el crecimiento que no permitió la evaluación de los otros parámetros. La falta de crecimiento de las células cultivadas en la mezcla 5:95 y las alteraciones morfológicas observadas posiblemente se debieron a la concentración de metales en niveles tóxicos en el extracto de levadura y la peptona, así como a una baja concentración de zinc en el extracto de levadura.