RESUMO Objetivo Investigar os genes que podem estar relacionados aos mecanismos que modulam a heparanase-1. Métodos A análise foi realizada na Universidade Federal de São Paulo, utilizando dados fornecidos por: The Cancer Genome Atlas, University of California Santa Cruz Genome Browser, Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes Pathway Database, Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery Bioinformatics Database e os softwares cBioPortal e Ingenuity Pathway Analysis. Resultados Usando o perfil de expressão de RNA mensageiro de diferentes subtipos moleculares de câncer de mama, propusemos que a heparanase-1 esteve correlacionada com a progressão tumoral. Além disso, os genes analisados apresentaram coexpressão com heparanase-1. Os resultados mostraram que a heparanase-1 coexpressa com proteína adaptadora 1 da fosfoinositídeo 3-quinase, lectina 7 tipo Ig de ligação ao ácido siálico e receptor 1 do tipo imunoglobulina associado a leucócitos, estes genes estão diretamente relacionados à evasão do sistema imune durante a progressão do câncer de mama. Além disso, a catepsina L foi coexpressa com a heparanase-1 e transformou a forma inativa da heparanase-1 em heparanase-1 ativa, desencadeando o remodelamento da matriz extracelular, o que contribuiu para a interação do tumor com o ambiente tumoral. Conclusão A análise utilizando bioinformática fornece evidências de possíveis mecanismos relacionados ao desenvolvimento do câncer de mama. Genes de evasão do sistema imune foram coexpressos com a heparanase-1, uma enzima relacionada à progressão tumoral.

ABSTRACT Objective To investigate the possible genes that may be related to the mechanisms that modulate heparanase-1. Methods The analysis was conducted at Universidade Federal de São Paulo, on the data provided by: The Cancer Genome Atlas, University of California Santa Cruz Genome Browser, Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes Pathway Database, Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery Bioinformatics Database and the softwares cBioPortal and Ingenuity Pathway Analysis. Results Using messenger RNA expression pattern of different molecular subtypes of breast cancer, we proposed that heparinase-1 was co-related with its progression. In addition, genes that were analyzed presented co-expression with heparanase-1. The results that showed that heparanase-1 co-expressed with phosphoinositide 3-kinase adapter protein 1, sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin 7, and leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 are directed related with immune system evasion during breast cancer progression. Furthermore, cathepsin L was co-expressed with heparanase-1 and transformed inactive heparanase-1 form into active heparanase-1, triggering extracellular matrix remodeling, which contributes to enhanced tumor-host interaction of the tumor. Conclusion The signaling pathway analysis using bioinformatics tools gives supporting evidence of possible mechanisms related to breast cancer development. Evasion genes of the immune system co-expressed with heparanase-1, a enzyme related with tumor progression.

Resumo Objetivo Investigar a ação da testosterona (T) isolada ou associada ao benzoato de estradiol (EB) na proliferação e apoptose de mamas de ratas ovariectomizadas. Métodos Um total de 48 ratas Wistar castradas foram divididas em 6 grupos, e cada um foi submetido a um dos seguintes tratamentos durante 5 semanas: 1) controle; 2) BE 50 mcg/dia + T 50mcg/dia; 3) T 50 mcg/dia; 4) BE 50 mcg + T 300mcg/dia; e) T 300 mcg/dia; e f) BE 50 mcg/dia. Após o tratamento, o tecido mamário foi submetido a análise histológica e avaliação de imunoexpressão de marcadores de proliferação (antígeno nuclear de células proliferantes, PCNA) e apoptose (caspase-3). Resultados Houve diferença estatisticamente significante entre os grupos com relação às microcalcificações e à atividade secretora, com maior prevalência nos grupos tratados com BE. Não houve diferença entre os grupos quanto à atrofia, mas houve maior prevalência de atrofia nos grupos que receberam T versus os que receberam BE+ T. Houve diferença entre os grupos quanto ao ANCP (p= 0,028), com maior expressão no grupo BE+ T 300 mcg/dia. Com relação à caspase-3, não houve diferença entre os grupos, mas, no grupo BE+ T 300 mcg/dia, a expressão foi maior do que no grupo de T isolada. Conclusão A T isolada não apresentou efeito proliferativo do tecido mamário, contrariamente ao EB. A T em associação ao EB pode diminuir ou não a proliferação, a depender da dose de T.

Abstract Objective To investigate the action of testosterone (T), isolated or associated with estradiol benzoate (EB), on the proliferation markers and apoptosis of breasts of ovariectomized rats. Methods A total of 48 castrated female Wistar rats were divided into 6 groups, and each of them were submitted to one of the following treatments for 5 weeks: 1) control; 2) EB 50 mcg/day + T 50 mcg/day; 3) T 50mcg/day; 4) EB 50 mcg +T 300 mcg/day; 5) T 300 mcg/day; and 6) EB 50 mcg/day. After the treatment, the mammary tissue was submitted to a histological analysis and immunoexpression evaluation of proliferation markers (proliferating cell nuclear antigen, PCNA) and apoptosis (caspase-3). Results There was a statistically significant difference among the groups regarding microcalcifications and secretory activity, with higher prevalence in the groups treated with EB. There was no difference among the groups regarding atrophy, but a higher prevalence of atrophy was found in the groups that received T versus those that received EB +T. There was a difference among the groups regarding the PCNA (p = 0.028), with higher expression in the group submitted to EB +T 300 mcg/day. Regarding caspase-3, there was no difference among the groups; however, in the group submitted to EB +T 300 mcg/day, the expression was higher than in the isolated T group. Conclusion Isolated T did not have a proliferative effect on the mammary tissue, contrary to EB. Testosterone in combination with EB may or may not decrease the proliferation, depending on the dose of T.

Resumo Objetivo Analisar os efeitos do estrogênio isolado ou em combinação com progestogênios e tibolona (TIB) na expressão das metaloproteinases 2 e 9 da matriz extracelular (MMP-2 e MMP-9), da perlecan e da heparanase (HPSE) das paredes vasculares das artérias carótidas. Métodos Trinta ratas Wistar ovariectomizadas com 250 dias de idade foram tratadas oralmente por 5 semanas com: a) 1 mg/kg de benzoato de estradiol (EB); b) EB + 0,2 mg/kg de acetato de medroxiprogesterona (MPA); c) EB + 0,2mg/kg de acetato de noretisterona (NETA); d) EB + 2 mg/kg de didrogesterona (DI); e) 1 mg/kg de TIB; f) placebo (CTR). Após o tratamento, a expressão de mRNA para MMP-2, MMP- 9, e HPSE foi analisada por reação em cadeia da polimerase (RCP) em tempo real, e a expressão de MMP-2, MMP-9, inibidor tecidual de metaloproteinase 2 (TIMP-2), e de perlecan foi quantificado por imunohistoquímica em artérias carótidas. Resultados Os grupos apresentaram diferenças significativas na expressão do mRNA HPSE (p = 0,048), sendo maiores nos grupos EB, EB + MPA e TIB. Não houve diferença estatisticamente significativa nas expressões de mRNA MMP-2 ou MMP-9. A expressão imunohistoquímica de MMP-2, TIMP-2, MMP-9, HPSE e perlecan não mostrou diferenças entre os grupos. Conclusão O estradiol isolado ou associado ao tratamento com MPA e TIB pode aumentar a expressão de mRNA HSPE nas paredes das artérias carótidas em ratas ovariectomizadas.

Abstract Objective To analyze the effects of estrogen alone or in combination with progestogens and tibolone (TIB) on the expression of the extracellular matrix metalloproteinases 2 and 9 (MMP-2 and MMP-9), of perlecan, and of heparanase (HPSE) of the vascular walls of the carotid arteries. Methods A total of 30 250-day-old ovariectomized Wistar rats were orally treated for 5 weeks with: a) 1 mg/kg of estradiol benzoate (EB); b) EB + 0.2 mg/kg of medroxyprogesterone acetate (MPA); c) EB + 0.2mg/kg of norethisterone acetate (NETA); d) EB + 2 mg/kg of dydrogesterone (DI); e) 1 mg/kg of TIB; f) placebo (CTR). Following treatment, the expression of mRNA for MMP-2, MMP-9, and HPSE was analyzed by realtime polymerase chain-reaction (PCR), and the expression of MMP-2, of MMP-9, of tissue inhibitor of metalloproteinase 2 (TIMP-2), and of perlecan was quantified by immunohistochemistry in the carotid arteries. Results The groups showed significant differences on mRNA HPSE expression (p = 0.048), which was higher in the EB, EB + MPA, and TIB groups. There was no statistically significant difference in mRNA MMP-2 or MMP-9 expression. The immunohistochemical expression of MMP-2, of TIMP-2, of MMP-9, of HPSE, and of perlecan showed no differences between groups. Conclusion Estradiol alone or associated with MPA and TIB treatment can increase mRNA HSPE expression of the walls of the carotid arteries in ovariectomized rats.

RESUMO Objetivo: Avaliar os níveis de fatores inflamatórios nos discos intervertebrais (interleucina 6) e proteinase (catepsina B) em pacientes com doença degenerativa de disco intervertebral, além de verificar os níveis séricos de interleucina 6, ácido hialurônico e atividade sérica da catepsina B. Métodos: Foi realizado exame imuno-histoquímica dos discos intervertebrais de pacientes com doença degenerativa e fratura da coluna (Grupo Controle) e análise do plasma de pacientes com doença degenerativa de disco intervertebral. Como controle, foram utilizados plasma de pacientes com fraturas, além de indivíduos saudáveis. Resultados: Interleucina 6 e catepsina B sugerem relação com a fisiopatologia da doença degenerativa de disco intervertebral, uma vez que os níveis de ambos foram maiores nos discos de pacientes com doença degenerativa de disco intervertebral. Interleucina 6 e catepsina B não representam bons biomarcadores da doença degenerativa do disco intervertebral, já que também encontram níveis aumentados em plasma de pacientes com fratura. Conclusão: O ácido hialurônico é um possível biomarcador de doença degenerativa de disco intervertebral, porque os níveis de ácido hialurônico foram maiores apenas em plasma de pacientes com doença degenerativa de disco intervertebral.

ABSTRACT Objective: To evaluate intervertebral disc levels of inflammatory factor (interleukin 6) and proteinase activity (cathepsin B) in patients with a degenerative disease and serum levels of interleukin 6, serum cathepsin B activity and hyaluronic acid biomarkers. Methods: We conducted immunohistochemistry studies of intervertebral discs to analyze interleukin 6 and cathepsin B levels of patients with degenerative disease and spine fracture (Control Group) and to measure hyaluronic acid, interleukin 6 and cathepsin B activity from sera of intervertebral disc degeneration patients, fracture patients, and healthy individuals. Results: Interleukin 6 and cathepsin B seem to be related with physiopathology of intervertebral disc degeneration, since the levels of both were higher in discs of patients with intervertebral disc degeneration. Interleukin 6 and cathepsin B do not represent good biomarkers of degenerative intervertebral disc disease, since the level of such compounds is increased in the plasma of patients with fractures. Conclusion: Hyaluronic acid can be a biomarker for intervertebral disc degeneration, because hyaluronic acid levels were higher only in sera of patients with intervertebral disc degeneration.

ABSTRACT Purpose: The present study evaluates chondroitin sulfate (CS) and heparan sulfate (HS) in the urine and hyaluronic acid (HA) in the plasma of patients with prostate cancer before and after treatment compared to a control group. Materials and Methods: Plasma samples were used for HA dosage and urine for quantification of CS and HS from forty-four cancer patients and fourteen controls. Clinical, laboratory and radiological information were correlated with glycosaminoglycan quantification by statistical analysis. Results: Serum HA was significantly increased in cancer patients (39.68 ± 30.00 ng/ mL) compared to control group (15.04 ± 7.11 ng/mL; p=0.004) and was further increased in high-risk prostate cancer patients when compared to lower risk patients (p = 0.0214). Also, surgically treated individuals had a significant decrease in seric levels of heparan sulfate after surgical treatment, 31.05 ± 21.01 μg/mL (before surgery) and 23.14 ± 11.1 μg/mL (after surgery; p=0.029). There was no difference in the urinary CS and HS between prostate cancer patients and control group. Urinary CS in cancer patients was 27.32 ± 25.99 μg/mg creatinine while in the men unaffected by cancer it was 31.37 ± 28.37 μg/mg creatinine (p=0.4768). Urinary HS was 39.58 ± 32.81 μg/ mg creatinine and 35.29 ± 28.11 μg/mg creatinine, respectively, in cancer patients and control group (p=0.6252). Conclusions: Serum HA may be a useful biomarker for the diagnosis and prognosis of prostate cancer. However, urinary CS and HS did not altered in the present evaluation. Further studies are necessary to confirm these preliminary findings.

RESUMO Objetivo Determinar a presença de glicosaminoglicanos na matriz extracelular do tecido conjuntivo colorretal neoplásico e não neoplásico, tendo em vista seu papel central no desenvolvimento e na progressão dos tumores. Métodos Amostras de tecidos colorretais neoplásicos e não neoplásicos foram obtidas de 64 pacientes operados com carcinoma colorretal sem metástases a distância. As expressões de heparan sulfato, sulfato de condroitina e sulfato de dermatan e seus fragmentos foram analisadas por espectrometria de massa por ionização por electrospray, com técnica de extração e quantificação de glicosaminoglicanos após proteólise e eletroforese. Para análise estatística, utilizaram-se média, desvio padrão e teste t de Student. Resultados Em gel de agarose, os glicosaminoglicanos extraídos de tecido colorretal mostraram três bandas eletroforéticas. A espectrometria de massa por ionização por electrospray mostrou fragmentos de dissacarídeos característicos de glicosaminoglicanos e indicou sua característica estrutural. Alguns picos na espectrometria de massa por ionização por electrospray não foram caracterizados como fragmentos de açúcares, sugerindo a presença de fragmentos de proteínas estruturais dos proteoglicanos, formadas durante a purificação dos glicosaminoglicanos. A quantidade média de condroitina e dermatan aumentou no tecido neoplástico em relação ao tecido normal (p=0,01). Por outro lado, a quantidade média de heparan foi menor no tecido neoplásico em relação ao tecido normal (p=0,03). Conclusão O método empregado permitiu determinar o perfil estrutural dos glicosaminoglicanos nas amostras. Tecidos neoplásicos apresentaram maiores quantidades de sulfato de condroitina e sulfato de dermatan em comparação com os não neoplásicos, enquanto o sulfato de heparan foi encontrado em menores quantidades nos tecidos neoplásicos.

ABSTRACT Objective To determine the presence of glycosaminoglycans in the extracellular matrix of connective tissue from neoplastic and non-neoplastic colorectal tissues, since it has a central role in tumor development and progression. Methods Tissue samples from neoplastic and non-neoplastic colorectal tissues were obtained from 64 operated patients who had colorectal carcinoma with no distant metastases. Expressions of heparan sulphate, chondroitin sulphate, dermatan sulphate and their fragments were analyzed by electrospray ionization mass spectrometry, with the technique for extraction and quantification of glycosaminoglycans after proteolysis and electrophoresis. The statistical analysis included mean, standard deviation, and Student’st test. Results The glycosaminoglycans extracted from colorectal tissue showed three electrophoretic bands in agarose gel. Electrospray ionization mass spectrometry showed characteristic disaccharide fragments from glycosaminoglycans, indicating their structural characterization in the tissues analyzed. Some peaks in the electrospray ionization mass spectrometry were not characterized as fragments of sugars, indicating the presence of fragments of the protein structure of proteoglycans generated during the glycosaminoglycan purification. The average amount of chondroitin and dermatan increased in the neoplastic tissue compared to normal tissue (p=0.01). On the other hand, the average amount of heparan decreased in the neoplastic tissue compared to normal tissue (p= 0.03). Conclusion The method allowed the determination of the glycosaminoglycans structural profile in colorectal tissue from neoplastic and non-neoplastic colorectal tissue. Neoplastic tissues showed greater amounts of chondroitin sulphate and dermatan sulphate compared to non-neoplastic tissues, while heparan sulphate was decreased in neoplastic tissues.

Objetivo Avaliar os efeitos da transferência gênica do VEGF165 no processo de remodelamento da matriz extracelular após infarto agudo do miocárdio. Métodos Ratos Wistar foram submetidos ao infarto do miocárdio por ligação da artéria coronária descendente esquerda, e a fração de ejeção de ventrículo esquerdo foi utilizada para classificar os infartos em grandes e pequenos. Os animais foram divididos em grupos de dez animais, de acordo com o tamanho do infarto (grande ou pequeno), e receberam ou não tratamento com o VEGF165. A avaliação dos diferentes marcadores foi realizada por imuno-histoquímica e quantificação digital. Os anticorpos primários utilizados foram antifibronectina, antivimentina, anti- CD44, anti-E-caderina, anti-CD24, anti-alfa-1-actina e anti-PCNA. Os resultados foram representados como média e erro padrão, e analisados por ANOVA, sendo considerado estatisticamente significativo se p≤0,05. Resultados Houve aumento significativo da expressão de marcadores de células indiferenciadas, como fibronectina (proteína presente na matriz extracelular) e CD44 (glicoproteína presente nas células endoteliais). Entretanto, houve diminuição da expressão de vimentina e PCNA, indicando possível diminuição do processo de proliferação celular após o tratamento com VEGF165. Os marcadores de células diferenciadas, E-caderina (proteína de adesão entre as células do miocárdio), CD24 (proteína presente nos vasos sanguíneos) e alfa-1-actina (marcador especifico de miócitos) também apresentaram maior expressão nos grupos submetidos à terapia gênica, comparativamente com o grupo não tratado. O valor obtido pela relação entre alfa-1-actina e vimentina foi aproximadamente três vezes maior nos grupos tratados com VEGF165, indicando maior diferenciação tecidual. Conclusão O papel dos miócitos se mostrou importante no processo de remodelamento tecidual, confirmando que o VEGF165 parece conferir um efeito protetor no tratamento do infarto agudo do miocárdio.

Objective Evaluate the effects of VEGF165 gene transfer in the process of remodeling of the extracellular matrix after an acute myocardial infarct. Methods Wistar rats were submitted to myocardial infarction, after the ligation of the left descending artery, and the left ventricle ejection fraction was used to classify the infarcts into large and small. The animals were divided into groups of ten, according to the size of infarcted area (large or small), and received or not VEGF165 treatment. Evaluation of different markers was performed using immunohistochemistry and digital quantification. The primary antibodies used in the analysis were anti-fibronectin, anti-vimentin, anti-CD44, anti-E-cadherin, anti-CD24, anti-alpha-1-actin, and anti-PCNA. The results were expressed as mean and standard error, and analyzed by ANOVA, considering statistically significant if p≤0.05. Results There was a significant increase in the expression of undifferentiated cell markers, such as fibronectin (protein present in the extracellular matrix) and CD44 (glycoprotein present in the endothelial cells). However, there was decreased expression of vimentin and PCNA, indicating a possible decrease in the process of cell proliferation after treatment with VEGF165. Markers of differentiated cells, E-cadherin (adhesion protein between myocardial cells), CD24 (protein present in the blood vessels), and alpha-1-actin (specific myocyte marker), showed higher expression in the groups submitted to gene therapy, compared to non-treated group. The value obtained by the relation between alpha-1-actin and vimentin was approximately three times higher in the groups treated with VEGF165, suggesting greater tissue differentiation. Conclusion The results demonstrated the important role of myocytes in the process of tissue remodeling, confirming that VEGF165 seems to provide a protective effect in the treatment of acute myocardial infarct.

OBJETIVO: Avaliar a expressão das metaloproteinases e do TGFb em pacientes com estenose do canal vertebral e em pacientes mais jovens que apresentam hérnia de disco. MÉTODOS: Foram analisadas 19 amostras de LA, sendo nove de pacientes com estenose de canal lombar e 10 de pacientes com hérnia discal. Do total, cinco pacientes tinham de 15 a 40 anos, 10 tinham de 40 a 65 anos e quatro tinham mais de 65 anos. As áreas representativas do LA foram escolhidas com base na coloração dos tecidos por hematoxilina-eosina. Os cortes de 3 µm de espessura incluídos em parafina e fixados em formalina foram desparafinizados e reidratados. Todos os ligamentos foram incubados overnight a 4 ºC com os anticorpos primários. RESULTADOS: Constatou-se aumento do TGFb em indivíduos mais velhos, embora sem significância estatística. CONCLUSÃO: As metaloproteinases não apresentaram diferença importante entre os grupos tanto com relação à idade quanto ao tipo de alteração da coluna vertebral.

OBJECTIVE: To evaluate the expression of matrix metalloproteinases and TGFb in patients with spinal stenosis and in younger patients who have herniated disc. METHODS: 19 samples of LA were analyzed, nine of them with lumbar canal stenosis and 10 with disc herniation. Of the total, five patients were aged between 15 and 40 years, 10 were between 40 and 65 years and four had more than 65 years. Representative areas of LF were chosen based on the staining of tissues with hematoxylin-eosin. The 3µm-thick sections embedded in paraffin and fixed in formalin were deparaffinized and rehydrated. All ligaments were incubated overnight at 4 °C with primary antibodies. RESULTS: An increase of TGFb was verified in older individuals, although without statistical significance. CONCLUSION: Metalloproteinases showed no significant difference between both groups with respect to age and type of abnormality of the spine.

OBJETIVO: Evaluar la expresión de metaloproteinasas de la matriz y del TGFb en pacientes con estenosis espinal y en pacientes más jóvenes que tienen una hernia de disco. MÉTODOS: Diecinueve muestras de LA fueron enviadas, de nueve pacientes con estenosis del canal lumbar y diez pacientes con hernia de disco. Del total de pacientes, cinco tenían de 15 a 40 años, 10 tenían de 40 a 65 años y cuatro tenían más de 65 años. Áreas representativas de LA se eligieron sobre la base de la tinción de los tejidos con hematoxilina-eosina. Las secciones de 3 µm de espesor, incluidas en parafina y fijadas en formalina fueron desparafinadas y rehidratadas. Todos los ligamentos se incubaron durante la noche a 4 °C con anticuerpos primarios. RESULTADOS: Se encontró un aumento de TGFb en personas mayores, aunque sin significación estadística. CONCLUSIÓN: Las metaloproteinasas no mostraron diferencias significativas entre ambos grupos con respecto a la edad y el tipo de anomalía de la columna vertebral.

OBJETIVO: Avaliar a remodelação da matriz extracelular na degeneração do disco intervertebral através do modelo experimental degeneração do disco intervertebral. MÉTODOS: O modelo de indução da degeneração discal, utilizando agulha 20G e rotação de 360º, foi aplicado por 30 segundos entre a sexta/sétima e oitava / nona vértebras coccígeas de ratos machos da linhagem Wistar. O nível intermediário, entre a sétima e oitava vértebras, foi tomado como controle, não sendo submetido à punção. A distribuição de constituintes da matriz extracelular envolvidos com mecanismos de remodelamento e inflamação, como proteoglicanos (agrecam, decorim, biglicam), fatores de crescimento (TGFβ), isoformas de heparanase (HPSE1, HPSE2), metaloprotease-9 (MMP9) e interleucinas (IL-6, IL-10) foram avaliadas no período pós-lesão (15 e 30 dias) e no grupo controle (discos coletados imediatamente após a punção, dia zero). No 15º dia, fase aguda da doença, notou-se redução da expressão dos constituintes da matriz extracelular, porém não houve diferenças na expressão de interleucinas. Aos 30 dias, as moléculas seguiram um padrão de expressão muito similar ao grupo controle (não acometido por degeneração discal). RESULTADOS: Os resultados mostram que na fase aguda ocorrem alterações significativas na matriz extracelular e, na fase tardia, o disco intervertebral retorna a um perfil semelhante ao tecido não acometido por degeneração, provavelmente devido a um intenso processo de remodelamento da matriz extracelular que é capaz de regenerar o tecido lesionado. CONCLUSÃO: O modelo experimental utilizado demonstrou a ocorrência de alterações significativas da matriz extracelular durante o período analisado após a indução da degeneração do disco intervertebral. Trabalho experimental.

OBJECTIVE: To evaluate the remodeling of the extracellular matrix in intervertebral disc degeneration through the experimental model of intervertebral disc degeneration. METHODS: The model of disk degeneration induction, using needle 20G and 360º rotation, was applied for 30 seconds between the 6th/7th, and 8th/9th coccygeal vertebrae of Wistar rats. The intermediary level, between the 7th and 8th vertebrae, was taken as control, not being subjected puncture. The distribution of the extracellular matrix components involved in the remodeling and inflammation process, such as proteoglycans (aggrecan, decorin, biglycan), growth factors (TGFβ), heparanase isoforms (HPSE1, HPSE2), metaloprotesasis-9 (MMP9) and interleukins (IL-6, IL-10) was analyzed during the pos-injury period (15 to 30 days) and in the control group (discs collected immediately after the puncture, day zero). On the 15th day, acute phase of the disease, a reduced expression of extracellular matrix components had been observed, whilst there were no differences in the interleukins expression. At 30 days, the molecules followed a very similar pattern of expression in the control group (not affected by disc degeneration). RESULTS: The results show that during the acute phase significant alterations in the extracellular matrix components occur and in the late phase intervertebral disc returns to a profile similar to noninvolved tissue, probably due to extensive remodeling process of the extracellular matrix that is capable of regenerating the damaged tissue. CONCLUSION: Todos os autores declaram não haver nenhum potencial conflito de interesses referente a este artigo. Laboratory investigation.

INTRODUÇÃO: A visão clássica de tecido adiposo como um reservatório passivo para o armazenamento de energia não é mais válido. Na última década, o tecido adiposo tem demonstrado funções endócrinas, sendo o peptídeo mais abundante secretado pelos adipócitos a adiponectina. O tecido adiposo epicárdico (TAE) é distribuído em torno das artérias coronárias e, a lesão endovascular causada pela presença de stent metálico intracoronário, poderia promover alterações inflamatórias na gordura periadventicial, contribuindo para reestenose. OBJETIVO: Determinar a expressão gênica de mediadores inflamatórios no tecido adiposo epicárdico após implante de stent metálico com reestenose que haviam sido encaminhados para tratamento cirúrgico. MÉTODOS: Amostras pareadas de TAE foram colhidas no momento da cirurgia de revascularização miocárdica (CRM) em 11 pacientes (n = 22), uma amostra foi obtida do tecido em torno da area com stent e outra amostra em torno da artéria coronária sem stent. Expressão local de adiponectina foi determinada por reação em cadeia de polymerase em tempo real utilizando Taq DNA polimerase. RESULTADOS: Em duas amostras, não houve expressão do gene da adiponectina. Fomos capazes de identificar adiponectina em 20 amostras, no entanto, o padrão de expressão gênica foi heterogêneo. Não percebemos especificidade quando comparamos TAE obtido próximo à área de stent ou distante da área de stent. CONCLUSÃO: Não houve correlação entre a expressão do gene de adiponectina e a presença de stent intracoronário

BACKGROUND: The classical view of adipose tissue as a passive reservoir for energy storage is no longer valid. In the past decade, adipose tissue has been shown to have endocrine functions and the most abundant peptide secreted by adipocytes is adiponectin. Pericardial adipose tissue (PAT) is distributed around coronary arteries and endovascular injury, caused by the presence of intracoronary bare-metal stent (BMS), could promote inflammatory changes in the periadvential fat, contributing to vascular restenosis. OBJECTIVE: We sought to determine gene expression of inflammatory mediator in pericardial adipose tissue after bare-metal stent implantation and vascular restenosis that had been referred to operative treatment. METHODS: Paired samples of PAT were harvested at the time of elective coronary artery bypass surgery (CABG) in 11 patients (n=22), one sample was obtained of the tissue around BMS area and another sample around coronary artery without stent. Local expression of adiponectin was determined by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) using Taq DNA polymerase. RESULTS: In two samples, there was no gene expression of adiponectin. We are able to identify adiponectin in 20 samples, however, the pattern of gene expression were heterogeneous.We did not notice specificity when we compared PAT obtained near BMS area or far from BMS area. CONCLUSION: There were no correlation between adiponectin gene expression and presence of BMS

OBJETIVO: Nosso estudo tem o objetivo de estudar as alterações histopatológicas, tais como neovascularização, infiltrado inflamatório, celularidade, apoptose, degeneração mucoide, alterações granulares e calcificação presentes nos tipos de hérnia (contida e extrusa), e também avaliar essas diferenças entre o núcleo pulposo e ânulo fibroso. MÉTODOS: Foram analisados 65 discos lombares, os quais foram divididos em três grupos: hérnia extrusa com 25 casos, hérnia contida com 28 casos e 12 discos sem alteração degenerativa. Os fragmentos removidos foram separados em ânulo fibroso e núcleo pulposo. Foi realizada análise semiquantitativa por microscopia óptica das alterações histopatológicas. RESULTADO: Em relação aos parâmetros avaliados na análise comparativa entre ânulo fibroso e núcleo pulposo não houve variação estatística significativa entre os grupos, o que mostra que ambas as regiões são semelhantes. A hérnia extrusa apresentou maior proporção de infiltrado inflamatório e neovascularização. As alterações degenerativas não apresentaram uma variação significante conforme o tipo de hérnia. CONCLUSÕES: Na hérnia de disco há uma relação entre neovascularização, infiltrado inflamatório e o tipo de hérnia. Não há diferença histopatológica em relação à porção do disco intervertebral analisada.

OBJECTIVE: to investigate histopathological changes such as neovascularization, inflammatory infiltrate, cellularity, apoptosis, mucoid degeneration, granular changes, and calcification in contained and extruded disc herniations, and to compare these differences in the nucleus pulposus and annulus fibrosus. METHODS: 65 lumbar discs were evaluated. These were divided in three groups: 25 cases of extruded herniated discs, 28 cases of contained herniated discs, and 12 cases of discs without degenerative changes. Fragments were removed and separated into annulus fibrosus and nucleus pulposus. Semi-quantitative analysis of histopathologic changes was carried out, using a microscope. RESULTS: in the comparative analysis between annulus fibrosus and nucleus pulposus, no statistical differences were obtained between these groups, showing that both regions are similar. The extruded disc herniation presented a higher proportion of inflammatory infiltrate and neovascularization. Degenerative changes did not present significant variation in relation to disc herniation type. CONCLUSION: There is a relation in disc herniation between neovascularitazion, inflammatory infiltrate and type of disc herniation. There is no histopathologic difference in relation of the portion of intervertebral disc analyzed.

OBJETIVO: Nuestro estudio tiene el objetivo de analizar las alteraciones histopatológicas tales como neovascularización, infiltrado inflamatorio, celularidad, apoptosis, degeneración mucoide, alteraciones granulares y calcificación, presentes según los tipos de hernia (contenida y extruida), así como evaluar esas diferencias entre el núcleo pulposo y el anillo fibroso. MÉTODOS: Se analizaron 65 discos lumbares, que se dividieron en tres grupos: hernia extruida en 25 casos, hernia contenida en 28 casos y 12 discos sin alteración degenerativa. Los fragmentos extraídos se separaron en anillo fibroso y núcleo pulposo. Se llevó a cabo un análisis semicuantitativo por microscopia óptica de las alteraciones histopatológicas. RESULTADO: Respecto a los parámetros evaluados en el análisis comparativo entre anillo fibroso y núcleo pulposo, no se produjo variación estadística significativa entre los grupos, lo cual muestra que ambas regiones son semejantes. La hernia extruida presentó una mayor proporción de infiltrado inflamatorio y neovascularización. Las alteraciones degenerativas no presentaron una variación significativa según el tipo de hernia. CONCLUSIONES: En la hernia discal hay una relación entre neovascularización, infiltrado inflamatorio y tipo de hernia. No hay diferencia histopatológica respecto a la parte del disco intervertebral analizada.

OBJECTIVE: To determine the molecules involved in extracellular matrix remodeling and to identify and quantify heparanase isoforms present in herniated and degenerative discs. INTRODUCTION: Heparanase is an endo-beta-glucuronidase that specifically acts upon the heparan sulfate chains of proteoglycans. However, heparanase expression in degenerative intervertebral discs has not yet been evaluated. Notably, previous studies demonstrated a correlation between changes in the heparan sulfate proteoglycan pattern and the degenerative process associated with intervertebral discs. METHODS: Twenty-nine samples of intervertebral degenerative discs, 23 samples of herniated discs and 12 samples of non-degenerative discs were analyzed. The expression of both heparanase isoforms (heparanase-1 and heparanase-2) was evaluated using immunohistochemistry and real-time RT-PCR analysis. RESULTS: Heparanase-1 and heparanase-2 expression levels were significantly higher in the herniated and degenerative discs in comparison to the control tissues, suggesting a possible role of these proteins in the intervertebral degenerative process. CONCLUSION: The overexpression of heparanase isoforms in the degenerative intervertebral discs and the herniated discs suggests a potential role of both proteins in the mediation of inflammatory processes and in extracellular matrix remodeling. The heparanase-2 isoform may be involved in normal metabolic processes, as evidenced by its higher expression in the control intervertebral discs relative to the expression of heparanase-1.

INTRODUÇÃO: Os marcadores séricos têm sido empregados na avaliação da fibrose hepática em pacientes portadores de hepatite crônica C (HCC). OBJETIVOS: Avaliar a capacidade do índice aspartato aminotransferase (AST)/alanina aminotransferase (ALT), dos níveis séricos de gama-glutamiltransferase (GGT), contagem de plaquetas, do índice AST/plaquetas (APRI) e do ácido hialurônico (AH) em predizer a intensidade da fibrose hepática na HCC e a variação desses marcadores após tratamento com interferon. PACIENTES E MÉTODOS: Em 72 pacientes portadores de hepatite C determinamos no soro o índice AST/ALT, GGT, plaquetas, índice APRI (obtido pelo quociente AST/plaquetas) e o AH, que foram comparados ao estadiamento histológico, segundo os critérios de METAVIR. Receberam tratamento com interferon e ribavirina 65 pacientes. Os indivíduos que concluíram o tratamento (n = 33) realizaram nova dosagem dos marcadores séricos de fibrose para comparar com os níveis pré-tratamento. RESULTADOS: Observamos que a GGT, a contagem de plaquetas, o índice APRI e o AH se correlacionaram com estádio de doença hepática (p < 0,01), exceto o índice AST/ALT. A análise das áreas sob as curvas ROC (AUC) evidenciaram que a melhor associação com estadiamento hepático foi para o índice APRI e a dosagem sérica do AH: AUC (APRI) = 0,85 e AUC (AH) = 0,86. Na avaliação pós-terapia com interferon, apenas a GGT e o índice APRI apresentaram redução de seus níveis (p < 0,05). CONCLUSÃO: O AH e o índice APRI apresentaram maior acurácia no estadiamento da fibrose, podendo ser aplicados como métodos diagnósticos alternativos na HCC.

INTRODUCTION: Serum markers have been used in the assessment of liver fibrosis in patients with chronic hepatitis C (CHC). AIMS: We evaluated the capacity of aspartate aminotransferase (AST)/alanine aminotransferase (ALT) ratio, gama-glutamyltransferase (GGT) levels, platelet count, the AST to platelet ratio index (APRI) and serum hyaluronic acid (HA) to predict the intensity of hepatic fibrosis in patients with CHC and the variation of these markers after therapy with interferon. PATIENTS AND METHODS: In 72 patients with hepatitis C, AST/ALT ratio, GGT levels, platelet count, the APRI index (calculated as the ratio of AST to platelets) and serum HA concentration were determined and compared to histological staging according to the scoring system of METAVIR. Sixty-five patients received interferon and ribavirin therapy. The individuals that completed the treatment (n = 33) underwent a new test for serum marker of fibrosis in order to compare it with pre-treatment levels. RESULTS: GGT levels, platelet count, the APRI index and serum HA were correlated with the stage of hepatic fibrosis (p < 0.01), except AST/ALT ratio. The analysis of the areas under the ROC curve (AUC) evidenced that APRI and HA levels were the markers with the best association with hepatic staging: AUC (APRI) = 0.85 and AUC (HA) = 0.86. After therapy with interferon, only GGT and the APRI showed reduction of their levels (p < 0.05). CONCLUSION: HA and the APRI index were the most accurate approaches to liver fibrosis staging and they may be used as alternative diagnostic methods in patients with CHC.

FUNDAMENTOS: Melanócitos amelanóticos inativos estão presentes no folículo piloso, constituindo reserva melanocítica no vitiligo. Procedimentos que provocam abrasão superficial da pele induzem a ativação e a migração de melanócitos do folículo piloso. OBJETIVO: Teve-se por objetivos avaliar: 1) o percentual médio do número de melanócitos em relação aos ceratinócitos na camada basal epidérmica e a presença de melanina à histopatologia; 2) a evolução clínica, após curetagem seqüencial em lesões de vitiligo. MÉTODOS: Foram avaliados 16 pacientes nos quais foi realizada seqüência de três curetagens superficiais a cada 30 dias, com biópsias pré-curetagem (controle) e 30 dias após cada curetagem. Coloração pela hematoxilina-eosina foi utilizada para contagem do percentual de melanócitos em relação aos ceratinócitos da camada basal epidérmica, e de Fontana-Masson para determinar a presença de melanina. A evolução clínica foi avaliada por documentação iconográfica. RESULTADOS: Observaram-se tendência ao aumento do percentual médio de melanócitos (p<0,10) e aumento estatisticamente significante da presença de melanina e de repigmentação cutânea (p<0,05) após a terceira curetagem. CONCLUSÕES: Uma seqüência de curetagens tende a elevar o percentual médio de melanócitos na camada basal epidérmica, induz a formação de grânulos de melanina e o aumento da repigmentação no vitiligo.

BACKGROUND: Inactive amelanotic melanocytes are found in hair follicles as a melanocytic reservoir in vitiligo. Procedures that cause superficial skin abrasion induce the activation and migration of melanocytes from hair follicles. OBJECTIVE: To evaluate 1) the proportion of melanocytes in relation to keratinocytes in the epidermal basal layer, and to the presence of melanin at histopathology and 2) the clinical progression after sequential curettage in vitiligo lesions. METHODS: Sixteen patients were evaluated and submitted to three surface curettages performed every 30 days, precurettage biopsy (control) and biopsies 30 days after each curettage. Hematoxylin-eosin staining was used to analyze the proportion of melanocytes and Fontana-Masson staining to determine melanin presence. Clinical progression was assessed through iconographic documentation. CONCLUSION: A sequence of curettages tends to increase the mean number of melanocytes in the epidermal basal layer, induce the melanin granule formation and enhance vitiligo repigmentation.

OBJETIVO: Comparar a quantificação da imunomarcação através de um método digital assistido por computador à bem estabelecida análise semiquantitativa. MÉTODO: A marcação citoplasmática de galectina-3 foi obtida por reações imunohistoquímicas em 25 casos de carcinoma bem-diferenciado da glândula tireóide. Determinou-se o índice de expressão da análise semiquantitativa que associa a convencional fração de área de células marcadas com os escores de intensidade da imunoexpressão, com base na observação visual qualitativa. O método digital assistido por computador foi desenvolvido com o uso de um programa de análise de imagem (ImageLab®). Três parâmetros foram obtidos: (1) porcentagem de células marcadas; (2) intensidade de imunoexpressão digital e (3) índice de expressão digital. O método proposto resulta na análise numérica da intensidade de imunoexpressão. RESULTADOS: Houve importante correlação entre as intensidades de imunoexpressão obtidas pelos dois métodos (coeficiente de correlação de Pearson, r=0,71, p=0,0001). O mesmo foi observado entre os índices de expressão (coeficiente de correlação de Pearson, r=0,66, p=0,0001). DISCUSSÃO: Os resultados de intensidade de imunoexpressão obtidos com o emprego do método digital assistido por computador foram concordantes com os escores da análise semiquantitativa. Entretanto, os resultados alcançados com o emprego do método digital podem resolver a discordância entre diferentes observadores com relação a esta intensidade de imunomarcação. Além disso, o método proposto não categoriza os resultados em grupos, o que torna a análise imunohistoquímica numericamente mensurável individualmente, aumentando seu poder diagnóstico e, sobretudo, prognóstico.

PURPOSE: To compare immunostaining quantification obtained by a digital computer-assisted method with the well-established semiquantitative analysis. METHODS: Cytoplasmic staining of galectin-3 was obtained by standard immunohistochemical reactions in 25 cases of well-differentiated thyroid carcinoma. The expression index that associates the conventional area fraction of labeled cells with the immunostaining intensity score based on visual qualitative observation was used as the semiquantitative analysis. A digital computer-assisted method is described based on the use of an image processing program (ImageLab®). Three parameters were obtained: (1) percentage of labeled cells; (2) digital immunostaining intensity, and (3) digital expression index. The proposed method allows numerical analysis of the immunostaining intensity. RESULTS: There was a strong correlation between the immunostaining intensity obtained by the two methods (Pearson correlation coefficient, r = 0.71, P = 0.0001). The same was observed between expression indexes (Pearson correlation coefficient, r = 0.66, P = 0.0001). CONCLUSION: Results obtained with our proposed digital computer-assisted method for immunoexpression analysis were concordant with the semiquantitative analysis. In addition, digital values can also resolve disagreement among different observers about the quality of staining intensity because the digital method does not classify the results into groups, but rather provides a numerical value for each individual case; thus, it increases the diagnostic and, more importantly, the prognostic sensitivity of the immunohistochemical analysis.