Marcadores microssatélite têm sido utilizados na determinação da pureza genética em programas de melhoramento e de produção de sementes, visando garantir a qualidade genética das sementes. Objetivou-se neste trabalho demonstrar, com auxílio de marcadores moleculares microssatélites, que variações na coloração do hilo em sementes de soja, muitas vezes não constituem variação genética. Foram avaliadas sementes de soja da cultivar CD 222 que apresenta sementes com hilo preto, e de duas linhagens (CD 02RV-8444 e CD 01RV-7618), as quais apresentam sementes com hilo marrom. As sementes com variações na coloração e tonalidade do hilo encontradas em cada genótipo foram separadas visualmente em grupos. O DNA de cada semente foi extraído e analisado com marcadores microssatélites em "bulks" contendo DNA de cinco sementes. As variações encontradas na coloração do hilo da cultivar CD 222 e da linhagem CD 02RV-8444 não foram devidas à variação genética, considerando 16 locos microssatélites. Para a linhagem CD 01RV-7618, os bulks de sementes com hilo marrom pigmentado de preto (B1), com hilo marrom mais intenso (B2) e intermediário (B3), foram considerados iguais. Para esta mesma linhagem foi detectada diferença no bulk de sementes com hilo marrom menos intenso (B4), com o primer Satt 070. Duas sementes deste bulk apresentaram o mesmo padrão molecular observado para os outros bulks, no mesmo loco. As demais sementes foram consideradas misturas. A utilização de marcadores microssatélites demonstra que variações na cor ou tonalidade do hilo da soja nem sempre correspondem à variação genética.

Microsatellite markers have been used in determining genetic purity in breeding programs and seed production to ensure seed genetic quality. The objective of this study was to demonstrate, with the aid of microsatellite molecular markers, that changes in the hilum color of soybean seeds are not necessarily related to genetic variation. Seeds of the CD 222 cultivar, showing a black hilum, and of two breeding lines (CD 02RV-8444 and CD 01RV-7618) showing a brown hilum, were evaluated. Seeds with color variation in the hilum of each genotype were visually separated into groups. The DNA of each seed was extracted and analyzed with microsatellite markers in DNA "bulks" of five seeds. The color variation found in the hilum of CD 222 and CD 02RV-8444 seeds did not show any genetic variation based on 16 microsatellite loci. For the CD 01RV-7618 line, the bulk of seeds with a brown-black hilum (B1), with an intense brown hilum (B2) and with an intermediary brown hilum (B3) showed the same molecular pattern. The seeds from the same line with a faint brown hilum (B4) showed a difference with the locus Satt070. Of the five seeds of this bulk, two showed the same molecular pattern of the other bulks at the same locus. The remaining seeds were considered mixtures. The use of microsatellite markers demonstrated that variations in color or tone of the soybean hilum do not always correspond to genetic variation.

Muitos métodos para determinar a presença de taninos são descritos na literatura, mas nenhum deles é universalmente aceito como ideal ou utilizado de forma unânime. Alguns métodos colorimétricos não diferenciam taninos de outros compostos fenólicos, outros utilizam substâncias que não são adequadas como padrão. Métodos que utilizam a capacidade dos taninos de precipitar as proteínas podem causar resultados divergentes devido às diferenças na conformação dessas moléculas. Assim, objetivou-se, neste estudo, identificar a presença de taninos em 10 híbridos de sorgo através da análise de padrões proteicos obtidos por eletroforese. O método colorimétrico Azul da Prússia foi utilizado para quantificar os taninos nas amostras. A precipitação das proteínas pelos taninos permitiu identificar os genótipos de sorgo com tanino através dos padrões proteicos das frações albuminas, globulinas e prolaminas. A análise eletroforética das prolaminas mostrou que as bandas produzidas pelo polipeptídeo kafirina, podem ser utilizadas na identificação de sorgo sem tanino no grão.

Several methods are described on the literature to determine the presence of tannin, however none of them is universally accepted as the ideal or even are used in a unanimous way. Some colorimetric methods do not differentiate tannins from others phenolic compounds, others use substances which are not appropriate to use as standard. Methods that use the capacity of tannins to precipitate proteins may end up with divergent results due to differences on the molecule conformation. Thus, the objective of this study was to identify the presence of tannin in 10 hybrids of sorghum throughout analysis of pattern proteins obtained by electrophoresis. The colored method Prussian Blue was used to quantify tannins on the samples. The protein precipitation by tannins permitted to identify the sorghum genotypes with grain tannin through protein standards of fractions of albumin, globulin and prolamins. The electrophoresis analysis of the prolamins showed that the bands produced by the kafirin polypeptide may be used in sorghum identification without the presence of tannin in grain.

O objetivo deste trabalho foi identificar as estirpes de Rhizobium mais efetivas e competitivas, a fim de maximizar a produtividade do feijoeiro por meio da fixação de nitrogênio, como alternativa à adubação nitrogenada. Foram conduzidos testes de competitividade em condições axênicas, em vasos com solo do Cerrado e em três experimentos de campo, com estirpes de Rhizobium nativas, previamente selecionadas quanto à efetividade e à variabilidade genética. A identificação das estirpes nos nódulos foi efetuada por meio das técnicas de aglutinação e ensaio imunoabsorvente de ligação de enzimas (Elisa), em condições de casa de vegetação, e pela técnica de DNA polimórfico amplificado ao acaso (RAPD), em solo de Cerrado. A produtividade das plantas foi determinada pela produção de matéria seca, teor de N e produção de grãos (condições de campo). A estirpe nativa SLA 2.2 e a estirpe comercial CIAT 899 foram dominantes nos nódulos das plantas das parcelas mais produtivas, com índices de produtividade iguais ou superiores aos obtidos nos tratamentos em que foram aplicados 20 kg ha-1 de N.

The objective of this work was to identify the most competitive and effective Rhizobium strains in order to increase common bean yield by nitrogen fixation as alternative or complementation to the nitrogen fertilization. Competitiveness tests were lead in axenic conditions, in Cerrado soil pots and in three field experiments, with native Rhizobium strains that were previously identified, according to their effectiveness and genetic variability. The identification of strains in nodules was performed using serological tests (axenic conditions) - agglutination and enzyme linked immunosorbent (Elisa) assays - and random amplified polymorfic DNA (RAPD) (Cerrado soil). Plant yield was determined using the dry weight (greenhouse conditions), total N and grain yield (field experiments). Among the analyzed Rhizobium strains, native strain SLA 2.2 and commercial strain CIAT 899 were the dominant nodules in plants of the most productive plots, presenting yield productivity similar or higher to those obtained in treatments where 20 kg ha-1 of N were applied.

Foram utilizados 22 isolados de vírus amostrados em diferentes regiões produtoras de milho do Brasil. Os vírus foram purificados e suas suspensões fornecidas a lagartas sadias do 3º e 4º ínstar de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith). A mortalidade foi avaliada diariamente, e as lagartas infectadas foram congeladas logo após sua morte, o que em geral ocorreu do 5º ao 7º dia após ingestão do vírus. Os isolados foram usados em seis concentrações (10³ a 10(8) poliedros/ml) e uma testemunha (água). Os percentuais de mortalidade, duração do período larval e período pupal, peso de pupa e a concentração letal (CL50) foram determinados para todos os isolados. Foram observadas diferenças significativas entre todos os isolados e concentrações testadas para todos os parâmetros avaliados, e também foi constatada a presença da interação isolado x concentração, exceto para período pupal. Os padrões de amplificação de 54 marcadores RAPD, sendo 41 polimórficos, foram utilizados para avaliar a distância genética e a sua correlação com os índices de mortalidade das lagartas. A divergência genética calculada pelo coeficiente Jaccard utilizando os dados moleculares permitiu dividir os isolados em dois grupos, com um elevada confiabilidade. O agrupamento não apresentou associação com a taxa de mortalidade causada pelos isolados ou com sua distribuição geográfica. No entanto, um fragmento de RAPD OPW04.2280 apresentou-se altamente associado com a mortalidade das lagartas e com a CL50, explicando 23% e 65% da variação fenotípica para essas características entre os isolados virais, respectivamente.

The total of 22 Baculovirus isolates surveyed in different corn producing regions in Brazil were used against fall armyworm, Spodoptera frugiperda (J.E. Smith). The viruses were purified and their suspensions were used to feed fall armyworm larvae from 4th and 5th instar. The mortality rate was checked daily and the infected larvae were frost after death, what generally occurred between the 5th and 7th day after virus ingestion. The 22 Baculovirus isolates were used in six concentrations (from 10³ to 10(8) polyhedra/ml) and one check treatment with water. Mortality rate, larval period, pupal period, pupa weight and lethal concentration (LC50) were determined for all isolates. Significant differences were found among all isolates and different concentrations, also interaction between isolate x virus concentration for all characteristics evaluated, except for pupal period. Amplification patterns of 54 RAPD markers, being 41 polymorphic among the isolates, were used to evaluate the genetic distance and its correlation with the fall armyworm larvae mortality rate. The genetic diversity calculated by the Jaccard's coefficient using the molecular data allowed a division of the isolates into two groups, with a high level of confidence. These groups did not present any association with the mortality rate caused by the isolates or with their geographical distribution. However, a RAPD fragment OPW04.2280 was highly associated with the larvae mortality rate and with LC50, explaining 23 and 65% of the phenotypic variation for these traits among the isolates, respectively.

As relações genéticas de 85 estirpes de Rhizobium capazes de nodular Arachis pintoi foram determinadas usando o método de "RAPD" (Random Amplified Polymorphic DNA). As análises incluíram 75 estirpes isoladas de solos de Cerrado e 10 de diferentes origens. Os resultados indicaram que existe um alto grau de similaridade entre estas estirpes e que a distribuição geográfica pode afetar suas relações filogenéticas. Além disso, os resultados permitiram a seleção de "primers" mais adequados para a caracterização dessas estirpes de Rhizobium, os quais serão úteis para a implementação de estudos de competitividade nos solos de Cerrado.

The genetic relationships of 85 Arachis pintoi nodulating Rhizobium strains were determined using the random amplified polymorphic DNA (RAPD) methods. The analysis included 75 strains isolated from Cerrado soils and 10 other ones of different origins. The results indicated that there is a high level of similarity between these strains and that geographic distribution may affect their phylogenetic relationship. In addition, the results allowed the selection of the most suitable primers for characterisation of these Rhizobium strains which will be useful for implementation of competitiveness studies in Cerrado soils.

Conduziu-se este trabalho com o objetivo de estudar o efeito de 2,4-D e BAP na indução da formação de calos originados de segmentos foliares de plântulas de Coffea arabica L., cv Rubi, obtidas in vitro, a partir da cultura de embriões, determinar sua curva de crescimento e analisar bioquimicamente, mediante determinação dos teores de proteínas totais, açúcares redutores e padrão proteíco. Segmentos foliares inoculados em meio desprovido de reguladores ou na presença de BAP em condições isoladas não apresentaram formação de calos. A produção máxima de calos é obtida utilizando-se 1,0 mg L-1 de 2,4-D. A curva de crescimento de calos apresenta crescimento tipo sigmóide, com três fases distintas: lag (entre 0 - 42 dias de inoculação), exponencial (42 - 77 dias) e linear (77 - 84 dias). Não foi observado acúmulo de proteínas em nenhuma fase de crescimento dos calos, sendo o teor máximo de açúcar redutor observado no dia de inoculação do explante. O padrão proteíco observado no período de desenvolvimento de calos apresenta diferenças quantitativas (intensidade das bandas) e qualitativas (presença ou ausência de bandas).

The objective of this work was to study the effect of 2,4-D and BAP in the induction of callus formation from leaf segments of Coffea arabica L. cv Rubi plantlets obtained through in vitro germination as well as to determine its growth curve, protein pattern and levels of total proteins and reducing sugars. The results indicated that explants inoculated in the absence of growth regulators or in the presence of BAP only showed no callus formation. Maximum callus production is obtained when 1.0 mg L-1 2,4-D is used. The callus growth curve showed a sigmoidal shape with 3 distinct phases: lag (0-42 d), exponential (42-77 d) and linear (77-84 d). It was not observed accumulation of proteins in any of the phases of callus growth and maximum levels of reducing sugars were observed in explants at the inoculation day. The callus protein pattern presented quantitative (intensity of bands) and qualitative (presence or absence of bands) differences.

Vinte amostras de espécies de fungos, agentes da helmintosporiose em cereais, foram obtidas de diferentes regiões geográficas, sendo nove constituídas de Bipolarisoryzae, isoladas de cultura do arroz (Oryza sativa), sete de B.sorokiniana coletadas de trigo (Triticum aestivum), duas de B.maydis e duas de Exserohilumturcicum provenientes de milho (Zea mays). As amostras foram analisadas através das técnicas de PCR-RFLP e RAPD. O polimorfismo de tamanho observado entre as amostras na região ITS1-ITS2 e o espaço compreendido da região 5,8S do rDNA indicou diferenças genéticas entre as amostras, enquanto o fenograma construído através do método de UPGMA após a digestão com as enzimas de restrição, indicaram polimorfismo inter e intraespecífico. Os perfis de RAPD indicaram um expressivo grau de polimorfismo entre as diferentes espécies. Entre as amostras da mesma espécie ocorreu um baixo índice de polimorfismo. O fenograma, obtido pelo método de UPGMA, permitiu diferenciar as quatro espécies analisadas e agrupou as mesmas conforme a espécie hospedeira. Os perfis de RAPD obtidos revelaram ausência de correlação entre os fatores climáticos e a origem geográfica dos isolados de B. sorokiniana e B. oryzae. Espécies teleomórficas revelaram alto nível de similaridade com seus correspondentes anamorfos.

Twenty isolates of four fungal species, agents of "Helminthosporium" diseases in cereals, were collected from different regions: nine Bipolarisoryzae isolated from rice (Oryza sativa), seven B.sorokiniana from wheat (Triticum aestivum), two B. maydis, and two Exserohilumturcicum from maize (Zea mays). The strains were compared by PCR-RFLP and RAPD analysis. Size polymorphism among the isolates in the ITS region comprising the 5.8 S rDNA indicated genetic differences among the isolates, while a UPGMA phenogram constructed after the digestion of this region with restriction enzymes showed inter- and intra-specific polymorphism. The RAPD profiles indicated an expressive level of polymorphism among different species, compared with a low level of polymorphism among isolates of the same species. A UPGMA phenogram grouped the isolates according to the species and their host plant. RAPD profiles did not reveal polymorphism that directly correlated climatic factors with geographic source of the isolates of B. sorokiniana, and B. oryzae. Teleomorphic species revealed high similarity with their correspondent anamorphs.

A irregularidade de resposta do feijoeiro à inoculação com rizóbio tem sido atribuída, entre outros fatores, à baixa capacidade competitiva, baixa eficiência em fixar N2 e instabilidade genética do simbionte. Esta instabilidade genética decorrente de frequências elevadas de rearranjos genômicos e/ou deleções plasmidiais pode ser acentuada após exposição a temperaturas elevadas, comprometendo a utilização dessas estirpes como inoculantes, especialmente nos solos tropicais. Nesse estudo, foi avaliada a variabilidade de colônias isoladas derivadas de estirpes efetivas de R. leguminosarum bv. phaseoli (SLP1.3 e BR10.026) e R. tropici (SLA2.2 e BR322), antes e após exposição à temperatura elevada (4 choques térmicos sucessivos a 45ºC). Essa avaliação foi efetuada através da análise de características fenotípicas (medida pela produção de matéria seca das plantas inoculadas) e genotípicas (perfil plasmidial e padrões genômicos via RAPD). Os resultados obtidos indicaram que à temperatura elevada acentuou a variabilidade na performance natural entre as colônias isoladas das estirpes testadas, especialmente da espécie R. leguminosarum bv. phaseoli. Os perfis plasmidiais das colônias derivadas das estirpes de R. tropici antes e após exposição à temperatura elevada apresentaram-se idênticos entre si e em relação a estirpe original. Os padrões genômicos determinados via RAPD mostraram mais alterações e variação genética nas colônias isoladas das estirpes de R. leguminosarum bv. phaseoli, indicando que as estirpes de R. tropici são mais estáveis e foram menos afetadas pela ação da temperatura.

Irregular response to bean plants to Rhizobium inoculation has been attributed to among other factors, low competitive ability, low N2 fixation efficiency and genetic instability of the symbiont. This genetic instability caused by high rates of genomic rearrangements and/or plasmid deletions can be accentuated by high temperatures. This fact may limit the utilization of these strains as inoculants, especially in tropical soils. In this study, the variability of isolated colonies derived from effective R. leguminosarum bv. phaseoli (SLP1.3 and BR 10.026) and R tropici (SLA2.2 and BR322) strains was evaluated before and after exposure to high temperatures (four consecutive thermal shocks at 45ºC). This evaluation involved plant dry matter analysis of inoculated plants and genotypic (plasmid profile and genomic patterns via RAPD) analysis of the Rhizobium strains. The results evidenced that high temperature improve the natural performance variability especially between isolated colonies from R. leguminosarum bv. phaseoli strains. The plasmid profile of isolated colonies from R. tropici strains were identical regardless of temperature treatment whereas isolated colonies from R. leguminosarum bv. phaseoli alterations were detected especially after the thermal treatment. The genomic patterns generated by AP-PCR showed more alterations and genetic variation in isolated colonies from R. leguminosarum bv. phaseoli strains indicating that R. tropici strains are more stable and lower affected by high temperature.

Alumínio (Al) é um dos principais fatores que afetam o desenvolvimento de plantas em solos ácidos, reduzindo substancialmente a produtividade agrícola. Na América do Sul, cerca de 66% da superfície do solo apresenta acidez, onde a alta saturação de alumínio é uma das maiores limitações à prática agrícola. Apesar do crescente número de estudos, uma compreensão completa das bases bioquímicas e moleculares da tolerância ao alumínio em plantas está longe de ser alcançada. No caso da cana-de-açúcar, não há nada publicado sobre a regulação gênica induzida durante o stress por alumínio. O objetivo deste trabalho foi identificar genes de cana-de-açúcar relacionados com as várias vias metabólicas reconhecidamente envolvidas na resposta à toxidez do alumínio em outras espécies de plantas e leveduras. Para a maioria dos genes relacionados com alumínio em outras espécies foram identificados similares em cana-de-açúcar, tais como aqueles que codificam enzimas que combatem o stress oxidativo ou a infestação por patógenos, proteínas responsáveis pela exudação de ácidos orgânicos e pela transdução de sinais. O papel desses genes na tolerância ao alumínio é revisado. Devido ao alto grau de conservação do genoma entre espécies próximas de gramíneas como milho, cevada, sorgo e cana-de-açúcar, esses genes serão uma ferramenta valiosa para a melhor compreensão e manipulação da tolerância ao alumínio nestas espécies.

Aluminum is one of the major factors that affect plant development in acid soils, causing a substantial reduction in yield in many crops. In South America, about 66% of the land surface is made up of acid soils where high aluminum saturation is one of the main limiting factors for agriculture. The biochemical and molecular basis of aluminum tolerance in plants is far from being completely understood despite a growing number of studies, and in the specific case of sugarcane there are virtually no reports on the effects of gene regulation on aluminum stress. The objective of the work presented in this paper was to prospect the sugarcane expressed sequence tag (SUCEST) data bank for sugarcane genes related to several biochemical pathways known to be involved in the responses to aluminum toxicity in other plant species and yeast. Sugarcane genes similar to most of these genes were found, including those coding for enzymes that alleviate oxidative stress or combat infection by pathogens and those which code for proteins responsible for the release of organic acids and signal transducers. The role of these genes in aluminum tolerance mechanisms is reviewed. Due to the high level of genomic conservation in related grasses such as maize, barley, sorghum and sugarcane, these genes may be valuable tools which will help us to better understand and to manipulate aluminum tolerance in these species.

Analisou-se o comportamento de 34 linhagens de Lentinula edodes, quando submetidas a diferentes condições de cultivo micelial (pH e temperatura), e a variabilidade das linhagens através de marcadores moleculares RAPD. A caracterização das linhagens foi realizada observando-se o comportamento de cada uma delas quando submetidas a três pHs (5, 6 e 7) e quatro temperaturas diferentes (16, 25, 28 e 37ºC), em função da taxa de desenvolvimento e da retenção de água pelo micélio in vitro. O cultivo micelial foi bem sucedido em todos os pHs utilizados. Já para o fator temperatura, foi estabelecido como faixas ideais para cultivo micelial, aquelas compreendidas entre 25 e 28ºC. O conteúdo hídrico foi menor nas linhagens cultivadas a 37ºC. O padrão de RAPD foi determinado e foram testados 20 primers OPA (Operon Technologies, Inc.), dos quais 17 forneceram boa fonte de polimorfismo (OPA01 a OPA05, OPA07 a OPA14, OPA17 a OPA20). O agrupamento das linhagens baseado nos coeficientes de similaridade permitiu a separação de dois grupos de procedências geográficas distintas.

The growth of thirty-four Lentinula edodes strains submitted to different mycelial cultivation conditions (pH and temperature) was evaluated and strain variability was assessed by RAPD molecular markers. The growth at three pH values (5, 6 and 7) and four different temperatures (16, 25, 28 and 37ºC) was measured using the in vitro mycelial development rate and water retention as parameters. Mycelial cultivation was successful at all pH tested, while the ideal temperature for mycelial cultivation ranged between 25 and 28ºC. The water content was lower in strains grown at 37ºC. Among 20 OPA primers (Operon Technologies, Inc.) used for the RAPD analyses, seventeen presented good polymorphism (OPA01 to OPA05, OPA07 to OPA14, OPA17 to OPA20). The clustering based on similarity coefficients allowed the separation of strain in two groups with different geographic origins.

Estirpes de Rhizobium eficientes na nodulação do feijoeiro, isoladas de diferentes solos da região do cultivo dessa leguminosa nos cerrados brasileiros, foram caracterizadas via RAPD. Esse estudo mostrou grande heterogeneidade genética entre as estirpes de R. tropici e R. leguminosarum bv. phaseoli testadas e permitiu a definição de grupos genéticos, além de indicar os "primers" mais adequados para essa caracterização. Os grupos de estirpes geneticamente distintas podem ser usados em estudos de competitividade, importantes para obtenção de resultados positivos na inoculação dessa leguminosa em solos de cerrado.

Efficient bean nodulating Rhizobium strains, isolated from different Brazilian cerrado soils, were characterized by RAPD. This study showed great genetic heterogeneity among R. tropici and R. leguminosarum bv. phaseoli strains and allowed the constitution of genetic clusters, besides indicating the most suitable primers for this characterization. The groups of genetically distinct strains can be used in competitiveness studies to select appropriate Rhizobium strains for bean inoculation in cerrado soils.

Fall armyworm, Spodoptera frugiperda (J. E. Smith), is the most important maize insect pest in Brazil and its damage can reduce yield up to 34%. The objective of this work was to utilize the PCR technique to Identify Bacillus thuringiensis (B.t) strains that control S. frugiperda in maize crops. Bioassays showed that 16 strains were very effective against S. frugiperda, 15 of them collected from soil samples and one (T09) obtained at the Institute Pasteur. The DNA of these strains were probed with cryI general primers and their proteins were analised by SDS-PAGE eletrophoresis. All strains present positive results for cryI genes. To further characterize these strains, specific cryI primers were employed. PCR technique showed that some strains harbour the same cryI genes. The only difference was the amplification of an unexpected fragment of approximately 160bp when a mixture of cryIB and cryID specific primers was used. Analysis by phase contrast microscope showed that crystal proteins produced by these strains were all bipyramidal crystals. Also, eltrophoretic analysis of proteins by SDS-PAGE showed the same protein banding pattern for most of the strains.

Recentemente, proteínas inseticidas vegetativas (Vips), identificadas no sobrenadante da cultura de certas cepas de Bacillus thuringiensis (B.t.), foram capazes de controlar alguns insetos-praga economicamente importantes. Como avaliação do potencial de aplicabilidade destas proteínas contra a lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda Smith), o inseto-praga mais importante da cultura do milho, as características e o efeito de mortalidade do sobrenadante da cultura de cinco cepas de B.t. foram investigadas. Notáveis diferenças entre as cepas foram detectadas, não somente em termos de eficiência na mortalidade dos insetos, mas também nas diferenças de mortalidade entre os sobrenadantes aquecido e não-aquecido, tratamentos estes que foram usados para distinguir a fração protéica inseticida termo-sensível de outra fração termo-estável, de natureza não-protéica (b-exotoxinas). Os padrões qualitativo, quantitativo e temporal de secreção da proteína total no meio (sobrenadante) foram avaliados por espectrofotometria e eletroforese em gel de poliacrilamida. As cepas apresentaram distintas taxas de crescimento e tempos de secreção de proteínas em relação a densidade de células na cultura. Além disso, o padrão de bandas eletroforéticas também variou de maneira cepa-específica, em ambas condições desnaturantes e não-desnaturantes. Polipeptídeos que apresentaram peso molecular semelhantes aos esperados para proteínas Vip3A identificadas anteriormente foram encontrados em cepas com alta taxa de mortalidade do sobrenadante. Os dados sugerem a possibilidade e a utilidade de pesquisar frações inseticidas de natureza protéica (do tipo Vip) em sobrenadantes de B.t., como forma para desenvolver alternativas específicas e eficientes de controle biológico que possam ser empregadas em programas de manejo integrado de S. frugiperda em milho tropical.

Novel vegetative insecticidal proteins (Vips) identified in the supernatant of Bacillus thuringiensis (B.t.) cultures have shown to provide adequate control over a wide spectrum of economically important crop pests. To evaluate the potential applicability of these proteins against fall armyworm (Spodoptera frugiperda Smith) larvae, the most important insect pest for tropical maize, the characteristics and mortality effects of culture supernatants from five B.t. strains were investigated. Striking differences among strains were detected, not only in terms of efficiency in killing the insect, but also regarding to mortality effects of heated and non-heated supernatants, which were used to distinguish the heat-sensitive protein-derived insecticidal fraction from a thermostable one, with a non-protein nature (b-exotoxinas). The qualitative, quantitative and temporal patterns of total protein secretion in the medium (supernatant) were assessed through spectrophotometry and polyacrylamide gel electrophoresis. The strains showed remarkably distinct rates of growth and timing for protein secretion relative to cell density in culture. Moreover, the electrophoretic-banding patterns also varied in a strain-specific manner, both in denaturing and non denaturing conditions. Polypeptides displaying a molecular weight that is very close to the expected for previously identified Vip3A proteins were found for the strains with high supernatant-mortality ratios. The data suggest the feasibility and usefulness of searching for protein-derived (Vip-like) insecticidal fractions in B.t. supernatants as a mean of developing especific and efficient alternatives of biological control to be employed in integrated pest management programs of S. frugiperda in tropical maize.

O objetivo deste trabalho foi testar a eficiência do comprimento relativo de raiz seminal (CRRS) e do comprimento líquido de raiz seminal (CLRS) como indicadores fenotípicos quanto à tolerância ao alumínio na avaliação de plantas individuais de milho. Plântulas de genótipos tolerantes e suscetíveis ao Al foram submetidas a solução nutritiva contendo nível tóxico deste elemento, por um período de sete dias, após o qual, determinaram-se os valores de CRRS e CLRS. Os resultados obtidos quando se utilizaram valores médios para CRRS e CLRS mostraram que ambos os índices foram capazes de discriminar com eficiência os materiais tolerantes dos suscetíveis. Entretanto, quando foram utilizados os valores de CRRS e CLRS obtidos a partir de plantas individuais, observou-se a existência de plantas tolerantes com valores típicos de plantas suscetíveis, o que indica que a avaliação fenotípica de plantas individuais pelos dois índices está sujeita a erros significativos, principalmente na caracterização de plantas suscetíveis. Portanto, em estudos para mapeamento de "quantitative trait loci" (QTLs) ligados à tolerância ao Al, nos quais utilizam-se estes índices fenotípicos, o mais apropriado é avaliar famílias F3, onde é possível obter valores médios para CRRS e CLRS e utilizar estas médias para representar os valores fenotípicos das respectivas plantas F2.

The objective of this work was to verify the efficiency of the relative seminal root length (RSRL) and net seminal root length (NSRL) as phenotypic indexes for aluminum tolerance in individual maize plants. Seedlings of Al tolerant and susceptible genotypes were grown in nutrient solution containing toxic level of Al for a period of seven days, after which the values of RSRL and NSRL were determined. The results obtained when mean values of RSRL and NSRL were utilized showed that both indexes were able to discriminate tolerant from susceptible maize genotypes. However, when individual values of RSRL and NSRL were utilized, some tolerant plants scored as susceptible ones were observed, showing that the phenotypic evaluation of individual plants by both indexes is subjected to significant errors, mainly in the characterization of susceptible plants. Therefore, in studies for quantitative traits loci (QTLs) mapping for Al tolerance in maize, where these indexes are used, the most appropriate is to use F3 families, where it is possible to obtain mean values for RSRL and NSRL and then utilize these means to represent the phenotypic values of the respective F2 plants.

Estudou-se a germinação de uma espécie selvagem sob influência do ABA e GA3. Embriões isolados, incubados em soluções de sacarose contendo ABA e/ou GA3, foram analizados em SDS-PAGE para observar o perfil da mobilização de proteínas de reserva durante o início da germinação. Cotilédones de sementes incubadas em soluções aquosas de ABA e/ou GA3 foram analizados em sds-page e PAGE/Géis de Atividade para observar o perfil da mobilização de proteínas de reserva e atividade de proteases, respectivamente, após o início da germinação. Os resultados indicam que ABA bloqueia a mobilização protéica através da inibição da atividade enzimática em cotilédones, mas não impede totalmente a germinação, parecendo afetar germinação e atividade enzimática independentemente. Em embriões houve bloqueio da mobilização, mas a relação com a inibição da atividade enzimática não foi claramente demonstrada. ABA induziu a síntese de proteínas em cotilédones, mas não em embriões. Um polipeptídeo com 17 kD é degradado em 6 horas nos embriões, mas a degradação é bloqueada por ABA e/ou GA3. Para mesmas concentrações de ABA e GA3, GA3 não inibiu o efeito do ABA em embriões, mas inibiu em cotilédones. Os efeitos do ABA e GA3 não diferiram sensivelmente dos dados correntes, mas o comportamento do polipeptídeo de 17 kD é contraditório e sugere estudos específicos.

In this work, a woody species [A. peregrina (L.) Speg.] was studied in order to observe the effect of ABA and GA3 at the biochemical level during the process of seed germination. Embryos incubated in sucrose solution containing ABA and/or GA3 were analyzed through SDS-PAGE to observe the mobilization pattern of storage proteins during the beginning of germination. Cotyledons isolated from seeds incubated in aqueous solutions containing ABA and/or GA3, were also analyzed through SDS-PAGE and by PAGE/Activity Gels (polyacrylamide gels copolymerized with substrate for enzymes) to observe the mobilization pattern of storage proteins and protease activity after the beginning of the germination. Results of these experiments show that ABA blocks protein mobilization by inhibiting protease activity in cotyledons. This inhibition is not sufficient to prevent germination showing that the effect of ABA on germination is not dependent on protease activity. The blockage of storage protein mobilization was also observed in embryos, but no protease activity inhibition was clearly detected. ABA was able to induce the synthesis of proteins in cotyledons but not in embryos. A polypeptide with an approximate molecular weight of 17 kD, was degraded within 6 hours in control embryos, but this degradation was blocked by ABA and GA3. Using the same concentrations of ABA and GA3 on embryos and cotyledons, the effect of ABA was counteracted by GA3 in embryos, but not in cotyledons. Although the effects of ABA and GA3 were not so different from those shown in the literature, the behavior of 17 kD-polypeptide contradicts these reports suggesting that specific studies should be performed.