Se estableció como objetivo la obtención de anticuerpos monoclonales (AcM), mediante la tecnología de fusión celular, capaces de reconocer a la fracción glucuronoxilomanano (GXM), serotipo A. Cryptococcus neoformans es un hongo levaduriforme rodeado por una cápsula polisacarídica y agente de micosis profundas en el hombre, que afecta particularmente a los pacientes con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida. Fueron inmunizados 3 grupos de ratones Balb/c con GXM acoplado a eritrocitos de carnero con una dosis de 10 µg de GXM vía subcutánea, 50 µ g de GXM vía subcutánea y 50 µ g de GXM vía intraperitoneal. Se obtuvieron 2 hibridomas secretores de AcM murinos contra el polisacárido capsular de Cryptococcus neoformans, de la clase IgG 1 , cadena ligera k , los sobrenadantes de cultivo fueron evaluados por ELISA utilizando el polisacárido capsular sin conjugar. Estos anticuerpos serán utilizados en estudios de protección y fagocitosis in vitro.

Twenty-six human respiratory syncytial virus strains (subgroup A) isolated from three outbreaks in Havana City during the period 1994/95, 1995/96 and 1996/97 were analyzed to determine their antigenic and genetic relationships. Analyses were performed by monoclonal antibodies and restriction mapping (N gene) following amplification of the select region of the virus genome by polymerase chain reaction. All isolated strains were classified as subgroup A by monoclonal antibodies and they showed a restriction pattern NP4 that belonged to subgroup A. Thus the results obtained in this work, showed a close relation (100%) between antigenic and genetic characterization of the isolated strains in our laboratory. These methods permit the examination of large numbers of isolates by molecular techniques, simplifying the researchs into the molecular epidemiology of the virus.

In spite of the advances attained in the diagnosis and early intervention with antibiotics, morbidity and mortality associated with sepsis caused by Gram-negative bacteria are high. The mediators responsible for the pathogenesis of the sepsis are components derived from the own bacteria (endotoxins) and from the cells of the immune response of the host (tumor necrosis factor and some interleukins). The treatment traditionally used in sepsis is mainly directed against microorganisms by the use of increasingly potent antibiotics. However, it is clear that antibiotics are not a definitive solution, since even when they cause bacterial death, they have no effects on endotoxin and may increase their liberation when cellular lysis occurs. New and successful treatments for sepsis have been tried since the 1980´s, including the use of polyclonal and monoclonal antibodies of murine and human origin, directed against the lipid A of the endotoxin, as well as monoclonal antibodies against the tumor necrosis factor. Although these molecules are not completely efficient for the interruption of the chain of undesirable events provoked by the endotoxin, it is valid to accept the appearance of immunotherapies as an adjuvant treatment for a condition that threatens life.

A pesar de los avances en el diagnóstico y la intervención temprana con antibióticos, es alta la morbilidad y mortalidad asociada con la sepsis por bacterias gramnegativas. Los mediadores responsables de la patogénesis de la sepsis son componentes derivados de las propias bacterias (endotoxinas) y de las células de la respuesta inmune del hospedero (factor de necrosis tumoral y algunas interleuquinas). El tratamiento que tradicionalmente se ha utilizado en la sepsis, está dirigido sobre todo contra el microorganismo, mediante el uso de antibióticos cada vez más potentes. Sin embargo, está claro que los antibióticos no constituyen una solución definitiva, ya que aun si provocan la muerte bacteriana, no tienen efectos sobre la endotoxina y pueden aumentar su liberación cuando ocurre la lisis celular. A partir de la década de los 80 se han probado nuevos y exitosos tratamientos para la sepsis, que incluyen el uso de anticuerpos policlonales y monoclonales de origen murino y humano, dirigido contra el lípido A de la endotoxina, así como anticuerpos monoclonales contra el factor de necrosis tumoral. Si bien en todos los casos no se puede hablar de una total eficacia de estas moléculas para interrumpir la cadena de acontecimientos indeseables provocados por la endotoxina, sí es válido celebrar el advenimiento de inmunoterapias como tratamiento adjunto para una condición que amenaza la vida.

An immunoglobulin G of mouse was purified from sera by affinity chromatography in protein A. The rabbits whose sera were able to recognize the antigen injected by double immunodiffusion were immunized with this preparation. The antibodies were precipatated from the rabbit's serum and purified by ion exchange chromatography. This preparation was conjugated to fluorescin isothiocyanate according to the conventional technique. The conjugated obtained was evaluated with the reference strains of Parainfluenza virus 1, 2, 3; Adenovirus; respiratory syncytial virus; and influenza virus A and B, by an indirect immunofluorescence technique and HIV positive samples by flow citometry. Specific monoclonal antibodies were used in both cases. Clinical specimens of patients with acute respiratory infection were evaluated.

Se purificó una inmunoglobulina G de ratón a partir de suero por cromatografía de afinidad en proteína A. Con esta preparación se inmunizaron los conejos cuyos sueros fueron capaces de reconocer al antígeno inyectado mediante inmunodifusión doble. Los anticuerpos fueron precipitados del suero de conejo y purificados mediante cromatografía de intercambio iónico. Esta preparación fue conjugada a isotiocianato de fluoresceína según la tecnología convencional. El conjugado obtenido fue evaluado con las cepas de referencia de virus Parainfluenza 1, 2, 3; Adenovirus; virus sincitial respiratorio y virus influenza A y B, por una técnica de inmunofluorescencia indirecta y muestras positivas de VIH mediante citometría de flujo. En ambos casos se utilizaron anticuerpos monoclonales específicos. Se evaluaron muestras clínicas de pacientes con infección respiratoria aguda.

The aim of this study was to develop a polymerase chain reaction (PCR) for the detection of respiratory syncytial virus (RSV) genomes. The primers were designed from published sequences and selected from conserved regions of the genome encoding for the N protein of subgroups A and B of RSV. PCR was applied to 20 specimens from children admitted to the respiratory ward of "William Soler" Pediatric Hospital in Havana City with a clinical diagnosis of bronchiolitis. The PCR was compared with viral isolation and with an indirect immunofluorescence technique that employs monoclonal antibodies of subgroups A and B. Of 20 nasopharyngeal exudates, 10 were found positive by the three assayed methods. In only two cases, samples that yielded positive RNA-PCR were found negative by indirect immunofluorescence and cell culture. Considering viral isolation as the "gold standard" technique, RNA-PCR had 100% sensitivity and 80% specificity. RNA-PCR is a specific and sensitive technique for the detection of the RSV genome. Technical advantages are discussed

It was possible to standardize a procedure which combined an indirect microELISA assay with a standard curve and that allowed to estimate the titre of IgG antibodies to Adenovirus in samples of human serum, using only one dilution of these. Based on the end-point titre previously determined for a panel of 117 serum samples, we selected 90 of these samples (r² = 0,98) to build 4 standard curves that related the natural logarithm of the fluorescence responses to the natural logarithm of the end-point titre for a wide range of serum dilutions (1:40=1:320). It was selected the curve corresponding to serum dilution 1:40 (r² = 0,81), which made possible an optium utilization of those accessories designed to handle the volumes in the ultramicro range and, therefore, the automation of the whole procedure. The results obtained as regards the complement fixation test (100 % of sensitivity and 97,3 % of specificity) support the use of this method in our laboratory as a complementary tool to carry out seroepidemilogical studies on a large scale and with diagnostic ends.

Se logró normalizar un procedimiento que combinaba un ensayo de ultramicroELISA indirecto con una curva patrón y que permitió estimar el título de anticuerpos IgG a Adenovirus en muestras de suero humano utilizando una sola dilución de éstos. Basándose en el título a punto final previamente determinado para un panel de 117 muestras de suero, se seleccionaron 90 de éstas (r² = 0,98) para construir 4 curvas patrones que relacionaron el logaritmo natural de las respuestas de fluorescencia y el logaritmo natural del título a punto final para un rango amplio de diluciones del suero (1:40 hastra 1:320). Se seleccionó la curva correspondiente a la dilución 1:40 del suero (r² = 0,81), la cual posibilitó una óptima utilización de los accesorios diseñados para la manipulación de los volúmenes en el rango ultramicro y, por tanto, la automatización de todo el procedimiento. Los resultados obtenidos con respecto a la técnica de fijación del complemento (100 % de sensibilidad y 97,3 % de especificidad) respaldan la utiización de este método como una herramienta complementaria en la ejecución de estudios seroepidemiológicos a gran escala y con fines diagnósticos.

Se estandarizó un ELISA para la detección de anticuerpos monoclonales a las proteínas E y NS1 del virus dengue. Se aplicó un ELISA indirecto utilizando como fuente de antígeno células C6/36 inoculadas con la cepa A-15 aislada durante la epidemia de dengue 2 en 1981. Estas células fueron fijadas en placas ELISA a una concentración de 200 000 células/pozo. Se utilizó un control celular en condiciones similares. Para normalizar el sistema se emplearon anticuerpos monoclonales específicos a ambas proteínas. Se realizaron estudios a diferentes tiempos de incubación para determinar el momento de mayor expresión de estas proteínas en la membrana celular. Los resultados muestran una respuesta máxima a las 72 horas posinoculación para ambas proteínas, se obtuvo una sensibilidad para la detección de NS1 de 14,7 ng/mL y para la E de 1,43 ng/mL. Este sistema permite el tamizaje primario de anticuerpos monoclonales a las proteínas E y NS1 del virus dengue 2.

Durante 1993, nuestro país se vio afectado por un brote de neuropatía epidémica (NE) caracterizado por 2 formas clínicas fundamentales: óptica y periférica. Aunque la causa de la enfermedad fue considerada multifactorial (fundamentalmente agentes neurotóxicos y deficiencia nutricional), fue aislado un Enterovirus del líquido cefalorraquídeo de un paciente (cepa 47/93, IPK), el cual fue posteriormente clasificado como Coxsackie A9 (Cox A9) mediante la prueba de neutralización (Nt) utilizando los pools de suero de Lim Benyesh Melnick (LBM). Se presentan los resultados obtenidos durante la aplicación del ELISA y del ultramicroELISA en la identificación de este agente a partir del sobrenadante de cultivo de células infectadas, así como en la detección de anticuerpos a la cepa en poblaciones con baja y alta incidencias de la enfermedad.