ABSTRACT: Clostridioides difficile is a strictly anaerobic, spore-forming Gram-positive bacterium associated with diarrhea, known as C. difficile infection (CDI). In domestic animals, C. difficile is considered an important pathogen mostly in pigs and horses, but there are also reports in other domestic species. In wild animals, the epidemiology of C. difficile is largely unknown, and the role of the bacterium as a cause of diarrhea is unclear. The aim of this study was to determine the prevalence of C. difficile in the feces of wild animals referred to the Center of Medicine and Research in Wild Animals (CEMPAS). Fecal samples obtained from 100 animals of 34 different species were subjected to qPCR for the detection of the C. difficile 16S rRNA gene and two major toxin genes (tcdA and tcdB) and to anaerobic bacterial isolation. A total of 63 animals (63%) were positive for C. difficile by qPCR, and 16 isolates were recovered. The opossum (Didelphis spp.) had the highest number of positive animals in both tests (from 21 samples, 19 were qPCR positive, and four isolates were recovered). Three toxigenic strains (RT 002, 004, and 014), all previously described as infecting humans and animals, were isolated in the following species: bearded dragon (Pogona vitticeps), pampas fox (Lycalopex vetulus), and marmoset (Callithrix sp.). The presence of C. difficile in the feces of wild animals highlights the importance of wildlife as potential carriers of infection for production animals or humans. ABSTRACT sporeforming spore forming Grampositive Gram C CDI. CDI . (CDI) horses unknown unclear CEMPAS. CEMPAS (CEMPAS) 10 3 S tcdA tcdB isolation 6 63% (63% 1 recovered Didelphis spp. spp 2 recovered) RT 002 004 014, 014 , 014) Pogona vitticeps, vitticeps vitticeps) Lycalopex vetulus, vetulus vetulus) Callithrix sp.. sp sp. sp.) (CDI (CEMPAS (63 00 01 (6 0 (

RESUMO: O Clostridioides difficile é uma bactéria Gram-positiva estritamente anaeróbica e formadora de esporos, associada à diarreia e conhecida como infecção por C. difficile (CID). Em animais domésticos, o C. difficile é considerado um patógeno importante principalmente em porcos e cavalos, mas também há relatos em outras espécies domésticas. Em animais selvagens, a epidemiologia do C. difficile é amplamente desconhecida, e o papel da bactéria como causa de diarreia não está claro. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência do C. difficile nas fezes de animais selvagens encaminhados ao Centro de Medicina e Pesquisa em Animais Selvagens (CEMPAS). Amostras de fezes obtidas de 100 animais de 34 espécies diferentes foram submetidas à qPCR para a detecção do gene 16S rRNA do C. difficile e dois principais genes de toxina (tcdA e tcdB), além de isolamento bacteriano anaeróbico. Um total de 63 animais (63%) foram positivos para C. difficile por qPCR, e 16 isolados foram recuperados. O gambá (Didelphis spp.) apresentou o maior número de animais positivos em ambos os testes (de 21 amostras, 19 foram positivas na qPCR, e quatro isolados foram recuperados). Três cepas toxigênicas (RT 002, 004 e 014), todas previamente descritas como infectando humanos e animais, foram isoladas nas seguintes espécies: dragão barbado (Pogona vitticeps), raposa-pampas (Lycalopex vetulus) e sagui (Callithrix sp.). A presença de C. difficile nas fezes de animais selvagens destaca a importância da vida selvagem como potencial portadora de infecção para animais de produção ou seres humanos. RESUMO Grampositiva Gram positiva esporos C CID. CID . (CID) domésticos cavalos domésticas desconhecida claro CEMPAS. CEMPAS (CEMPAS) 10 3 S tcdA tcdB, tcdB , tcdB) anaeróbico 6 63% (63% 1 recuperados Didelphis spp. spp 2 amostras recuperados) RT 002 00 014, 014 014) Pogona vitticeps, vitticeps vitticeps) raposapampas raposa pampas Lycalopex vetulus Callithrix sp.. sp sp. sp.) (CID (CEMPAS (63 0 01 (6 (

ABSTRACT: São Paulo state is one of the country’s largest producers of beef and milk, and the midwestern region plays a key role in this production, as half of São Paulo’s cattle herd is found in this region. These numbers alone demonstrate the importance of livestock in this region. Therefore, this study aimed to describe the main epidemiological and clinical signs in cattle cases at the Large Animal Hospital at FMVZ-Unesp, located in the midwestern region of São Paulo state. The present retrospective study assessed 638 clinical cases of cattle treated from January 2010 to December 2019 (10 years). Digestive system diseases were the most prevalent, diagnosed in 30.3% of patients, followed by neurological diseases (19.1%) and respiratory diseases (10.5%). The other diseases were distributed in decreasing order as follows: musculoskeletal (7.8%), hematopoietic (6.1%), genitourinary (5.6%), metabolic and nutritional (5.5%), neonatal (4.7%), cutaneous (2.6%), poisoning (2.5%), lymphatic (2.2%), cardiovascular (1.6%) and other diseases (1.4%). Rabies, a fatal zoonotic disease, was the main cause of death in this study and the main disease associated with neurological signs (23.7%). Recognizing the main diseases of cattle in this region will promote the adoption of prophylactic measures to minimize their occurrence and manage treatment to avoid economic losses and decreased productivity of herds. ABSTRACT countrys country s milk production Paulos Therefore FMVZUnesp, FMVZUnesp FMVZ Unesp, Unesp FMVZ-Unesp 63 201 10 (1 years. years . years) prevalent 303 30 3 30.3 patients 19.1% 191 19 1 (19.1% 10.5%. 105 10.5% 5 (10.5%) follows 7.8%, 78 7.8% , 7 8 (7.8%) 6.1%, 61 6.1% 6 (6.1%) 5.6%, 56 5.6% (5.6%) 5.5%, 55 5.5% (5.5%) 4.7%, 47 4.7% 4 (4.7%) 2.6%, 26 2.6% 2 (2.6%) 2.5%, 25 2.5% (2.5%) 2.2%, 22 2.2% (2.2%) 1.6% 16 (1.6% 1.4%. 14 1.4% (1.4%) Rabies 23.7%. 237 23.7% 23 (23.7%) herds 20 ( 30. 19.1 (19.1 10.5 (10.5% 7.8 (7.8% 6.1 (6.1% 5.6 (5.6% 5.5 (5.5% 4.7 (4.7% 2.6 (2.6% 2.5 (2.5% 2.2 (2.2% 1.6 (1.6 1.4 (1.4% 23.7 (23.7% 19. (19. 10. (10.5 7. (7.8 6. (6.1 5. (5.6 (5.5 4. (4.7 2. (2.6 (2.5 (2.2 1. (1. (1.4 23. (23.7 (19 (10. (7. (6. (5. (4. (2. (23. (7 (6 (5 (4 (2 (23

RESUMO: O estado de São Paulo é um dos maiores produtores de carne e leite bovino do país e a região centro-oeste do estado tem papel fundamental nessa produção, pois possui a metade do rebanho de bovinos do estado. Portanto, este estudo descreve os principais achados clínicos e epidemiológicos de bovinos atendidos no Hospital de Grandes Animais da FMVZ/Unesp, localizado na região centro-oeste paulista. Foi realizado um levantamento nos arquivos da Clínica de Grandes Animais do Hospital Veterinário da FMVZ-Unesp, Botucatu/SP, dos 638 casos clínicos de bovinos atendidos de janeiro de 2010 a dezembro de 2019. Enfermidades do sistema digestório foram as mais prevalentes (30,3%), seguidas das doenças neurológicas (19,1%) e respiratórias (10,5%). As demais enfermidades foram distribuídas, em ordem decrescente, em: musculoesquelético (7,8%), haematopoiético (6,1%), geniturinário (5,6%), cutânea (2,6%), linfático (2,2%) e cardiovascular (1,6%) ou foram classificadas em doenças metabólicas e nutricionais (5,5%), neonatais (4,7%), tóxicas (2,5%) ou outros distúrbios (1,4%). A raiva, uma zoonose fatal, foi a principal causa de óbito neste estudo e a principal doença neurológica (23,7%). O reconhecimento das principais doenças dos bovinos desta região permite a adoção de medidas profiláticas e de manejo para minimizar sua ocorrência e evitar perdas econômicas com o tratamento e menor produtividade do rebanho. RESUMO centrooeste centro oeste produção Portanto FMVZUnesp FMVZ Unesp FMVZ/Unesp paulista FMVZUnesp, Unesp, FMVZ-Unesp BotucatuSP Botucatu SP Botucatu/SP 63 201 2019 30,3%, 303 30,3% , 30 3 (30,3%) 19,1% 191 19 1 (19,1% 10,5%. 105 10,5% . 10 5 (10,5%) distribuídas decrescente 7,8%, 78 7,8% 7 8 (7,8%) 6,1%, 61 6,1% 6 (6,1%) 5,6%, 56 5,6% (5,6%) 2,6%, 26 2,6% 2 (2,6%) 2,2% 22 (2,2% 1,6% 16 (1,6% 5,5%, 55 5,5% (5,5%) 4,7%, 47 4,7% 4 (4,7%) 2,5% 25 (2,5% 1,4%. 14 1,4% (1,4%) raiva fatal 23,7%. 237 23,7% 23 (23,7%) 20 30,3 (30,3% 19,1 (19,1 10,5 (10,5% 7,8 (7,8% 6,1 (6,1% 5,6 (5,6% 2,6 (2,6% 2,2 (2,2 1,6 (1,6 5,5 (5,5% 4,7 (4,7% 2,5 (2,5 1,4 (1,4% 23,7 (23,7% 30, (30,3 19, (19, 10, (10,5 7, (7,8 6, (6,1 5, (5,6 2, (2,6 (2, 1, (1, (5,5 4, (4,7 (1,4 23, (23,7 (30, (19 (10, (7, (6, (5, (2 (1 (4, (23, (30 (10 (7 (6 (5 ( (4 (23 (3

ABSTRACT: The present study investigated Salmonella spp. in the feces of 200 foals up to one year of age (100 with clinical signs of diarrhea and 100 without clinical signs of diarrhea). Bacteriological culture, serotyping, antimicrobial susceptibility, and real-time PCR (qPCR SYBR® Green or a TaqMan®) for detecting the invA gene (with and without a selective pre-enrichment step in tetrathionate broth) were performed. Bacterial culture revealed 15% (n=30) of positive animals (21 animals with diarrhea and nine without diarrhea). Among the 30 isolates, 13 different serovars were identified: S. Infantis, S. Minnesota, S. I.4,5,12:i:-; S. Anatum, S. Cerro, S. Oranienburg, S. Braenderup, S. Give, S. Newport, S. IIIb 61:c:z35, S. 109:-:1.5, S. I.4.12:d:-, S. I.6.8:-:-. Multidrug resistance was found in 43.33% (n=13) of the isolates, with one isolate obtained from animals without diarrhea and 12 isolates from animals with diarrhea. All qPCR techniques used in the study classified more samples as positive for Salmonella spp. than the bacterial culture of feces. In addition, all qPCR techniques detected more positive animals in the diarrhea group than in the diarrhea-free group. The results confirm the utility of the qPCR method without the pre-enrichment step in tetrathionate as a rapid test for Salmonella spp. in carrier animals. In animals with clinical signs of diarrhea, it can be combined with bacterial culture (antimicrobial susceptibility testing and serotyping). The isolation of Salmonella spp. in nine animals without diarrhea confirms the importance of asymptomatic carrier animals in the epidemiology of the disease. The multidrug resistance observed highlights the importance of rational antimicrobial use in horses and adopting biosecurity protocols that are efficacious in controlling the spread of infections between animals and zoonotic transmission in farms. ABSTRACT spp 20 (10 10 . diarrhea) serotyping realtime real time SYBR TaqMan® TaqMan preenrichment pre enrichment broth performed 15 n=30 n30 n (n=30 21 (2 3 1 identified S Infantis Minnesota I.4,5,12i I4512i Ii I.4,5,12 i I 4 5 I.4,5,12:i:- Anatum Cerro Oranienburg Braenderup Give Newport 61cz35, 61cz35 cz 61 c z35, z35 z 61:c:z35 1091.5, 10915 109 1.5, 109:-:1.5 I.4.12d, I412d Id I.4.12 d , I.4.12:d:- I.6.8. I68 I.6.8 6 8 I.6.8:-:- 4333 43 33 43.33 n=13 n13 (n=13 addition diarrheafree free serotyping. serotyping) disease farms 2 (1 n=3 n3 (n=3 ( 12i I4512 I.4,5,1 I.4,5,12:i: 61cz3 z3 61:c:z3 1091 1091.5 1.5 109:-:1. 12d I.4.12d I412 I.4.1 I.4.12:d: I6 I.6. I.6.8:-: 433 43.3 n=1 n1 (n=1 n= (n= I451 I.4,5, I.4,5,12:i 61cz 61:c:z 1091. 1. 109:-:1 I41 I.4. I.4.12:d I.6 I.6.8:- 43. (n I45 I.4,5 109:-: I4 I.4 I. I.6.8: I.4, 109:- 109:

RESUMO: O presente estudo investigou a ocorrência de Salmonella spp. em fezes de 200 potros com até um ano de idade (100 com sinais clínicos de diarreia e 100 sem sinais clínicos de diarreia), utilizando as técnicas de cultivo bacteriológico e PCR em tempo real (qPCR) pelos métodos de corante fluorescente (SYBR® Green) e sonda específica (Taqman®) para a detecção do gene invA com e sem etapa de pré-enriquecimento seletivo em caldo de tetrationato. O cultivo bacteriológico revelou 15% (n=30) de animais positivos (21 animais com diarreia e nove animais sem diarreia). Dentre esses 30 isolados, 13 sorovares diferentes foram identificados: S. Infantis, S. Minnesota, S. I.4,5,12:i:-; S. Anatum, S. Cerro, S. Oranienburg, S. Braenderup, S. Give, S. Newport, S. IIIb 61:c:z35, S. 109:-:1.5, S. I.4.12:d:-, S. I.6.8:-:-. Multirresistência foi constatada em 43,33% (n=13) dos isolados, sendo um isolado obtido de animal sem diarreia e 12 isolados de animais com diarreia. Todas as técnicas de qPCR empregadas no estudo apresentaram maior número de amostras classificadas como positivas para Salmonella spp. comparadas ao cultivo bacteriológico de fezes. Adicionalmente, em todas as técnicas de qPCR houve maior número de animais detectados como positivos no grupo de animais com diarreia em relação aos animais sem diarreia. Os resultados confirmaram a utilidade do método qPCR sem a etapa de pré-enriquecimento em tetrationato, como um teste rápido para detecção de Salmonella spp. em animais portadores ou em animais com sinais clínicos de diarreia. O cultivo bacteriológico deve ser associado para a realização do teste de sensibilidade aos antimicrobianos e sorotipificação. O isolamento de Salmonella spp. em nove animais sem diarreia, confirma a importância dos animais portadores assintomáticos na epidemiologia da doença. A multirresistência observada evidencia a importância do uso racional de antimicrobianos em equinos e a importância da adoção de protocolos de biossegurança que sejam eficazes para controlar a disseminação de infecções entre animais e a transmissão zoonótica nas fazendas. RESUMO spp 20 (10 10 , diarreia) (qPCR SYBR® SYBR (SYBR Green Taqman® Taqman (Taqman® préenriquecimento pré enriquecimento tetrationato 15 n=30 n30 n (n=30 21 (2 . 3 1 identificados S Infantis Minnesota I.4,5,12i I4512i Ii I.4,5,12 i I 4 5 I.4,5,12:i:- Anatum Cerro Oranienburg Braenderup Give Newport 61cz35, 61cz35 cz 61 c z35, z35 z 61:c:z35 1091.5, 10915 109 1.5, 109:-:1.5 I.4.12d, I412d Id I.4.12 d I.4.12:d:- I.6.8. I68 I.6.8 6 8 I.6.8:-:- 4333 43 33 43,33 n=13 n13 (n=13 Adicionalmente sorotipificação doença fazendas 2 (1 (Taqman n=3 n3 (n=3 ( 12i I4512 I.4,5,1 I.4,5,12:i: 61cz3 z3 61:c:z3 1091 1091.5 1.5 109:-:1. 12d I.4.12d I412 I.4.1 I.4.12:d: I6 I.6. I.6.8:-: 433 43,3 n=1 n1 (n=1 n= (n= I451 I.4,5, I.4,5,12:i 61cz 61:c:z 1091. 1. 109:-:1 I41 I.4. I.4.12:d I.6 I.6.8:- 43, (n I45 I.4,5 109:-: I4 I.4 I. I.6.8: I.4, 109:- 109:

ABSTRACT: Vagal indigestion (VI) is a digestive disorder characterized by the dysfunction of the vagus nerve. This disorder leads to changes in forestomach motility. The causes of VI are varied. Failure to transport digestive contents may occur due to mechanical obstruction or a neurogenic origin. There are few reports in the literature regarding this disease in mini-cattle. These cattle seem to be predisposed to the development of VI. The aim of the present study was to analyze the epidemiological, clinical, laboratory, and electrocardiographic aspects of mini-cattle diagnosed with VI. The medical records of nine mini-cattle diagnosed with VI were retrospectively reviewed. Mini-cattle were referred to the Large Animal Hospital in Botucatu, Brazil, from 2002 to 2021. It was observed that VI affected young mini-cattle. The predominant clinical manifestations were intermittent gas ruminoreticular tympanism with increased volume in the left paralumbar fossa and increased volume in the right ventral region (apple/pear aspect), hypomotility in ruminal auscultation and the presence of pasty stools. The mean heart rate of the animals was 75 beats per minute. In one case, bradycardia was observed by electrocardiogram and Holter monitor system. In this case, the predominance of parasympathetic activity of the autonomic nervous system was observed. The main hematological findings were leukocytosis and lymphocytosis. The therapeutic approach included ruminal fistulation and the implantation of a permanent rumen cannula. All animals undergoing the procedure were discharged with daily care instructions. ABSTRACT (VI nerve motility varied origin minicattle. minicattle mini cattle. epidemiological laboratory reviewed Minicattle Mini Botucatu Brazil 200 2021 apple/pear applepear apple pear aspect, aspect , aspect) stools 7 minute case lymphocytosis cannula instructions 20 202 2

RESUMO: A indigestão vagal (IV) é um distúrbio digestivo caracterizado pela disfunção do nervo vago. Esse distúrbio leva a alterações na motilidade dos pré-estômagos. As causas da IV são variadas. A falha no transporte do conteúdo digestivo pode ocorrer por obstrução mecânica ou pode ser de origem neurogênica. Há poucos relatos na literatura a respeito dessa enfermidade em mini-bovinos. Esses bovinos parecem estar predispostos ao desenvolvimento de IV. O objetivo do presente estudo foi analisar os aspectos epidemiológicos, clínicos, laboratoriais e eletrocardiográficos de mini-bovinos diagnosticados com IV. Os prontuários de nove mini-bovinos diagnosticados com IV foram revisados retrospectivamente. Os mini-bovinos foram encaminhados ao Hospital de Grandes Animais de Botucatu, Brasil, de 2002 a 2021. Observou-se que a IV acometeu mini-bovinos jovens. As manifestações clínicas predominantes foram timpanismo ruminoreticular gasoso intermitente com aumento de volume na fossa paralombar esquerda e aumento de volume na região ventral direita (aspecto maçã/pêra), hipomotilidade na ausculta ruminal e presença de fezes pastosas. A frequência cardíaca média dos animais foi de 75 batimentos por minuto. Em um caso, foi observada bradicardia por meio do eletrocardiograma e do sistema Holter. Neste caso observou-se a predominância da atividade parassimpática do sistema nervoso autônomo. Os principais achados hematológicos foram leucocitose e linfocitose. A abordagem terapêutica incluiu fistulação ruminal e implante de cânula ruminal permanente. Todos os animais submetidos ao procedimento receberam alta hospitalar com orientações de cuidados diários. RESUMO (IV vago préestômagos. préestômagos pré estômagos. estômagos pré-estômagos variadas neurogênica minibovinos. minibovinos mini bovinos. epidemiológicos clínicos retrospectivamente Botucatu Brasil 200 2021 Observouse Observou se jovens aspecto maçã/pêra, maçãpêra maçã/pêra , maçã pêra maçã/pêra) pastosas 7 minuto Holter observouse observou autônomo linfocitose permanente diários 20 202 2

RESUMO: A leucoencefalomalácia (LEM) é uma enfermidade que acomete equídeos causada pela ingestão de milho e seus derivados e feno contaminados pela micotoxina fumonisina, um metabólito do fungo Fusarium verticillioides (sinônimo para F. moniliforme). Os sinais clínicos apresentam início agudo e evolução rápida e são decorrentes de lesões encefálicas. O objetivo deste estudo é descrever os achados clínicos de 11 equídeos diagnosticados com LEM, incluindo a análise do líquido cefalorraquidiano (LCR). 91% dos animais afetados eram equinos e somente 9% (1/11) era asinino. A localização clínica das lesões era 64% (7/10) cerebrais, manifestadas por alterações no estado mental e comportamento e 36% (4/10) no tronco encefálico, manifestadas por incoordenação, desvio lateral de cabeça, nistagmo, hipoalgesia da face e dificuldade de apreensão, mastigação e deglutição de alimentos. Comparativamente, os achados post mortem revelaram que 82% (9/11) das lesões eram no cérebro e 18% (2/11) no tronco encefálico. Alterações no LCR, tais como xantocromia (43%, 3/7), hiperproteinorraquia (50%, 3/6) e pleocitose (43%, 3/7), foram observadas. Os animais afetados apresentaram sinais clínicos compatíveis com lesões encefálicas e/ou de tronco cerebral. O LCR de animais com LEM pode apresentar xantocromia, hiperproteinorraquia, e pleocitose, reforçando que esta doença deve ser incluída como diagnóstico diferencial de encefalomielites.

ABSTRACT: Equine leukoencephalomalacia (LEM) is a disease caused by the ingestion of food, especially corn, contaminated by fumonisin, a Fusarium verticillioides (synonymous with F. moniliforme) metabolite. The clinical signs of brain injuries have an acute onset and rapid evolution. This study aimed to describe the clinical findings in 11 animals diagnosed with LEM, including cerebrospinal fluid (CSF) analysis. Of these animals, 91% (10/11) were horses, and only 9% (1/11) were asinine. The clinical localization of the lesions was 64% (7/10) cerebral, manifested mainly by altered mental state and behavioral disturbance, and 36% (4/11) were brainstem lesions, manifested by incoordination, head tilt, nystagmus, facial hypoalgesia, difficulty in apprehension, chewing, and swallowing food. Postmortem findings revealed that 82% (9/11) of the lesions were in the cerebrum and 18% (2/11) in the brainstem. CSF findings, such as xanthochromia (43%, 3/7), hyperproteinorrachia (50%, 3/6), and pleocytosis (43%, 3/7) were observed. The affected animals showed neurological signs that were compatible with cerebral and/or brainstem injuries. The CSF from animals with LEM may present with xanthochromia, hyperproteinorrachia, and pleocytosis, reinforcing the fact that this disease should be included in the differential diagnosis of encephalomyelopathies.

RESUMO: O Labrador Retriever é uma das principais raças caninas com maior predisposição à obesidade. Vários fatores, especialmente as interrelações entre a alimentação, exercício e fatores sociais, influenciam a probabilidade de um cão se tornar obeso. Além disso, fatores genéticos são também responsáveis pela obesidade em cães, e no Labrador Retriever a mutação “frameshift” P187fs no gene pró-opiomelanocortina (POMC) está fortemente associada à obesidade. Não existem estudos prévios de prevalência da deleção P187fs no gene POMC em cães Labrador Retriever no Brasil. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar esta mutação em cães da raça Labrador Retriever no Brasil. Dos 108 Labradores Retrievers avaliados neste estudo, 59 eram de um estudo retrospectivo (composto por animais atendido no hospital veterinário e sem linhagem conhecida) e 49 eram de um estudo prospectivo (composto por 19 cães pet e 30 cães de assistência/resgate). Um questionário de risco de obesidade modificado foi aplicado nos tutores dos animais usados no estudo prospectivo. Fragmentos de DNA, contendo a mutação, foram amplificados por PCR e submetidos ao sequenciamento gênico direto. A frequência alélica da mutação foi de 21,3% e estava fora do equilíbrio de Hardy-Weinberg (P<0,05). Usando somente os dados dos animais de linhagem conhecida, a presença do alelo mutado foi maior no Grupo de cães de Assistência/resgate que no Grupo de Pets (P<0,01), além disso, as frequências alélicas nos Grupos de Assistência/resgate (31,7%) e no de pets (18,4%) estavam fora e em equilíbrio de Hardy-Weinberg (P<0,05), respectivamente. Embora a mutação tenha aumentado a motivação pelo alimento em cães Labrador Retriever do Grupo de Assistência/resgate, outras variáveis, especialmente o frequente exercício, favoreceu a manutenção o peso corporal ideal (peso corporal = 5). Em resumo, o desequilíbrio de Hardy-Weinberg observado na distribuição do alelo POMC_P187fs observado neste estudo, independentemente do grupo de Labrador Retriever avaliado, sugere a possibilidade de uma seleção positiva para o alelo mutado, o qual poderá levar a manutenção desse alelo deletério nesta população.

ABSTRACT: The Labrador Retriever is among the main breeds with the greatest predisposition to obesity. Several factors, especially the interrelationships between food management, exercise and social factors; influence the likelihood of a dog becoming obese. Furthermore, genetic factors are also responsible for obesity in dogs, and in Labrador Retriever, a frameshift mutation (P187fs) in pro-opiomelanocortin (POMC) gene is strongly associated with obesity. There is no knowledge of studies that have previously evaluated the prevalence of the canine POMC deletion (P187fs) in Brazilian Labrador Retriever. Therefore, the objective of this study was to investigate this mutation in Labrador Retriever dogs in Brazil. Of the 108 Labrador Retrievers that were assessed in this study, 59 were from a previous study, composed by animals assisted in a veterinary hospital with unknown lineage, and 49 were from a prospective study, composed of 19 pet and 30 assistance/rescue Labrador Retriever dogs. The obesity risk and appetite questionnaire were applied, with some modifications, to tutors of the animals used in the prospective study. Fragments of the DNA, containing the mutation, were amplified by PCR and submitted to direct gene sequencing. The allele frequency of the mutation was 21.3% and was out of Hardy-Weinberg equilibrium (P<0.05). Using only the data of animals with known lineage, the presence of the mutated allele was higher in the Assistance/rescue Group than Pet Group (P<0.01), furthermore, the allele frequencies observed in Assistance Group (31.7%) was out of Hardy-Weinberg equilibrium (P<0.05), while that in the Pet Group (18.4%) was in equilibrium (P>0.05). Although the mutation has increased the food-motivation in the assistance/rescue dogs, other variables, especially frequent exercising, favored that these animals maintained the ideal body weight (body condition score = 5). In summary, the Hardy-Weinberg disequilibrium observed in the allele distribution of the deletion POMC_P187fs in this study, independently of the Labrador Retriever group assessed, suggesting the possibility of positive selection of the mutated allele, which may lead to the maintenance of this deleterious allele in the studied population.

RESUMO: O Albinismo é uma doença genética caracterizada pela deficiência na produção de melanina, o que torna os animais afetados mais susceptíveis a problemas cutâneos e influencia negativamente a criação destes animais. A mutação nonsense (c.1431G>A) no gene da tyrosinase já foi descrita como responsável pelo albinismo oculocutâneo em búfalos, entretanto estudos prévios sobre a prevalência dessa mutação ainda não foram realizados no Brasil. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a presença desta mutação em uma população de búfalos brasileiros. Foram genotipados 315 búfalos clinicamente normais, ou seja, sem o fenótipo albino evidente. Desses, 11 (3,5%) eram heterozigotos para a mutação (N/TYR) e os demais eram homozigotos selvagens (N/N). Este resultado demonstra que o alelo mutado para o albinismo em búfalo está presente no rebanho brasileiro e aponta a importância de estudos de prevalência de enfermidades hereditárias com o objetivo de prevenir a disseminação desses alelos mutados, minimizando os prejuízos.

ABSTRACT: Albinism is a genetic disease characterized by deficient melanin production making affected animals more susceptible to skin problems, negatively influencing production systems of the same. In buffalo, a nonsense mutation (c.1431G>A) in the tyrosinase gene was already described, which is responsible for the oculocutaneous albinism buffalo phenotype. However, prevalence studies have never been performed for this anomaly in Brazil. Therefore, the objective of this study was to investigate this mutation in buffalo herd in Brazil. Of the 315 buffalo tested with no albinism phenotype evident, 11 (3.5%) were heterozygous for the mutation and none were mutated homozygous, showing the existence of the albinism gene in buffalo production herds and proving the importance of prevalence studies for hereditary diseases in order to prevent the dissemination of these same genes and their negative productivity consequences.

RESUMO: A doença de armazenamento de glicogênio tipo II (DAG-II) e a síndrome miastênica congênita (SMC) são importantes doenças autossômicas recessivas no gado Brahman. O objetivo deste estudo foi investigar a presença das mutações responsáveis pela DAG-II (E7, c.1057_1058delTA; e E13, c.1783C>T) e pela SMC (c.470del20) em bovinos da raça Brahman e em touros Brahman que são rotineiramente utilizados em programas de reprodução no Brasil. Um total de 276 amostras de bulbo piloso de bovinos Brahman (167 fêmeas e 109 machos, com idade variando de 12 a 24 meses) e 35 amostras de sêmen congeladas de touros Brahman (22 touros americanos, 11 touros brasileiros, um touro argentino e um touro australiano) foram usados neste estudo. O DNA genômico foi purificado, das amostras de bulbo piloso e de sêmen, e utilizado na genotipagem por PCR das mutações c.1057_1058delTA (E7) e c.1783C>T (E13) no gene GAA e c.470del20 no gene CHRNE. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados. A frequência genotípica para cada polimorfismo foi estimada separadamente. Dos 276 Brahman testados, 7,3% foram identificados como heterozigotos para E7. Todos os Brahman foram homozigotos wild-type para o alelo E13. A mutação E7 foi identificada em homozigose em 8,6% (3/35) das amostras de sêmen comerciais, enquanto que a mutação E13 não foi identificada. A mutação c.470del20 foi identificada em heterozigose em 0,73% das amostras de bulbo piloso, mas esta mutação não estava presente nas amostras de sêmen avaliadas. Nenhum estudo prévio avaliou a prevalência das mutações responsáveis pela DAG-II ou SMC em bovinos Brahman brasileiro. Em suma, as mutações E7 e c.470del20 estão presentes no rebanho Brahman brasileiro, e medidas de controle devem ser adotadas para prevenir o aumento da incidência da DAG-II e SMC em bovinos da raça Brahman no Brasil.

ABSTRACT: Glycogen storage disease type II (GSD-II) and congenital myasthenic syndrome (CMS) are important autosomal recessive disorders in Brahman cattle. The objective of this study was to investigate the presence of mutations responsible for GSD II (E7, c.1057_1058delTA; and E13, c.1783C>T) and CMS (c.470del20) in purebred Brazilian Brahman cattle and in purebred Brahman bulls that were routinely used in breeding programs in Brazil. A total of 276 purebred Brahman cattle (167 females and 109 males, with ages ranging from 12-24 months) and 35 frozen semen samples taken from purebred Brahman bulls (22 bulls from the USA, 11 Brazilian bulls, one Argentine bull and one Australian bull) were used in this study. Genomic DNA was purified from hair root samples and from semen samples. Purified DNA was used in PCR genotyping to mutations c.1057_1058delTA (E7) and c.1783C>T (E13) in the GAA gene and c.470del20 in the CHRNE gene. The PCR products were purified and sequenced. The genotypic frequencies per polymorphism were estimated separately. Of the 276 Brahman cattle tested, 7.3% were identified as heterozygous for E7. All Brahman cattle studied were homozygous for the wild-type E13 allele. The E7 mutations was identified as heterozygous in 8.6% (3/35) of the commercial semen samples, whereas the E13 mutations was not identified. The c.470del20 mutation was identified as heterozygous in 0.73% of the hair root samples, but this mutation was not present in any semen sample assessed. No study had previously evaluated the prevalence of mutations responsible for GSD II or CMS in Brazilian Brahman cattle. In summary, the E7 and c.470del20 mutations are present in the Brazilian Brahman herd, and control measures should be adopted to prevent an increase in the incidence of GSD-II and CMS in Brahman cattle in Brazil.

RESUMO: Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma e concentrações séricas de IgG (após a padronização de teste ELISA) em potros do nascimento aos trinta dias de idade, antes e depois de mamarem colostro e serem tratados com plasma por via intravenosa. Foram utilizados 20 potros e suas respectivas mães, além de quatro animais doadores de plasma. Foram colhidas amostras de sangue dos potros em cinco momentos, logo após o nascimento e antes de mamar colostro (M1), dez horas após nascimento (M2), 24 horas após nascimento e previamente administração do plasma sanguíneo (M3), 48 horas de vida e 24 horas após administração do plasma sanguíneo (M4), e 30 dias após nascimento (M5). Foram colhidos sangue e colostro das éguas progenitoras no momento do parto. A concentração de proteína total (PT) e albumina foram determinadas em analisador bioquímico, a concentração de PT também foi avaliada em refratômetro manual. O fracionamento proteico foi realizado utilizando eletroforese em gel de agarose. A densidade do colostro foi avaliada com colostrômetros de refração BRIX e de densidade específica. A concentração de IgG total de todas as amostras foi determinada por teste ELISA. Com o sistema de ELISA aqui proposto foi possível determinar concentrações de IgG em amostras de soro, plasma e colostro equino com adequada repetibilidade. A média ± desvio padrão da concentração sérica de IgG dos potros ao nascer, foi de 15±8mg/dL, com dez horas de vida foi de 2.408±608mg/dL, se manteve em níveis semelhantes até 48 horas (2.364±784mg/dL) e diminuíram significativamente aos 30 dias de vida (1.414±586mg/dL). A concentração sérica e colostral de IgG nas éguas foi de 1.746±505mg/dL e 7.714±2.619mg/dL, respectivamente. A concentração plasmática de IgG dos doadores de plasma foi de 2.026±148mg/dL. Houve correlação positiva entre as concentrações séricas de IgG e PT (r=0,69 para refratômetro e r=0,76 para bioquímico), GT (r=0,81) e gamaglobulina (r=0,85). Dez horas após o nascimento foi possível verificar a transferência de imunidade passiva, possibilitando adotar medidas profiláticas e/ou terapêuticas em haras de criação de cavalos. Considerando que a proteína total, globulinas totais e fração γ-globulina apresentam correlação com IgG, estas determinações são úteis para monitorar os potros após mamarem o colostro. Um litro de plasma administrado às 24 horas de vida não foi suficiente para aumentar as concentrações séricas de IgG, 24 horas após transfusão, em potros com adequada transferência de imunidade passiva.

ABSTRACT: The aim of this study was to evaluate serum protein and serum IgG concentrations (after a direct enzyme immunoassay test ELISA optimization) in newborns foals from birth to thirty days of life before and after colostrum consumption and intravenous treatment with plasma. Twenty foals and their respective progenitors as well as four plasma donor’s horses were used. Blood samples were obtained from newborn foals at five time points, immediately after birth and before colostrum intake (M1), ten hours after birth (M2), 24 hours after birth and prior administration of blood plasma (M3), 48 hours after birth and 24 hours after plasma administration (M4), and 30 days after birth (M5). Blood and colostrum samples were collected from the progenitor mares immediately postpartum. Concentration of total protein (TP) and albumin were determined using a biochemical analyzer. The TP concentration was also measured by refractometer. Fractions of total serum protein were separated using agarose gel electrophoresis. Colostrum density was evaluated using BRIX refractometer and specific density colostrometer. Total IgG concentration was determined by an enzyme-linked immunosorbent assay. With the ELISA system proposed here it was possible to determine IgG concentrations in serum, plasma, and equine colostrum samples with adequate repeatability. Serum IgG concentration in foals at birth was 15±8mg/dL (mean ± standard deviation) raising at ten hours (2,408±608mg/dL) and remaining at similar levels up to 48 hours of life (2,364±784mg/dL), and decreasing significantly at 30 days of age (1,414±586mg/dL). Serum and colostrum IgG concentrations of mares were 1,746±505mg/dL and 7,714±2,619mg/dL, respectively. The plasma IgG concentrations from donor mares were 2,026±148mg/dL. Total protein, total globulins, and γ-globulin fraction showed correlation with IgG. Ten hours post birth was an adequate time to verify the transfer of passive immunity, allowing to adoption prophylactic and/or therapeutic measures in a horse farms. One liter of plasma administered at 24 hours of life was not sufficient to raise serum IgG concentrations in foals without passive immunity transfer failure.

RESUMO: O granuloma leproide canino (GLC) é uma doença micobacteriana que cursa com lesão nodular, cutânea ou subcutânea, tipicamente auto limitante, decorrente de infecção pelo Mycobacterium. É uma doença dermatológica rara, usualmente relatada em países de clima tropical. O objetivo deste trabalho é caracterizar as alterações microscópicas e epidemiológicas de casos de GLC. Além disso, utilizar exames complementares para demonstração do Mycobacterium sp. na lesão analisada utilizando coloração de Ziehl-Neelsen, imuno-histoquímica e PCR para classificação e sequenciamento da espécie de Mycobacterium. Foram analisados 27 casos de GLC diagnosticados no período compreendido de 2005 a 2014 (21 exames histológicos e seis citológicos). A raça mais acometida foi Boxer (33,3%), seguida da Dachshund (11,1%). Foi frequente o acometimento de caninos de grande porte (64%) e de pelame curto (96%). Não foi possível estabelecer qualquer padrão de sazonalidade do GLC. As lesões se localizaram anatomicamente no pavilhão auricular na maioria dos casos (93%), constituindo-se de nódulos únicos ou múltiplos, ulcerados ou não. Em nenhum dos casos foi observado acometimento sistêmico. Lesões histológicas seguiram três padrões que variaram de nodulares a difusos, com infiltrado granulomatoso/piogranulomatoso com envolvimento de derme superficial e profunda. A observação de bacilos pela coloração de Ziehl-Neelsen confirmou o diagnóstico. Este teste demonstrou grande variação na quantidade de bacilos nas lesões, não relacionado estatisticamente ao tipo da lesão nem ao período evolutivo. A imuno-histoquímica foi positiva em 90% dos casos, e em alguns casos facilitou a identificação de bacilos, entretanto, em dois casos ocorreram resultados negativos mesmo havendo marcação pela coloração de Ziehl-Neelsen. Na técnica de PCR realizada em 18 amostras, 44% dos casos foram positivos, duas sequências inespecíficas, e demonstrou ainda, que Mycobacterium murphy foi responsável por 2 casos e Mycobacterium hodleri em um caso. Em outros três casos não se obteve 100% de semelhança entre o produto sequenciado e os demais Mycobacterium.

ABSTRACT: Canine leproid granuloma (CLG) is cutaneous diseases caused by mycobacteria that course with nodular cutaneous or subcutaneous lesion, typically self-limiting, due to Mycobacterium infection. It is an unusual dermatological disease, usually reported in tropical countries. The objective of the present study is to describe the epidemiological and histopathological findings of CLG. Furthermore, use additional tests for demonstration of Mycobacterium sp. in the lesion were performed, e.g. Ziehl-Neelsen staining, immunohistochemical and polymerase chain reaction (PCR) for classification and genetic sequencing of Mycobacterium species. Twenty seven cases of CLG diagnosed between 2005 and 2014 were studied (21 cases by histological examination and six by cytological examination). Boxer dogs were the breed most affected (33.3%) followed by Dachshund dog breed (11.1%). The disease affected dogs with mainly large size (64%) and short-coated (96%). There was no evidence predilection for occurrence in any season. The lesions were localized, in most cases, at the pinna (93%), comprise one or multiple nodules, ulcerated or not. None of the cases was observed with systemic involvement. Histopathological findings included three patterns of nodular to diffuse, with inflammatory infiltration granulomatous/pyogranulomatous that involved superficial and deep dermis. Definitive diagnosis was made by the presence of acid-fast bacilli by Ziehl-Neelsen stain, showing wide variation in the number of bacilli in the lesions, not being statistically correlated to the type of injury or the evolution period. Immunohistochemistry was effective, and in some cases facilitated the identification of bacilli, but in two cases were negative even with marking by Ziehl-Neelsen staining. The immunohistochemistry was positive in 90% cases, and in some cases facilitated the identification of bacilli, but in two cases were negative even with marking by Ziehl-Neelsen staining. The PCR technique was positive in 44% of cases, demonstrating that Mycobacterium murphy was responsible for two cases of GLC and Mycobacterium hodleri by a one case. In other three PCR-positive cases if not got 100% similarity between the sequenced and other Mycobacterium.

Resumo: A dermatosparaxia é uma doença autossômica recessiva do tecido conjuntivo, clinicamente caracaterizada pela fragilidade e hiperextensibilidade da pele. A dermatosparaxia em ovinos White Dorper é causada pelo polimorfismo de base única (SNP) c.421G>T no gene ADAM metalopeptidase com trombospondina tipo 1 motif, 2 (ADAMTS2). O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência deste SNP em ovinos White Dorper no estado de São Paulo, Brasil. Foram coletadas amostras de sangue de 303 ovinos White Dorper. O DNA foi purificado destas amostras sanguíneas e utilizado em uma reação em cadeia da polimerase (PCR) para amplificação da região do gene contendo SNP c.421G>T. Os produtos das PCR foram sequenciados para determinar o genótipo dos animais. A prevalência do SNP na população estudada foi de 15,5%, estes achados indicam que medidas de controle efetivas devem ser utilizadas para prevenir a disseminação deste SNP no rebanho brasileiro de White Dorper.

Abstract: Dermatosparaxis is an autosomal recessive disorder of connective tissue; the disorder is clinically characterized by skin fragility and hyperextensibility. Dermatosparaxis in White Dorper sheep is caused by a single nucleotide polymorphism (SNP) (c.421G>T) in the ADAM metalloproteinase with thrombospondin type 1 motif, 2 (ADAMTS2) gene. The aim of this study was to investigate the prevalence of this SNP in a White Dorper herd in São Paulo state, Brazil. In this study, we collected blood DNA samples from 303 White Dorper sheep and performed polymerase chain reaction to amplify the SNP region. The samples were sequenced to determine the presence of the SNP in the ADAMTS2 gene. The SNP prevalence in the studied population was 15.5%; this finding indicates that more effective control measures should be used to prevent the inheritance of SNP c.421G>T in the ADAMTS2 gene in Brazilian White Dorper herds.

Resumo:O colapso induzido pelo exercício (EIC) é considerado uma síndrome autossômica recessiva que afeta principalmente cães da raça Labrador Retriever. A doença é caracterizada por fraqueza muscular e colapso após exercício intenso. Usualmente, ocorre recuperação clínica após o episódio, mas alguns animais podem vir a óbito. Os sinais clínicos são decorrentes do polimorfismo de base única (SNP) c.767G>T no gene Dynamin 1 (DNM1). O objetivo deste trabalho foi determinar a ocorrência deste SNP em 321 cães da raça Labrador Retriever do Estado de São Paulo. Primers específicos para a amplificação de todo o exon 6 do gene DNM1 foram usados nas PCRs utilizando DNA a partir de amostras de sangue ou swab bucal, a avaliação final foi realizada com sequenciamento direto dos produtos da PCR. Dentre os 321 animais estudados, 3,4 % (11/321) eram homozigotos para o SNP c.767G>T no gene DNM1 e 24,6% (79/321) eram heterozigotos. Somente um dos 11 animais homozigotos apresentavam sinais clínicos compatíveis com a EIC. Este é o primeiro estudo sobre a ocorrência deste SNP no Brasil e considerando que quase 25% dos animais estudados eram heterozigotos, a genotipagem dos animais para este SNP pode ser importante antes dos acasalamentos para cães desta raça. A EIC deve ser considerada nos diagnósticos diferenciais de enfermidades neuromusculares em cães da raça Labrador Retriever.

Abstract:The exercise-induced collapse (EIC) is considered an autosomal recessive syndrome that mainly affects Labrador Retriever dogs. The disease is characterized by muscle weakness and collapse after intense exercise. Recovery usually occurs after exercise but some animals may die. The clinical signs occurs due to the single-nucleotide polymorphism (SNP) c.767G>T in Dynamin 1 (DNM1) gene. The aim of this study was to evaluate the occurrence of this SNP in 321 Labrador Retriever dogs from São Paulo state. Specific primers for amplification of the entire exon 6 of the DNM1 gene were used in a PCR performed with DNA from blood or buccal swab samples, direct sequencing was performed for the final evaluation. Among 321 animals studied, 3.4% (11/321) of animals were homozygous for the DNM1 SNP (c.767G>T) and 24.6% (79/321) were heterozygous. Only one of the 11 homozygous animals in this study had previous clinical signs compatible with this disease. This is the first study that evaluated the occurrence of DNM1 SNP (c.767G>T) gene in Brazil and considering that almost 25% of the studied animals were heterozygous, the routinely evaluation of this SNP may be important before this breed mating The EIC should be include in the differential diagnosis of neuromuscular diseases in Labrador Retriever dogs.

Dermatosparaxia em animais é uma doença autossômica recessiva do tecido conjuntivo caracterizada por fragilidade e hiperextensibilidade cutânea. A doença em ovinos White Dorper é provocada pela mutação c.421G>T no gene ADAMmetalopeptidase com trombospondina tipo 1 motif, 2 (ADAMTS2). O objetivo deste estudo foi descrever os achados clínicos, moleculares e histopatológicos da dermatosparaxia em ovinos White Dorper de um rebanho localizado no Centro-Oeste Paulista. O rebanho era composto por nove animais, sendo um reprodutor, quatro matrizes e seus respectivos borregos. Dos nove animais examinados, dois apresentavam sinais clínicos compatíveis com dermatosparaxia. O exame histopatológico de amostras cutâneas das lesões destes dois animais revelou também achados compatíveis com dermatosparaxia, sendo caracterizados por epiderme e anexos cutâneos preservados e sem características atípicas; colágeno displásico arranjado em feixes pequenos, fragmentados e com focos de degeneração, anexos cutâneos proeminentes e na região da derme foco hemorrágico intenso associado a moderado infiltrado neutrofílico na derme profunda. Com o objetivo de realizar o diagnóstico molecular da enfermidade, uma PCR foi padronizada utilizando primers específicos desenhados para amplificar a região do gene ADAMTS2 que continha a mutação c.421G>T e o DNA obtido de amostras de sangue de todos os animais do rebanho. O sequenciamento direto dos produtos da PCR, comprovou que os dois animais clinicamente afetados possuíam a mutação responsável pela dermatosparaxia. A metodologia descrita neste estudo possibilitou o diagnóstico definitivo da doença. Segundo a literatura consultada, esta é a primeira vez que a dermatosparaxia é descrita em ovinos White Dorper no Brasil. A metodologia aqui descrita poderá ser empregada em estudos futuros que avaliem a prevalência desta mutação no Brasil, possibilitando a adoção de medidas que previnam a disseminação dessa mutação no rebanho brasileiro de ovinos White Dorper.

Dermatosparaxis in animals is an autosomal recessive disorder of the connective-tissue clinically characterized by skin fragility and hiperextensibility. The disease in White Dorper sheep is caused by mutation (c.421G>T) in the ADAM metalloproteinase with thrombospondin type 1 motif, 2 (ADAMTS2) gene. This study describes the dermatological, histological and the molecular findings of the dermatosparaxis in White Dorper sheep from a herd located in the center-west of São Paulo State. The herd consisted of one ram, four ewe and their lambs. In this herd two lambs had clinical signs consistent with dermatosparaxis. Histopathological evaluation of the affected skin of these two animals also revealed consistent findings with dermatosparaxis, characterized by dysplasia of the collagen, which were arranged in small and fragmented collagen bundles and with foci of degeneration of collagen. Prominent cutaneous appendages and severe hemorrhagic focus in dermis region associated with mild neutrophilic infiltrate in the deep dermis. PCR using DNA blood and specific primers to amplify the mutation region c.421G>T was optimized in order to perform molecular diagnosis of the disease. The direct sequencing of the PCR products proved that the two clinically affected animals had the mutation responsible for dermatosparaxis, previously described for this breed and allowed the definitive diagnosis of the disease. This is the first report of the dermatosparaxis in White Dorper sheep in Brazil and the methodology used to confirm the diagnosis could be used in future studies to assess the prevalence of this mutation in Brazil, allowing the adoption of measures to prevent the spread of this mutation in the Brazilian White Dorper herd.

A hipoferremia observada durante os processos inflamatórios sistêmicos é mediada pela hepcidina. O aumento da expressão da hepcidina é particularmente importante durante a inflamação aguda, por restringir a disponibilidade de ferro necessária para o crescimento de microrganismos patogênicos antes que a imunidade adaptativa ocorra. O objetivo deste estudo foi avaliar os achados clínicos e a expressão hepática do RNA mensageiro (RNAm) da hepcidina em cavalos após a indução da inflamação com Adjuvante completo de Freund (FCA). A expressão hepática do RNAm da hepcidina foi determinada em cavalos sadios após duas administrações intramusculares de FCA às 0 h (M0) e 12 h (M12). As concentrações plasmáticas de ferro e fibrinogênio foram mensuradas em múltiplos momentos entre 0 h e 240 h (M240) após a primeira administração de FCA (PI). A expressão do RNAm da hepcidina foi determinada por RT-qPCR usando amostras de biopsias hepáticas colhidas as 0 h (controle), 6 h (M6) e 18 h (M18) PI. A concentração plasmática média de fibrinogênio foi estatisticamente diferente do M0 entre 120 h e 216 h PI. A concentração plasmática média de ferro foi significantemente menor que o controle entre 16 h e 72 h PI, alcançou o nível mais baixo às 30 h PI (33% do valor inicial) e retornou aos valores de referência entre 96 h PI e até o final do experimento. A expressão do RNAm da hepcidina aumentou no M6 e permaneceu alta no M18. A concentração plasmática de ferro foi um indicador precoce da inflamação quando comparada com o fibrinogênio e pode ser útil na detecção precoce da inflamação em cavalos. A administração do FCA causou um rápido início da hipoferremia, e isto foi resultante do aumento da expressão hepática da hepcidina. Estes resultados enfatizam a importância da hepcidina e do metabolismo do ferro durante a inflamação em cavalos.

Hypoferremia observed during systemic inflammatory disorders is regulated by hepcidin. Hepcidin up-regulation is particularly important during acute inflammation, as it restricts the availability of iron, which is necessary for pathogenic microorganism growth before adaptive immunity occurs. The aim of this study was to evaluate the clinical findings and hepatic hepcidin mRNA expression in horses using a Freund's complete adjuvant (FCA) model of inflammation. The expression of hepcidin mRNA in the liver was determined in healthy horses following two intramuscular injections of FCA at 0 h and 12 h. Plasma iron and fibrinogen concentrations were measured at multiple time points between 0 h and 240 h post-FCA injection (PI). Hepcidin mRNA expression was determined by RT-qPCR using liver biopsy samples performed at 0 h (control), 6 h and 18 h PI. The mean plasma fibrinogen level was significantly different from the control values only between 120 and 216 h PI. The mean plasma iron level was significantly lower than the control between 16 and 72 h PI, reaching the lowest levels at 30 h PI (33 % of the initial value), and returned to the reference value from 96 h PI to the end of the experiment. Hepcidin mRNA expression increased at 6 h PI and remained high at 18 h PI. The iron plasma concentration was an earlier indicator of inflammatory processes in horses when compared with fibrinogen and might be useful for the early detection of inflammation in the horse. FCA administration caused the rapid onset of hypoferremia, and this effect was likely the result of up-regulated hepatic hepcidin gene expression. This study emphasizes the importance of hepcidin and iron metabolism during inflammation in horses.

A hipoferremia observada durante os processos inflamatórios sistêmicos é mediada pela hepcidina, um peptídeo que é sintetizado predominantemente no fígado de mamíferos. A hepcidina desempenha um papel chave no metabolismo do ferro e no sistema imune. O aumento da expressão da hepcidina é particularmente útil durante a inflamação aguda, pois restringe a disponibilidade de ferro, necessária para o crescimento de microorganismos patogênicos. Neste estudo, o RNA mensageiro da hepcidina asinina foi caracterizado e sua expressão foi determinada em fígado de jumentos (Equus asinus). A sequência da hepcidina asinina tem uma janela de leitura de 261 nucleotídeos e a proteína correspondente é formada por 86 aminoácidos. A sequência de aminoácidos da hepcidina asinina foi mais homóloga à sequência da hepcidina equina (98%). A hepcidina madura (25 aminoácidos) foi 100% idêntica à hepcidina madura equina e possuía as oito cisteínas conservadas nas demais sequências de hepcidinas analisadas. O perfil de expressão da hepcidina no fígado de jumentos saudáveis foi alto e similar ao perfil de expressão do gene de referência. A sequência da hepcidina asinina foi depositada no GenBankTM (HQ902884) e será útil para o desenvolvimento de estudos adicionais sobre o metabolismo de ferro e inflamação nesta espécie.

The hypoferremia that is observed during systemic inflammatory processes is mediated by hepcidin, which is a peptide that is mainly synthesized in the livers of several mammalian species. Hepcidin plays a key role in iron metabolism and in the innate immune system. It's up-regulation is particularly useful during acute inflammation, and it restricts the iron availability that is necessary for the growth of pathogenic microorganisms. In this study, the hepcidin mRNA of Equus asinus has been characterized, and the expression of donkey hepcidin in the liver has been determined. The donkey hepcidin sequence has an open reading frame (ORF) of 261 nucleotides, and the deduced corresponding protein sequence has 86 amino acids. The amino acid sequence of donkey hepcidin was most homologous to Equus caballus (98%). The mature donkey hepcidin sequence (25 amino acids) was 100% homologous to the equine mature hepcidin and has eight conserved cysteine residues that are found in all of the investigated hepcidin sequences. The expression profile of donkey hepcidin in the liver was high and was similar to the reference gene expression. The donkey hepcidin sequence was deposited in GenBankTM (HQ902884) and may be useful for additional studies on iron metabolism and the inflammatory process in this species.