Introdução: Nos últimos anos tem-se verificado uma incidência crescente da doenc¸a associada a Clostridium difficile (DACD). A caracterização molecular das várias estirpes tem permitido o reconhecimento de determinados ribotipos da bactéria associados a uma maior virulência. Objetivo: Isolamento e caracterização molecular das estirpes de Clostridium difficile responsáveis por DACD e a sua correlação clínica numa série hospitalar. Material e métodos: Análise prospetiva de doentes consecutivos com DACD, incluídos durante um período de 18 meses. Foi realizada a colheita de dados epidemiológicos, clínicos e laboratoriais. Após exame cultural das fezes, todas as estirpes da bactéria foram caracterizadas geneticamente, por deteção do gene gluD, específico da espécie, e dos genes codificantes das toxinas A e B. Posteriormente, as estirpes foram genotipadas, com determinação do ribotipo, por amplificação por PCR da região intergénica RNAr16S-23S e separação por eletroforese em gel por capilaridade. Resultados: Foram incluídos 20 doentes, 65% do sexo feminino, com uma idade média de 73 anos. A maioria dos doentes adquiriu a infeção em contexto nosocomial e apresentava história de antibioterapia prévia. O diagnóstico de DACD ocorreu, em média, ao 7.◦ dia de internamento. Todas as estirpes foram confirmadas como sendo Clostridium difficile, produtoras das toxinas A e/ou B. Foi possível obter um perfil de ribotipo em 17 estirpes, não tendo sido identificada nenhuma dominante. Os ribotipos mais observados foram o R014, o R027, o R126 e o R501, cada um detetado em 2 doentes. Foram ainda isolados 3 novos perfis, sem homologia na base de dados. Não houve correlação entre a gravidade da doença e os ribotipos identificados. Conclusões: Na nossa casuística não se isolou nenhum ribotipo dominante, observando-se 2 casos causados pela estirpe hipervirulenta R027. Não se verificou associação entre a gravidade da doença e os ribotipos isolados.
Introduction: The incidence of Clostridium difficile- associated disease (CDAD) has increased in the last years. Molecular analysis of the different strains of this bacteria has identified specific ribotypes associated with a more severe disease. Aim: Molecular characterization of Clostridium difficile strains isolated from consecutive inpatients with CDAD and its correlation with clinical outcome. Material and methods: A prospective analysis of consecutive patients with CDAD recruited during 18 months. Epidemiological, clinical and laboratory data were collected. After stool culture, the isolates were genetically characterized with primers for gluD, tcdA and tcdB genes. The strains were then typed by PCR ribotyping, with primers for rRNA16S-23S genes, and capillary gel electrophoresis analysis. Results: 20 patients were included, 65% were female. Their mean age was 73 years. In the majority of cases the infection was nosocomial and there was a history of antibiotic therapy intake. All strains were confirmed as toxins A and/or B producing Clostridium difficile. Ribotypes R014, R027, R126 and R051 were the most common strains. There was no correlation between isolated strains and the severity of the disease. Conclusions: In our series, there was a lack of association between clinical outcome of Clostridium difficile-associated diarrhea and the several strains identified.
