For several decades now the comet assay (single cell gel electrophoresis assay) has been the method used for the study of deoxyribonucleic acid damage, with multiple applications in genotoxicity assays, biomonitoring studies in humans, molecular epidemiology and ecotoxicology, and a fundamental tool for research into deoxyribonucleic acid damage and repair. The comet assay has stood out for its simplicity, sensitivity, versatility, rapidity and economy. It is a powerful technique based on microscopic visualization of deoxyribonucleic acid images after the cells have been embedded in agarose, lysed and subjected to alkaline electrophoresis. This basic methodology has been broadened, and may now detect with great sensitivity a large variety of deoxyribonucleic acid damage in any type of cell. Inclusion in the assay of enzymes capable of producing specific lesions on the deoxyribonucleic strand has broadened its detection range and sensitivity. However, it is important to bear in mind that its specificity is not absolute. The purpose of the present study is to point out some useful aspects and advantages of the method, and describe the experience with some technical aspects of the procedure, standardized in keeping with the conditions in the laboratory at the institute to extend its use in the country.

Desde hace varias décadas el ensayo Cometa, o electroforesis alcalina de células individuales, se ha convertido en un método establecido para el estudio del daño de ácido desoxirribonucleico, con múltiples aplicaciones en ensayos de genotoxicidad, estudios de biomonitoreo en humanos, epidemiologia molecular y ecotoxicología; así como una herramienta fundamental para investigaciones sobre daño y reparación del ácido desoxirribonucleico. Este ensayo se distinguió por su simplicidad, sensibilidad, versatilidad, rapidez y economía. Es una poderosa técnica que se basa en la visualización microscópica de las imágenes del ácido desoxirribonucleico después que las células son embebidas en agarosa, lisadas y sometidas a una electroforesis alcalina. Esta metodología básica ha sido ampliada, y permite ahora, detectar con alta sensibilidad una gran variedad de daños del ácido desoxirribonucleico en cualquier tipo de células. La inclusión en este ensayo, de enzimas capaces de producir lesiones específicas en la hebra de ácido desoxirribonucleico, ha incrementado su rango de detección y sensibilidad. Pero es importante tener claro que su especificidad no es absoluta. El propósito es destacar algunos aspectos útiles de este método y sus ventajas; describir la experiencia en algunos aspectos técnicos del proceder, normalizado según las condiciones del laboratorio en el instituto para ampliar su utilización en el país

BACKGROUND: Multiple sclerosis (MS) was first reported in Cuba in 1965. The most frequent appearance is observed in the first six months of the year. OBJECTIVE: To determine the seasonal distribution and evolving forms of MS patients diagnosed with the disease between April 2004 and November 2007. METHOD: Twenty-one patients with suspected MS and 42 outbreaks were studied. Patients were classified according to Lublin and Revingold's criteria for clinical forms and according to McDonald. RESULTS: Most patients were classified in outbreak and remission and only two patients classified as primary-progressive multiple sclerosis. The higher number of outbreaks occurred in the first two quarters of the year. CONCLUSION: It is recommended to study further weather variables that may be related to the emergence of these outbreaks in our environment.

INTRODUCCIÓN: La esclerosis múltiple (EM) fue reportada en Cuba por primera vez en 1965. Se ha venido observando la aparición más frecuente en los primeros seis meses del año. OBJETIVO: Determinar la distribución estacional y formas evolutivas de EM en pacientes con diagnóstico de esta enfermedad entre abril 2004 y noviembre 2007. MÉTODO: Se estudiaron 21 pacientes con sospecha de EM y un total de 42 brotes. Los pacientes fueron clasificados según los criterios de Lublin y Revingold para las formas evolutivas y según los criterios de McDonald. RESULTADOS: Solo dos pacientes clasificaron en la forma evolutiva progresiva primaria; los primeros dos trimestres del año fueron los de mayor número de brotes. CONCLUSIÓN: Se recomienda profundizar en las variables climatológicas que pudieran tener vínculo con la aparición de estos brotes en nuestro medio.

Bacterial meningoencephalitis is an important source of morbidity, mortality and disabilities in different regions of the world. The objective of this paper is to know if the complement system can be involved in producing-meningoencephalitis bacterial lysis through C3c release into cerebrospinal fluid. Seven patients with an average age of 3 years-old, who attended the Pediatric Hospital of San Miguel del Padrón, were studied by lumbar puncture diagnosis. Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae were isolated from the samples taken. The quantification of C3c, albumin and main immunoglobulins in serum and in cerebrospinal fluid were carried out by radial immunodifusion. Results were analyzed using a Reibergram. All patients showed C3c intrathecal synthesis. This fact demonstrates that the activation of this system has occurred in some of their three pathways and once its biological functions are fulfilled, it suffered a degradation and release process into cerebrospinal fluid as C3c.

Las meningoencefalitis bacterianas constituyen una fuente importante de morbilidad, mortalidad y discapacidad en diferentes regiones del mundo. El objetivo del presente trabajo es conocer si el sistema de complemento puede estar involucrado en la lisis de las bacterias productoras de meningoencefalitis a través de la liberación de C3c al líquido cefalorraquídeo. Se estudiaron siete pacientes con edad promedio de 3 años, que ingresaron en el Hospital Pediátrico de San Miguel del Padrón, a los que se les realizó una punción lumbar diagnóstica y se les aislaron los gérmenes siguientes: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenzae. La cuantificación de los niveles de C3c, albúmina e inmunoglobulinas mayores en suero y líquido cefalorraquídeo se realizó en placas de inmunodifusión radial. Los resultados obtenidos fueron recogidos en un reibergrama. El total de los pacientes estudiados mostraron síntesis intratecal del componente C3c del sistema de complemento. Este hecho evidenció la activación de este sistema en alguna de sus vías y que una vez cumplidas sus funciones biológicas, ha sufrido un proceso de degradación y liberación al LCR en forma de C3c.

The intercellular adhesion molecule is a transmembrane glycoprotein belonging to the immunoglobulin superfamily. Serum and cerebrospinal fluid (CSF) soluble intercellular adhesion molecule 1 (sICAM-1) from normal control children as well as from children with Guillain-Barré syndrome (GBS), with Coxsackie A9 virus meningoencephalitis and with Streptococcus pneumoniae meningoencephalitis were studied. sICAM-1 was quantified using an immunoenzimatic assay and albumin using the immunodiffusion technique in both biological fluids. Increased sICAM-1 values in CSF in patients with GBS correspond to an increase of the albumin CSF/serum quotient. In contrast, in inflammatory diseases like S. pneumoniae and Coxsackie A9 virus meningoencephalitis an increased brain-derived fraction was observed. In particular cases these values are 60-65% and 70-75% respectively. The results indicate an additional synthesis of sICAM-1 in subarachnoidal space during central nervous system (CNS) inflammatory process. An important role of sICAM-1 in the transmigration of different cell types into CSF during CNS inflammation in children with S. pneumoniae and Coxsackie A9 meningoencephalitis may be suggested.

La molécula de adhesión intercelular es una glicoproteína que pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas. Se estudiaron los niveles de molécula de adhesión intercelular tipo 1 soluble (sICAM-1) en suero y líquido cefalorraquídeo (LCR) de niños con meningoencefalitis por Streptococcus pneumoniae y por Coxsackie A9 al igual que en niños con sindrome de Guillain-Barré (SGB). sICAM-1 fue cuantificado por ensayo inmunoenzimático y la albúmina por inmunodifusión en ambos líquidos biológicos. Los valores incrementados de sICAM-1 en LCR en los pacientes con GBS corresponden a valores aumentados de razón LCR/suero de albúmina. En contraste, en las enfermedades inflamatorias como las meningoencefalitis por S. pneumoniae y por Coxsackie A9 se observa un incremento en la fracción derivada del cerebro. En casos particulares los valores se incrementan hasta un 60-65% y 70-75% respectivamente. Los resultados indican una síntesis adicional de sICAM-1 en el espacio subaracnoideo durante el proceso inflamatorio del sistema nervioso central (SNC). Esto puede sugerir un importante papel del sICAM-1 en la transmigración de diferentes tipos celulares en el LCR durante la inflamación del SNC en niños con meningoencefalitis por S pneumoniae y coxsackie A9.

Morbimortality due to meningococcal disease in Cuba have been diminished by a massive meningococcal (VA-MENGOC-BC®) vaccination campaign. However, some years later, meningococcal disease in vaccinated children is reported. This study aims at describing the neuroinmmunological and clinical behavior of the illness in 12 vaccinated children, who were admitted at the Pediatric Hospital from San Miguel del Padrón municipality suffering from meningoencephalitis due to Neisseria meningitidis. Simultaneous blood and cerebrospinal fluid samples were obtained. Major immunoglobulin and albumin were quantified in both fluids by radial immunodiffusion, these results were compared to those of eight non-immunized patients who were sick before this vaccine was included in the National Vaccination Schedule. Neuroimmunological response and the clinical characteristics of vaccinated patients were different from what was previously observed in non-vaccinated patients. The disease was less serious in the vaccinated group. The pattern of intrathecal synthesis of immunoglobulins was also different in both groups. The mean value of intrathecal synthesis of IgG, IgM, IgA was statistically significant higher in non-vaccinated patients. This study leads to the conclusion that in the studied sample the vaccine modifies the immunological response and the clinical frame of the disease.

La morbimortalidad por la enfermedad meningocócica en Cuba disminuyó notablemente después de la introducción de la vacuna VA-MENGOC-BC®. Sin embargo, años después de ser vacunados se han reportado algunos niños que enfermaron. En este trabajo nos propusimos describir el comportamiento neuroinmunológico y clínico de esta enfermedad en 12 pacientes vacunados que fueron ingresados en el Hospital Pediátrico de San Miguel del Padrón con el diagnóstico de meningoencefalitis producida por Neisseria meningitidis. Se tomaron muestras de forma simultánea de sangre y líquido cefalorraquídeo para la cuantificación de albúmina e inmunoglobulinas mayores por inmunodifusión radial; para el análisis de los resultados se tomó como referencia el registro histórico de los resultados de ocho pacientes no inmunizados que enfermaron antes de incluir esta vacuna en el Esquema Nacional de Vacunación. La respuesta neuroinmunológica y las características clínicas de los pacientes vacunados resultaron diferentes a lo observado previamente en pacientes no vacunados. El grupo vacunado mostró un cuadro menos grave de la enfermedad. El patrón de síntesis intratecal de inmunoglobulinas fue diferente entre los dos grupos. La media de la síntesis intratecal de IgG, IgM e IgA fue significativamente superior en el grupo de los pacientes no vacunados. Este estudio nos permitió concluir que en la muestra estudiada la vacuna modificó la respuesta neuroinmunológica y el cuadro clínico de la enfermedad.

OBJECTIVE: to attain the link between teaching and research in the Immunology subject for students of Health Technology. METHODS: practical activities of Immunology were established in the Cerebrospinal Fluid Central Lab for all the 4th-year students of the career of this specialty and modality. The practical activity included the use of various techniques. The interested were advised to make a research paper on neuroimmunology topics based on the patients suffering specific diseases at the same hospitals of the students as a final test of the subject. RESULTS: the support to this strategy was unanimous with highly satisfactory results. The evaluation consisted in the oral and writing presentation of the final papers. Of the 10 papers presented, 6 have the highest qualification, and 4 were recommended to be presented in the Student's Scientific Meeting of faculty. CONCLUSIONS: the results confirmed the convenience of linking theory with practice and with the research activities in the teaching of this specialty and modality.

OBJETIVO: lograr la vinculación de la docencia y la investigación en la asignatura Inmunología para los estudiantes de Tecnología de la Salud. MÉTODOS: se establecieron actividades prácticas de Inmunología en el Laboratorio Central de Líquido Cefalorraquídeo para todos los alumnos de cuarto año de la carrera de esta especialidad y modalidad. La actividad práctica incluyó la realización de diversas técnicas. Además, se orientó a los interesados en hacer un trabajo de investigación con temas de neuroinmunología a partir de pacientes con determinadas enfermedades en los hospitales de procedencia de los estudiantes como examen final de la asignatura. RESULTADOS: el respaldo a esta forma fue unánime con resultados altamente satisfactorios. La evaluación fue la presentación oral y por escrito de los trabajos finales. De los 10 trabajos presentados, 6 obtuvieron la máxima calificación y 4 fueron recomendados para ser presentados en la Jornada Científica Estudiantil de la facultad. CONCLUSIONES: los resultados confirman lo beneficioso que resulta vincular la teoría con la práctica y las actividades de investigación en la docencia de esta especialidad y modalidad.

INTRODUCTION: Multiple sclerosis (MS) is a chronic, inflammatory and progressive disease of the central nervous system in which local inflammatory injuries of the brain white matter appears, being the most outstanding feature the myeline loss (demyelination). OBJECTIVE: To determine if the complement system might be involved in the MS immunopathogeny favouring the mechanism intervening in the myelin destruction. METHOD: Samples of sera and CSF from twelve patients with a diagnosis of MS obtained at the moment of the admission to the hospital at the beginning of the break out, were collected. Levels of C3c and albumin in sera and in CSF were quantified using radial immunodiffusion plates. RESULTS: High values over 80% of intrathecal synthesis were obtained except in one of the patients. CONCLUSION: Intrathecal synthesis of C3c and its liberation to the CSF means that the activation of the complement system in any of the two ways has taken place, and that once performed its biological functions, has suffered a degradation process.

INTRODUCCIÓN: La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad crónica, inflamatoria y progresiva del sistema nervioso central que cursa con la aparición de lesiones inflamatorias focales en la sustancia blanca cerebral, en las que lo más llamativo es la pérdida de mielina (desmielinización). OBJETIVO: Conocer si el sistema de complemento puede estar involucrado en la inmunopatogenia de la EM favoreciendo los mecanismos que median la destrucción de la mielina. MÉTODO: Se colectaron muestras de suero y LCR de doce pacientes con diagnóstico de EM obtenidas en el momento del ingreso al inicio del brote. Se cuantificaron los niveles de C3c y albúmina en suero y en LCR en placas de inmunodifusión radial. RESULTADOS: Se obtuvieron altos valores que superan el 80% de síntesis intratecal, menos en uno de los pacientes. CONCLUSION: La síntesis intratecal de C3c y su liberación al LCR significa que ha sucedido la activación del sistema de complemento en alguna de las dos vías y que una vez cumplidas sus funciones biológicas, ha sufrido un proceso de degradación y liberación al LCR en forma de C3c.

INTRODUCTION: Reiber's quotient diagram or reibergram has a growing apply for characterize the intratecal synthesis of proteins. Firstly reibergrama was used for the major classes of immunoglobulins but later it was used to evaluate other proteins based on the theory about molecular flux/cerebrospinal fluid (CSF) flow rate. METHOD: C3c is a degradation product of complement factor C3 with 145 KDa and approaches to IgG molecular characteristics according with Fick's diffussion laws. It was assumed IgG constants and graphic for IgG constants and graphic to evaluate the intrathecal synthesis of C3c. Twenty-seven patients and 27 controls were studied. Serum and CSF C3c and albumin were quantified by immunodiffusion. RESULTS: The patients with the C3c proposed reibergram were evaluated. It has been proved its validity under several CSF blood barrier conditions. CONCLUSION: Reibergram for C3c can be used for the evaluation of the intrathecal synthesis of this protein.

INTRODUCCIÓN: El diagrama de las razones de Reiber o reibergrama cobra cada día mayores usos para la caracterización de la síntesis intratecal de proteínas. El reibergrama fue definido para las clases mayores de inmunoglobulinas pero luego ha sido utilizado para evaluar otras proteínas basado en la teoría de la difusión molecular/velocidad de flujo del líquido cefalorraquídeo (LCR). MÉTODO: El C3c, producto de la degradación del factor del complemento C3 y con una masa molecular de 145 KDa, se acerca a las características moleculares de la IgG para las leyes de la difusión de Fick. Se asume las constantes de la IgG en la fórmula de Reiber para evaluar la síntesis intratecal de C3c así como su correspondiente reibergrama. Se estudiaron 27 pacientes y 27 controles a los que se les dosificó albúmina y C3c en suero y LCR por inmunodifusión radial. RESULTADOS: Con el reibergrama propuesto para el C3c se evaluaron estos pacientes. Se comprueba la validez de este reibergrama para distintas condiciones de barrera con o sin síntesis intratecal de C3c. CONCLUSION: El reibergrama y su fórmula correspondiente propuesto para la C3c puede ser usado para la evaluación de la síntesis intratecal de C3c.

INTRODUCTION: Angiostrongylus cantonensis meningoencephalitis is an emergent disease in the Americas. METHOD: Twelve children suffering from eosinophilic meningoencephalitis due to this parasite aged between 6-10 years were studied. Cerebrospinal fluid (CSF) and serum samples were taken simultaneously in the first diagnostic puncture at admission. RESULTS: All cases showed typical findings on the routine CSF and serum analysis: increased CSF total protein, increased Q (CSF/serum) albumin accompanied by eosinophilia in CSF. No intrathecal synthesis of immunoglobulins was found. Mean serum and CSF sICAM-1 values were 337.4 and 3.97 ng/mL. Qalbumin and QsICAM-1 mean values were 4.1 and 6.2 respectively. In 50% of the patients an increased brain-derived fraction of sICAM-1 was found. CONCLUSION: It may be suggested that a dynamic of the sICAM-1 brain derived fraction is perhaps associated to the immune response in the evolution of the disease.sICAM-1 may be an agent in negative feedback for eosinophils passage through the blood-CSF barrier into the inflammatory brain response.

INTRODUCCIÓN: La meningoencefalitis por Angiostrongylus cantonensis es una enfermedad emergente en las Américas. MÉTODO: Doce niños con meningoencefalitis eosinofílica por Angiostrongylus cantonensis con edades entre 6 y 10 años fueron estudiados. Se tomaron muestras simultáneas de suero y líquido cefalorraquídeo (LCR) en la primera punción lumbar diagnóstica. RESULTADOS: Todos los casos evidenciaron hallazgos típicos en los análisis de rutina del LCR y suero: incremento de proteínas totales, aumento de la razón albúmina Q (LCR/suero) acompañado de eosinofilia en LCR. No se encontró síntesis intratecal de inmunoglobulinas. Los valores medios de sICAM-1 en suero y LCR fueron de 337,4 y 3,97 ng/mL respectivamente. Los valores medios de Q albúmina y Q sICAM-1 fueron de 4,1 y 6,2 respectivamente. En el 50% de los pacientes se encontró un incremento de la fracción de sICAM-1 derivado del cerebro. CONCLUSIÓN: Se puede sugerir que la dinámica de la fracción sICAM-1 derivada del cerebro ocurre quizas asociada a la respuesta inmune frente a la enfermedad. sICAM-1 puede ser un agente de retroalimentación negativa para el paso de eosinófilos de la sangre a través de la barrera sangre-LCR en el cerebro inflamado.

La Neuroinmunología surge como disciplina en las últimas décadas del pasado siglo, a partir del desarrollo de las ciencias matrices. Para comprender las bases moleculares de estas ciencias es necesario conocer los conceptos actuales de barrera hematoencefálica y síntesis intratecal de inmunoglobulinas. La barrera hematoencefálica es un equilibrio físico-químico de transporte bidireccional restringido, donde las moléculas se difunden de acuerdo con su masa molecular. Existen proteínas que se difunden de la sangre al líquido cefalorraquídeo y otras se sintetizan en éste. Las inmunoglobulinas se difunden hacia el líquido cefalorraquídeo y se sintetizan en él. Para discriminar la síntesis intratecal de éstas se emplean diversas fórmulas, entre las que se encuentran las de Link, Tourtellotte, Schuller y Reiber.

Entre las fórmulas que estudian la síntesis intratecal de las inmunoglobulinas se ha generalizado la propuesta de Reiber mediante el reibergrama, el cual posee ventajas indiscutibles con respecto a las reportadas con anterioridad. El reibergrama puede trabajar en cualquier condición de la barrera sangre-líquido cefalorraquídeo. Esta fórmula se basa en la teoría de la difusión molecular/flujo del líquido cefalorraquídeo, cuyo principio fundamental expresa que la disminución de la velocidad del flujo está siempre acompañada de un incremento de la difusión molecular de la sangre al líquido. Se evalúan e interpretan los resultados de la disfunción de la barrera y la síntesis intratecal de las inmunoglobulinas, elementos básicos además del uso del índice de anticuerpo, para el estudio de las bases moleculares de esta ciencia.

An IgG subclass deficiency is often associated with bacterial infections. We studied four pediatric patients suffering from meningoencephalitis, two of them due to Streptococcus pneumoniae and two due to Haemophilus influenzae type b. Simultaneous diagnostic serum and cerebrospinal fluid samples were taken during income. The four subclasses of IgG and albumin were quantified in both biologic fluids by radial immunodiffusion. Very low levels of seric IgG2 with non detectable cerebrospinal fluid IgG2 were found in the patients. No intrathecal IgG subclass synthesis was found in two patients. One patient with S. pneumoniae had IgG3 intrathecal synthesis. Intrathecal IgG1, IgG3 and IgG4 synthesis was found in one patient suffering from H. influenzae according with reibergrams. Substitutive therapy with intravenous gammaglobulin was given to the patients as part of the treatment.

Las deficiencias por subclases de IgG se asocian frecuentemente con infecciones de origen bacteriano. Se estudian cuatro pacientes en edad pediátrica con meningoencefalitis, dos de ellos a Streptococcus pneumoniae y dos a Haemophilus influenzae tipo b. Se toman muestras simultáneas diagnósticas de suero y líquido cefalorraquídeo en el momento del ingreso. Se cuantificaron las cuatro sublclases de IgG y albúmina en ambos líquidos biológicos por inmunodifusión radial. Se encontró que los pacientes presentaban cifras muy disminuidas de IgG2 sérico y ningun exhibia IgG2 en el líquido cefalorraquídeo. Dos pacientes no sintetizaron ninguna subclase de IgG intratecalmente. Un paciente con S. pneumoniae sintetizó IgG3 intratecal. Uno de los pacientes con meningoencefalitis a H. influenzae sintetizó IgG1, IgG3 e IgG4 intratecalmente de acuerdo com el reibergrama. Estos pacientes recibieron terapia substitutiva com gammaglobulina intravenosa como parte de la medicación.