As metodologias empregadas para a medida de TSH sérico apresentam níveis de especificidade e sensibilidade, tanto diagnósticas como analíticas, bastante elevadas. Adicionalmente, são metodologias bastante robustas, de maneira que resultados falso-positivos ou falso-negativos são raros e inesperados. Descrevemos neste trabalho dois casos de indivíduos descritos como eutiróideos, sem antecedentes de doenças autoimunes e sem referência ao uso de TSH exógeno, que apresentavam níveis de TSH de normais a muito elevados, dependendo da metodologia empregada. Em três métodos testados para a medida de TSH a diluição seriada das amostras mostrou que os níveis reais situavam-se entre 250 e 300 mUI/L. Nos dois casos, o aumento de TSH foi ocasionado pela presença de proteínas ligadoras de TSH no soro, formando formas de alto peso molecular ("macro TSH"), demonstradas por cromatografia de gel filtração em coluna de Superdex S-200. Em uma das pacientes a proteína ligadora foi caracterizada como IgG através de cromatografia em proteína G sepharose, na outra, a ligação em proteína G e em coluna de sepharose acoplada a monoclonal anti-IgM não conseguiu caracterizar a proteína ligadora sérica. Estes casos salientam a importância da correlação clínico-laboratorial e sugerem a necessidade de se pesquisar a presença de macro TSH em pacientes com níveis de TSH anormalmente elevados.

The laboratory methods usually employed for the measurement of serum TSH present sensitivity and specificity levels, both analytical and clinical, that are highly satisfactory. Additionally, the methodologies are quite robust, so that false-positive and false-negative results are rare and unexpected. In this paper we describe two individuals quoted as euthyroid clinically, with no reference to autoimmune diseases, and no reference to the use of exogenous TSH, that presented with normal to extremely high serum TSH levels, depending on the method employed for analysis. In the three tested methods, serial dilution showed that the real TSH levels were between 250 and 300 mUI/L. In both cases the increment in TSH levels were due to the presence of TSH-binding proteins, forming high molecular weight complexes ("macro TSH"), well characterized by gel filtration chromatography on Superdex S-200 column. In one of the patients the binding protein was characterized as being IgG by protein-G binding study. In the other case, protein-G binding as well as anti-IgM binding failed to characterize the protein. These two cases call attention to the importance of the clinical-laboratory correlation and suggest the need that the presence of "macro TSH" must be investigated in patients with unexpectedly high TSH values.

A introdução de ensaios imunométricos (EIM) de 2ª geração, tornaram a medida de paratormônio (PTH) sérico mais disponível, simples e rápida, aumentando sua utilização. Esses métodos, baseados em dupla identificação da molécula de PTH, mediriam supostamente a molécula intacta, bioativa, de seqüência 1-84. Recentes trabalhos mostraram que eles também medem formas com deleções amino-terminais, como a forma 7-84, que não ativam o receptor tradicional de PTH (PTH1R). Em função disto, um aspecto prático importante é a definição das formas de PTH medidas pelos EIM, sendo que estas dependem da especificidade dos anticorpos empregados. Neste trabalho, comparamos um ensaio imunofluorométrico por nós desenvolvido, que apresenta reatividade cruzada de 50% com a seqüência 7-84 do PTH, com dois ensaios comerciais de 2ª geração, que reagem 100%. Numa 1ª. comparação, 135 amostras de soro foram dosadas com o nosso ensaio e com um ensaio eletroquimioluminescente, obtendo-se uma correlação de 0,961 (P<0,0001) e medianas de 35,0 e 51,0ng/L (P<0,001). Numa 2ª. comparação, 252 amostras foram dosadas com nosso ensaio e com um ensaio imunoquimioluminométrico, obtendo-se uma correlação de 0,883 (P<0,0001) e medianas de 36,0 e 45,5ng/L (P<0,0001). Em ambos os casos, os dados obtidos com nosso ensaio foram significativamente mais baixos, dados condizentes com a especificidade do anticorpo amino-terminal empregado. Nossos dados reiteram a necessidade de descrição precisa da especificidade dos anticorpos amino-terminais empregados em ensaios de PTH de 2ª geração, de maneira a melhor comparar resultados e definir faixas de normalidade.

Introduction of 2nd generation immunometric assays for the measurement of serum parathyroid hormone (PTH), turned them more available, simple and rapid. These methods, based on double identification of the PTH molecule, supposedly measure the intact, bioactive molecule, with the sequence 1-84. Recent works showed that they also measure forms with amino-terminal deletions, like the 7-84 form, which are not able to activate the traditional PTH receptor (PTH1R). Thus, an important practical aspect is the definition of the PTH forms measured by the immunometric assays, a fact that depends on the specificity of the antibodies employed. In this report we compare the results obtained with an in-house immunofluorometric assay that presents a cross-reactivity of 50% with the 7-84 PTH sequence, and two commercial 2nd generation assays, that react 100%. In a first study, 135 samples were measured using our assay and an electrochemiluminescent assay, resulting in a correlation coefficient of 0.961 (P<0.0001) and medians of 35.0 and 51.0ng/L (P<0.0001). In a second study, 252 samples were analyzed using our assay and an immunochemiluminometric assay, resulting in a correlation of 0.883 (P<0.0001) and medians of 36.0 and 45.5ng/L (P<0.0001). In both studies results obtained with the in-house assay were significantly lower, as expected by the specificity of the anti-amino-terminal antibody employed. Our data support the need of a precise description of the specificity of the amino-terminal antibodies employed in 2nd generation PTH assays in order to better compare results and define normal ranges.

A globulina ligadora de tiroxina (thyroxine-binding globulin, TBG) é a principal transportadora de hormônios tiroidianos no soro. Variações na concentração sérica de TBG determinam variações proporcionais nas concentrações séricas totais de T4 e T3, sem implicar alterações de função, desde que a fração livre permaneça normal. Várias condições clínicas comuns levam a alterações significativas nos níveis de TBG, sendo as variações mais importantes devidas a defeitos genéticos. Como a TBG é codificada por gene localizado no cromossomo X, os defeitos se manifestam mais facilmente no sexo masculino. Descrevemos o desenvolvimento de ensaio imunofluorométrico para a medida de TBG com base em anticorpos monoclonais, sendo um desenvolvido em nosso laboratório e outro comercial. O método apresenta sensibilidade de 0,8mg/l e coeficientes de variação intra e interensaio inferiores a 10%. O estudo comparativo com método comercial mostrou alta correlação (r = 0,93; n = 48), sendo os valores normais obtidos de 10mg/l a 29mg/l. Estudamos também 20 indivíduos portadores de deficiência congênita de TBG, 19 homens e uma mulher, que apresentavam valores normais de TSH e baixos de T4 total; em todos eles os níveis de TBG foram indetectáveis. Já os níveis de T4 livre medidos por método indireto em 16 desses indivíduos mostraram-se elevados em todos, ao passo que, quando medidos por método direto pós-diálise nos quatro restantes, mostraram-se normais. Nossos resultados reforçam a necessidade prática da disponibilidade de ensaio para a medida de TBG para esclarecimento e definição diagnóstica de alguns casos especiais, principalmente quando o ensaio de T4 livre direto, pós-diálise, não é disponível.

Thyroxine-binding globulin (TBG) is the main responsible for serum thyroid hormone transport. Serum variations in TBG concentrations determine proportional variations in serum total T4 and T3 concentrations, without implications to function, since the free fraction remains normal. Several frequent clinical conditions lead to significant alterations in the TBG levels, being the most important variations due to genetic defects. Since TBG is codified by a gene localized in the X chromosome, the defects are more often found in males. We describe the development of an immunofluorometric assay for the measurement of TBG based on monoclonal antibodies, being one developed at our laboratories and the other obtained from commercial sources. The method presents sensitivity of 0.8mg/l and intra and inter-assay coefficients of variation of less than 10%. Comparison with a commercial assay showed high correlation (r = 0.93, n = 48), with normal values between 10mg/l and 29 mg/l. We also studied 20 individuals with congenital deficiency of TBG, 19 men and one woman, that presented normal TSH values and low total T4 values; in all of them the TBG values were undetectable. Free T4 values otherwise were high when measured with an indirect method in 16 of the individuals, and normal in the other four patients where they were measured with a direct post-dialysis method. Our results reinforce the practical need for an assay for the measurement of serum TBG for the diagnostic definition of some special cases, mainly when a direct free T4 assay is not available.