ABSTRACT Rabbit hemorrhagic disease virus 2 and Clostridium perfringens type A cause infections in rabbit. Vaccines are considered an effective strategy for fighting these infections. Nowadays, the demand for using a nanoparticle adjuvant as (Montanide™ IMS) is increased due to its ability for enhancing both humoral and cell mediated immunity and, in addition, it can be administrated through different routes. An inactivated vaccine against rabbit hemorrhagic disease virus 2 and Clostridium perfringens type A which adjuvanted by Montanide™ IMS 1313 N VG PR (IMS 1313) was developed. The prepared vaccine was evaluated in rabbits for sterility, safety and potency via two different routes of vaccination. Oral administration of inactivated vaccine was evaluated as an alternative route to subcutaneous vaccination. The results revealed that rabbits vaccinated by subcutaneous route exhibited satisfactory antibody and antitoxin titer against rabbit hemorrhagic disease virus 2 and Clostridium perfringens type A, respectively, from 2nd week post vaccination and reached the peak at 3th week post vaccination. On the other hand, antibody and antitoxin titer of orally vaccinated rabbits didn't reach the satisfactory level. Rabbits vaccinated orally were not protected against virulent rabbit hemorrhagic disease virus 2, with 30% protection, while rabbits vaccinated subcutaneously showed satisfactory protection (90%). Serum nitric oxide and lysozyme activity had significant differences between vaccinated and control rabbits. The level of nitric oxide and lysozyme in sera of subcutaneously vaccinated rabbits was higher than that of orally vaccinated rabbits. Interleukin-6 and tumor necrosis factor-ɑ were determined in the spleen of vaccinated rabbits, significant differences were obtained between subcutaneously and orally vaccinated rabbits. It was concluded that the combined vaccine is potent when inoculated by subcutaneous route in contrast to the oral route. The Montanide™ IMS 1313 adjuvant is a product that can be used for rabbit vaccine preparation.

RESUMEN El virus de la enfermedad hemorrágica del conejo tipo 2 y el Clostridium perfringens tipo A causan infecciones en conejos. Las vacunas se consideran una estrategia eficaz para combatir estas infecciones. Hoy en día, la demanda para el uso de un adyuvante de nanopartículas como Montanide™ IMS es cada vez mayor debido a su capacidad para mejorar la inmunidad humoral y la mediada por células, y a la posibilidad de administrarla por diferentes vías. En este estudio se desarrolló una vacuna inactivada contra el virus de la enfermedad hemorrágica del conejo tipo 2 y el Clostridium perfringens tipo A, adyuvada con Montanide™ IMS 1313 N VG PR (IMS 1313). Se evaluó la vacuna preparada en cuanto a esterilidad, seguridad y potencia en conejos mediante dos vías diferentes de vacunación. Se evaluó la administración oral de la vacuna inactivada como vía alternativa a la vacunación subcutánea. Los resultados revelaron que los conejos vacunados por vía subcutánea presentaban títulos satisfactorios de anticuerpos y antitoxinas contra el virus 2 de la enfermedad hemorrágica del conejo y el Clostridium perfringens tipo A, respectivamente, a partir de la segunda semana de vacunación y alcanzaron el máximo en la tercera semana. En cambio, los títulos de anticuerpos y antitoxinas de los conejos vacunados por vía oral no alcanzaron un nivel satisfactorio. Los conejos vacunados por vía oral no mostraron protección contra el virus virulento de la enfermedad hemorrágica del conejo tipo 2, con un 30% de protección, mientras que los conejos vacunados por vía subcutánea mostraron una protección satisfactoria (90%). El óxido nítrico sérico y la actividad de la lisozima presentaron diferencias significativas entre los conejos vacunados y los controles. El nivel de óxido nítrico y lisozima en el suero de los conejos vacunados por vía subcutánea fue superior al de los conejos vacunados por vía oral. Se determinaron la interleucina-6 y el factor de necrosis tumoral-ɑ en el bazo de los conejos vacunados, y se obtuvieron diferencias significativas entre los conejos vacunados por la vía subcutánea y la oral. Se concluyó que la vacuna combinada es potente cuando se inocula por vía subcutánea en contraste con la vía oral. El adyuvante Montanide™ IMS 1313 es un producto que puede utilizarse para la preparación de vacunas para conejos.

ABSTRACT The avian influenza H5N8 virus is a highly pathogenic virus that can cause severe economic losses in poultry species worldwide. In Egypt, highly pathogenic avian influenza virus of subtype H5N8 clade 2.3.4.4b was reported in 2016, and despite vaccination efforts, the virus has become endemic. The current study aims to evaluate the efficacy of some commercial inactivated H5 vaccines from a different lineage against the challenge with HPAI H5N8 virus in broiler chickens, in Egypt. Groups of broilers vaccinated with different inactivated H5 vaccines and unvaccinated controls were challenged with HPAI H5N8 virus. Antibody titer was calculated at the first 3 weeks after vaccination and the viral shedding titer was calculated at 3-, 5-, 7- and 10-days post challenge. Mortality rates were monitored daily during the first 10 days after the challenge to provide an estimate of the protection level. According to our findings, following a challenge with the HPAI H5N8 clade 2.3.4.4b virus, the inactivated vaccines offered varying degrees of efficacy, HI titer and reduction of virus shedding titer, which may be related to variations in the nucleotide sequence identity percentages of the HA genes between the challenge virus and the vaccine seeds. These findings emphasize the need for continual updating of the H5 vaccines applied in Egypt to keep up with the continual mutations that discovered in H5Nx viruses.

RESUMEN El virus de la gripe aviar H5N8 es un virus altamente patógeno que puede causar graves pérdidas económicas en especies avícolas de todo el mundo. En Egipto, el virus de la gripe aviar altamente patógena del subtipo H5N8 clado 2.3.4.4b se notificó en 2016 y, a pesar de los esfuerzos de vacunación, el virus se ha vuelto endémico. El presente estudio tiene como objetivo evaluar la eficacia de algunas vacunas comerciales inactivadas H5 de linaje diferente, contra el virus de la influenza aviar de alta patogenicidad H5N8 en pollos de engorde, en Egipto. Grupos de pollos de engorde vacunados con diferentes vacunas H5 inactivadas y controles no vacunados fueron retados con el virus de la influenza aviar de alta patogenicidad H5N8. Se calculó el título de anticuerpos a las 3 semanas de la vacunación y el título de excreción viral a los 3, 5, 7 y 10 días de la prueba. Las tasas de mortalidad se controlaron diariamente durante los 10 días siguientes al reto para obtener una estimación del nivel de protección. Según nuestros hallazgos, tras el reto con el virus de la influenza aviar de alta patogenicidad H5N8 del clado 2.3.4.4b, las vacunas inactivadas ofrecieron diferentes grados de eficacia, título de inhibición de la hemaglutinación y reducción del título de excreción del virus, lo que puede estar relacionado con las variaciones en los porcentajes de identidad de la secuencia de nucleótidos de los genes HA entre el virus del reto y las semillas de la vacuna. Estos hallazgos enfatizan la necesidad de una actualización continua de las vacunas H5 aplicadas en Egipto para mantenerse al día con las continuas mutaciones que se descubren en los virus H5Nx.

ABSTRACT The objective of this study was to investigate the effects of Spirulina platensis (SP) powder supplementation on immune response in SPF chickens. For this purpose, 120 SPF chicks were randomly clustered into six groups consisting of 20 birds each which assigned to five groups vaccinated by commercial inactivated Newcastle disease (ND) vaccine at 21 days of age. The four groups were supplemented with 0.5, 1, 1.5 and 2 g of SP per kg of ration at 7 day of age and other group as control treatment group. Control unvaccinated group still without any treatment. Individual blood samples were collected weekly from all groups, and NDV-HI antibodies were measured using Hemagglutination inhibition (HI) test. After 28 days post-vaccination, ten birds from all groups were challenged intramuscularly at a dose 0.5 mL/bird containing 106 EID50 of local NDV genotype VII. Challenge virus shedding was detected using real time qrt-PCR of oropharyngeal swabs that were collected from all challenged chicken groups of at 3, 5, 7 and 10 days post challenge. Obtained results showed that vaccinated groups of SPF-chickens either supplied with Spirulina or control treatment group induced positive serological response as NDV-HI antibody were measured in sera of immunized chicks (7.6, 8, 8.3, 8.9 and 7.4 log2, respectively) at 4 weeks post vaccination (WPV). Significant differences were observed at 2 WPV in the vaccinated SPF chickens consumed 1, 1.5 and 2 g of SP/kg of ration, compared to untreated vaccinated group (p<0.05). Immunized SPF chickens supplied with different SP concentration confer satisfactory protection against heterologous challenge virus (90%, 100%, 100% and 100% respectively), in contrast to untreated vaccinated chickens. Different percentages of reduction of viral shedding (55%, 65%, 76% and 87%) of treated vaccinated chickens with different concentration of SP were detected, despite untreated group were reduced 46% from total viral shedding. These findings suggest that dietary Spirulina has immune-stimulatory effects on the immune system of SPF chickens. One gram from SP per kg of ration was minimum recommended concentration that able to exhibit optimum immune response, increase protection against heterologous strains and able to reduce viral shedding.

RESUMEN El objetivo de este estudio fue investigar los efectos de la suplementación con polvo de Spirulina platensis (SP) sobre la respuesta inmune en pollos SPF. Para este propósito se agruparon al azar 120 polluelos SPF en seis grupos de 20 aves cada uno, que se asignaron a cinco grupos vacunados con la vacuna comercial inactivada contra la enfermedad de Newcastle (ND) a los 21 días de edad. Cuatro grupos se suplementaron con 0,5; 1; 1,5 y 2 g de SP por kg de ración a los 7 días de edad, un grupo vacunado sin suplemento y un grupo sin ningún tratamiento. Semanalmente, se recogieron muestras de sangre individuales de todos los grupos y se midieron los anticuerpos hemaglutinantes contra el virus Newcastle (NDV-HI) mediante la prueba de inhibición de la hemaglutinación (HI). 28 días después de la vacunación, fueron retadas diez aves de cada grupo por vía intramuscular a una dosis 106 EID50 del genotipo VII del NDV local en un volumen de 0,5 mL/ave. Se detectó la eliminación del virus mediante qrt-PCR en hisopos orofaríngeos que se recolectaron en todos los grupos a los 3, 5, 7 y 10 días después del reto. Los resultados obtenidos mostraron que los grupos vacunados de pollos y suplementados con Espirulina y el grupo de control vacunado, indujeron una respuesta serológica positiva cuando se determinaron los anticuerpos NDV-HI en los pollitos inmunizados (7,6; 8; 8,3; 8,9 y 7,4 log2 respectivamente) a las 4 semanas después de la vacunación (SPV). Se observaron diferencias significativas a las 2 SPV en los pollos vacunados que consumieron 1, 1,5 y 2 g de SP/kg de ración, en comparación con el grupo vacunado no tratado (p<0,05). Los pollos inmunizados que recibieron diferentes concentraciones de SP mostraron una protección satisfactoria contra el desafío heterólogo viral (90%, 100%, 100% y 100% respectivamente), en contraste con los pollos vacunados no tratados. Se observaron diferentes porcentajes de reducción de la diseminación viral (55%, 65%, 76% y 87%) entre los pollos vacunados tratados con diferente concentración de SP. En el grupo no tratado se redujo al 46%. Estos hallazgos sugieren que la Espirulina en la dieta tiene efectos inmunoestimuladores sobre el sistema inmunitario de los pollos. Un gramo de SP por kg de ración fue la concentración mínima recomendada para una respuesta inmune óptima, y de esta forma aumentar la protección contra las cepas heterólogas y disminuir la diseminación viral.

In Egypt the "national schistosomiasis control program" was formulated to control transmission by reduction of prevalence and intensity of current infections, and thereby achieve an acceptable level of schistosomiasis disease control. The program was implemented foremost in Middle Egypt (1977) and Upper Egypt (1980), collectively extending 800 km alongside of the River Nile and accommodate about 10.5 million people. Schistosoma haematobium has been essentially the prevailing species infection in both areas. The strategy of control entailed both area-wide mollusciciding with niclosamide, and selective population chemotherapy with metrifonate. Evaluation in 1986 showed that prevalence dropped from pre-control 29.4% in Middle Egypt and 26.3% in Upper Egypt to 6% and 7.8% respectively, together with a remarkable drop of infections among children. Also mean intensity attained low levels consistent of low grade infections. It is evident therefore that in these areas where an enhancement of schistosomiasis infections had been anticipated the employment of the twofold strategy effected a state of low-prevalence/low-intensity signifying a lowered reservoir of infection and a substantial interference with the potentials of transmission.