Abstract The cytokine microenvironment is crucial in generating and polarizing the immune response. A means of monitoring this environment would be of great value for better understanding Toxocara canis immune modulation. The aim of this study was to analyze the dynamics of cytokine transcription ex vivo, during early (24-48 hours) and late (15-30 days) times post-infection, in the mesenteric lymph nodes, spleen and intestinal mucosa of Balb/c mice experimentally infected with T. canis larvae. Mice in the treated group were infected with 100 third-stage larvae (L3), whereas mice in the control group were not infected. Analyses were performed at different times: 24-48 hours post-infection (HPI), 15-30 days post-infection (DPI). IL4, IL10, IL12 and Ym1 mRNA transcriptions were analyzed through qPCR. This study showed cytokine transcription mediated by migrating larvae in the mesenteric lymph nodes and spleen at 24-48 HPI, whereas cytokine transcription in the intestinal mucosa was observed only at late times (15-30 DPI). These results suggest that the T. canis larvae migration during infection might play a role in cytokine dynamics. Since the cytokine microenvironment is crucial in modulating immune response, knowledge of cytokine dynamics during T. canis infections pave the way to better understand its interaction with the host. response modulation vivo 2448 24 48 (24-4 1530 15 30 (15-3 postinfection, postinfection post infection, Balbc Balb c T 10 thirdstage third stage L3, L3 L , (L3) 24-4 HPI (HPI) 15-3 DPI. DPI . (DPI) IL4 IL IL10 IL1 Ym qPCR DPI) host 244 2 4 (24- 153 1 3 (15- (L3 24- (HPI 15- (DPI (24 (15 (L (2 (1 (

Resumo O microambiente das citocinas é crucial na geração e polarização da resposta imune. Monitorar esse ambiente é importante para entender a modulação imune de Toxocara canis. Este estudo analisou a dinâmica da transcrição de citocinas ex vivo, durante os períodos pós-infecção precoce (24-48 horas) e tardio (15-30 dias) em linfonodos mesentéricos, baço e mucosa intestinal em camundongos, infectados experimentalmente com larvas de T. canis. Camundongos foram infectados com 100 larvas de terceiro estágio (L3), enquanto os camundongos do grupo controle não foram infectados. Foram analisados diferentes períodos: 24-48 horas pós-infecção (HPI), 15-30 dias pós-infecção (DPI). A transcrição do mRNA de IL4, IL10, IL12 e Ym1 foi analisada por qPCR. Observou-se a transcrição de citocinas mediada por larvas migratórias nos linfonodos mesentéricos e baço por 24-48 HPI, enquanto na mucosa intestinal a transcrição de citocinas foi observada apenas na infecção tardia (15-30 DPI). Esses resultados sugerem que a migração das larvas de T. canis, durante a infecção, pode desempenhar um papel na dinâmica das citocinas. Uma vez que o microambiente das citocinas é crucial na modulação da resposta imune, o conhecimento da dinâmica das citocinas, durante as infecções por T. canis, permite uma melhor compreensão da sua interação com o hospedeiro. canis vivo pósinfecção pós 2448 24 48 (24-4 1530 15 30 (15-3 T 10 L3, L3 L , (L3) 24-4 HPI (HPI) 15-3 DPI. DPI . (DPI) IL4 IL IL10 IL1 Ym qPCR Observouse Observou se DPI) hospedeiro 244 2 4 (24- 153 1 3 (15- (L3 24- (HPI 15- (DPI (24 (15 (L (2 (1 (

Resumo O objetivo deste trabalho foi avaliar a modulação imunológica precoce e tardia da infecção experimental de larvas de T. canis em camundongos. Estes foram infectados com 100 larvas infectantes e eutanasiados em diferentes períodos: 24 e 48 horas pós infecção (HPI), 15 e 30 dias após a infecção (DPI). A resposta humoral foi avaliada por ELISA indireto. RT-PCR quantitativo (qPCR) foi usado para quantificar a transcrição de mRNA das citocinas IL4, IL10, IL12 e Ym1 nos períodos de infecção precoce e tardia. A infecção por T. canis foi capaz de gerar IgG total específico aos 15 e 30 DPI. A análise do isótipo IgG revelou uma diferenciação significativa para IgG1 em comparação com IgG2a, IgG2b e IgG3, caracterizando uma resposta Th-2. Avaliando-se a transcrição gênica na fase inicial da infecção, foram observados níveis mais elevados de transcrição de IL10, IL4 e Ym1 e a regulação negativa de IL12. Na fase tardia, foram observados níveis aumentados de transcrição de IL4, Ym1 e IL12, e foi observada regulação negativa da transcrição de IL-10. Os dados obtidos sugerem, que durante a infecção experimental com T. canis, a participação das citocinas IL4, IL10, IL12 e Ym1 podem desempenhar um papel importante na imunomodulação de T. canis.

Abstract The objective of this work was to evaluate the early and late immunological modulation of an experimental infection of T. canis larvae in mice. Mice were infected with 100 infective larvae and euthanized at different period: 24, 48 hours post infection (HPI), 15- and 30 days post infection (DPI). The humoral response was evaluated by indirect ELISA. Quantitative RT–PCR (qPCR) was used to quantify the mRNA transcription of cytokines IL4, IL10, IL12 and Ym1 in the early and late infection periods. Infection with T. canis was able to generate specific total IgG at 15- and 30- DPI. Analyzing the IgG isotype revealed a significant differentiation for IgG1 compared with IgG2a, IgG2b and IgG3, characterizing a Th-2 response. Evaluating the gene transcription at the early phase of infection, higher transcription levels of IL10, IL4 and Ym1 and a downregulation of IL12 were observed. By the late phase, increased transcription levels of IL4, Ym1 and IL12 were observed, and downregulation of IL-10 transcription was observed. The data obtained suggest that during experimental infection with T. canis, the participation of the IL4, IL10, IL12 cytokines and Ym1 can play an important role in T. canis immunomodulation.

ABSTRACT Human toxocariasis consists of chronic tissue parasitosis that is difficult to treat and control. This study aimed to evaluate the action of the probiotic Lactobacillus acidophilus ATCC 4356 on larvae of Toxocara canis and the effect of IFN-γ cytokine on parasite-host in vivo (1.109 CFU) and in vitro (1.106, 1.107, 1.108, 1.109 CFU) interactions. Four groups of six BALB/c mice were formed: G1 - L. acidophilus supplementation and T. canis infection; G2 - T. canis infection; G3 - L. acidophilus supplementation; and G4 - PBS administration. Mice were intragastrically suplemented with probiotics for 15 days before inoculation and 48 h after inoculation with 100 T. canis eggs. The inoculation of T. canis was also perfomed intragastrically. The recovery of larvae took place through digestion of liver and lung tissues; the evaluation of IFN-γ gene transcription in leukocytes was performed by qPCR. The in vitro test consisted of incubating the probiotic with T. canis larvae. The supplementation of probiotics produced a reduction of 57.7% (p = 0.025) in the intensity of infection of T. canis larvae in mice, whereas in the in vitro test, there was no larvicidal effect. In addition, a decrease in the IFN-γ gene transcription was observed in both, T. canis-infected and uninfected mice, regardless of whether or not they received supplementation. The probiotic L. acidophilus ATCC 4356 reduced T. canis infection intensity in mice, however, the probiotic did not have a direct effect on larvae, demonstrating the need of interaction with the host for the beneficial effect of the probiotic to occur. Yet, the proinflammatory cytokine IFN-γ did not apparently contributed to the observed beneficial effect of probiotics.

Resumo As infecções por nematódeos gastrintestinais (ING) constituem a maior limitação à produção de pequenos ruminantes. Na busca do controle desses parasitos, estudos com plantas medicinais têm sido uma importante alternativa. Visto isto, o estudo desenvolvido teve como objetivo avaliar a ação ovicida e larvicida in vitro do óleo essencial de Rosmarinus officinalis. O óleo foi extraído, analisado por cromatografia gasosa e testado sobre ovos e larvas de ING em seis concentrações, 227,5mg/mL; 113,7mg/mL; 56,8mg/mL; 28,4mg/mL; 14,2mg/mL; 7,1mg/mL. Para determinar a ação ovicida, ovos de ING foram recuperados de fezes de ovinos e incubados por 48h com as diferentes concentrações do óleo. Na avaliação da migração das larvas, as larvas de terceiro estágio (L3) foram obtidas por coprocultura, e associadas ao óleo essencial por 24h nas mesmas concentrações, permanecendo por mais 24h em microtamises, seguindo-se a contagem de larvas que migraram e que não migraram. Os testes in vitro com o óleo de R. officinalis mostraram o nível de significância (p<0.05) 97,4% a 100% na inibição da eclodibilidade e 20% a 74% na inibição da migração das larvas. Na análise por cromatografia gasosa o constituinte majoritário foi o eucaliptol. Os resultados apresentados mostram que o óleo essencial de R. officinalis possui ação ovicida e larvicida sobre ING de ovinos.

Abstract Gastrointestinal Nematode Infection (GIN) are the main constraint to the production of small ruminants. Studies of medicinal plants have been an important alternative in the effort to control these parasites. Therefore, the purpose of this study was to evaluate the in vitro ovicidal and larvicidal activity of essential oil of Rosmarinus officinalis. The oil was extracted, analyzed by gas chromatography and tested on GIN eggs and larvae in six concentrations, 227.5mg/mL, 113.7mg/mL, 56.8mg/mL, 28.4mg/mL, 14.2mg/mL and 7.1mg/mL. To determine the ovicidal activity, GIN eggs were recovered from sheep feces and incubated for 48h with different concentrations of the oil. For the evaluation of larval migration, third-stage larvae (L3) were obtained by fecal culture, and associated with the essential oil for 24h at the same concentrations, after which they were left for another 24 hours on microsieves, followed by the count of migrating and non-migrating larvae. The assays of R. officinalis oil showed a significant (p<0.05) 97.4% to 100% inhibition of egg hatching and a significant (p<0.05) 20% to 74% inhibition of larval migration. The main constituent revealed by gas chromatography was Eucalyptol. The results indicate that R. officinalis essential oil has ovicidal and larvicidal activity on sheep GINs.

A frequência de contaminação parasitária de áreas públicas de Pelotas, Rio Grande do Sul, Brasil, foi avaliada entre junho de 2010 e maio de 2011, com coletas mensais de amostras de solo de oito praças. Das 400 amostras submetidas à técnica de centrífugo-flutuação em solução de dicromato de sódio com densidade de 1,35, 176 (44%) apresentaram pelo menos uma forma parasitária e, das amostras positivas, 29 (16,5%) estavam poliparasitadas. Os resultados demonstraram relevante índice de contaminação do solo em todas as praças avaliadas, com maiores índices de positividade para ovos de ancilostomídeos (13,5%) e ovos deToxocara (8,8%), sendo também identificados ovos de Trichuris, Ascaris eCapillaria. O estudo demonstrou a contaminação ambiental de praças públicas e os riscos a que a população está exposta em relação a doenças causadas por geoparasitos zoonóticos e sugere que medidas de saneamento e educação em saúde devem ser implementadas no município.

The frequency of parasitic contamination of public areas in the municipality of Pelotas, state of Rio Grande do Sul, Brazil, was studied between June 2010 and May 2011, when soil samples were collected from eight city squares. Out of 400 samples submitted to centrifugal floatation technique in solution of sodium dichromate with density of 1.35, 176 (44%) proved positive for at least one parasite; 29 (16.5%) samples were multi-infested. The results showed that there was a significant soil contamination rate in all the parks included in the study. The positivity rate was higher for hookworms eggs (13.5%) andToxocara eggs (8.8%);Trichuris, Ascaris andCapillaria eggs were also detected. This study shows the risks to which the population is exposed in relation to zoonotic geohelminths, and suggests that sanitation and health education measures should be implemented in the municipality.