Resumo Novas abordagens para o desenvolvimento de organismos geneticamente modificados, resistentes a doenças, incluem alvos específicos de expressão gênica, visando a aumentar as chances de controle do patógeno. A expressão gênica, induzida por promotores de genes de Citrus sinensis, derivados do floema, poderia ser avaliada e comparada com aquela induzida por um promotor constitutivo no mesmo tecido, levando à produção de laranjas-doces transgênicas, potencialmente mais resistentes a doenças causadas por bactérias de floema. Plantas de citrange ‘Carrizo’ [Poncirus trifoliata (L.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck] foram transformadas, via Agrobacterium tumefaciens, com o vetor binário pCAMBIA2301 contendo o gene uidA (ß-glucuronidase), dirigido pelo promotor constitutivo CaMV35S (CaMV35S :: uidA) ou pelos promotores de citros CsPP2.B1 (CsPP2 .B1 :: uidA) ou CsVTE2 (CsVTE2 :: uidA). Brotos regenerados in vitro foram enxertados em limão ‘Cravo’ (C. limonia Osbeck). A transformação genética foi confirmada por análises de Southern blot. A expressão do gene uidA foi avaliada por RT-qPCR, e a histolocalização do gene, dirigida por esses três promotores, foi acessada por seções de ramos tratadas com X-GLUC. A expressão do gene uidA, exibida por promotores específicos de tecido, foi, em geral, menor do que a do promotor constitutivo CaMV35; no entanto, as construções dirigidas por promotores específicos de tecido podem levar à expressão em tecidos restritos. Os promotores CsPP2.B1 e CsVTE2 podem ser considerados adequados para utilização em construções gênicas, visando à resistência a doenças.
Abstract New approaches for developing disease-resistant genetically modified organisms have included specific targets for gene expression to enhance the chances for pathogen control. Gene expression driven by phloem-derived Citrus sinensis gene promoters could be evaluated and compared with the expression induced by a strong constitutive promoter in the same tissue, leading to the production of transgenic sweet oranges potentially more resistant to diseases caused by phloem-limited bacteria. ‘Carrizo’ citrange [ (Poncirus trifoliataL.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck] was transformed, via Agrobacterium tumefaciens, with the binary vector pCAMBIA2301 bearing the uidA gene (ß-glucuronidase) driven by the CaMV35S constitutive promoter (CaMV35S::uidA) or by the CsPP2.B1 (CsPP2.B1::uidA) or by the CsVTE2 (CsVTE2::uidA) citrus promoters. In vitro regenerated shoots were grafted onto ‘Rangpur’ lime (C. limonia Osbeck). The genetic transformation was confirmed by Southern blot analyses. uidA gene expression was evaluated by RT-qPCR, and gene histolocalization controlled by these three promoters was accessed by X-GLUC treated stem sections. uidA gene expression exhibited by tissue-specific promoters was overall lower than from the constitutive promoter CaMV35; however, constructs driven by tissue-specific promoters may lead to expression in restricted tissues. CsPP2.B1 and CsVTE2 promoters can be considered adequate for the utilization in gene constructs aiming disease resistance.