RESUMO Campomanesia rufa (O. Berg) Nied. é uma espécie mirtácea nativa do Cerrado brasileiro. Considerada uma espécie ameaçada de extinção, a propagação in vitro de C. rufa apresenta-se como uma alternativa para sua conservação. No entanto, a falta de protocolos eficazes para a desinfecção de microrganismos endofíticos naturalmente presentes nos tecidos vegetais dificulta o sucesso da micropropagação. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi o isolamento, a identificação molecular e o controle de bactérias endógenas de C. rufa propagadas in vitro. Produtos de PCR purificados dos isolados bacterianos foram sequenciados pelo método de Sanger. As sequências obtidas foram alinhadas com sequências homólogas usando Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) disponível na National Centre for Biotechnology Information (NCBI). As sequências obtidas neste estudo e as sequências homólogas listadas no GenBank foram alinhadas usando o software MEGA7 para elaborar árvores filogenéticas. Avaliaram-se a sobrevivência, a altura da parte aérea e a eficiência de antibióticos (estreptomicina, ampicilina e cloranfenicol) em diferentes concentrações no meio de cultura. A ocorrência de diferentes cepas de Bacillus sp. foi observada nos tecidos vegetais. Ao testar o controle de Bacillus sp. com antibióticos, o uso de 32 mg L-1 de ampicilina causou uma redução significativa na contaminação bacteriana sem afetar a sobrevivência do explante. Por outro lado, o uso de 256 mg L-1 de estreptomicina causou a maior redução na contaminação, embora esta concentração tenha sido letal para mais de 90% dos explantes. Este estudo é o primeiro relato sobre a ocorrência de bactérias endógenas e seu controle no contexto da conservação in vitro de espécies nativas. O. O (O Berg Nied brasileiro extinção C apresentase apresenta se entanto micropropagação isolamento Sanger BLAST (BLAST NCBI. NCBI . (NCBI) MEGA filogenéticas Avaliaramse Avaliaram estreptomicina, (estreptomicina cloranfenicol cultura sp 3 L1 L 1 L- explante lado 25 90 explantes nativas (NCBI 2 9

ABSTRACT Campomanesia rufa (O. Berg) Nied. is a Myrtaceae species native to the Brazilian Cerrado. As C. rufa is considered endangered, in vitro propagation is an alternative for its conservation. However, the lack of effective disinfection protocols for endophytic microorganisms naturally present in plant tissues hinders the success of micropropagation. In this context, the objective of this study was to isolate, molecular identify, and control endogenous occurring bacteria of C. rufa propagated in vitro. Purified PCR products of bacterial isolates were sequenced by the Sanger method and aligned with homologous sequences using the Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) available in National Centre for Biotechnology Information (NCBI) database. MEGA7 software was used to align all sequences and to draw phylogenetic trees. Survival, shoot height, and efficiency of antibiotics (streptomycin, ampicillin, and chloramphenicol) at different concentrations in the culture medium were evaluated. Different Bacillus sp. strains were observed in the plant tissues. When testing the control of Bacillus sp. with antibiotics, 32 mg L-1 ampicillin caused a significant reduction in bacterial contamination with no effect on explant survival. On the other hand, 256 mg L-1 streptomycin caused the greatest reduction in contamination but was lethal to over 90% of the explants. This study is the first report on the occurrence of endogenous bacteria and their control in the context of in vitro native species conservation. O. O (O Berg Nied Cerrado C endangered conservation However micropropagation isolate identify BLAST (BLAST NCBI (NCBI database MEGA trees Survival height streptomycin, (streptomycin chloramphenicol evaluated sp 3 L1 L 1 L- survival hand 25 90 explants 2 9

RESUMO Campomanesia rufa (O. Berg) Nied. é uma espécie nativa do Cerrado que apresenta grande potencial comestível. No entanto, é uma espécie “em perigo de extinção”, segundo a União Internacional para a Conservação da Natureza (IUCN). Não existe informação técnica e científica sobre a espécie, demonstrando a importância das pesquisas. O presente trabalho teve como objetivo a caracterização físico-química de frutos imaturos e maduros de C. rufa. Os frutos apresentaram alteração na coloração de verde (b * = 25.11, h = 122.43) para verde amarelado (b * = 34.26, h = 115.73), aumento na massa (6.54 g para 10.88 g), diâmetro (23.76 mm a 28.03 mm) e sólidos solúveis (8.00 a 10.80%). Os frutos apresentaram altos teores de pectina total (1246.35 mg 100 g-1) e solúvel (195.93 mg 100 g-1), alto teor de água (78.86 g 100 g-1), baixo valor de pH (3.40) e alto ácido cítrico conteúdo (1.2%). No entanto, os frutos apresentaram baixo teor de proteína (0.81 g 100 g-1), teor de lipídios e baixo valor calórico (64.76 kcal 100 g-1). Os frutos apresentaram valores significativos de carotenóides, compostos fenólicos (312.47 mg 100 g-1), vitamina C (263.60 mg 100 g-1) e boa atividade antioxidante in vitro (1862.81 µM g-1). Os resultados obtidos indicam que os frutos de C. rufa apresentam composição semelhante aos frutos de outras espécies de Campomanesia, e suas propriedades biológicas devem ser investigadas adicionalmente em condições in vivo.

ABSTRACT Campomanesia rufa (O. Berg) Nied. is a native Cerrado species that presents great edible potential. However, it is a species “in danger of extinction” as recommended by the International Union for the Conservation of Nature (IUCN). No technical and scientific information about the species exists, thus demonstrating the importance of its research. The present work aimed at the physical and chemical characterization of immature and mature C. rufa fruits. The fruits showed a change in coloration from green (b * = 25.11, h = 122.43) to yellowish-green (b * = 34.26 , h = 115.73), an increase in mass (6.54 g to 10.88 g), diameter (23.76 mm to 28.03 mm) and soluble solids (8.00 to 10.80%). The fruits presented high levels of total (1246.35 mg 100 g-1) and soluble pectin (195.93 mg 100 g-1), high water content (78.86 g 100 g-1), low pH value (3.40), and high citric acid content (1.2%). However, the fruits had low protein (0.81 g 100 g-1), lipid contents, and low caloric values (64.76 kcal 100 g-1). The fruits presented significant values of carotenoids, phenolic compounds (312.47 mg 100 g-1), vitamin C (263.60 mg 100 g-1) as well as good in vitro antioxidant activity (1862.81 µM g-1). The results obtained indicate that C. rufa fruits showed a similar composition to the fruits of other Campomanesia species, and their biological properties should be investigated additionally under in vivo conditions.