Seqüências do banco de dados SUCEST foram analisadas baseado em suas identidades com genes relacionados que codificam enzimas chalcone sintase (CHS). A seqüência da proteína CHS de sorgo (gi|12229613), foi usada para a busca de seqüências no banco de dados do SUCEST, que foram mais similares à CHS. Baseado na similaridade das seqüências de aminoácidos deduzidas, quatorze conjuntos formados por 121 seqüências, foram divididos em dois grupos. O primeiro grupo é mais similar à CHS de sorgo (EC 2.3.1.74) e apresenta a seqüência consenso do sítio ativo de chalcone e stilbene sintase. Análises da expressão gênica, baseada no número de seqüências de uma dada biblioteca presente em cada grupo, indicaram que neste caso, a maioria das seqüências são de bibliotecas preparadas de raíz e flores de cana-de-açúcar. O segundo grupo é mais similar à seqüência de aminoácidos deduzida de uma proteína, não caracterizada, induzida por patógeno (PI1, gi|9855801|) do banco de dados de EST de Sorghum bicolor. Estas duas seqüências de proteínas são 90% idênticas e tem duas mudanças de aminoácidos no consenso padrão de chalcone e stilbene sintase, e conservam o resíduo de cisteína na posição do sítio ativo. Esta EST não foi associada a chalcone sintase antes, e apresenta diferenças na seqüência consenso da CHS previamente descrita de sorgo. A maioria das seqüências do segundo grupo são de bibliotecas de cana-de-açúcar preparadas de raíz e plantas infectadas com Herbaspirillum rubrisubalbicans e Gluconacetobacter diazotroficans. Os resultados indicam que nós identificamos uma chalcone sintase, tal como a encontrada no banco de cDNA de sorgo em uma biblioteca induzida por patógeno, expressa em plantas de cana-de-açúcar, e que ambas as proteínas são novos membros da super família chalcone e stilbene sintase.
Sequences from the sugarcane expressed sequence tag (SUCEST) database were analyzed based on their identities to genes encoding chalcone-synthase-like enzymes. The sorghum (Sorghum bicolor) chalcone-synthase (CHS, EC 2.3.1.74) protein sequence (gi|12229613) was used to search the SUCEST database for clusters of sequencing reads that were most similar to chalcone synthase. We found 121 reads with homology to sorghum chalcone synthase, which we were then able to sort into 14 clusters which themselves were divided into two groups (group 1 and group 2) based on the similarity of their deduced amino acid sequences. Clusters in group 1 were more similar to the sorghum enzyme than those in group 2, having the consensus sequence of the active site of chalcone and stilbene synthase. Analysis of gene expression (based on the number of reads from a specific library present in each group) indicated that most of the group 1 reads were from sugarcane flower and root libraries. Group 2 clusters were more similar to the amino acid sequence of an uncharacterized pathogen-induced protein (PI1, gi|9855801) from the S. bicolor expressed sequence tag (EST) database. The group 2 clusters sequences and PI1 proteins are 90% identical, having two amino acid changes at the chalcone and stilbene synthase consensi but conserving the cysteine residue at the active site. The PI1 EST has not been previously associated with chalcone synthase and has a different consensus sequence from the previously described chalcone synthase of sorghum. Most of the group 2 reads were from libraries prepared from sugarcane roots and plants infected with Herbaspirillum rubrisubalbicans and Gluconacetobacter diazotroficans. Our results indicate that we have identified a sugarcane chalcone synthase similar to the pathogen-induced PI1 protein found in the sorghum cDNA libraries, and it appears that both proteins represent new members of the chalcone and stilbene synthase super-family.
