Rotaviruses are important enteric pathogens for humans and animals. Group A rotaviruses (RV-A) are the most common agents of severe gastroenteritis in infants and young children and vaccination is the most effective method to reduce RV-A-associated diseases. G1P[8], the most prevalent RV-A genotype worldwide, is included in the RV-A vaccine Rotarix®. The discrimination between wild-type G1P[8] and vaccine G1P[8] strains is an important topic in the study of RV-A epidemiology to manage outbreaks and to define control measures for vaccinated children. In this study, we developed a novel method to segregate the wild-type and vaccine strains using restriction endonucleases. The dsRNA from the Rotarix® vaccine was sequenced and the NSP3 gene was selected as the target gene. The vaccine strain has a restriction pattern that is different than that of wild-type RV-A G1P[8] isolates after digestion with the restriction endonuclease BspHI. This pattern could be used as a marker for the differentiation of wild-type G1P[8] strains from the vaccine strain.

OBJETIVO: Estudar a etiologia dos casos de exantema com ou sem febre em crianças atendidas no pronto-socorro de um hospital de uma zona endêmica para dengue. MÉTODOS: No período de 21/09/2001 a 20/09/2002, foram inscritas no estudo 95,9% (71/74) das crianças atendidas no pronto-socorro do Hospital Universitário de Campo Grande (MS) que apresentassem exantema (percentual de recusa de 4,1%). Após preenchimento do protocolo com os dados das crianças, as mesmas foram submetidas a exame físico seguido da coleta de amostras de sangue para realizar hemograma com contagem de plaquetas e sorologias (IgM e IgG); inicialmente para dengue, rubéola e toxoplasmose e, posteriormente, naqueles casos com resultado negativo, realizou-se sorologia para parvovirose, herpes vírus tipo 6 e sarampo. RESULTADOS: O diagnóstico laboratorial foi confirmado através da pesquisa de anticorpo IgM em 88,7% dos casos investigados: dengue (77,5%), herpes vírus tipo 6 (8,4%), parvovirose (2,8%) e diagnóstico inconclusivo em oito pacientes (11,3%). Não foi evidenciada sorologia positiva (IgM) para sarampo, rubéola ou toxoplasmose naquela ocasião. As manifestações clínicas mais freqüentes nos pacientes com dengue foram: febre, prurido, prostração, mialgia e prova do laço positiva. Nos pacientes cujo diagnóstico foi dengue, a prova do laço foi positiva em 58,4% (32/55) dos casos, demonstrando diferença estatisticamente significativa quando comparada com o grupo cujo diagnóstico não foi dengue. CONCLUSÕES: Nas crianças com exantema, dengue pode ser a principal enfermidade causal, atentando-se para a epidemiologia do local. É necessário um controle constante da vigilância epidemiológica e sorológica das doenças exantemáticas.

OBJECTIVE: To study the etiology of exanthema cases, with or without fever, in children seen in the emergency room of a hospital located in a region where dengue is endemic. METHODS: Enrollment took place between 21/09/2001 and 20/09/2002 and included 95.9% (71/74) of children presenting with exanthema at the emergency room of the Hospital Universitário de Campo Grande, MS (4.1% refusals). After the children had had their details taken and entered on the study protocol, they were subjected to physical examination followed by collection of blood samples for blood testing with platelet counts and serology (IgM and IgG); initially for dengue, rubella and toxoplasmosis and then, in negative cases, serology was also run for parvovirus, herpes virus type 6 and measles. RESULTS: Laboratory diagnoses were confirmed by means of IgM antibody assay in 88.7% of the cases investigated: dengue (77.5%), herpes virus type 6 (8.4%), parvovirus (2.8%) and in eight patients diagnosis was inconclusive (11.3%). On this occasion no positive serology (IgM) was observed for measles, rubella or toxoplasmosis. The most common clinical manifestations among the dengue patients were: fever, itching, prostration, myalgia and positive tourniquet test results. In 58.4% (32/55) of those cases diagnosed with dengue, the tourniquet test was positive, which was a statistically significant difference when compared with the remainder of the sample. CONCLUSIONS: When children present with exanthema, it is possible that dengue is the primary causative disease, depending on the epidemiology of the location. Constant control of epidemiological and serological surveillance of exanthematous diseases is necessary.

A tipagem de cepas é uma ferramenta fundamental para a análise epidemiológica molecular e pode fornecer informações importantes sobre a dispersão dos vírus dengue. Neste trabalho, foi realizada a caracterização molecular de amostras de vírus DEN-2 isoladas no Brasil entre 1990-2000, de áreas geograficamente e temporalmente distintas, com o objetivo de investigar a distribuição genética deste sorotipo circulante no país. A reação em cadeia pela polimerase baseada em sítios de restrição específicos (RSS-PCR) apresentou o mesmo padrão para as 52 amostras Brasileiras, mostrando a circulação de apenas uma variante de vírus DEN-2. A análise filogenética utilizando alinhamento progressivo de sequências de 240 nucleotídeos da junção E/NS1 de 15 cepas mostrou que estas pertencem ao genotipo III (genotipo Jamaica).

Strain typing is a critical tool for molecular epidemiological analysis and can provide important information about the spread of dengue viruses. Here, we performed a molecular characterization of DEN-2 viruses isolated in Brazil during 1990-2000 from geographically and temporally distinct areas in order to investigate the genetic distribution of this serotype circulating in the country. Restriction site-specific polymerase chain reaction (RSS)-PCR presented the same pattern for all 52 Brazilian samples, showing the circulation of just one DEN-2 variant. Phylogenetic analysis using progressive pairwise alignments from 240-nucleotide sequences of the E/NS1 junction in 15 isolates showed that they belong to genotype III (Jamaica genotype).

In a prospective field study conducted from July 2000 to June 2001, adult Aedes aegypti and Ae. albopictus mosquitoes were caught from the municipality of Nova Iguaçu, State of Rio de Janeiro, Brazil. Virus isolation in Ae. albopictus clone C6/36 cell line and a semi-nested reverse transcription-polymerase chain reaction detected only dengue virus type 3 in three pools of Ae. aegypti, despite the co-circulation of DEN-1, DEN-2 and DEN-3 serotypes in that area. No viruses were detected in Ae. albopictus mosquitoes. This virological surveillance consists in a sentinel system alerting for dengue outbreaks.

Dengue virus type 3 was isolated for the first time in the country as an indigenous case from a 40 year-old woman presenting signs and symptoms of a classical dengue fever in the municipality of Nova Iguaçu, State of Rio de Janeiro. This serotype has been associated with dengue haemorrhagic epidemics and the information could be used to implement appropriate prevention and control measures. Virological surveillance was essential in order to detected this new serotype.

This paper presents epidemiological, laboratory, and clinical data on 12 years of dengue virus activity in the State of Rio de Janeiro from the time the disease was first confirmed virologically in April 1986 through April 1998. DEN-1 and DEN-2 viruses are the serotypes circulating in the state and were responsible for the epidemics reported during the last 12 years. The results published here show both the impact of dengue virus infections on the population and laboratory advances that have improved dengue diagnosis.

Um inquérito soroepidemiológico foi realizado em uma amostra de escolares, em 1994, no município de Paracambi, Estado do Rio de Janeiro. Positividade do teste de Inibição da Hemaglutinação foi detectada em 39,2% (145/370) dos escolares pesquisados. A freqüência de positividade foi de 53,8% (78/145) para o sexo feminino e de 46,2% (67/145) para o sexo masculino. A distribuição por faixa etária mostrou uma positividade crescente com o aumento da idade. Cepas do vírus dengue tipo 1 e vírus dengue tipo 2 foram isoladas anteriormente (1990), mostrando a co-circulação de ambos os sorotipos na área. Os índices de infestação predial pelo Aedes aegypti e pelo Aedes albopictus foram determinados.

A seroepidemiological survey was carried out during 1994 in the municipality of Paracambi, state of Rio de Janeiro. Haemagglutination inhibition test positivity was detected in 145 out of 370 (39.2%) schoolchildren. The frequency of positive test by sex was 53.8% (78/145) female and 46.2% (67/145) male. Distribution by age showed the increasing of antibody posivity in older children. Strains of dengue virus type 1 and dengue virus type 2 were isolated before (1990) showing the co-circulation of both serotypes in that area. The house index infestation of Aedes albopictus and Aedes aegypti has been determined.

Em março de 1994, casos de uma doença exantemática foram notificados nos municípios de Itagimirim, Eunápolis e Belmonte, sul da Bahia. Infecção por dengue foi confirmada por sorologia (MAC-ELISA) e pelo isolamento de virus dengue tipo 2 (genotipo Jamaica). Sinais e sintomas de dengue clássico foram observados com um alto percentual de exantema (73,8%) e prurido (50,5%). Manifestações hemorrágicas não foram importantes e apenas casos de gengivorragia foram descritos. A atividade dos virus dengue espalhou-se rapidamente para importantes áreas de turismo da região, tais como Porto Seguro, Ilhéus, Santa Cruz de Cabrália, Prado, Alcobaça e outros, representando um risco da dispersão do virus para outras regiões do país e exterior.

During March 1994 cases of a exanthematic acute disease were reported in the municipalities of Itagemirim, Eunápolis and Belmonte, state of Bahia. Dengue fever was confirmed by serology (MAC-ELISA) and by dengue virus type 2 isolation, genotype Jamaica. Signs and symptoms of classic dengue fever were observed with a high percentual of rash (73.8%) and pruritus (50.5%). Major haemorrhagic manifestations were unfrequent and only bleeding gum was reported. Dengue virus activity spreaded rapidly to important tourism counties like Porto Seguro, Ilhéus, Santa Cruz de Cabrália, Prado, Alcobaça and others, representing a risk for the spreading of dengue virus into the country and abroad.

Após um período de epidemias sequenciais pelos vírus dengue tipo 1 e 2 (DEN-1 e DEN-2), foi realizado um estudo soroepidemiológico em uma amostra de escolares da rede pública de ensino do município de Niterói; 450 amostras de sangue foram obtidas através de punção da polpa digital, coletadas sobre discos de papel de filtro e testadas para a detecção de anticorpos inibidores da hemaglutinação (1HA) para DEN-1 e DEN-2. Das amostras testadas, 66,0% (297/450) apresentaram títulos de anticorpos IHA e as médias geométricas dos títulos de anticorpos foram de 1/182 e 1/71, para DEN-1 e DEN-2, respectivamente. Cerca de 61,0% (181/297) daqueles com anticorpos IHA tiveram infecção secundária. Destes, 75% (135/181) tinham idade igual a ou menor do que 15 anos. Nenhum caso de dengue hemorrágico foi relato entre os participantes do estudo. Cerca de 56,0% dos casos com anticorpos IHA tiveram infecção assintomática ou oligossintomática. As freqüências absoluta e relativa das sorologias positivas por idade e sexo não evidenciaram diferenças estatisticamente significativas. Acredita-se que a barreira imumtária formada pelos individuos infectados pelo DEN-2 seja a responsável pela não ocorrência do dengue de forma epidêmica nos anos imediatamente posteriores ao presente estudo.

A seroepidemiologic survey was carried out in schoolchildren from public schools of the Niterói municipality, state of Rio de Janeiro, Brazil, after a period of sequential epidemics by dengue virus type 1 and 2 (DEN-1 and DEN-2). 450 blood samples were obtained by fingertip puncture and collected on filter paper discs. The hemagglutination inhibition (HAI) test was carried out using DEN-1 and DEN-2 antigens. HAI titres were demonstrated in 66% (297/450) of the sera and the geometric means of the titres were 1/182 and 1/71 for DEN-1 and DEN-2, respectively. Secondary infections were observed in 61% (181/297) of positive cases. Among these, 75% (135/181) were under fifteen years old. No dengue haemorrhagic fever (DHF) was reported in these children. Asymptomatic or oligosymptomatic infections were detected in 56% of the studied population. The absolute and relative frequencies of positive tests by age group and sex did not evidence statistically significant difference. The number of individuals infected probably produced a immunologic barrier responsible for the non occurrence of dengue epidemic in the latter years.

Foram realizados estudos laboratoriais em 3178 pacientes com sinais e sintomas sugestivos de infecção por dengue no Estado do Rio de Janeiro, no período de abril de 1986 a dezembro de 1987. A epidemia apresentou 2 picos e afetou residentes de 17 municípios. Ambos os sexos e todos os grupos etários foram igualmente afetados. Dengue virus tipo 1 foi isolado de 1039 soros e a utilização do MAC-ELISA elevou para 1874 (59%) o número de casos confirmados. Nestes casos, a taxa de isolamento alcançou 80% nos espécimens obtidos até o quarto dia após o início da doença. A magnitude da viremia variou de 10(3.0) a 10 8.0 TCDI50/ml.

Laboratorial studies were carried out on 3178 patients with signs and symptoms suggestive of dengue infection from April 1986 to December 1987 in the State of Rio de Janeiro, Brazil. The epidemic had two peaks following the first virus isolation and affected the inhabitants of 17 counties. Both sex and all age groups were affected. Dengue virus type 1 was isolated from 1039 sera and the number of confirmed cases was increased to 1874 (59%) by MAC-ELISA. Isolation rate confirmed cases reached 80% in the specimens obtained until the 4th day after the onset of disease and viraemia ranged from 10 3.0 to 10(8.5) TCID50/ml.

Foi avaliada a resposta imune de anticorpos IgM em vacinados contra febre amarela usando a amostra 17D empregando-se provas de captura de anticorpos IgM (MAC-ELISA) e teste de neutralização por redução de placas (PRNT). Os resulta-dos mostraram uma concordância de 97% entre ambas as provas e os autores concluem que o MAC-ELISA pode ser utilizado como um método específico e sensível para substituir o teste de neutralização para detecção de anticorpos IgM em vacinados contra febre amarela.

An evaluation of the IgM antibody immune response against yellow fever using strain 17D was carried out by MAC-ELISA and PRNT. The results showed an agreement of 97% between both tests and the authors conclude that MAC-ELISA can be used as a specific and sensitive asssay to replace the PRNT for detecting yellow fever antibodies in human sera, after vaccination programs.

Uma epidemia de dengue iniciou-se em março de 1986, no Rio de Janeiro, alcançando rapidamente outras partes do país. Febre dengue clássica foi observada, porém o vírus do dengue foi isolado de um caso fatal. As amostras de dengue 1 isoladas de pacientes e de fêmeas adultas de Aedes aegypti capturadas na área apresentaram efeito citopático na linhagem de células A. albopictus clone C6/36. A lesão celular foi estudada também em microscopia eletrônica, sendo descritos os dados observados. Um teste de captura para IgM (MAC-ELISA) foi utilizado durante a epidemia tanto para o diagnóstico como para avaliarr a circulação de vírus, com resultados claros e reprodutíveis; os anticorpos IgM apareceram precocemente após o início da doença clínica, permanecendo por cerca de 90 dias na maioria dos pacientes. A reação mostrou-se tipo específico em cerca de 50% dos pacientes, porém, um alto nível de respostas heterológas para dengue tipo 3 foi observado nos demais pacientes. Observou-se uma taxa total de isolamento de 46,8% (813 amostras de vírus de 1734 pacientes). Com a reação de IgM houve um momento de casos confirmados: 1479, em 2541 casos suspeitos (58,2%). A possível influência dos anticorpos dos pacientes sobre a taxa de isolamento de vírus é discutida, porém a questão não está esclarecida completamente. Os autores enfatizam a importância do diagnóstico laboratorial dos casos suspeitos de dengue em todas as regiões do país, onde os vetores são encontrados.

A dengue outbreak started in March, 1986 in Rio de Janeiro and spread very rapidly to other parts of the country. The great majority of cases presented classical dengue fever but there was one fatal case, confirmed by virus isolation. Dengue type 1 strains were isolated from patients and vectors (Aedes aegypti) in the area by cultivation in A. albopictus C6/36 cell line. The cytopathic effect (CPE) was studied by electron microscopy. An IgM capture test (MAC-ELISA) was applied with clear and reproducible results for diagnosis and evaluation of virus circulation; IgM antibodies appeared soon after start of clinical disease, and persisted for about 90 days in most patients. The test was type-specific in about 50% of the patients but high levels of heterologous response for type 3 were observed. An overall isolation rate of 46,8% (813 virus strains out of 1734 specimens) was recorded. The IgM test increased the number of confirmed cases to 58,2% (1479 out of 2451 suspected cases). The importance of laboratory diagnosis in all regions where the vectors are present is emphasized.