Esse trabalho teve como objetivo avaliar a morfologia de embriões nucelares de laranja 'Valência' (Citrus sinensis (L.) Osbeck) a fim de fornecer informações para estudos de embriogênese somática induzida in vitro visando o melhoramento de citros que utilizem essa variedade. Para a realização dessas avaliações, embriões coletados de sementes provenientes de frutos maduros (13 meses após o florescimento) foram fixados, desidratados e preparados para a realização dos cortes histológicos seriados. Dos embriões avaliados, apenas um apresentou a morfologia de embrião zigótico. Os demais mostraram cotilédones com angulações e formatos distintos. Foram observados embriões mal formados com a não diferenciação de ápice caulinar e/ou ápice radicular, não desenvolvimento de um dos cotilédones, além de eixo embrionário colapsado. Os dados obtidos poderão auxiliar na interpretação dos tipos morfológicos de embriões somáticos obtidos in vitro e sua capacidade de conversão em plantas.

This research work evaluated the morphology of nucellar embryos of 'Valencia' sweet orange (Citrus sinensis (L.) Osbeck), in an effort to provide this information as a reference in somatic embryo induction experiments, for in vitro breeding of this cultivar. Embryos were collected from mature fruits (13 months after blooming), and were fixed, dehydrated and prepared for serial histological cuts. Among the embryos, only one presented similar morphology to a zygotic embryo, whereas the others showed different shapes and angles in the cotyledons. Not well formed embryos were also observed, mainly due to the lack of the differentiation of the shoot apex and/or root apex, undevelopment of one of the cotyledons, or sometimes due to the collapsed embryo. The results may contribute to a better understanding of different embryo morphologies of somatic embryos and their capacity to convert in plants.

Híbridos somáticos de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck) e limão Cravo (C. limonia L. Osbeck) foram regenerados após a fusão (polietileno glicol) e cultura de protoplastos. Os híbridos somáticos foram confirmados pela análise da morfologia das folhas, determinação do número de cromossomos e marcadores moleculares (RAPD). Todas as plantas analisadas revelaram-se tetraplóides (2n = 4x = 36), possuíam folhas de morfologia intermediária e uma combinação do padrão de bandas de RAPD de ambos os parentais. Esta combinação pode se tornar útil como porta-enxerto para a Região Sudeste da indústria citrícola brasileira. Este híbrido somático potencialmente combinará as características de tolerância à seca e o vigor do limão Cravo com a tolerância ao declínio da laranja Caipira.

Protoplast culture following polyethylene glycol-induced fusion resulted in the regeneration of somatic hybrid plants between Caipira sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) and Rangpur lime (C. limonia L. Osbeck). The plants were confirmed as somatic hybrids by leaf morphology, chromosome number and RAPD profile. All regenerated plants were tetraploid (2n = 4x = 36), with intermediate leaf morphology and complementary RAPD banding profile of both parents. This combination may be useful as a rootstock for the citrus industry in Southeastern Brazil since this somatic hybrid could combine the drought tolerance and vigor of Rangpur lime with the blight tolerance of Caipira sweet orange.

Nucelos de sete variedades de Citrus foram introduzidos em três meios de cultura para produção de calos embriogênicos. Os meios de cultura testados foram: EME [MT, modificado pela adição de extrato de malte (500 mg.L-1)]; 1/2-EME [1/2 concentração de macronutrientes no meio MT + 1/2 concentração de macronutrientes no meio BH3 + 500 mg.L-1 extrato de malte + 1,55 g.L-1 de glutamina]; e EBA [EME + 0,44 miM 6-benziladenina + 0,04 miM 2,4 D]. Calos friáveis foram obtidos nas variedades tangerinas 'Cravo' e 'Ponkan' (Citrus reticulata, Blanco), tangor 'Murcote' (Citrus reticulata Blanco x Citrus sinensis L. Osbeck), laranja 'Valencia' (Citrus sinensis L. Osbeck) e lima 'Serra d'água' (Citrus sinensis L. Osbeck) 120 dias após a instalação do ensaio. As laranjas 'Natal' e 'Pera' (Citrus sinensis L. Osbeck) produziram calos duros de crescimento lento neste período. Os meios EME e 1/2-EME mostraram os melhores resultados para as tangerinas 'Cravo' e 'Ponkan' e lima 'Serra d'água', enquanto que EBA foi o melhor meio de cultura para indução de calos friáveis de tangor 'Murcote' e laranja 'Valencia'. Calos friáveis das variedades, tangerinas 'Cravo' e 'Pokan' e tangor 'Murcote' foram subcultivados e apresentaram bom rendimento e qualidade de protoplastos após isolamento.

Nucellar tissues of seven Citrus varieties were introduced onto three growth media to produce embryogenic callus. The media tested were: EME [MT, modified, with the addition of malt extract (500 mg.L-1)]; 1/2-EME [half concentration of MT macronutrients + half concentration of BH3 macronutrients + 500 mg.L-1 malt extract + 1.55 g.L-1 of glutamine]; and EBA [EME + 0.44 muM 6-benzyladenine + 0.04 muM 2,4 D]. Soft friable calli were obtained from 'Cravo' and 'Ponkan' mandarins (Citrus reticulata, Blanco), 'Murcott' tangor (Citrus reticulata Blanco x Citrus sinensis L. Osbeck), 'Serra d'água' and 'Valencia' sweet oranges (Citrus sinensis, L. Osbeck) 120 days after callus induction. 'Natal' and 'Pera' sweet oranges (Citrus sinensis, L. Osbeck) produced hard non-friable calli in this period. EME and 1/2-EME media had the best results for 'Cravo' mandarin, 'Ponkan' mandarin and 'Serra d'água' sweet orange, whereas EBA was the best media composition to induce soft friable calli on 'Murcott' tangor and 'Valencia' sweet orange. Friable callus cultures of 'Cravo' and 'Ponkan' mandarins, and 'Murcott' tangor yielded high quality protoplasts after isolation. Abbreviations: a.c. - activated charcoal; BA - 6-benzyladenine; IAA - indole-acetic acid; 2,4-D - 2,4-diclorophenoxyacetic acid; MT - Murashige & Tucker basal medium.