Foram analisados espécimes cervicais de 202 mulheres, com idade variando de 15 e 64 anos, atendidas no Hospital Luis Antonio, Natal-RN, objetivando determinar a prevalência do HPV, identificar genotipos do vírus e possíveis fatores de risco para a infecção por esse patógeno, em mulheres atendidas em um serviço de rastreamento do câncer do colo do útero. De cada paciente foram coletados dois espécimes: um destinado ao exame citológico e outro para detecção do HPV por PCR, com tipagem por hibridização "dot blot". Das pacientes incluídas no estudo, 54,5% apresentaram citologia normal e 45,5% tinham alterações citológicas. HPV foi detectado em 24,5% das mulheres com citologia normal, e em 59,8% das que apresentaram citologia alterada. Tanto a infecção por um único tipo de HPV, quanto a infecção simultânea por dois tipos diferentes do vírus aumentaram a chance de ocorrência de alterações citológicas. Foram identificados treze tipos de HPV, a maioria de alto risco. Nas infecções por um único tipo, o HPV 16 foi o mais prevalente, seguido do HPV 58. Na infecção dupla a associação mais freqüente foi entre HPV 56 e 57. A prevalência do HPV nas mulheres com citologia normal foi superior a relatada para países de todos os continentes, exceto África. Nas mulheres com alterações citológicas observou-se resultado inverso. A distribuição dos tipos de HPV foi semelhante à descrita para Américas, com algumas diferenças. Dos fatores de risco analisados, o relacionamento sexual com múltiplos parceiros foi o único que apresentou associação com a presença de infecção por HPV.

We analyzed cervical specimens of 202 women, aged 15 to 64 years, attended at Luis Antonio Hospital, Natal, Brazil, to determine the prevalence of HPV and identify the more frequent genotypes and risk factors for HPV infection in women attended at a cervical cancer screening service. Two specimens were collected from each patient: one for cytological examination and the other to detect HPV DNA by PCR, and typing by dot blot hybridization. A total of 54.5% of the sample had normal cytology and 45.5% had cytological alterations. HPV was detected in 24.5% of the cytologically normal women and in 59.8% of those with altered cytology. Both single and double HPV infection increased the likelihood of cytological alterations. Thirteen types of HPV were identified, most of which were high risk. HPV 16 was the most prevalent single-type infection, followed by HPV 58. The most frequent double infection was the association between HPV 56 and 57. The prevalence of HPV in cytologically normal women was greater than that reported for countries on all the continents except Africa. The inverse was observed in women with cytological alterations. The distribution of HPV types was similar to that described for the Americas, with some differences. Multiple sexual partners was the only risk factor showing an association with the presence of HPV infection.

OBJETIVO: Padronizar um método alternativo para extração de DNA a partir de tecido fixado em formol e conservado em arquivos de blocos de parafina, visando à realização de estudos retrospectivos. MÉTODOS: Comparou-se a eficiência de protocolos de extração de DNA a partir de tecido parafinado, para análise por reação em cadeia de polimerase (PCR), tomando-se como parâmetro um protocolo baseado em um kit comercial. Foram feitas extrações do DNA de 60 espécimes por três métodos: o protocolo A, baseado no kit GlassMAX; o B, utilizando-se o kit GFX TM; e o C, tendo como base o método de Banerjee et al.(2). A integridade e a suficiência do DNA presente na amostra foram avaliadas pela amplificação por PCR de um segmento de 110pb do gene da beta-globina humana, com visualização por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida, corado pela prata. Resultados: Das 60 amostras analisadas, 45 apresentaram resultado positivo na PCR quando o DNA foi extraído por qualquer um dos três protocolos. Em seis amostras, a amplificação foi positiva apenas para o DNA extraído pelos protocolos A e C. Em três amostras, o resultado foi positivo apenas para o DNA extraído pelo protocolo A, e em duas, apenas para o DNA extraído pelo protocolo C. CONCLUSÕES: O protocolo C apresentou desempenho semelhante ao do protocolo A, com as vantagens de apresentar menor custo, dispensar o uso de kit comercial, além de não utilizar solventes orgânicos, revelando-se uma alternativa viável para a obtenção de DNA a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina.

OBJECTIVE: To set up a method for DNA extraction from paraffin embedded cervical cancer specimens, previously formalin-fixed, aiming to accomplish retrospective analysis. METHODS: Sixty specimens were submitted to DNA extraction by three different methods. All of them involved digestion of the tissues by proteinase K, followed by DNA purification, based in three different approaches: protocol A used a DNA isolation kit, GlassMax (Gibco/BRL); protocol B was performed with the kit GFX TM Amersham Pharmacia Biotech; and protocol C was based on the method proposed by Banerjee et al.(2), with modifications. To evaluate the integrity and sufficiency of the DNA, the samples were submitted to a in vitro amplification of a segment of the human beta-globin gene, and the PCR products were analyzed by electrophoresis on 7% polyacrylamide gels, followed by silver staining. Results: Among 60 analyzed samples, 45 showed positive results when submitted to the three protocols. In six samples, PCR fragments were obtained with DNAs extracted through protocols A e C; in three samples, DNA extraction was achieved with protocol A only; and in two samples the DNA was successfully extracted only through protocol C. CONCLUSIONS: Protocols A and C generated similar results. Although protocol C is more labor-intensive and time consuming, it does not require a commercial kit and therefore has a lower cost. Furthermore, it does not require the use of organic solvents and may be considered a good alternative for DNA extraction from paraffin embedded tissues.