Resumo Hypostomus está distribuído por bacias da América Central e do Sul, com grande diversidade de espécies com conflitos taxonômicos. Desta forma, a integração de técnicas auxiliares contribui para a compreensão da sistemática e filogenia do grupo. Assim, este estudo teve como objetivo investigar Hypostomus cochliodon e H. boulengeri do riacho Onça (bacia do rio Paraguai) por meio de técnicas aloenzimáticas e citogenéticas. As análises citogenéticas em H. boulengeri mostraram número cromossômico igual a 2n = 68 (14m+14sm+18st+22a), sistema de NOR múltiplo revelado por Ag-NOR e 18S-FISH, um polimorfismo de heterocromatina em acrocêntricos e a presença de microcromossomos Bs. Hypostomus cochliodon mostrou um número diploide de 64 cromossomos (16m+26sm+14st+8a); apesar do sistema de NOR simples, alguns indivíduos apresentaram NOR em ambos os telômeros detectados por Ag-NOR e 18S-FISH. Uma isozima identificou dois loci diagnósticos (Idh-A and Gdh-A) entre as duas espécies e múltiplos loci com alelos únicos em H. boulengeri. A variabilidade genética indicada pela heterozigosidade média (He) foi de 0,2461 e 0,0309 em H. boulengeri e H. cochliodon, respectivamente. Assim, este estudo relata os primeiros dados citogenéticos para H. boulengeri e os primeiros dados isoenzimáticos para H. boulengeri e H. cochliodon. As duas espécies apresentaram evidentes diferenças citogenéticas e isoenzimáticas com a obtenção de marcadores genéticos exclusivos fornecendo suporte para futuros estudos evolutivos no grupo. Sul taxonômicos forma grupo Assim H bacia Paraguai n 6 14m+14sm+18st+22a, 14m14sm18st22a msmsta 14m+14sm+18st+22a , 14m 14sm 18st 22a m sm st (14m+14sm+18st+22a) AgNOR Ag 18SFISH, 18SFISH SFISH 18S FISH, FISH S 18S-FISH Bs 16m+26sm+14st+8a 16m26sm14st8a 16m 26sm 14st 8a (16m+26sm+14st+8a) simples 18SFISH. FISH. IdhA Idh GdhA Gdh Gdh-A He (He 02461 0 2461 0,246 00309 0309 0,030 respectivamente (14m+14sm+18st+22a (16m+26sm+14st+8a 0246 246 0,24 0030 030 0,03 024 24 0,2 003 03 0,0 02 2 0, 00

Abstract Hypostomus is distributed by Central and South America basins, with diverse species with taxonomic conflicts. This way, the integration of auxiliary techniques contributes to understanding the systematics and phylogeny of the group. Thus, this study aimed to investigate the Hypostomus cochliodon and H. boulengeri from the Onça stream (Paraguai River basin) by allozyme and cytogenetic techniques. Hypostomus boulengeri showed a diploid number of 68 chromosomes (14m+14sm+18st+22a), multiple NOR revealed by Ag-NOR and 18S rDNA FISH, a polymorphism of heterochromatin in acrocentrics and the presence of B microchromosome. Hypostomus cochliodon showed a diploid number of 64 chromosomes (16m+26sm+14st+8a); despite the single NOR, some individuals showed NOR in both telomeres detected by Ag-NOR and 18S rDNA FISH. Isozyme identified two diagnostic loci (Idh-A and Gdh-A) between the two species and multiple loci with unique alleles in H. boulengeri. The genetic variability indicated by the mean heterozygosity (He) was 0.2461 and 0.0309 in H. boulengeri and H. cochliodon,respectively.Thus, this study reports the first cytogenetic data for H. boulengeri and the first isozymatic data for H. boulengeri and H. cochliodon. The two species presented evident cytogenetic and isoenzymatic differences with the obtaining of exclusive genetic markers providing support for future evolutionary studies in the group. basins conflicts way group Thus H Paraguai basin 6 14m+14sm+18st+22a, 14m14sm18st22a msmsta 14m+14sm+18st+22a , 14m 14sm 18st 22a m sm st (14m+14sm+18st+22a) AgNOR Ag S FISH microchromosome 16m+26sm+14st+8a 16m26sm14st8a 16m 26sm 14st 8a (16m+26sm+14st+8a) IdhA Idh A GdhA Gdh Gdh-A He (He 02461 0 2461 0.246 00309 0309 0.030 cochliodonrespectivelyThus respectively cochliodon,respectively.Thus (14m+14sm+18st+22a (16m+26sm+14st+8a 0246 246 0.24 0030 030 0.03 024 24 0.2 003 03 0.0 02 2 0. 00

ABSTRACT The karyotypes of three armored catfish species (Loricariidae) from the Iguaçu river, southern of the Brazil, were compared using different techniques: C-banding, Ag-NOR and fluorescence in situ hybridization (FISH), which used 5S and 18S rDNAs and total Cot-1 fraction as probes. Hypostomus commersoni and Hypostomus derbyi presented 2n = 68 chromosomes, with karyotype formulae 12m+12sm+14st+30a and 12m+12sm+10st+34a, respectively; whereas Hypostomus myersi presented 2n = 74 chromosomes and 12m+16sm+12st+34a. The chromosomal localization of the Ag-NORs, 5S and 18S rDNAs differed in number of sites and chromosomal localization among the studied species. The total Cot-1 probe permitted the visualization of the repetitive DNA fraction in karyotypes of each species. Cross-hybridizations using total Cot-1 probe revealed that these species have repetitive DNAs in common. However, this does not occur in H. commersoni in relation to the other species. The apparent karyotype similarity suggests a close relationship between the sympatric H. commersoni and H. derbyi species, but the small differences detected in the examined chromosomal markers indicate evolutionary divergence due to gene flow restriction among them. Hence, the present findings indicate different composition of repetitive sequences among studied species, which permit to infer its role in chromosomal differentiation of Hypostomus.

Cromossomos B são cromossomos extras ao conjunto cromossômico normal, encontrado em diferentes organismos, com destaque para sua presença no grupo de peixes. Callichthys callichthys do alto rio Paraná tem um número diploide de 56 cromossomos (26 m-sm+ 30 st-a) para ambos os sexos, com a presença esporádica de um cromossomo B acrocêntrico. Além do mais, um indivíduo apresentou número diploide de 57 cromossomos, com a presença de um cromossomo B acrocêntrico morfologicamente mal definido em todas as células analisadas. O mapeamento físico do DNAr 5S e 18S mostrou múltiplos sítios de DNAr 5S e apenas um par de cromossomos com sítio para o DNAr 18S em C. callichthys, com exceção para dois indivíduos. Estes dois indivíduos apresentaram um terceiro cromossomo portador das RONs (Ag-RONs e 18S rDNA), onde os genes DNAr 5S e 18S são sintênicos, diferindo apenas na posição. A dispersão dos genes DNAr 18S do par de cromossomos principal st-a 25 para um dos cromossomos do par m-sm 4 teria originado dois indivíduos variantes, um dos quais com cromossomo B acrocêntrico mal definido. Mecanismos para justificar a hipótese sugerida sobre a origem deste cromossomo B são discutidos no presente estudo.

B chromosomes are extra chromosomes from the normal chromosomal set, found in different organisms, highlighting their presence on the group of fishes. Callichthys callichthys from the upper Paraná River has a diploid number of 56 chromosomes (26 m-sm + 30 st-a) for both sexes, with the presence of a sporadically acrocentric B chromosome. Moreover, one individual presented a diploid number of 57 chromosomes, with the presence of a morphologically ill-defined acrocentric B chromosome in all analyzed cells. The physical mapping of 5S and 18S rDNA shows multiple 5S rDNA sites and only one pair of chromosomes with 18S sites in C. callichthys, except for two individuals. These two individuals presented a third chromosome bearing NORs (Ag-staining and 18S rDNA) where 5S and 18S rDNA genes are syntenic, differing only in position. The dispersion of the 18S rDNA genes from the main st-achromosome pair 25 to one of the chromosomes from the m-sm pair 4 would have originated two variant individuals, one of which with the ill-defined acrocentric B chromosome. Mechanisms to justify the suggested hypothesis about this B chromosome origin are discussed in the present study.

O gênero Astyanax é destacado entre os Characiformes, pelo grande número de espécies encontradas e a ampla distribuição geográfica. Neste trabalho, foram analisados citogeneticamente espécimes de Astyanax laticeps do sistema da laguna do Patos. O número diplóide observado foi de 2n = 50 cromossomos distribuídos em 6m+16sm+16st+12a (NF= 88), sem diferenças entre machos e fêmeas. Foram observados poucos blocos de heterocromatina, além de três bandas-C mais conspícuas, correspondentes às NORs, confirmado pela coloração com nitrado de prata,CMA3, FISH, e coloração negativa ao DAPI. Estas regiões foram localizadas em um cromossomo subtelocêntrico de tamanho médio e em um par subtelocêntrico grande, provavelmente devido a deleção desta região em um dos cromossomos homólogos, ou por eventos de transposição entre eles

The genus Astyanax is prominent among Characiformes, due to the large number of species found and its wide geographic distribution. In this work, Astyanax laticeps specimens from the laguna dos Patos system were cytogenetically analyzed. A diploid number of 2n = 50 chromosomes distributed into 6m+16sm+16st+12a (FN = 88) was found, without differences between males and females. A few small heterochromatin blocks were observed, besides three more conspicuous C-bands, corresponding to NORs, as confirmed by silver nitrate and CMA3 staining, FISH, and DAPI negative staining. These regions were located in a medium-sized subtelocentric and in a large subtelocentric chromosomal pair, probably because of a deletion of this region in one homologous chromosome, or due to a transposition event between them.

Fluorescence in situ hybridization (FISH) was undertaken in order to determinate the chromosomal distribution pattern of 18S and 5S ribosomal DNAs (rDNA) in four populations of the characid fish Astyanax altiparanae from the upper Paraná river basin, Brazil. The 18S rDNA probe FISH revealed numerical and positional variations among specimens from the Keçaba stream compared to specimens of the other populations studied. In contrast to the variable 18S rDNA distribution pattern, highly stable chromosomal positioning of the 5S rDNA sites was observed in the four A. altiparanae populations. Divergence in the distribution pattern of 18S and 5S rDNA sites is also discussed.

Análise citogenética de T. davisi, coletada na bacia do rio Iguaçu, demonstrou um número diplóide de 2n = 54 cromossomos. Contudo, um indivíduo desta espécie apresentou polimorfismo intra-individual numérico. Análise mitótica mostrou três populações de células com número diplóide de 2n = 54 (40M + 12SM + 2ST), 2n = 55 (40M + 12SM + 2SM + 1M) e 2n = 56 (40M + 12SM + 2SM + 2A) cromossomos. Esta variação foi atribuída a uma provável não disjunção pós-zigótica de um cromossomo metacêntrico de tamanho médio/pequeno, seguido de fissão cêntrica, originando um indivíduo mosaico.

Cytogenetic analysis of Trichomycterus davisi, collected from the Iguaçu River basin, has shown a diploid number of 2n = 54 chromosomes. However, we observed intra-individual numerical polymorphism in a T. davisi specimen. There were three cell populations with diploid number 2n = 54 (40M + 12SM + 2ST), 2n = 55 (40M + 12SM + 2ST + 1M) and 2n = 56 (40M + 12SM + 2ST + 2A) chromosomes. This variation was attributed to a probable post-zygotic non-disjunction of a metacentric chromosome of small/middle size, followed by centric fission, which originated in this individual.

Foram realizados estudos citogenéticos e morfométricos de quatro populações de peixes characídeos, designados de" complexo" de Astyanax scabripinnis, pertencentes a três bacias hidrográficas diferentes: bacia do Ivaí (populações A e B), do Paranapanema (população C) e do Paraná (população D). A análise cariotípica mostrou um número diplóide de 2n = 48 cromossomos para a população B e de 2n = 50 cromossomos para as demais populações. Todas as populações analisadas diferiram na composição cariotípica e no padrão de banda C. A análise de variável canônica, aplicada aos dados morfométricos, revelou que: 1) as quatro populações estudadas foram totalmente discriminadas entre si, e 2) os coeficientes que mais contribuíram para isto foram o comprimento padrão, distância rostro-dorsal, diâmetro do olho e comprimento do focinho. Portanto, estes resultados indicam que as diferenças cariotípicas foram acompanhadas pelas diferenças morfológicas nas populações e contribuíram para o problema da sistemática do "complexo" A. scabripinnis.

A cytogenetic and morphometric study of four populations of characid fish assigned to the "complex" of Astyanax scabripinnis originating from three riverine basins, namely Ivaí (populations A and B), Paranapanema (C) and Paraná (D), was carried out. Karyological analysis showed the diploid chromosome number 2n = 48 for population B and 2n = 50 for the remaining populations. All populations under study differed in the composition of karyotypes and C-banding patterns. Canonical variable analysis used to assess the morphometric data revealed that 1) the four populations under study were entirely discriminated from each other and 2) the coefficients that most contributed to this pattern were standard length, rostrodorsal distance, eye diameter and snout length. The results indicate that the differences in karyotypes were paralleled by the morphological differentiation of the populations under study and contributed to the problem of systematics of A. scabripinnis "complex".