Resumo O objetivo deste estudo foi detectar formas tripomastigotas de Trypanosoma vivax em esfregaço sanguíneo, DNA de T. vivax e anticorpos anti-T. vivax, em amostras de búfalos, criados na Baixada Maranhense, Brasil. Foram coletadas amostras de sangue de 116 búfalos e 25 espécimes de ectoparasitas. Para o diagnóstico, foi realizada a confecção de esfregaços sanguíneos a fim de observar formas compatíveis com Trypanosoma spp., a sorologia por Ensaio Imunoenzimático Indireto ((iELISA), a Imunocromatografia de fluxo lateral (Imunotest®) e o diagnóstico molecular por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Não foram observadas formas compatíveis com Trypanosoma spp. nos esfregaços sanguíneos. Dentre as 116 amostras de soro analisadas, 79,31% e 76,72% mostraram-se positivas nos ensaios de ELISA e teste rápido, respectivamente. Uma amostra foi positiva no teste molecular. Foram coletados 25 piolhos da espécie Haematopinus tuberculatus. Quando submetidos a PCR para a detecção do DNA de T. vivax, todos mostraram-se negativos. Os espécimes de piolhos estavam negativos para T. vivax. Não houve diferença estatística significante (p<0,05) em relação à idade e sexo dos animais e a presença de T. vivax na região. Pode-se concluir que o protozoário está circulando em rebanho bubalino da Baixada Maranhense, demostrando parasitemias crípticas. sanguíneo T antiT. antiT anti anti-T Maranhense Brasil 11 2 ectoparasitas spp iELISA, iELISA , ((iELISA) Imunotest® Imunotest (Imunotest® PCR. . (PCR) analisadas 7931 79 31 79,31 7672 76 72 76,72 mostraramse mostraram se rápido respectivamente tuberculatus p<0,05 p005 p 0 05 (p<0,05 região Podese Pode crípticas 1 ((iELISA (Imunotest (PCR 793 7 3 79,3 767 76,7 p<0,0 p00 (p<0,0 79, 76, p<0, p0 (p<0, p<0 (p<0 p< (p< (p

Abstract The aim of this study was to detect trypomastigote forms of Trypanosoma vivax, in blood smears, DNA of T. vivax and anti-T. vivax antibodies in samples from buffalos reared in the lowlands of Maranhão, Brazil. Blood samples were collected from 116 buffalos and 25 ectoparasite specimens. Blood smears were produced to diagnose forms compatible with Trypanosoma spp.; the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (iELISA) and lateral-flow immunochromatography (Imunotest®) serological tests were used; and the polymerase chain reaction (PCR) was used to make molecular diagnoses. No forms compatible with Trypanosoma spp. were observed in blood smears. Among the 116 serum samples analyzed, 79.31% and 76.72% were positive in the ELISA and rapid tests, respectively. One sample was positive in the molecular test. Twenty-five lice of the species Haematopinus tuberculatus were collected. When subjected to PCR for detection of DNA of T. vivax, all of them were negative. The louse specimens were negative for T. vivax. There were no statistically significant differences (p < 0.05) in the presence of T. vivax in this region, in relation to the animals’ age and sex. It can be concluded that these protozoa are circulating in the buffalo herd of the lowlands of Maranhão displaying crypitc parasitemias. T antiT. antiT anti anti-T Brazil 11 2 spp enzymelinked enzyme linked iELISA (iELISA lateralflow lateral flow Imunotest® Imunotest (Imunotest® (PCR diagnoses analyzed 7931 79 31 79.31 7672 76 72 76.72 respectively test Twentyfive Twenty five p 0.05 005 0 05 region animals sex parasitemias 1 (Imunotest 793 7 3 79.3 767 76.7 0.0 00 79. 76. 0.

Resumo A Babesiose e a Anaplasmose são doenças associadas a grandes perdas econômicas, sendo carrapatos e moscas sugadoras de sangue importantes vetores e reservatórios zoonóticos dessas enfermidades. Este estudo teve como objetivo investigar a circulação de anticorpos anti-Babesia spp. e anti-Anaplasma marginale usando Ensaio de Imunoabsorção Enzimática (ELISA), e Babesia spp. em ruminantes no Parque Nacional do Catimbau. Foram coletados ectoparasitos e amostras de sangue de 119 ovinos, 119 caprinos e 47 bovinos. Carrapatos Rhipicephalus microplus foram coletados em bovinos. O teste ELISA mostrou soropositividade de 34% (16/47), 20,3% (24/119) e 16% (19/119) para anti-Babesia bovis; 34% (16/47), 15,2% (18/119) e 9% (7/119) para anti-Babesia bigemina; e 34% (16/47), 35,6% (42/119) e 17% (20/119) para anti-A. marginale em bovinos, caprinos e ovinos, respectivamente. As informações coletadas por meio de questionário epidemiológico mostraram a maioria com sistema semi-intensivo, com acesso à vegetação de Caatinga. A circulação de B. bovis, B. bigemina e A. marginale foi confirmada. Assim, com base na prevalência, essa área foi sugerida como de instabilidade enzoótica e propensa a surtos. econômicas enfermidades antiBabesia anti spp antiAnaplasma Anaplasma ELISA, , (ELISA) Catimbau 11 ovinos 4 bovinos 34 16/47, 1647 16/47 16 (16/47) 203 20 3 20,3 24/119 24119 24 (24/119 19/119 19119 19 (19/119 bovis 152 15 2 15,2 18/119 18119 18 (18/119 9 7/119 7119 7 (7/119 356 35 6 35,6 42/119 42119 42 (42/119 17 20/119 20119 (20/119 antiA. antiA anti-A respectivamente semiintensivo, semiintensivo semi intensivo, intensivo semi-intensivo Caatinga B confirmada Assim prevalência surtos (ELISA 1 164 16/4 (16/47 20, 24/11 2411 (24/11 19/11 1911 (19/11 15, 18/11 1811 (18/11 7/11 711 (7/11 35, 42/11 4211 (42/11 20/11 2011 (20/11 16/ (16/4 24/1 241 (24/1 19/1 191 (19/1 18/1 181 (18/1 7/1 71 (7/1 42/1 421 (42/1 20/1 201 (20/1 (16/ 24/ (24/ 19/ (19/ 18/ (18/ 7/ (7/ 42/ (42/ 20/ (20/ (16 (24 (19 (18 (7 (42 (20 (1 (2 ( (4

Abstract Babesiosis and Anaplasmosis are diseases associated with economic losses; ticks and blood-sucking flies are important zoonotic vectors and reservoirs. This study aimed to investigate the presence of anti-Babesia spp. and anti-Anaplasma marginale antibodies using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), in ruminants at the Catimbau National Park. Blood samples were collected from 119 sheep, 119 goats, and 47 cattle. Rhipicephalus microplus ticks were collected from cattle. ELISA showed seropositivity of 34% (16/47), 20.3% (24/119), and 16% (19/119) for anti-Babesia bovis; 34% (16/47), 15.2% (18/119), and 9% (7/119) for anti-Babesia bigemina; and 34% (16/47), 35.6% (42/119), and 17% (20/119) for anti-A. marginale antibodies in cattle, goats, and sheep, respectively. The information collected using an epidemiological questionnaire showed that mostly are breed in a semi-intensive system, with access to Caatinga vegetation. The circulation of B. bovis, B. bigemina, and A. marginale was confirmed. Thus, based on the prevalence, this suggests this is an enzootic instability area and is prone to outbreaks. losses bloodsucking blood sucking reservoirs antiBabesia anti Babesia spp antiAnaplasma Anaplasma enzymelinked enzyme linked ELISA, , (ELISA) Park 11 sheep goats 4 cattle 34 16/47, 1647 16/47 16 (16/47) 203 20 3 20.3 24/119, 24119 24/119 24 (24/119) 19/119 19119 19 (19/119 bovis 152 15 2 15.2 18/119, 18119 18/119 18 (18/119) 9 7/119 7119 7 (7/119 bigemina 356 35 6 35.6 42/119, 42119 42/119 42 (42/119) 17 20/119 20119 (20/119 antiA. antiA A anti-A respectively semiintensive semi intensive system vegetation B confirmed Thus prevalence outbreaks (ELISA 1 164 16/4 (16/47 20. 2411 24/11 (24/119 19/11 1911 (19/11 15. 1811 18/11 (18/119 7/11 711 (7/11 35. 4211 42/11 (42/119 20/11 2011 (20/11 16/ (16/4 241 24/1 (24/11 19/1 191 (19/1 181 18/1 (18/11 7/1 71 (7/1 421 42/1 (42/11 20/1 201 (20/1 (16/ 24/ (24/1 19/ (19/ 18/ (18/1 7/ (7/ 42/ (42/1 20/ (20/ (16 (24/ (19 (18/ (7 (42/ (20 (1 (24 (18 ( (42 (2 (4

Resumo Há uma crescente preocupação com a participação de hospedeiros e reservatórios silvestres na epidemiologia de diversos patógenos, principalmente no contexto das mudanças ambientais e da expansão do conceito "One Health". O objetivo deste estudo foi investigar a presença de hemoplasmas em gambás resgatados da região metropolitana do estado do Rio de Janeiro, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 15 Didelphis aurita e submetidas à extração de DNA e PCR utilizando-se "primers" para os genes 16S rRNA e 23S rRNA. O exame físico e a análise hematológica também foram realizados. Três dos 15 gambás testaram positivo para Mycoplasma spp. hemotrópico por PCR. Os sinais clínicos eram inespecíficos e associados a lesões traumáticas. Anemia e leucocitose foram detectadas em animais positivos. A análise filogenética indicou que o hemoplasma detectado estava posicionado entre 'Ca. Mycoplasma haemodidelphis' detectado em D. virginiana da América do Norte e hemoplasmas recentemente detectados em D. aurita do estado de Minas Gerais, Brasil. Este estudo indica a existência de infecções por hemoplasmas em D. aurita, da região metropolitana do Rio de Janeiro, e reforça a necessidade de novos inquéritos epidemiológicos, para esclarecer a participação destes na dinâmica de circulação de patógenos transmitidos por carrapatos. One Health. Health . Health" Janeiro Brasil 1 utilizandose utilizando se primers "primers S realizados spp traumáticas positivos Ca. Ca 'Ca haemodidelphis D Gerais epidemiológicos carrapatos

Abstract There is a growing concern about the participation of wild hosts and reservoirs in the epidemiology of several pathogens, particularly within the context of environmental changes and the expansion of the One Health concept. The aim of this study was to investigate the presence of hemoplasmas in opossums rescued from the metropolitan region of Rio de Janeiro state, Brazil. Blood samples were collected from 15 Didelphis aurita and subjected to DNA extraction and PCR using primers for the 16S rRNA and 23S rRNA genes. Physical examination and hematological analysis were also performed. Three out of 15 opossums tested positive for hemotropic Mycoplasma spp. by PCR and showed hematological alterations such as anemia and leukocytosis. Clinical signs were non-specific and associated to traumatic lesions. The phylogenetic analysis indicated that the hemoplasma detected was positioned between 'Ca. Mycoplasma haemodidelphis' detected in D. virginiana from North American and hemoplasmas recently detected in D. aurita from the state of Minas Gerais, Brazil. This study indicates the existence of hemoplasma infections in D. aurita from the metropolitan region of Rio de Janeiro, and reinforce the need for new epidemiological inquiries to clarify the participation of these in the dynamics of circulation of tick-borne pathogens. pathogens concept Brazil 1 S genes performed spp leukocytosis nonspecific non specific lesions Ca. Ca 'Ca haemodidelphis D Gerais tickborne tick borne

Resumo Mieloencefalite protozoária equina (MPE) é uma doença neurológica causada por Sarcocystis neurona. Reação de imunofluorescência indireta (RIFI) tem sido utilizada para identificar a exposição de equinos à S. neurona no Brasil. Neste estudo, a RIFI foi utilizada para avaliar a presença de anticorpos IgG anti-Sarcocystis falcatula-like (Dal-CG23) e anti-S. neurona (SN138) no soro de 342 equinos de Campo Grande, Mato Grosso do Sul (Centro-oeste) e São Paulo, São Paulo (Sudeste), Brasil. O ponto de corte de 1:25 foi escolhido para maximizar a sensibilidade. Anticorpos IgG anti-S. neurona foram detectados em 239 cavalos (69,88%), enquanto anticorpos IgG anti-S. falcatula-like foram detectados em 177 cavalos (51,75%). O soro de 132 animais (38,59%) reagiu contra ambos os isolados. A ausência de reatividade foi evidenciada em 58/342 animais (16,95%). O baixo ponto de corte e a presença de gambás infectados com S. falcatula-like e Sarcocystis spp., nas regiões onde os equinos foram amostrados podem justificar a alta soroprevalência aqui observada. Devido à similaridade entre antígenos de superfície detectados nos imunoensaios, relatos de soropositividade contra S. neurona no Brasil podem resultar da exposição dos equinos a outras espécies de Sarcocystis. O papel de outras espécies de Sarcocystis como causa de doença neurológica em equinos no Brasil permanece incerto. MPE (MPE (RIFI S estudo antiSarcocystis anti falcatulalike falcatula like DalCG23 DalCG Dal CG23 CG (Dal-CG23 antiS. antiS anti-S SN138 SN (SN138 34 Grande Centrooeste Centro oeste (Centro-oeste Sudeste, Sudeste , (Sudeste) 125 1 25 1:2 sensibilidade 23 69,88%, 6988 69,88% 69 88 (69,88%) 17 51,75%. 5175 51,75% . 51 75 (51,75%) 13 38,59% 3859 38 59 (38,59% isolados 58342 58 58/34 16,95%. 1695 16,95% 16 95 (16,95%) spp spp. observada imunoensaios incerto DalCG2 CG2 (Dal-CG2 SN13 (SN13 3 (Sudeste 12 2 1: 698 69,88 6 8 (69,88% 517 51,75 5 7 (51,75% 38,59 385 (38,59 5834 58/3 169 16,95 9 (16,95% (Dal-CG SN1 (SN1 69,8 (69,88 51,7 (51,75 38,5 (38,5 583 58/ 16,9 (16,95 (SN 69, (69,8 51, (51,7 38, (38, 16, (16,9 (69, (51, (38 (16, (69 (51 (3 (16 (6 (5 ( (1

Abstract Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) is a neurological disease caused by Sarcocystis neurona. Immunofluorescence antibody tests (IFATs) have been widely used to identify exposure of horses to S. neurona in Brazil. Here we used IFAT to search for IgG antibodies against Sarcocystis falcatula-like (Dal-CG23) and S. neurona (SN138) in sera from 342 horses sampled in Campo Grande, Mato Grosso do Sul state (Midwestern), and São Paulo, São Paulo state (Southeastern), Brazil. The 1:25 cutoff value was chosen to maximize sensitivity of the test. IgG antibodies against S. neurona were detected in 239 horses (69.88%), whereas IgG antibodies against S. falcatula-like were detected in 177 horses (51.75%). Sera from 132 horses (38.59%) reacted against both isolates. Absence of reactivity was evidenced in 58/342 horses (16.95%). The lower cutoff used, and the presence of opossums infected with S. falcatula-like and Sarcocystis spp. in the regions where the horses were sampled, might justify the high seroprevalence observed here. Owing to the similarity among antigens targeted in immunoassays, reports on S. neurona-seropositive horses in Brazil may also derive from the exposure of horses to other Sarcocystis species. The role of other Sarcocystis species in causing neurological diseases in horses in Brazil remains unclear. EPM (EPM IFATs (IFATs S falcatulalike falcatula like DalCG23 DalCG Dal CG23 CG (Dal-CG23 SN138 SN (SN138 34 Grande Midwestern, Midwestern , (Midwestern) Southeastern, Southeastern (Southeastern) 125 1 25 1:2 test 23 69.88%, 6988 69.88% 69 88 (69.88%) 17 51.75%. 5175 51.75% . 51 75 (51.75%) 13 38.59% 3859 38 59 (38.59% isolates 58342 58 58/34 16.95%. 1695 16.95% 16 95 (16.95%) spp here immunoassays neuronaseropositive seropositive unclear DalCG2 CG2 (Dal-CG2 SN13 (SN13 3 (Midwestern (Southeastern 12 2 1: 698 69.88 6 8 (69.88% 517 51.75 5 7 (51.75% 38.59 385 (38.59 5834 58/3 169 16.95 9 (16.95% (Dal-CG SN1 (SN1 69.8 (69.88 51.7 (51.75 38.5 (38.5 583 58/ 16.9 (16.95 (SN 69. (69.8 51. (51.7 38. (38. 16. (16.9 (69. (51. (38 (16. (69 (51 (3 (16 (6 (5 ( (1

Resumo O gênero Neorickettsia compreende bactérias associadas a trematódeos que podem causar doenças em animais e humanos. Apesar da detecção de antígenos de Neorickettsia por imuno-histoquímica no intestino de quatis mantidos em cativeiro no sul do Brasil, a identidade molecular da bactéria em procionídeos da América do Sul permanece indefinida. O presente trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de Neorickettsia sp. em amostras de sangue de quatis do Centro-Oeste do Brasil. Entre março de 2018 e janeiro de 2019, os animais foram capturados em duas áreas de Cerrado (Parque Estadual do Prosa PEP e Vila da Base Aérea VBA) localizadas na cidade de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Centro-Oeste do Brasil. Todas as capturas e recapturas foram realizadas por conveniência. O DNA de 97 amostras de sangue foi submetido a "nested" (nPCR), baseada em um fragmento do gene 16S rRNA de Neorickettsia sp. Seis (3,6% - 5 de VBA e 1 de PEP) amostras de quatis diferentes foram positivas na nPCR, baseada no rRNA 16S. As sequências obtidas (~500 pb) apresentaram ˃99% de identidade com N. risticii. A inferência filogenética agrupou as sequencias detectadas no presente estudo em um clado com N. risticii. Esta é a primeira detecção molecular de Neorickettsia sp. em quatis do Brasil. humanos imunohistoquímica imuno histoquímica Brasil indefinida sp CentroOeste Centro Oeste 201 2019 Parque Grande conveniência 9 nested "nested nPCR , (nPCR) S 3,6% 36 3 6 (3,6 ~500 500 (~50 pb 99 ˃99 N risticii 20 (nPCR 3,6 (3, ~50 50 (~5 ˃9 2 3, (3 ~5 (~ ˃ ( ~

Abstract The genus Neorickettsia comprises trematode-associated bacteria that can cause diseases in animals and humans. Despite detection of Neorickettsia antigens in the intestine of coatis kept in captivity in southern Brazil through immunohistochemistry, the molecular identity of the bacteria in South American procyonids remains elusive. The aim of the present study was to investigate the occurrence of Neorickettsia sp. in blood samples from coatis in central-western Brazil. Between March 2018 and January 2019, animals were captured and recaptured in two areas of the Cerrado (Parque Estadual do Prosa, PEP; and Vila da Base Aérea, VBA) located in the city of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, central-western Brazil. All captures were performed according to convenience. DNA from 97 blood samples was subjected to nested PCR (nPCR) targeting a fragment of the 16S rRNA gene of Neorickettsia sp. Six samples (3.6%; five from VBA and one from PEP) from different coatis were positive in nPCR based on the 16S rRNA. The sequences obtained (~500 bp) showed ˃ 99% similarity to N. risticii. Phylogenetic analysis clustered the sequences detected in the present study in a clade with N. risticii. This is the first molecular detection of Neorickettsia sp. in coatis in Brazil. trematodeassociated trematode associated humans immunohistochemistry elusive sp centralwestern central western 201 2019 Parque Prosa PEP Aérea Grande Sul convenience 9 (nPCR S 3.6% 36 3 6 (3.6% ~500 500 (~50 bp 99 N risticii 20 3.6 (3.6 ~50 50 (~5 2 3. (3. ~5 5 (~ (3 ~ (

Resumo Gambás sul-americanos (Didelphis spp.) são hospedeiros definitivos de Sarcocystis neurona, Sarcocystis speeri, Sarcocystis lindsayi e Sarcocystis falcatula. No Brasil, diversos estudos têm demonstrado alta frequência de Sarcocystis falcatula-like em esporocistos derivados de gambás, com grande diversidade nos genes que codificam antígenos de superfície (SAGs). Neste estudo, a diversidade genética de Sarcocystis spp., oriundos de Didelphis albiventris e Didelphis aurita, dos municípios de Campo Grande e São Paulo, foi acessada por meio do sequenciamento de SAG2, SAG3 e SAG4, da primeira região espaçadora interna transcrita (ITS-1) e citocromo c oxidase subunidade I (cox1). Identificação molecular foi realizada em 16 amostras de DNA, obtidas de esporocistos ou merozoítos derivados de cultivo. Os fragmentos de ITS-1, cox1 e SAG3 foram clonados, enquanto SAG2 e SAG4 foram sequenciados diretamente dos produtos de PCR. Quatro alelos foram observados em SAG2, 13 em SAG3 e sete em SAG4, sendo novos quatro, 13 e quatro, respectivamente. Em ITS-1, 27 alelos foram observados, todos filogeneticamente relacionados à S. falcatula-like, previamente detectados no Brasil. Sarcocystis sp. filogeneticamente relacionado à Sarcocystis rileyi foi evidenciado por cox1 em três gambás. Mais estudos são necessários para entender o papel de Didelphis spp. como hospedeiro definitivo de Sarcocystis spp. diferentes daqueles previamente descritos. sulamericanos sul americanos spp neurona speeri falcatula Brasil falcatulalike like gambás SAGs. SAGs . (SAGs) estudo aurita Paulo SAG ITS1 ITS 1 (ITS-1 cox1. cox (cox1) DNA cultivo ITS1, 1, ITS-1 clonados PCR quatro respectivamente 2 S falcatulalike, like, sp descritos (SAGs (ITS- (cox1 ITS- (ITS (cox

Abstract South American opossums (Didelphis spp.) are definitive hosts of Sarcocystis neurona, Sarcocystis speeri, Sarcocystis lindsayi and Sarcocystis falcatula. In Brazil, diverse studies have demonstrated a high frequency of Sarcocystis falcatula-like in sporocysts derived from opossums, and high genetic diversity has been observed in surface antigen-encoding genes (SAGs). In this study, genetic diversity of Sarcocystis spp. derived from Didelphis albiventris and Didelphis aurita from the cities of Campo Grande and São Paulo, was accessed by sequencing SAG2, SAG3, SAG4, the first internal transcribed spacer (ITS-1) and cytochrome c oxidase subunit I (cox1). Molecular identification was performed for 16 DNA samples obtained from sporocyst or culture-derived merozoites. The ITS-1, cox1, and SAG3 fragments were cloned, whereas SAG2 and SAG4 were sequenced directly from PCR products. Four alleles variants were found for SAG2, 13 for SAG3 and seven for SAG4, from which four, 13 and four, respectively, were novel. Twenty-seven allele variants were found for ITS-1, all phylogenetically related to S. falcatula-like previously described in Brazil. Sarcocystis sp. phylogenetically related to Sarcocystis rileyi was evidenced by cox1 in three opossums. Further studies are needed to clarify the role of Didelphis spp. as definitive hosts of Sarcocystis spp. other than that previous described. spp neurona speeri falcatula Brazil falcatulalike like antigenencoding antigen encoding SAGs. SAGs . (SAGs) study Paulo SAG ITS1 ITS 1 (ITS-1 cox1. cox (cox1) culturederived culture merozoites ITS1, 1, ITS-1 cloned products four respectively novel Twentyseven Twenty S sp (SAGs (ITS- (cox1 ITS- (ITS (cox

Resumo A bartonelose é uma zoonose transmitida por vetores, com distribuição mundial, que infecta várias espécies de mamíferos. Apesar dos estudos conduzidos no Brasil, informações sobre Bartonella em cães são escassas. Portanto, foi realizado um estudo retrospectivo para investigar a exposição a Bartonella sp. em cães cães, utilizando-se o ensaio de imunofluorescência indireta (IFA). Trezentas e trinta e cinco amostras de soro de cães, previamente testadas para patógenos transmitidos pelos vetores, Toxoplasma gondii e Neospora caninum foram avaliadas quanto à presença de anticorpos IgG contra Bartonella sp. Todos os cães eram oriundos da região metropolitana de Ribeirão Preto, Nordeste do Estado de São Paulo. Vinte e oito amostras (8,3%) foram positivas para Bartonella sp. no ponto de corte de 64. Entre as 28 amostras positivas, 16 (57,1%) também foram positivas para Ehrlichia canis, 12 (42,8%) para Babesia vogeli, cinco (17,8%) para T. gondii e três (10,7%) para L. infantum e N. caninum. Os resultados demonstraram que os cães amostrados foram expostos a Bartonella sp. Como os animais eram de proprietários particulares, nossos achados demonstram que as pessoas também podem ter sido expostas a Bartonella sp. São necessários estudos para avaliar se a infecção por B. canis ou E. canis constitui fator de risco para infecção por Bartonella em cães.

Abstract Bartonellosis is a vector-borne zoonotic disease with worldwide distribution that infect a broad spectrum of mammalian species. Despite the recent studies carried out in Brazil, information regarding Bartonella in dogs are scarce. Therefore, we performed a retrospective study to investigate the exposure to Bartonella sp. in dogs by indirect immunofluorescence assay (IFA). Three hundred and thirty-five archived serum samples from dogs previously tested for vector-borne pathogens, Toxoplasma gondii, and Neospora caninum were screened for the presence of IgG antibodies to Bartonella sp. All dogs originated from the Metropolitan region of Ribeirão Preto, northeast of the State of São Paulo. Twenty-eight samples (8.3%) were positive for Bartonella sp. at the cut-off of 64. Among the 28 seropositive samples for Bartonella sp., 16 (57.1%) were also seropositive for Ehrlichia canis, 12 (42.8%) for Babesia vogeli, five (17.8%) for T. gondii and three (10.7%) for L. infantum and N. caninum. Our results demonstrated that dogs sampled were exposed to Bartonella sp. Since all the animals sampled in the present study were from private owners, our findings demonstrate that these people may also be exposed to Bartonella sp. Further studies designed to assess whether the infection by other arthropod-borne pathogens such as B. vogeli and E. canis are risk factors for Bartonella infection are needed.

Resumo A erliquiose monocítica canina (EMC) é uma das doenças veiculadas por carrapatos com apresentações multisistêmicas mais relevantes em todo o mundo. A desregulação do sistema imune vem sendo proposta como o principal mecanismo envolvido na patogênese e lesão de tecidos em cães com EMC. A infecção experimental de pastores alemães nesta pesquisa evidenciou marcadas alterações patológicas em linfonodos, baço e também infiltração mononuclear em órgãos e tecidos. A imunofenotipagem de células em linfonodos, baço e tecidos lesados destacou diferenças em subconjuntos de linfócitos, expressão local de subclasses de imunoglobulinas e de moléculas MHCII entre cães infectados e controle. Esses achados sugerem que um viés Th1 e uma resposta imune compartimentalizada estão relacionados às alterações imunofenotípicas e imunopatológicas em cães com EMC experimental aguda.

Abstract Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is one of the most important tick-borne diseases worldwide, with multisystemic presentations. Immune dysregulation has been proposed as the primary mechanism involved in its pathogenesis and in tissue injury in dogs with CME. Experimental infection of German Shepherd dogs in the present study demonstrated that CME caused marked pathological changes in their lymph nodes and spleen, and also gave rise to mononuclear infiltration in organs and tissues. Immunophenotyping of cells in lymph nodes, spleen and injured tissues highlighted differences in lymphocyte subsets, local expression of immunoglobulin subclasses and MHCII molecules between infected and control dogs. These findings suggest that the immunophenotypic and immunopathological changes in dogs with acute experimental CME are related to Th1 bias and compartmentalized immune response.

Resumo Anaplasma marginale é um patógeno transmitido por vetores que causam uma doença conhecida como anaplasmose. Até a presente data, não há genomas sequenciados de cepas brasileiras. O objetivo deste estudo foi comparar o genoma completo das cepas brasileiras de A. marginale (Palmeira e Jaboticabal) com os genomas de cepas de outras regiões (cepas dos EUA e Austrália). As sequências dos genomas das cepas brasileiras foram obtidas mediante sequenciamento de nova geração. As “reads” foram mapeadas usando-se como referência o genoma de A. marginale da cepa Florida. Foram identificados polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) e analisadas inserções/deleções (INDELs). As duas linhagens brasileiras se agruparam em um clado particular que, por sua vez, agrupou-se em um grupo maior junto com as linhagens norte-americanas. Além disso, foram identificadas diferenças significativas nas proteínas de superfície entre os dois isolados brasileiros. Esses resultados lançam luz sobre a história evolutiva de A. marginale e fornecem as primeiras informações de genomas de isolados sul-americanos. Avaliar as sequências de genomas de cepas de diferentes regiões é essencial para aumentar o conhecimento do pan-genoma dessa bactéria.

Abstract Anaplasma marginale is a vector-borne pathogen that causes a disease known as anaplasmosis. No sequenced genomes of Brazilian strains are yet available. The aim of this work was to compare whole genomes of Brazilian strains of A. marginale (Palmeira and Jaboticabal) with genomes of strains from other regions (USA and Australia strains). Genome sequencing of Brazilian strains was performed by means of next-generation sequencing. Reads were mapped using the genome of the Florida strain of A. marginale as a reference sequence. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) and insertions/deletions (INDELs) were identified. The data showed that two Brazilian strains grouped together in one particular clade, which grouped in a larger American group together with North American strains. Moreover, some important differences in surface proteins between the two Brazilian isolates can be discerned. These results shed light on the evolutionary history of A. marginale and provide the first genome information on South American isolates. Assessing the genome sequences of strains from different regions is essential for increasing knowledge of the pan-genome of this bacteria.

Resumo O objetivo deste estudo foi descrever pela primeira vez a ocorrência da mosca Hippoboscidae Ornithoctona erythrocephala em uma seriema (Cariama cristata). Um espécime de díptero foi encontrado entre as penas de dessa ave, que havia sido encaminhada para necropsia ao Serviço de Patologia de Animais Selvagens, UNESP, Jaboticabal. A mosca foi armazenada em álcool absoluto e enviada ao Instituto de Biociências da Universidade Federal do Mato Grosso do Sul para identificação por um especialista. Baseado em características morfológicas, o espécime foi identificado como fêmea de Ornithoctona erythrocephala. Este relato oferece a descrição de um novo hospedeiro para O. erythrocephala.

Abstract The aim of this study was to report, for the first time, the occurrence of the hippoboscid fly Ornithoctona erythrocephala on a red-legged seriema (Cariama cristata). A Diptera specimen was found among the feathers of a free-living red-legged seriema, which was referred to necropsy at the Wild Animal Pathology Service, UNESP Jaboticabal. The fly was collected, stored in absolute alcohol, and shipped to the Institute of Biosciences of the Federal University of Mato Grosso do Sul for proper identification. Based on morphological characters, the specimen was identified as a female of Ornithoctona erythrocephala. This study provides a report on a new host for O. erythrocephala.

Resumo Duas linhagens de Rhipicephalus sanguineus são conhecidas no Brasil: populações da linhagem temperada ou do sul, e tropical ou do norte. Os padrões de distribuição de ambas as linhagens de R. sanguineus têm implicações epidemiológicas, podendo afetar a competência vetorial de Ehrlichia canis, o agente etiológico da erliquiose monocítica canina. Com a intenção de identificar os microbiomas de ambas as linhagens e comparar microrganismos de R. sanguineus, foi utilizada a metataxonomia, baseada no gene 16S rRNA (região V4-V5), por meio do sequenciamento de nova geração na plataforma MiSeq Illumina. Foram selecionadas amostras de fêmeas do ambiente e cultivo primário de células embrionárias, considerando-se as duas linhagens conhecidas do Brasil. Este é o primeiro estudo que investiga o microbioma procariótico de células de cultura de carrapato. Os resultados mostram que muitos grupos de bactérias detectadas nas amostras são membros típicos do ambiente do hospedeiro. Uma diversidade significativa de microrganismos em fêmeas e cultura de células embrionárias nas duas linhagens de R. sanguineus foi encontrada, com ênfase na presença de Coxiella em todas as amostras, ainda que em diferentes proporções. Possivelmente, as espécies de Coxiella presentes nas duas linhagens de carrapatos são diferentes e co-evoluíram com essas linhagens, conduzindo a diferentes padrões de interação entre carrapatos e patógenos que podem abrigar ou transmitir aos hospedeiros vertebrados.

Abstract Two lineages of Rhipicephalus sanguineus are known in Brazil: the temperate or southern and the tropical or northern populations. The distribution patterns of both lineages of R. sanguineus have epidemiological implications that can affect vectorial competence concerning Ehrlichia canis, the agent of canine monocytic ehrlichiosis. Intending to identify the microbiomes of both lineages and compare microorganisms in R. sanguineus, we used the 16S rRNA (V4-V5 region) gene-based metataxonomic approach, through NGS sequencing on the MiSeq Illumina platform. We selected specimens of females from the environment and samples of primary embryonic cell cultures, from both lineages, and this was the first study to investigate the prokaryotic microbiome in tick cell cultures. The results showed that many bacterial taxa detected in the samples were typical members of the host environment. A significant diversity of microorganisms in R. sanguineus females and in embryonic cell cultures from both lineages was found, with emphasis on the presence of Coxiella in all samples, albeit in different proportions. The Coxiella species present in the two lineages of ticks may be different and may have co-evolved with them, thus driving different patterns of interactions between ticks and the pathogens that they can harbor or transmit to vertebrate hosts.

Resumo Este estudo teve como objetivo investigar a diversidade genética de Hepatozoon spp. em roedores de Valdivia, Chile. Um total de 74 roedores (sinantrópicos n=38; selvagens n=36) foram capturados. PCR convencional foi realizada para organismos Apicomplexa, visando dois fragmentos sobrepostos do gene 18S rDNA (600 bp e 900 bp), seguida pelo sequenciamento de amplicons selecionados. A ocorrência de Hepatozoon spp. foi de 82,43% (61/74). Doze sequências obtidas dos fragmentos de 18S rDNA de 600 pb e dez dos fragmentos de 18S rDNA de 900 pb foram identificadas como Hepatozoon sp. Seis sequências obtidas, a partir de protocolos de PCR sobrepostos, foram usadas para análises filogenéticas (1.400 bp), de haplótipos e de distância. Sequências concatenadas 18S rDNA do presente estudo foram detectadas em Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus e Abrothrix longipilis e agrupadas com Hepatozoon descrito em roedores e répteis do Chile e do Brasil. A análise de polimorfismos das seis sequências deste estudo, junto com outras sequências chilenas de roedores e carrapatos de roedores, mostrou alta diversidade com um total de nove haplótipos no Chile. Três haplótipos detectados em Valdivia foram identificados pela primeira vez neste estudo, sugerindo que novos haplótipos circulam em roedores do sul do Chile.

Abstract This study aimed to investigate the genetic diversity of Hepatozoon spp. in rodents from Valdivia, Chile. A total of 74 rodents (synanthropic n=38; wild n=36) were trapped in Valdivia. We performed conventional PCR assays for Apicomplexa organisms targeting two overlapping 18S rDNA gene fragments (600 bp and 900 bp) followed by sequencing of selected amplicons. Hepatozoon spp. occurrence was 82.43% (61/74). Twelve sequences obtained from the 600 bp and ten from the 900 bp 18S rDNA fragments were identified as Hepatozoon sp. Six sequences obtained from 18S rDNA-based overlapping PCR protocols were used for concatenated (1,400 bp) phylogenetic, haplotype and distance analyses. Hepatozoon spp. 18S rDNA concatenated sequences from the present study were detected in Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus, and Abrothrix longipilis grouped with Hepatozoon species earlier described in rodents and reptiles from Chile and Brazil. Nucleotide polymorphism of the six 18S rDNA sequences (1,400 bp) from this study, and other Chilean sequences from rodents and rodent’s ticks, showed high diversity with a total of nine Chilean haplotypes. Three haplotypes from Valdivia were identified for the first time in this study, suggesting the circulation of novel haplotypes in rodents from southern Chile.

Resumo Realizou-se um estudo sorológico, molecular e histopatológico com o objetivo de verificar a ocorrência de Toxoplasma gondii em suínos abatidos com e sem serviço de inspeção. Foram coletados soros de 60 suínos para a pesquisa de anticorpos anti-T. gondii pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Também foram coletados fragmentos de língua, masseter e diafragma para a detecção do DNA do parasito por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) e análise histopatológica. A análise sorológica demonstrou que 77% (44/60) dos suínos apresentaram anticorpos anti-T. gondii. Com relação ao PCR, 66,67% (40/60) foram positivos para T. gondii. Dentre os tecidos avaliados, o diafragma foi o que obteve maior frequência de positividade (40%; 24/60), seguidos de masseter (38,33%; 23/60) e língua (33,3%; 20/60). Alterações histopatológicas foram observadas apenas no diafragma, que apresentou infiltrado inflamatório do tipo linfohistiocitário e neutrofílico. Esses resultados não evidenciam apenas a ameaça potencial de T. gondii à saúde humana, mas também demonstram a dinâmica situação epidemiológica da toxoplasmose em suínos na região da cidade de São Luís, fornecendo suporte para a segurança alimentar de suínos e programas de controle de T. gondii no país.

Abstract A serological, molecular and histopathological study was carried out in order to investigate occurrences of Toxoplasma gondii in pigs slaughtered with and without inspection service. Serum samples were collected from 60 pigs to detect anti-T. gondii antibody by indirect fluorescent antibody (IFAT). Tongue, masseter and diaphragm fragments were also collected for parasite DNA detection by means of the polymerase chain reaction (PCR) and histopathological analysis. The serological results showed that 77% (44/60) of the pigs were positive. Regarding PCR, 66.67% (40/60) were positive for T. gondii. Among the tissues evaluated, the diaphragm was the one with the highest frequency of positivity (40%; 24/60), followed by the masseter (38.33%; 23/60) and tongue (33.3%; 20/60). Histopathological changes were only observed in the diaphragm, which presented inflammatory infiltrates of lymphohistiocytic and neutrophilic types. These results not only show the potential threat of T. gondii to human health, but also demonstrate the dynamic epidemiological situation of toxoplasmosis in pigs in the city of São Luís, providing support for food security regarding pigs and for T. gondii control programs in Brazil.

Resumo A tripanossomíase, causada por Trypanosoma vivax, é responsável por grandes perdas econômicas na bovinocultura da África e da América do Sul. Durante seu ciclo de vida, o parasita pode apresentar diferentes características morfológicas, metabólicas e fisiológicas em função das interações que ele encontra em cada ponto do seu ciclo. Embora o T. vivax seja reportado, frequentemente, na circulação dos seus hospedeiros mamíferos, o protozoário tem a capacidade de migrar para os tecidos desses indivíduos. Entretanto, essa característica é pobremente conhecida. Neste contexto, o objetivo foi verificar a presença, assim como as alterações causadas pelo T. vivax nos diferentes tecidos de caprinos experimentalmente infectados. Apesar dos animais não terem sido perfundidos antes da coleta dos tecidos, utilizando-se diferentes abordagens, foi evidenciada a presença do T. vivax em diferentes amostras teciduais, incluindo no tecido adiposo e pele dos animais infectados. Além disso, foi observada reação inflamatória mononuclear, caracterizada majoritariamente por infiltrado de linfócitos, plasmócitos e macrófagos. Os resultados evidenciam a possibilidade de que, assim como outros tripanossomatídeos, T. vivax pode usar esses tecidos durante o seu ciclo de vida. São necessários futuros estudos, objetivando elucidar o período em que o T. vivax permanece ativo nesses sítios, se ele utiliza esses locais como refúgio das drogas tripanocidas, e se ele é capaz de recolonizar a circulação sanguínea.

Abstract Trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax, is responsible for great economic losses among livestock in Africa and South America. During the life cycle of these parasites, they may present different morphological, metabolic and physiological characteristics depending on the interactions that are encountered at each point of their life cycle. Although T. vivax is frequently reported in the circulation of its mammalian hosts, it has the ability to migrate to the tissues of these individuals. However, this characteristic is poorly understood. In this context, we aimed to investigate the presence of T. vivax and the changes caused in different tissues of experimentally infected goats. Despite the animals were not perfused before tissues collection, using different approaches, we demonstrated its presence in different samples, including in the adipose tissue and skin of infected animals. In addition, a mononuclear inflammatory reaction, mostly characterized by an infiltrate of lymphocytes, plasma cells and macrophages were observed. The results highlight the possibility that, like other trypanosomatids, T. vivax may use these tissues during its life cycle. Future studies aiming to elucidate the length of time for which T. vivax remains active in these sites, and whether it uses these sites as a refuge from trypanocidal drugs, and whether it is capable of recolonizing the blood circulation, are much needed.

Resumo Anaplasma marginale é uma bactéria Gram-negativa intracelular obrigatória de eritrócitos de ruminantes e responsável pela anaplasmose bovina. A diversidade genética de A. marginale tem sido caracterizada com base nas sequências das principais proteínas de superfície (MSPs), como a MSP1α. O objetivo deste estudo foi investigar a diversidade genética de A. marginale em bovinos no estado do Maranhão, Nordeste do Brasil. Dessa forma, 343 amostras de sangue foram submetidas ao ensaio iELISA, utilizando-se a proteína recombinante MSP5. Das 343 amostras de sangue, 235 (68,5%) foram escolhidas aleatoriamente e submetidas à extração de DNA, qPCR e PCR convencional para gene msp1α, para determinação das sequências de aminoácidos e classificação dos genótipos. Os resultados do iELISA mostraram 81,34% de soropositividade (279/343), enquanto qPCR revelou 224 amostras positivas (95,32%). Dentre estas na qPCR, 67,4% (151/224) mostraram-se positivas no PCR convencional. Das 50 sequências obtidas, 21 cepas não haviam sido relatadas anteriormente. Em relação aos genótipos, H (26/50) e E (18/50) foram os mais frequentes, enquanto os genótipos F e C foram identificados apenas duas vezes cada, e B e G uma vez cada. Em conclusão, alta prevalência e marcante diversidade genética de A. marginale foram observadas em rebanhos leiteiros no estado do Maranhão.

Abstract Anaplasma marginale is an obligate intracellular Gram-negative bacterium found in ruminants’ erythrocytes and is the etiological agent of bovine anaplasmosis. The bacterium’s genetic diversity has been characterized based on sequences of major surface proteins (MSPs), such as MSP1α. The aim of the present study was to investigate the genetic diversity of A. marginale in cattle in the state of Maranhão, northeastern Brazil. To this end, 343 blood samples were harvested and subjected to iELISA assays using the recombinant surface protein MSP5. Out of 343 blood samples, 235 (68.5%) were randomly chosen and submitted to DNA extraction, qPCR and conventional PCR targeting the msp1α gene to determine amino acid sequences and classify the genotypes. The iELISA results showed 81.34% seropositivity (279/343), whereas qPCR revealed 224 positive samples (95.32%). Among these qPCR-positive samples, 67.4% (151/224) were also positive in the cPCR. Among the 50 obtained sequences, 21 strains had not been previously reported. Regarding the genotypes, H (26/50) and E (18/50) were identified most often, while genotypes F and C were only identified twice each and B and G once each. In conclusion, high prevalence and genetic diversity for A. marginale were observed in dairy cattle herds in the state of Maranhão.