Resumo Introdução Devido a seus resultados positivos sobre o tecido ósseo o estrôncio passou a ser utilizado também como coadjuvante de processos de neoformação óssea, principalmente procedimentos cirúrgicos maxilo-faciais. Objetivo Avaliar se a suplementação de estrôncio (Sr) não radioativo melhora a osseointegração de implantes de titânio em ratos. Material e método Setenta ratos machos (Rattus Norvegicus) foram divididos aleatoriamente em 5 grupos, de acordo com a suplementação sistêmica: Controle - solução salina; SRAN50 - ranelato de estrôncio (SRAN) 50mg/kg/dia; SRAN625 - SRAN 625mg/kg/dia; SCAR/SCHL30 - carbonato de estrôncio e cloreto de estrôncio (SCAR/SCHL) 30mg/kg/dia; SCAR/SCHL365 - SCAR/SCHL 365mg/kg/dia. Os medicamentos foram administrados por gavagem, uma vez ao dia, iniciando 15 dias antes da cirurgia (1 implante de titânio em cada tíbia), e persistiram por 15 ou 60 dias. As tíbias direitas foram utilizadas para avaliação biomecânica (torque de remoção) e imuno-histoquímica (Osteocalcina – OCN e proteína morfogenética óssea - BMP-2). As esquerdas foram utilizadas para avaliação microtomográfica e histomorfométrica. Resultado Aumento do torque de remoção para SRAN625 e SCAR/SCHL365 foi observado quando comparado ao Controle, em 15 dias. Entretanto, não foram encontradas diferenças no período de 60 dias entre os grupos. A avaliação microtomográfica mostrou maior volume ósseo em 60 dias, comparado a 15 dias, para todos os grupos, exceto SCAR/SCHL30. Quando todos os grupos foram comparados, não foram observadas diferenças no período de 15 dias, enquanto no período de 60 dias SRAN625 e SCAR/SCHL365 foram estatisticamente maiores que o Controle. Na análise imuno-histoquímica, doses maiores (SRAN625 e SCAR/SCHL365) levaram a um aumento de BMP-2 em 15 dias. A análise histomorfométrica não revelou diferenças entre os grupos quanto ao contato osso-implante e área óssea ao redor das roscas do implante. Conclusão Este estudo sugere que concentrações mais altas de Sr sistêmico levam a parâmetros relacionados à osseointegração melhorados de forma variável quanto à avaliação biomecânica e microtomográfica. maxilofaciais. maxilofaciais maxilo faciais. faciais maxilo-faciais (Sr Rattus Norvegicus sistêmica salina SRAN5 (SRAN 50mg/kg/dia 50mgkgdia mgkgdia 50mg kg dia mg SRAN62 625mg/kg/dia 625mgkgdia 625mg SCARSCHL30 SCARSCHL SCAR SCHL30 SCHL SCAR/SCHL3 (SCAR/SCHL 30mg/kg/dia 30mgkgdia 30mg SCARSCHL365 SCHL365 SCAR/SCHL36 365mgkgdia 365mg 365mg/kg/dia gavagem 1 ( tíbia, tíbia , tíbia) 6 imunohistoquímica imuno histoquímica Osteocalcina BMP2. BMP2 BMP 2 . BMP-2) Entretanto comparados imunohistoquímica, histoquímica, (SRAN62 BMP- ossoimplante osso SRAN6 SCARSCHL3 SCHL3 SCARSCHL36 SCHL36 (SRAN6

Abstract Introduction Due to its positive results on bone tissue, strontium also began to be used as an adjuvant in bone neoformation processes, mainly maxillofacial surgical procedures. Objective To assess if the non-radioactive strontium (Sr) supplementation enhances the osseointegration of titanium implants in rats. Material and method Seventy male rats (Rattus Norvegicus) were randomly divided into 5 groups, according to the systemic supplementation: Control - saline solution; SRAN50 - strontium ranelate (SRAN) 50mg/kg/day; SRAN625 - SRAN 625mg/kg/day; SCAR/SCHL30 - strontium carbonate and strontium chloride (SCAR/SCHL) 30mg/kg/day; SCAR/SCHL365 - SCAR/SCHL 365mg/kg/day. The drugs were administered via gavage, once a day, starting 15 days before surgery (1 titanium implant in each tibia), and persisted for 15 or 60 days. The right tibiae were used for biomechanical (removal torque) and immunohistochemical (Osteocalcin – OCN, and bone morphogenetic protein - BMP-2) evaluation. The left were used for microtomographic, and histomorphometric evaluation. Result Increased removal torque for SRAN625 and SCAR/SCHL365 were observed when compared with the Control, in 15 days. However, no differences were found in the 60-days period among the groups. Microtomographic evaluation showed larger bone volume at 60 days, compared to 15 days, for all groups but SCAR/SCHL30. When all groups were compared, no differences were seen in the 15-days period, while in the 60-days SRAN625 and SCAR/SCHL365 were statistically higher than the Control. In the immunohistochemical analysis, higher doses (SRAN625 and SCAR/SCHL365) led to an increase of BMP-2 in 15 days. Histomorphometric analysis revealed no differences among the groups regarding bone-to-implant-contact and bone area around the implant threads. Conclusion This study suggests that higher concentrations of systemic Sr lead to variably improved osseointegration-related parameters regarding the biomechanical and microtomographic evaluation. tissue processes procedures nonradioactive non radioactive (Sr Rattus Norvegicus solution SRAN5 (SRAN 50mg/kg/day 50mgkgday mgkgday 50mg kg day mg SRAN62 625mg/kg/day 625mgkgday 625mg SCARSCHL30 SCARSCHL SCAR SCHL30 SCHL SCAR/SCHL3 (SCAR/SCHL 30mg/kg/day 30mgkgday 30mg SCARSCHL365 SCHL365 SCAR/SCHL36 365mgkgday 365mg 365mg/kg/day gavage 1 ( tibia, tibia , tibia) 6 Osteocalcin OCN BMP2 BMP 2 However 60days 15days (SRAN62 BMP- bonetoimplantcontact contact threads osseointegrationrelated related SRAN6 SCARSCHL3 SCHL3 SCARSCHL36 SCHL36 (SRAN6

Resumo Introdução Diferentes metodologias tem sido utilizadas para avaliação histológica da osseointegração, levando a diferentes resultados. Objetivo O objetivo é comparar diferentes metodologias de análise histomorfométrica da osseointegração de implantes com diferentes superfícies, instalados em tíbias de ratos. Material e método 24 ratos foram aleatoriamente divididos em 3 grupos (n = 8) para a instalação dos implantes. Esses grupos foram divididos de acordo com o tipo de implante instalado na tíbia: Grupo Hidrofílico - HFL (instalação de implante com superfície modificada por jateamento de óxidos e ataque ácido e mantida em solução de cloreto de sódio), Grupo Hidrofóbico - HFB (instalação de implante com superfície modificada por jateamento de óxidos e ataque ácido) e Grupo Usinado - U (instalação de implante com superfície usinada). No período de 45 dias após os procedimentos cirúrgicos de instalação dos implantes, os animais foram submetidos à eutanásia, e as tíbias foram removidas, sendo realizado o processamento histológico para amostras não descalcificadas. Após a obtenção das lâminas, foi realizada a análise histomorfométrica para avaliar as porcentagens de contato osso-implante (% BIC) e da área óssea entre as espiras (% BBT). As mensurações foram realizadas em duas diferentes regiões: 1) as roscas do implante na região do osso cortical e 2) todas as roscas do implante inseridas no osso (cortical e medular). A análise estatística foi feita por meio de ANOVA One-Way, seguida pelo teste de Tukey para análise inferencial dos dados. Resultado Quando o BIC e o BBT foram analisados de forma independente nas regiões cortical e trabecular/total, observou-se uma diferença no comportamento histológico dos implantes de acordo com o tratamento de superfície. Os implantes HFL apresentaram BIC (%) trabecular 16,85% maior (p = 0,02) do que os implantes HFB e 26,12% maior (p ≤ 0,0001) do que os implantes usinados. Contudo, a região cortical de todos os grupos apresentou valores de BIC cortical significativamente maiores ao redor dos implantes, independentemente da superfície. Conclusão Os resultados obtidos demonstraram que a formação óssea peri-implantar foi superior nas análises realizadas apenas em osso cortical, se comparados aos valores obtidos na mensuração total (osso cortical somado ao medular). Também foi possível observar que, dentro da mesma superfície, os valores de BIC (%) foram superiores em osso cortical. Em relação às limitações do estudo, pode-se concluir que diferentes metodologias de análise histométrica da osseointegração ao redor de diferentes superfícies de implantes instalados em tíbias de ratos podem interferir nos resultados de osseointegração, independentemente da superfície analisada. 2 n 8 tíbia sódio, sódio , sódio) usinada. usinada . usinada) 4 eutanásia removidas descalcificadas lâminas ossoimplante % ( BBT. BBT) 1 medular. medular medular) OneWay, OneWay One Way, Way One-Way dados trabeculartotal trabecular/total observouse observou 1685 16 85 16,85 p 0,02 002 0 02 2612 26 12 26,12 0,0001 00001 0001 usinados Contudo periimplantar peri implantar estudo podese pode analisada 168 16,8 0,0 00 261 26,1 0,000 0000 000 16, 0, 26, 0,00

Abstract Introduction Different methodologies were used for histological evaluation of osseointegration, leading to different results. Objective The objective is to compare different methodologies for histomorphometric analysis of the osseointegration of implants with different surfaces, installed in rat tibias. Material and method Twenty-four rats were randomly divided into 3 groups (n=8) for implant installation. These groups were divided according to the type of implant that will be installed in the tibia: Hydrophilic Group (installation of an implant with a surface modified by oxide blasting and acid attack and maintained in a sodium chloride solution), Hydrophobic Group (installation of an implant with surface modified by oxide blasting and acid attack) and Machined Group (implant installation with machined surface). Within 45 days after the surgical procedures to install the implants, the animals were euthanized and the tibias were removed, and histological processing was carried out for non-decalcified samples. After obtaining the slides, histomorphometric analysis was performed to evaluate the percentages of bone-implant contact (%BIC) and the bone area between the turns (%BBT). Measurements were carried out in two different regions: 1) the implant threads in the cortical bone region and 2) all implant threads inserted into the bone (cortical and medullary). Statistical analysis was performed using One-Way ANOVA followed by Tukey's test for inferential data analysis. Result The BIC and BBT were analyzed independently in the cortical and trabecular/total regions, a difference was observed in the histological behavior of the implants according to the surface treatment. HFL implants showed trabecular BIC (%) 16.85% higher (p=0.02) than HFB implants and 26.12% higher (p≤0.0001) than machined implants. However, the cortical region of all groups showed significantly higher cortical BIC values around the implants, regardless of the surface. Conclusion the results obtained demonstrated that peri-implant bone formation was superior in analyzes carried out only on cortical bone, compared to the values obtained in the total measurement (cortical bone plus medullary bone). It was also possible to observe that, even within the same surface, the BIC(%) values were higher in cortical bone. Within the limitations of the study, it can be concluded that different methodologies for histometric analysis of osseointegration around different surfaces of implants installed in rat tibias can interfere with the results of osseointegration regardless of the surface analyzed. Twentyfour Twenty four n=8 n8 n 8 (n=8 tibia solution, solution , solution) . surface) 4 removed nondecalcified non decalcified samples slides boneimplant %BIC (%BIC %BBT. %BBT (%BBT) regions 1 2 medullary. medullary) OneWay One Way Tukeys Tukey s trabeculartotal treatment % (% 1685 16 85 16.85 p=0.02 p002 p 0 02 (p=0.02 2612 26 12 26.12 p≤0.0001 p00001 0001 (p≤0.0001 However periimplant peri bone) BIC% BIC(% study n= (n= (%BBT ( 168 16.8 p=0.0 p00 (p=0.0 261 26.1 p≤0.000 p0000 000 (p≤0.000 BIC( (n 16. p=0. p0 (p=0. 26. p≤0.00 p000 00 (p≤0.00 p=0 (p=0 p≤0.0 (p≤0.0 p= (p= p≤0. (p≤0. (p p≤0 (p≤0 p≤ (p≤

Resumo Introdução o desafio no uso do Micro-Ct tem sido estabelecer e padronizar padrões adequados para escaneamento e tratamento das imagens, para que se obtenha o máximo desempenho do equipamento, e permitir a comparação dos achados entre diferentes estudos. Objetivo o presente estudo tem como objetivo comparar a porcentagem de volume ósseo em regiões com perda óssea periodontal utilizando diferentes metodologias para definição da área a ser analisada (ROI). Material e método dez ratos foram submetidos à indução de doença periodontal, e, após a eutanásia, as mandíbulas foram escaneadas com cortes de 9 μ e 18 μm de espessura, com passo de rotação de 0.3mm. As imagens foram reconstituídas utilizando o software NRecon, e em seguida, utilizando o software CTAnalyser – CTAn, foram definidas as áreas de interesse (ROI) ao redor dos segundos molares. A primeira área de interesse (ROI1) foi definida em um padrão retangular que se restringiu às regiões interproximais e furca, onde a área total de tecido ósseo foi obtida somando os resultados dos 3 ROIs. A segunda área (ROI2) foi definida no sentido corono/apical ao redor do segundo molar até suas limitações proximais com os dentes vizinhos, onde a porcentagem de tecido ósseo pertencente às raízes foram excluídas das avaliações. As análises foram realizadas com cinco diferentes valores de thresholds (130-50, 130-60, 130-70, 130-80, 130-90 e 130-100). Resultado a análise entre os diferentes ROIs demonstrou que em ambas as análises foi observada a tendência a menor porcentagem de tecido ósseo quanto maior o contraste de tons de cinza utilizado, no entanto, nos resultados obtidos no ROI2 essa diferença não foi estatisticamente significante. Conclusão com os resultados obtidos pode se concluir que a utilização de diferentes thresholds para quantificação óssea, em áreas onde houve doença periodontal, pode trazer resultados divergentes; a definição da área de interesse interfere com os resultados obtidos e que a obtenção de uma área de interesse com a remoção das raízes mostrou-se menos susceptível à variação dos parâmetros de escaneamento.

Abstract Introduction the challenge in the use of Micro-Ct has been to establish and standardize adequate standards for scanning and image processing to obtain the maximum performance of the equipment and to allow the comparison of findings between different studies. Objective this study aims to compare the percentage of bone volume in regions with periodontal bone loss using different methodologies to define the area to be analysed (ROI). Material and method ten rats were submitted to periodontal disease induction, and, after euthanasia, the mandibles were scanned with slices of 9μ and 18μm thickness, with a rotation step of 0.3mm. The images were reconstructed using the NRecon software, and then, using the CTAnalyser - CTAn software, the areas of interest (ROI) around the second molars were defined. The first area of interest (ROI1) was defined in a rectangular pattern that was restricted to the interproximal and furcation regions, where the total area of bone tissue was obtained by adding the results of the 3 ROIs. The second area (ROI2) was defined in the coronal/apical direction around the second molar to its proximal limitations with the neighboring teeth, in which the percentage of bone tissue belonging to the roots was excluded from the evaluations. Analyses were performed with five different threshold values (130-50, 130-60, 130-70, 130-80, 130-90, and 130-100). Result the analysis between the different ROIs showed that, in both analyses, there was a tendency towards a lower percentage of bone tissue the greater the grayscale contrast used. However, in the results obtained in ROI2, this difference was not statistically significant. Conclusion with the results obtained, it can be concluded that the use of different thresholds for bone quantification, in areas where there was a periodontal disease, can bring divergent results; the definition of the area of interest interferes with the results obtained; and that obtaining an area of interest with the removal of the roots, proved to be less susceptible to the variation of the scanning parameters.

This investigation compared gingival crevicular fluid (GCF) interleukin-1β (IL-1β) concentrations in periodontitis patients subjected to a strict supragingival biofilm control (Supra) for 6 months. Never-smokers (23) and smokers (n = 20; 19.6 ± 11.8 cigarettes/day) moderate-to-severe chronic periodontitis patients underwent a 6 months period of supragingival control with weekly recall visits. Periodontal probing depth (PPD), bleeding on probing (BOP) and GCF samples (from different PPD category sites: 3-5 mm and 6–10 mm) were obtained at the baseline, 30, and 180 days. IL-1β was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay. Generalized estimating equations were used to fit prediction models of IL-1β changes, considering the dependence between the examinations, and using only data from experimental sites. Overall IL-1β concentrations decreased from 3.2 pg/µL to 1.9 pg/µL. Higher baseline IL-1β concentrations were associated with higher baseline PPD values in both groups. There were no differences in IL-1β concentrations between never-smokers and smokers over time for any PPD category. Higher baseline PPD values and the presence of BOP on day 180 were significantly associated with higher IL-1β concentrations. A strict Supra regimen reduced IL-1β concentrations over time in periodontitis patients. The benefits observed for smokers underline the importance of oral hygiene measures, even considering the presence of this important risk factor.