Resumo Estrogênios são poluentes emergentes e os tratamentos de esgoto tradicionais não são capazes de removê-los. São prejudiciais à saúde humana e ao ambiente. Portanto, torna-se importante avaliar a presença e concentração dessas substâncias em corpos hídricos e matrizes ambientais. No presente trabalho, apresenta-se o desenvolvimento e aplicação de uma metodologia para a determinação de E1, E3, EE2, E2 em águas superficiais utilizando a extração em fase sólida com polímeros de impressão molecular (MISPE) seguida da identificação e quantificação via HPLC-DAD. A fase móvel empregada foi acetonitrila e água acidificada, com ácido fosfórico, pH 3, (1:1, v/v), vazão 1,0 mL min-1, 40ºC, injeção 5 µL e λ = 280 nm. O método foi validado segundo o protocolo ICH Q2 R1. Testes de reprodutibilidade e repetibilidade resultaram em coeficientes de variância menores que 10%, e as curvas de calibração na faixa de concentração de 1 a 20 mg L-1 retornaram valores de linearidade maiores que 0,99. Os limites de detecção e quantificação ficaram abaixo de 1 mg L-1 e o método mostrou-se satisfatório para testes de especificidade e seletividade usando cafeína encontrada em corpos hídricos que recebem efluentes, e DES, estrogênio utilizado em tratamento de câncer de próstata. Amostras selecionadas foram submetidas a clean-up e pré-concentração utilizando extração em fase sólida com fase comercial (C18) e polímeros de impressão molecular (MISPE). Os extratos MISPE analisados indicaram que é possível obter resultados com maior sensibilidade e precisão para análises de matrizes ambientais complexas; mostrando que o método desenvolvido pode ser aplicado em matrizes ambientais complexas.

Abstract Estrogens are emerging pollutants and traditional sewage treatments unable to remove them. They are harmful to human health and to the environment. It is therefore important to evaluate the presence and concentration of estrogens in water bodies and environmental matrices. This work presents the development and application of a methodology for the determination of E1, E3, EE2 and E2 in surface waters using solid phase extraction with molecular imprinting polymers (MISPE) followed by identification and quantification by HPLC-DAD. Acetonitrile and water deionized acidified with phosphoric acid pH 3 (1:1, v/v), a flow rate of 1.0 ml min-1, at 40°C and an injection volume of 5 µL. The method was validated according to the protocol ICH Q2R. Reproducibility and repeatability tests resulted in a smaller variation coefficient of 10%; the calibration curves in the concentration ranged from 1 to 20 mg L-1, with return linearity values greater than 0.99. The limits of detection and quantification were less than 1 mg L-1 and the method was satisfactory for specificity and selectivity tests using caffeine, which is often found in water bodies receiving effluent, and DES, an estrogen used in the treatment of prostate cancer. Selected samples underwent clean-up and pre-concentration treatments using solid phase extraction with commercial phase (C18) and molecularly imprinted polymers (MISPE). The analysis of MISPE extracts indicate that it is possible to obtain results with greater sensitivity and precision for analyses of complex environmental matrices, demonstrating that the developed method can be applied in complex environmental matrices.

Os hormônios β-Estradiol , estrona, estriol e 17α-etinilestradiol vêm sendo detectados em efluentes principalmente porque os atuais processos de tratamento de esgotos são incapazes de removê-los, sendo uma parte descartada em corpos receptores. Estas substâncias causam danos à saúde humana e ambientais (organismos aquáticos e terrestres) por isso o seu monitoramento é necessário. No presente trabalho, empregou-se extração em fase sólida (SPE) utilizando cartuchos adsorventes de octadecil sílica (C18) e análise por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para a determinação simultânea desses hormônios em amostra de água do Córrego Tubarão. A análise cromatográfica foi realizada em modo isocrático, fase móvel 50% ACN:H2O pH 3,0; coluna C18, vazão 1 mLmin-1, injeção 10 µL, λ = 281 nm, T=40ºC. Os limites de quantificação encontrados foram de 3,75 µgL-1 para o 17α-etinilestradiol a 7,75 µgL-1 para o estriol. Os limites de detecção encontrados foram de 1,12 µgL-1 para o 17α-etinilestradiol a 2,32 µgL-1 para o estriol. Na faixa de 0 a 60 µgL-1, os hormônios analisados apresentaram altos coeficientes de correlação (R²> 0,99). A precisão (inter e intra-ensaio) avaliada em 4 diferentes níveis de concentração apresentou coeficiente de variância (%CV) e exatidão inferiores a 3%. Foram realizados diferentes testes de extração SPE mostrando que o condicionamento utilizando-se acetonitrila, eluição com metanol mostrou valores de recuperação superiores a 75%. A metodologia validada foi aplicada na análise de uma amostra de água do córrego Tubarão (Santo André, SP) destacando-se a presença dos hormônios estriol 0,4 gL-1 e estrona 0,32 gL-1. A metodologia proposta apresentou-se adequada para a determinação de hormônios estrógenos em águas naturais.

The hormones β-Estradiol , estrone, estriol and 17a-ethinyl estradiol have been detected in effluents because the current processes of sewage treatment are unable to remove them; the residue is being discarded into receiving bodies. These substances cause harm to human and environmental health (aquatic and terrestrial organisms), which is why there is a need for monitoring them. In the present work, we used SPE methodology using C18 cartridges and a HPLC method for simultaneous determination of these hormones in effluent samples. HPLC analysis was performed in isocratic mode, mobile phase 50% ACN: H2O pH 3.0, C18 column, flow 1 mLmin-1 Injection 10 µ L, λ = 281nm, T = 40 º C. The measurements ranged from 3.75 µgL-1 for 17a-ethinylestradiol to 7.75 µgL-1 for estriol. Detection limits varied from 1.12 µgL-1 for 17a-ethinylestradiol to 2.32 µgL-1 for estriol. In the range of 0-60 µgL-1 the hormones analyzed showed high correlation coefficient (R²> 0.99). The precision (inter- and intra-assay) assessed at 4 different concentration levels presented coefficient of variance (%CV) and accuracy lower than 3%. Different tests have been performed showing that the SPE extraction using acetonitrile elution with methanol showed recovery values higher than 75%. The validated methodology was applied in the analysis of a sample of water from Tubarão Stream (Santo André, SP) highlighting the presence of the hormones estriol 0.4 µgL-1 and estrone 0.32 µgL-1. The proposed methodology was found to be adequate for the determination of estrogen hormones in natural water.