Resumen La alta carga de agroquímicos y antibióticos en los ambientes acuáticos y los agroe-cosistemas representa un riesgo para la vida silvestre. Dado que la microbiota intestinal juega un papel fundamental en el funcionamiento de su hospedador y es sensible a una amplia variedad de contaminantes, su estudio permite evaluar la salud de los organismos. En este trabajo estudiamos los efectos de formulaciones comerciales de un herbicida a base de glifosato (GBH) y del antibiótico ciprofloxacina (CIP), por separado y en mezcla, sobre la diversidad de bacterias intestinales de renacuajos del sapo común (Rhinella arenarum). El estudio de la diversidad de bacterias entéricas cultivables de rápido crecimiento y bajo requerimiento nutricional se llevó a cabo utilizando pruebas microbiológicas clásicas e identificación por espectrometría de masas de tiempo de vuelo por desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI-TOF). La microbiota entérica fue diferente según el tratamiento. El GBH indujo un aumento de la diversidad bacteriana, mientras que la CIP produjo una reducción. Entre estos cambios, destaca la presencia de Yersinia spp. y Proteus spp. solo en el tratamiento con GBH. Además, en el tratamiento GBH-CIP se encontró una disminución en la prevalencia de Klebsiella spp. y Pseudomonas spp. en la microbiota intestinal de los renacuajos. Este es el primer informe sobre la alteración del contenido bacteriano intestinal de renacuajos de R. arenarum producido por dos contaminantes emergentes de preocupación. Demostramos que el renacuajo del sapo común se puede utilizar como un organismo modelo no convencional para el monitoreo de la contaminación ambiental. Estos hallazgos constituyen el primer paso para comprender cómo la presencia de GBH y CIP en aguas dulces puede representar una amenaza para la vida silvestre y la salud humana a través de la disbiosis entérica asociada al efecto sobre la comunidad bacteriana.

Abstract The high load of agrochemicals and antibiotics present in agricultural aquatic environments represents a risk for wildlife. Since enteric bacteria, which play a key role in the physiological functioning of their hosts, are sensitive to a wide variety of pollutants, their study allows to evaluate the health of organisms. This study aimed to evaluate the effects of commercial formulations of a glyphosate-based herbicide (GBH) and the antibiotic ciprofloxacin (CIP), individually and in mixture, on the bacterial diversity of the intestinal content of common toad (Rhinella arenarum) tadpoles. The diversity of cultivable fast-growing bacteria with low nutritional requirements was evaluated using classic microbiological tests and matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometry identification. Bacterial diversity varied among treatments. Taxa diversity increased in the GBH-treated group but decreased in the CIP-treated group. Remarkably, Yersinia spp. and Proteus spp. were only found in the GBH-treated group. The prevalence of Klebsiella spp. and Pseudomonas spp. decreased in the intestinal microbiota of the GBH-CIP-treated group. To our knowledge, this is the first report on the alteration of cultivable enteric bacteria of autochthonous tadpoles due to two pollutants of emerging concern. Our results demonstrate that R. arenarum tadpoles can be used as non-conventional model organisms for environmental pollution monitoring. Our preliminary findings would contribute to understanding how the presence of GBH and CIP in freshwaters may represent a threat to wildlife and human health by causing enteric dysbiosis of part of the bacterial community.

Resumen Introducción: El reconocimiento de la variedad de servicios ecosistémicos de la biodiversidad en los agroecosistemas es uno de los principios básicos de la agroecología. Debido a que los índices de diversidad funcional pueden estar directamente relacionados con los servicios ecosistémicos, la evaluación de la diversidad funcional representa una estrategia adecuada para evaluar estos servicios en agroecosistemas bajo manejo agroecológico. Objetivo: Se comparó la diversidad funcional de aves entre arroceras bajo manejo convencional y agroecológico en la zona arrocera de la provincia de Santa Fe, Argentina. El objetivo fue determinar si el manejo agroecológico del arroz se asocia con una mayor diversidad funcional y con una diferente composición funcional de aves en relación con el manejo convencional. Métodos: Se muestrearon las aves mediante 8 conteos repetidos aproximadamente cada 15 días entre noviembre 2017 y marzo 2018, desde el comienzo de la siembra hasta antes de la cosecha, en ambos tipos de arroceras. Los muestreos fueron realizados mediante una técnica mixta combinando transectas de línea y puntos de conteo en cuatro sitios por tipo de manejo. Se calcularon índices de diversidad y composición funcional con base en atributos morfológicos y tróficos de las aves registradas. Resultados: La riqueza, la divergencia y la dispersión funcional fueron más altos bajo manejo agroecológico. Solamente en el caso de la riqueza funcional las diferencias reflejaron únicamente la variación de la riqueza de especies. La media ponderada a nivel de ensamble de los valores de los rasgos por muestra varió entre los tipos de manejo, estando la dieta insectívora, la persecución como método de forrajeo, y el aire y los arbustos como sustrato de forrajeo mejor representados bajo manejo agroecológico. Conclusión: Los resultados sugirieron que el manejo agroecológico del arroz se relaciona con una mayor diversidad funcional de aves que las prácticas de manejo convencional, sugiriendo que el manejo agroecológico puede mejorar la provisión de servicios ecosistémicos por aves en cultivos de arroz.

Abstract Introduction: Recognition of the variety of ecosystem services that biodiversity performs in agroecosystems is one of the basic principles of agroecology. Because indices of functional diversity may be directly related with ecosystem services, an assessment of functional diversity can be useful for evaluating ecosystem services provided under agroecological management. Objective: We compared functional diversity of birds found in rice fields under conventional and agroecological management in the rice zone of Santa Fe Province, Argentina. Our objective was to determine whether agroecological management of rice is associated with a higher functional diversity and a different functional composition of birds than conventional management. Methods: We surveyed birds eight times, roughly every 15 days between November 2017 and March 2018, from beginning of sowing to before harvest, in both types of rice fields. Birds were sampled by a combined technique of line transects and point counts at four sites in each type of management. We calculated indices of functional diversity and composition based on morphologic and trophic attributes of birds detected in each type of field. Results: Functional richness, divergence and dispersion were higher under agroecological management. Only differences in functional richness between managements reflected differences in species richness. Community-level weighted means of trait values by sample varied between management types. An insectivorous diet, pursuit as a foraging method, and air and shrubs as foraging substrates were traits best represented under agroecological management. Conclusions: Our results suggest that agroecological management of rice crops is related with a higher functional diversity of birds than conventional practices, suggesting that agroecological management may enhance the provision of ecosystem services by birds in rice agroecosystems.

ABSTRACT Increased anthropogenic-made sounds such as traffic noises contribute to acoustic pollution, which produces deleterious effect on song-vertebrates. We compared the advertisement call of Scinax nasicus (Cope, 1862) males in natural (as a reference or control, Site A) and Sites affected by traffic noises (Site B). Call structure was recorded and it was amplified in sonograms (software Raven Pro 1.5). Seven variables were measured on its advertisement call: duration (s), number of notes, number of pulses per note, maximum and minimum frequency (kHz), dominant frequency (kHz) and amplitude (dB). In addition, at each Site the background noise (the fundamental frequency, F0 and amplitude, dB) was measured. The amplitude of background noise reached higher values (68.02 dB) in Site B, while in Site A was lower (34.81 dB). Thus, the F0 in Site A was 6.28 kHz and in Site B it was 4.15 kHz. Frog call in noisy environment (Site B) were characterized by lesser duration (s) and number of pulses per note, higher maximum and dominant frequencies (kHz), lower minimum frequencies, and amplitude (dB) when compared with control environment (Site A). Our study highlights, that S. nasicus males shift their vocal structure in traffic noisy ponds, mainly by vocal “adjust” of their frequencies and amplitude to counteract masking effect. Finally, acoustic monitoring of anurans on noise environments should be considering the spatial, temporal and spectral overlap between noise and species-specific acoustic behaviour.

RESUMEN El aumento de los sonidos de origen antropogénico, como los ruidos del tráfico, contribuyen a la contaminación acústica, que produce un efecto nocivo en el canto de los vertebrados. Comparamos la vocalización de machos de Scinax nasicus (Cope, 1862) en ambientes naturales (como referencia o control, Sitio A) y sitios afectados por ruidos de tráfico (Sitio B). La estructura de la vocalización se registró y amplificó en sonogramas (software Raven Pro 1.5). Se midieron siete variables de su vocalización: duración (s), número de notas, número de pulsos por nota, frecuencia máxima, mínima y dominante (kHz) y amplitud (dB). Además, en cada sitio se midió el ruido de fondo (frecuencia fundamental, la F0 y amplitud, dB). La amplitud del ruido de fondo alcanzó valores más altos (68.02 dB) en el Sitio B, en el Sitio A fue menor (34.81 dB). Por lo tanto, el F0 en el Sitio A fue de 6.28 kHz y en el Sitio B fue de 4.15 kHz. Las vocalizaciones de esta rana en el ambiente con ruido de tráfico (Sitio B) se caracterizaron por menor duración (s) y número de pulsos por nota, mayor amplitud (dB) y frecuencias máximas y dominantes más altas (kHz), baja frecuencia mínima en comparación con el ambiente control (Sitio A). Nuestro estudio resaltó que los machos de S. nasicus cambian su estructura vocal en estanques de ruido de tráfico, principalmente por “ajuste” vocal de sus frecuencias y amplitud para contrarrestar el efecto de enmascaramiento del ruido. Finalmente, el monitoreo acústico de anuros en ambientes ruidosos debe considerar el solapamiento espacial, temporal y espectral entre ruido acústico específico y el comportamiento de la especie.

Agriculture can modify natural systems through habitat loss and fragmentation, as well as through the effect of agrochemicals on biological traits such as reproduction. We studied anuran diversity and reproduction of assemblages from 3 sites with different degrees of agricultural activities (an agroecosystem, a transitional area, and a natural forest) located in Entre Ríos province (Argentina). We conducted several field surveys during 2 soybean-cropping periods from November 2006 to April 2008. A total of 23 anuran species were identified. Richness, evenness and diversity differed among sites. No range-abundance models were statistically adequate to describe the distribution of abundances within the agroecosystem, whereas the anuran species from the other 2 sites fitted the normal logarithmic model. The location and substrates used for nuptial calling in ponds, as well as the reproductive periods of anuran species varied among sites. These findings might respond to a combination of factors, such as anuran composition, species abundances, availability of reproductive microhabitats, and variation of microclimatic characteristics among sites, the agroecosystem being the most different anuran reproductive community. Finally, our results suggest that agricultural land use have adverse effects on the reproduction of anurans in central-eastern Argentina.

La agricultura puede modificar los sistemas naturales mediante la fragmentación y pérdida de hábitat, como también debido al efecto de los agroquímicos sobre rasgos biológicos tales como la reproducción. Se estudió la diversidad y la reproducción en 3 comunidades de anuros provenientes de sitios con distintos grados de actividad agrícola (un agroecosistema, una área de transición y un bosque natural) de la provincia de Entre Ríos (Argentina). Se realizaron inspecciones a campo durante 2 periodos entre la siembra y la cosecha de soja, desde noviembre de 2006 hasta abril de 2008. Se identificaron 23 especies de anuros. La riqueza, la equitatividad y la diversidad difirieron entre sitios. La distribución de abundancias dentro del agroecosistema no se ajustó a ningún modelo rango-abundancia. La ubicación y los sustratos utilizados para vocalizar por las especies como también sus periodos reproductivos variaron entre sitios. Estos resultados podrían responder a una combinación de factores tales como composición de anuros, abundancia de las especies, disponibilidad de microhabitats reproductivos y variaciones microclimáticas entre sitios, siendo el agroecosistema la comunidad reproductiva más diferente. Finalmente, se sugiere que el uso de la tierra para la agricultura tendría efectos adversos sobre la reproducción de los anuros en el centro-este de Argentina.

Mortality of vertebrates was monitored on 2 roads (National Road 168; NR168 and Provincial Road 1; PR1) in Santa Fe Province (Argentina) from October 2007 to August 2008. These roads differed in traffic volume and surrounding landscape management conditions. We also investigated the influence of environmental variables (mean monthly air temperature and monthly total rainfall) on the incidence of road kills. Two people monitored the roads on foot (1 000-m line transects), 3 times a month (36 samples per road). We found 2 024 vertebrate road killed specimens representing 61 species (7 amphibians, 15 reptiles, 32 birds, and 7 mammals). The toad Rhinella fernandezae was the most frequently killed species (n = 1307, 64.57%). NR168 had a higher incidence of vertebrate road kills, particularity for amphibians, whereas birds had a higher incidence of road kills on PR1. We found a positive correlation between precipitation and temperature with vertebrate road kills on PR1. We suggest that vertebrate road mortality is a very serious problem for the conservation of the biodiversity in Santa Fe Province-Argentina, therefore implementing mitigation measures will be necessary.

Se estudió la mortalidad de vertebrados en 2 rutas (RP1: Ruta Provincial N° 1 y RN168: Ruta Nacional N° 168) de la Provincia de Santa Fe (Argentina) desde octubre de 2007 hasta agosto de 2008. Estas rutas diferían en el tránsito vehicular y obras de infraestructura. Además, se investigó la influencia de variables climáticas (temperatura media mensual y precipitación total mensual) con el atropellamiento de la fauna silvestre. Se realizaron de 2 a 3 transectos por mes de 1 000 m cada uno, los cuales fueron recorridos a pie por 2 observadores. Un total de 2 024 vertebrados fueron registrados distribuidos en 61 taxa (7 anfibios, 15 reptiles, 32 aves y 7 mamíferos). La especie más impactada fue el sapo Rhinella fernandezae (n = 1307, 64.57%). La RN168 presentó una alta abundancia de vertebrados particularmente de anfibios, mientras que las aves fueron más representativas en la RP1. Se encontró una correlación positiva entre las variables ambientales (precipitación y temperatura) con la mortalidad de vertebrados en la RP1. Sugerimos que la mortandad de vertebrados en la Provincia de Santa Fe, Argentina, es un problema serio para la conservación de la biodiversidad, siendo necesaria la implementación de medidas de mitigación.

La descripción de la hematología de los anfibios anuros es escasa, habiéndose realizado la mayoría de los trabajos en especies de Norteamérica, Asia y Europa. Con el propósito de obtener datos hematológicos para Rhinella fernandezae, fueron estudiados 23 especímenes provenientes de zonas protegidas de las provincias de Santa Fe y Entre Ríos. Se les extrajo sangre por punción cardíaca y se realizaron hemogramas. En los extendidos sanguíneos, se efectuaron la descripción morfológica y citoquímica de las células sanguíneas y búsqueda de parásitos. Se observaron cinco tipos de leucocitos, donde predominaron los linfocitos pequeños. Heterófilos y eosinófilos resultaron positivos para PAS, Sudan B y peroxidasa; contrariamente, los eritrocitos y sus precursores fueron negativos. Los puntajes de las reacciones citoquímicas fueron variables para basófilos, linfocitos, monocitos y trombocitos. Las frecuencias de micronúcleos y de alteraciones nucleares fueron escasas. No se observaron diferencias significativas (p>0.05) entre sexos en el hemograma ni en la morfología sanguínea. Los únicos hemoparásitos encontrados fueron microfilarias (Nematoda: Filaroidea), cuya prevalencia e intensidad de infección fueron bajas. Las características hematológicas estudiadas fueron semejantes a los valores reportados para otros anfibios, pudiendo inferir que los individuos de R. fernandezae estudiados se encuentran en un buen estado nutricional e inmunológico.

Hematology and blood cell cytochemistry of Rhinella fernandezae (Amphibia: Anura) from Espinal and Delta-Islands of Paraná River, Argentina. The description of amphibian hematology is scarce and most of these studies have been done in species from North America, Asia and Europe. With the purpose to obtain basic hematological information of Rhinella fernandezae, 23 blood samples from Santa Fe and Entre Ríos natural reserves were studied. Blood of each individual was extracted by cardiac puncture and hemograms were carried out. Morphological and cytochemical description of blood cells were analyzed in slides and were inspected for extra and intra cellular parasites. Five leucocytes types were observed, being lymphocytes the predominant ones followed by basophiles. Heterophils and eosinophils were positive to PAS, Sudan B and peroxidase. The erythrocytes and its precursors were negative for cytochemical reactions. Micronuclei and nuclear alterations frequencies were scarce. No significant differences (p>0.05) were observed between sexes neither in hemograms nor in blood cells morphology. Microfilarias were the only hemoparasites found with a relative low prevalence and infection intensity. The hematological characteristics studied were similar to those reported for other amphibians, suggesting that R. fernandezae individuals present optimal nutritional and immunological status. Rev. Biol. Trop. 59 (1): 17-28. Epub 2011 March 01.

Aquatic ecosystems are increasingly exposed to numerous environmental contaminants, as agrochemicals. In recent years it has been observed that toxicity tests only span short time effects (mortality) but are not sufficient to evaluate the ecosystems risk. For that reason, long time estimations are very important as reference to estimate the incidence of those changes over the biodiversity and also on human health. In the present report we statistically analyzed, under laboratory conditions, the acute effect (mortality - survival) and subchronic doses (growth rate and development), as well as the alterations at histological and subcellular level produced by the cypermethrin pesticide. Bioassays on toxicity were carried out with embryos and tadpoles of critical stages of two regional anuran species: Physalaemus biligonigerus and Bufo arenarum. These species were chosen due to their biocides sensibility and ecological importance. Additionally, a morphological analysis of the target organs by optic and electron microscopy was carried on, to determine the development of adaptative mechanisms to the new adverse condition. Complementary studies of in situ TUNEL and morphometry were made.

Los ecosistemas acuáticos están cada vez más expuestos a numerosos contaminantes ambientales, como los agroquímicos. En los últimos años se ha observado que los tests de toxicidad sólo evalúan los efectos a corto plazo (mortalidad) y no son suficientes para evaluar los riesgos de los ecosistemas. Por esta razón, son muy importantes las evaluaciones a largo plazo, ya que permiten estimar la incidencia de estos cambios sobre la biodiversidad y la salud humana. En el presente artículo evaluamos estadísticamente, bajo condiciones de laboratorio, el efecto agudo (mortalidad - supervivencia), las dosis subcrónicas (tasa de crecimiento y desarrollo) y las alteraciones a nivel subcelular e histológico, producidos por el pesticida cipermetrina. Los bioensayos de toxicidad fueron realizados con embriones y larvas de estadios críticos de dos especies regionales de anuros: Physalaemus biligonigerus y Bufo arenarum. Estas especies fueron elegidas debido a su sensibilidad a los biocidas y a su importancia ecológica. Adicionalmente, se realizó un análisis morfológico de los órganos target por microscopía óptica y electrónica, para evaluar el desarrollo de mecanismos adaptativos a las nuevas condiciones desfavorables. Se realizaron en forma complementaria estudios de in situ TUNEL y morfometría.