Este artigo descreve a anteriormente desconhecida diversidade molecular de amostras brasileiras de Coronavírus canino (CCoV). Vinte e duas amostras foram submetidas à análise da sequência parcial do gene codificador da proteína de membrana, sendo 12 classificadas como CCoV Tipo II e 10 como CCoV Tipo I e uma possível sublinhagem tipicamente brasileira foi encontrada para o CCoV Tipo II.

Com o objetivo de monitorar a imunidade passiva em bezerros alimentados com colostro de vacas imunizadas e não imunizadas com vacina contra rotavírus, foram determinados títulos de anticorpos em amostras de sangue e colostro de 26 vacas da raça Holandesa no dia do parto e de seus bezerros, à zero, às 24, 48 horas e aos sete, 14, 21, 28 dias de idade, pelo ensaio imunoenzimático. Tanto no soro sangüíneo como no colostro, os títulos dos isótipos IgG, IgG1 e IgG2 foram mais elevados no grupo dos animais vacinados, porém somente no colostro o aumento foi significativo. Os bezerros alimentados com o colostro das vacas vacinadas apresentaram títulos mais altos dos isótipos IgG, IgG1, IgG2, IgA e IgM, após a ingestão do colostro, sendo constatado aumento significativo apenas para os títulos do isótipo IgG2. Amostras positivas para rotavírus foram detectadas nos dois grupos experimentais a partir dos sete dias de idade. A vacinação materna não protegeu efetivamente os bezerros das infecções naturais por rotavírus, pois, apesar de aumentar os títulos séricos de anticorpos anti-rotavírus nos animais vacinados, não foi capaz de impedir a ocorrência da rotavirose nos bezerros alimentados com o colostro das vacas imunizadas.

Passive immune response in calves fed colostrum from immunized and nonimmunized cows by anti-rotavirus vaccine was monitored. Titers of antibodies were determined by immunoenzymatic assay in blood and colostrum sampled at parturition day from 26 Holstein cows as well as in blood from their calves collected at 0, 24, and 48 hours and seven, 14, 21, and 28 days after birth. In serum and colostrum, IgG, IgG1, and IgG2 antibody titers were higher in vaccinated animals; however, this increase was only significant in colostrum. The calves fed colostrum from vaccinated cows showed higher IgG, IgG1, IgG2, IgA, and IgM isotypes titers after the ingestion of colostrum, being evidenced significant increase only for IgG2 titers. Positive samples for rotavirus were detected in both experimental groups since seven days after birth. Results showed that maternal vaccine failed to protect effectively the calves from natural infections by rotavirus, though it increased the anti-rotavirus antibody titers in vaccinated animals, but was not capable to impair the occurrence of rotaviruses in the calves fed colostrum from immunized cows.

Descreve-se a pesquisa de BCoV e rotavírus em 13 mostras fecais de vacas de surtos de disenteria utilizando uma nested PCR dirigida ao gene RdRp e PAGE, respectivamente. Todas as amostras fecais foram positivas para BCoV e nenhuma delas apresentou-se positiva para rotavírus em PAGE. O encontro de coronavírus bovino em amostras fecais de vacas com disenteria sugere que este vírus possa ser o agente primário envolvido na etiologia dos casos aqui relatados.

RESUMO Estudou-se a participação de coronavírus bovino (BCoV) rotavírus e Cryptosporidium parvum em um surto de diarréia em bezerros de corte no Município de Presidente Epitácio, Estado de São Paulo. Das 9 amostras colhidas, 2 foram positivas para BCoV, 6 para C. parvum e 6 para rotavírus, sendo 4 co-infecções por rotavírus e C. parvum, 1 coinfecção por BCoV e C. parvume 1 co-infecção por rotavírus e coronavírus. Estes resultados reiteram a necessidade de que se pesquise de um modo abrangente a etiologia de diarréias, com o intuito de se avaliarem os agentes circulantes no rebanho, o que possibilita uma abordagem profilática mais exata para impedir o aparecimento de surtos epidêmicos de gastroenterites.

ABSTRACT This article describes the role of bovine coronavirus, rotavirus and Cryptosporidium parvum in an outbreak of beef calf diarrhea in Presidente Epitácio, São Paulo State. Two out 9 fecal samples were positive to BCoV, 6 to C. parvum and 6 to rotavirus, with 4 rotavirus-C. parvumco-infections, 1 BCoV-C. parvumco-infection and 1 rotavirus-BCoV co-infection. These results show the need for a detailed survey of the etiology of diarrheas, aiming to evaluate the agents spread in a flock, allowing the design of prophylactic measures against gastroenteritis outbreaks.

RESUMO Coronavírus têm um interesse especial em cavalos, uma vez que causam doenças em potros e adultos. Este estudo objetivou avaliar a existência de coronavírus, rotavírus, protozoários e bactérias em fezes de um potro com 3 dias de idade sofrendo de diarréia aguda. Uma reação de nested-RT-PCR para o gene da RNA-polimerase RNA-dependente foi aplicada para a detecção de coronavírus e as provas de PAGE, teste de flutuação em sacarose e bacteriologia clássica foram aplicadas para a pesquisa de rotavírus, protozoários e bactérias, respectivamente. Um coronavírus entérico do grupo II foi encontrado, sem outras infecções ou infestações simultâneas. O papel dos coronavírus neste caso clínico é discutido no presente artigo, bem como as possíveis vias de transmissão.

ABSTRACT Coronaviruses are of special interest in diarrhea of horses, once they cause disease in foals and in the adult. This study aimed to evaluate the existence of coronavirus, rotavirus, protozoa and bacteria in stool of a 3-day old foal suffering from acute diarrhea. A nested PCRassay for the RNA-dependent RNA-polymerase gene was applied to coronavirus detection and PAGE, sucrose flotation test and classical bacteriology for rotavirus, protozoa and bacteria detection, respectively. An enteric group II coronavirus was found with no concurrent infections. The role of coronavirus in this clinical case is discussed, as well as possible transmission routes.

ABSTRACT Rotavirus is one of the most important etiological agents in infant gastroenteritis and diarrhea in neonatal animals. The purpose of this study was the optimization of isolation of rotaviruses in MA104 (fetal kidney Rhesus monkey) cells by the comparison of culture, taking into account the number of samples, different treatments with trypsin, number of serial passages, and positivity by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Twenty diarrheic fecal samples of calves and piglets from São Paulo, State, Brazil, all positive for rotavirus in ELISA and PAGE, were submitted to four isolation protocols: in treatment 1, the inoculum was left on the monolayer and the maintenance medium was trypsin-free; treatment 2 was the same as treatment 1 except that the inoculum was discarded; in treatment 3 the inoculum was left on the monolayer and the maintenance medium had 5 µg/mL of trypsin; treatment 4 was the same as the monolayer treatment 3, except that the maintenance medium had 10 µg/mL of trypsin. Fifteen samples were successfully isolated, representing an efficacy of 75% (15/20). Treatment 3 was the most suitable because the lower number of serial passages and lower cytotoxity to the cells, with statistical significance (p < 0.001) using Freedman's and Wilcoxon's tests. animals MA MA10 fetal monkey culture trypsin PAGE. PAGE . (PAGE) Paulo State Brazil protocols trypsinfree free trypsin-free discarded µgmL µg mL isolated 75 15/20. 1520 15/20 15 20 (15/20) p 0.001 0001 0 001 Freedmans Freedman s Wilcoxons Wilcoxon tests MA1 (PAGE 7 152 15/2 (15/20 0.00 000 00 15/ (15/2 0.0 (15/ 0. (15 (1 (

RESUMO Os rotavírus são importantes agentes virais envolvidos nas gastroenterite infantil e da diarréia dos animais neonatos. O objetivo deste trabalho foi otimizar o isolamento de rotavírus levando-se em conta o número de amostras, diferentes tratamentos com tripsina, número de passagens seriadas e monitoramento das mesmas através de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). Foram utilizadas 20 amostras fecais diarréicas, positivas para rotavírus por meio de ELISA e PAGE, oriundas de bezerros e leitões, as quais foram submetidas a quatro protocolos usando tripsina. No tratamento 1 o inóculo foi mantido e o meio de manutenção não continha tripsina; no tratamento 2 o inóculo foi dispensado e o meio de manutenção sem tripsina; no tratamento 3 o inóculo foi mantido e o meio de manutenção continha tripsina na concentração de 5 µg/mL; no tratamento 4 o inóculo foi mantido e o meio de manutenção continha tripsina na concentração de 10 µg/mL. Todos os inóculos continham tripsina na concentração de 5 mg/mL. Dentre as amostras estudadas, 15 foram isoladas com sucesso, o que representa uma eficiência de 75% (15/20). Dentre os protocolos, o tratamento 3 foi o que apresentou melhor desempenho, considerando-se o número de passagens seriadas, a ausência de citotoxidade e significância estatística (p < 0,001), quando se aplicou o teste de Freedman e o teste de Wilcoxon. neonatos levandose levando PAGE. PAGE . (PAGE) diarréicas leitões µg/mL µgmL µg mL mgmL mg mg/mL estudadas sucesso 75 15/20. 1520 15/20 (15/20) desempenho considerandose considerando p 0,001, 0001 0,001 , 0 001 0,001) Wilcoxon (PAGE 7 152 15/2 (15/20 000 0,00 00 15/ (15/2 0,0 (15/ 0, (15 (1 (

Determinou-se a prevalência de rotavírus durante surto de diarréia em bezerros de um rebanho de corte, criado em regime semi-intensivo de produção. Analisaram-se, por meio de técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) e ensaio imunoenzimático (kit EIARA - Fiocruz), 69 amostras de fezes de bezerros, entre 30 e 60 dias de idade, colhidas em três estações de parição consecutivas (agosto a novembro/1999, janeiro a abril e agosto a novembro/2000). Pelo EIARA foram detectadas 63,8% (44/69) de amostras positivas. Na primeira estação de parição foi detectado rotavírus em 82,4% (14/17) dos bezerros que apresentaram quadro clínico de diarréia. No ano de 2000 a presença de rotavírus foi detectada em 41,7% (5/12) e 62,5% (25/40) do total de amostras examinadas. A análise do perfil eletroforético do genoma indicou grande diversidade, com quatro eletroferótipos distintos, todos com perfil longo, característico de rotavírus do grupo A.

During three successive seasons of calving (August to November 1999, January to April and August to November 2000) 69 fecal samples were collected from calves between 30 and 60 days of age presenting diarrhea, to account for the detection and prevalence of rotavirus. Samples were submited to an immunoenzymatic assay for rotavirus and adenovirus (kit EIARA-Fiocruz) and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Of the 69 samples tested, 63.8% (44/69) were positive by EIARA. At the first calving season rotavirus was detected in feces from 14 of 17 calves (82.4%) with clinical signals of diarrhea. For the year 2000 seasons, rotavirus was detected in 5 of 12 (41.7%) and 25 of 40 (62.5%) of samples, respectively. The analysis of the eletrophoretic pattern of the positive samples showed four distinct group A rotavirus genome eletropherotypes.

ABSTRACT A nested PCR targeted to the S1 ectodomain gene of the spike (S) glycoprotein of coronaviruses was developed to detect bovine coronavirus (BCoV) in stool specimens from cattle. One outer and one internal pair of primers were designed to conserved regions surrounding the hypervariable region of the S gene (GenBank accession No. M31053). Outer primers produced an 885bp-long product (nn 1204 to 2088 from S gene) and the internal primers a 488bp-long product (nn 1329 to 1816 from S gene, internal to the first PCR). Optimal annealing temperatures were tested in a gradient thermocycler and used in the final protocols. Outer primers and the final nested protocol detection limits were tested with the BCoV Kakegawa strain diluted two-fold in BCoV-free stool suspension. The nested PCR assay was tested in 22 clinical stool specimens from calves with or without diarrhea and 1 sample from a diarrheic cow, resulting in 10 positive samples both from diarrheic and non-diarrheic individuals. The nested PCR reported here is a specific and sensitive tool for bovine coronavirus diagnosis. (S (BCoV cattle GenBank No M31053. M31053 M . M31053) 885bplong bplong 885bp long bp nn 120 208 488bplong 488bp 132 181 PCR. PCR) protocols twofold two fold BCoVfree free suspension 2 cow nondiarrheic non individuals diagnosis M3105 12 20 13 18 M310 M31 M3

RESUMO Desenvolveu-se uma reação de "nested PCR" direcionada para o gene do ectodomínio S1 da glicoproteína S dos coronavírus para a detecção de coronavírus bovino (BCoV) em amostras fecais. Foram desenhados um par de primers externos e um par de primers internos para regiões conservadas flanqueando a região hipervariável do gene S (GenBank accession No. M31053). Os primers externos produziram um fragmento de 885pb (nn 1204 ao 2088 do gene S) e os internos um fragmento de 488bp (nn 1329 ao 1816 do gene S, interno ao produto do primeiro PCR). Temperaturas ótimas de hibridação dos primers foram testadas em um termociclador com gradiente e utilizadas no protocolo final. Os limites de detecção para os primers externos e para o protocolo "nested" final foram testados com a amostra Kakekawa de BCoV diluída em base 2, em uma suspensão de fezes livre de BCoV. O protocolo final de "nested" foi testado em 22 amostras de fezes de bezerros diarréicos e não-diarreicos e em uma amostra de uma vaca com diarréia, resultando em 10 amostras positivas entre fezes diarréicas e não-diarreicas. O nested PCR aqui relatado é uma ferramenta específica e sensível para o diagnóstico de coronavírus bovino. Desenvolveuse Desenvolveu se (BCoV fecais GenBank No M31053. M31053 M . M31053) pb nn 120 208 bp 132 181 PCR. PCR) 2 nãodiarreicos não diarreicos diarréia 1 nãodiarreicas. nãodiarreicas diarreicas. diarreicas não-diarreicas M3105 12 20 13 18 M310 M31 M3

ABSTRACT Vesicular Stomatitis (VS) is a sanitary barrier imposed by countries that buy industrialized and bottled semen in order to assure biosafety, besides the disease is considered a zoonosis. In the present study an Artificial Insemination (AI) Center located in northeast São Paulo, Brazil, was monitored in order to detect the presence of antibodies to VS (Indiana serotype) in donor bulls. A total of 72 bulls were analyzed from 2000 April to 2001 April, in relation to three periods and the following occurrence was found: 1.4% (1/72) in 2000, April; all the bulls were negative in 2000, September and 2.5% (1/40) in 2001, April. Although positive animals did not present clinical symptoms, they were culled. Although the animal positive in the first evaluation was eliminated, there was a new case in April, 2001. Results indicate the need for surveillance at AI Centers in Brazil and suggest that prophylatic and unspecific measures for the control of VS should be improved. (VS biosafety zoonosis (AI Paulo Indiana serotype 7 200 found 14 1 4 1.4 1/72 172 (1/72 25 2 5 2.5 1/40 140 40 (1/40 symptoms culled eliminated improved 20 1. 1/7 17 (1/7 2. 1/4 (1/4 1/ (1/ (1 (

RESUMO A Estomatite Vesicular (EV) constitui-se em uma das barreiras sanitárias impostas por países compradores de sêmen industrializado e envasado que exigem biosseguridade, associado ao fato de ser zoonose. No presente trabalho foi monitorada uma Central de Inseminação Artificial (IA), localizada na região nordeste do Estado de São Paulo, Brasil, com o objetivo de detectar a presença de anticorpos para a EV (sorotipo Indiana) em touros doadores de sêmen. Foram examinados 72 touros no período de abril de 2000 a abril de 2001, totalizando três colheitas com intervalo semestral. A ocorrência encontrada foi: 1,4% (1/72) em abril de 2000; nenhum animal (0/40) em setembro de 2000 e 2,5% (1/40) em abril de 2001. Os animais positivos, mesmo não apresentando sintomas clínicos foram retirados do recinto. Apesar da eliminação do animal positivo na primeira avaliação, houve aparecimento de um novo caso em abril de 2001. Os resultados indicam a necessidade de monitoramento nas Centrais de IA no Brasil e sugerem a necessidade de se incrementar as medidas profiláticas de ordem inespecíficas para o controle da EV. (EV constituise constitui biosseguridade zoonose IA, , (IA) Paulo sorotipo Indiana 7 200 2001 semestral 14 1 4 1,4 1/72 172 (1/72 0/40 040 0 40 (0/40 25 2 5 2,5 1/40 140 (1/40 positivos recinto avaliação (IA 20 1, 1/7 17 (1/7 0/4 04 (0/4 2, 1/4 (1/4 1/ (1/ 0/ (0/ (1 (0 (

ABSTRACT Rotavirus is a worldwide occurring viral agent of neonatal diarrheas of children and the young of many species, mainly calves and piglets. This survey aimed to evaluate the occurrence of antirotavirus antibodies in cattle raised in São Paulo State by the counterimmunoelectroosmophoresis (CIEOP) test. Two hundred serum samples were collected from 23 farms in 19 counties. The total positivity found was 77.5% and the mean farm-level positivity was 76.57 ± 21.73%. Since there are no regular anti-rotavirus vaccines currently available in Brazil, these results show a high occurrence of rotavirus natural infections in São Paulo State. species piglets CIEOP (CIEOP test 2 1 counties 775 77 5 77.5 farmlevel farm level 7657 76 57 76.5 2173 21 73 21.73% anti Brazil 7 77. 765 76. 217 21.73 21.7 21.

RESUMO Rotavírus é um agente viral de diarréias neonatais de crianças e de animais jovens de várias espécies, principalmente bezerros e leitões. Este estudo teve por objetivo avaliar a ocorrência de anticorpos anti-rotavírus pela técnica da contraimunoeletroosmoforese (CIEOF) em bovinos criados no Estado de São Paulo. Duzentas amostras de soro foram colhidas em 23 fazendas pertencentes a 19 municípios. A soropositividade total encontrada foi de 77,5% e a positividade média por fazenda foi de 76,57 ± 21,73%. Uma vez que não há vacinas anti-rotavírus de uso regular no Brasil, estes resultados demonstram elevada ocorrência de infecções naturais por rotavírus no Estado de São Paulo. espécies leitões antirotavírus anti CIEOF (CIEOF Paulo 2 1 municípios 775 77 5 77,5 7657 76 57 76,5 2173 21 73 21,73% Brasil 7 77, 765 76, 217 21,73 21,7 21,

ABSTRACT The occurrence of coronavirus and rotavirus was surveyed using 72 diarrheic stool specimens from calves reared in 12 municipalities of São Paulo State, using haemagglutination (HA) / haemagglutination inhibition (HI) and Polyacrilamide Gel Electrophoresis (PAGE), respectively, for the detection of these agents. An amount of 14% of the samples were positive for serogroup A rotavirus and 39% were positive for Coronavirus. In one farm it was found a rotavirus/ coronavirus co-infection in 2 calves (3%). These results confirmed the participation of rotavirus and coronavirus in the etiology of neonatal calf diarrhea in the surveyed area. 7 1 State HA (HA HI (HI PAGE, PAGE , (PAGE) respectively agents 14 39 Coronavirus coinfection co infection 3%. 3 3% . (3%) area (PAGE (3% (3 (

RESUMO Estudou-se a ocorrência dos rotavírus e dos coronavírus em propriedades de criação de gado bovino leiteiro, localizadas em diversos Municípios do Estado de São Paulo, a partir de amostras fecais diarréicas de bezerros, utilizando como provas diagnósticas a eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) e hemaglutinação (HA) / inibição da hemaglutinação (HI), respectivamente para rotavírus e coronavírus. Das 72 amostras amostras fecais, 14% delas apresentaram-se positivas para os rotavírus do sorogrupo A e 39% para coronavírus. Em uma propriedade foram detectadas co-infecções de rotavírus e coronavírus em dois (3%) bezerros. Estes achados confirmaram a participação dos rotavírus e coronavírus na etiologia das diarréias de bezerros na área estudada. Estudouse Estudou se leiteiro Paulo PAGE (PAGE HA (HA HI, HI , (HI) 7 14 apresentaramse apresentaram 39 coinfecções co infecções 3% 3 (3% estudada (HI 1 (3 (

Foi realizado um estudo para determinar a ocorrência de infecção por rotavírus em rebanhos bovinos leiteiros. Foram analisadas 375 amostras de fezes de bezerros, na faixa etária 1 a 45 dias, provenientes de animais pertencentes a nove propriedades rurais, situadas em seis municípios da região nordeste do Estado de São Paulo. Destas, 193 pertenciam a animais com diarréia e 182 foram obtidas de animais clinicamente sadios. As técnicas utilizadas para a detecção de rotavírus foram o ensaio imunoenzimático (EIE) e a eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA). Por meio do EIE foram detectadas 11,2% (42/375) de amostras positivas, 15% delas (29/193) obtidas de animais com diarréia e 7,1% (13/182) colhidas de animais sem diarréia. A análise do perfil do genoma indicou a presença de seis eletroferótipos distintos, característicos de rotavírus do grupo A. Um único eletroferótipo foi detectado em três rebanhos, o qual permaneceu constante durante o período de amostragem. Em dois rebanhos diferentes eletroferótipos foram detectados, embora com maior prevalência de um dado perfil. A caracterização das amostras positivas em subgrupos foi realizada por meio do EIE com "duplo sanduíche", utilizando-se anticorpos monoclonais (MAb) específicos para antígenos de subgrupo (I e II). Foram caracterizadas como subgrupo I 52,4% (22/42) das amostras testadas, nenhuma reagiu com MAb de subgrupo II, enquanto as demais, 47,6% (20/42), não reagiram com nenhum dos dois subgrupos.

A study was accomplished to determine the occurrence of rotavirus in feces of calves, in the State of São Paulo, Brazil. A total of 375 samples of feces from calves 1 to 45 day-old were collected. The animals belonged to farms situated in six counties of the northeast region of the State. One hundred and ninety tree out of these samples belonged to animals with a clinical picture of diarrhea and 182 were obtained from clinically healthy animals. The techniques used for the detection of rotavirus were the enzyme immunoassay (EIA) and the polyacrilamide gel electrophoresis (PAGE). By the use of EIA, 11.2% (42/375) of the samples were positive for rotavirus. Among the samples of diarrheic calves, 15% (29/193) were found to be positive for rotavirus, whereas 7.1 (13/182) positive samples were obtained from clinically healthy animals. The PAGE test presented a lower sensitivity than EIA, since from the 42 positive samples in EIA, only 36 presented an electrophoretical profile characteristic of rotavirus. The genome analysis indicated the presence of six distinct electrophoretical types characteristic of group A rotavirus. A unique electropherotype was detected in tree farms, which remained constant during the sampling period. In two farms a second electropherotype was detected. The serological characterization of the positive samples in subgroups was accomplished through EIA with "double sandwich", utilizing monoclonal antibodies ( I and II). Twenty two group A rotavirus strains I (52.4%, 22/42) reacted with MAb of subgroup I, none to subgroup II, and the remaining 47.6% (20/42) did not react with the two subgroups.

ABSTRACT There was developed a polyclonal “double-sandwich” antibody ELISA method for detection of rotavirus from stool specimens. The NCDV strain of rotavirus group A was concentrated by ultra-centrifugation using a 45% (v/v) saccharose cushion and inoculated in rabbits and sheep. After that, the IgG of serum samples of the animals was purified by ion-exchange chromatography and absorbed with whole serum of both animal species using a glutaraldehyde polymer, in order to eliminate unspecific reactions. The presence of rotavirus was detected by the sheep’s IgG and revealed by the rabbit’s IgG, using an anti-rabbit IgG peroxidase conjugate developed in goats. When applied in population of 86 fecal samples from piglets with diarrhea, the results of the ELISA were: 100% of sensivity; 98.79% of specificity, with an agreement of 98.83%, using as standard the polyacrilamide gel electrophoresis (PAGE) test. The variances between 86 repetitions of the same sample were 0.001 (for one positive sample) and 0.0002 (for one negative sample). These results showed that this ELISA is a sensitive and specific alternative test for rotavirus diagnosis from fecal material. doublesandwich double sandwich “double-sandwich specimens ultracentrifugation ultra centrifugation 45 v/v vv v (v/v sheep ionexchange ion exchange polymer reactions sheeps s rabbit antirabbit anti goats 8 diarrhea 100 sensivity 9879 98 79 98.79 specificity 9883 83 98.83% PAGE (PAGE 0001 0 001 0.00 00002 0002 0.000 sample. . material 4 10 987 9 7 98.7 988 98.83 000 00 0.0 0000 1 98. 98.8 0.

RESUMO Um método de ELISA policlonal tipo “duplo-sanduíche” foi desenvolvido para a detecção de rotavírus a partir de material fecal. A amostra NCDV de rotavírus do sorogrupo A foi concentrada por ultracentrifugação utilizando-se um colchão de sacarose a 45% (v/v), e inoculada em coelhos e carneiros. Em seguida, a fração IgG oriunda dos soros dos animais foi purificada por cromatografia de troca iônica e absorvida, utilizando-se polímero de glutaraldeído, de modo a eliminar reações inespecíficas. A presença dos rotavírus foi detectada pela IgG de carneiro e revelada pela IgG de coelho, usando-se IgG de cabra anti-IgG de coelho conjugada à peroxidase. Aplicado a um painel constituído de 86 amostras fecais diarréicas de leitões obteve-se 100% de sensibilidade; 98,79% de especificidade, com uma concordância de 98,83%, tendo como prova padrão a eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). As variâncias entre 86 repetições da mesma amostra foram 0,001 (para a amostra positiva) e 0,0002 (para a amostra negativa). Estes resultados demonstram que este ELISA constitui-se numa alternativa sensível e específica para o diagnóstico de rotavírus a partir de material fecal. duplosanduíche duplo sanduíche “duplo-sanduíche fecal utilizandose utilizando se 45 v/v, vv v/v , v (v/v) carneiros seguida absorvida glutaraldeído inespecíficas usandose usando antiIgG anti peroxidase 8 obtevese obteve 100 sensibilidade 9879 98 79 98,79 especificidade 9883 83 98,83% PAGE. PAGE . (PAGE) 0001 0 001 0,00 positiva 00002 0002 0,000 negativa. negativa negativa) constituise constitui 4 (v/v 10 987 9 7 98,7 988 98,83 (PAGE 000 00 0,0 0000 1 98, 98,8 0,