Abstract In urban environments, domestic dogs (Canis familiaris) are a major reservoir for the parasite Leishmania infantum. Miltefosine has been used as the standard treatment for canine visceral leishmaniasis in Brazil. However, therapeutic failures have been reported. In the present study, two dogs (CG03 and CG06) with a diagnosis of infection by L. infantum underwent two cycles of treatment with miltefosine (Milteforan™ - Virbac®). Analyses showed increases in the parasite load of both CG03 and CG06, even after treatment. The clinical score of CG03 dropped from 1 to 0 (after one round of treatment), such that this dog became asymptomatic. CG06 showed clinical worsening, such that its score increased from 1 to 2. After the second therapeutic round, the parasite load in CG03 was found to have decreased, but it was still higher than before drug treatment even though this dog was physically asymptomatic. There was no decrease in the parasite load in CG06 and there was clinical worsening. The clinical response of these dogs to the treatment differed, but the parasite load remained high in both cases, which poses a risk to public health, making it essential take measures to prevent the sandfly vector from accessing the dog. environments Canis familiaris Brazil However reported study CG (CG0 L Milteforan™ Milteforan (Milteforan Virbac®. Virbac Virbac® . Virbac®) CG0 treatment, , treatment) asymptomatic worsening 2 decreased differed cases health (CG

Resumo Em ambientes urbanos, o cão doméstico (Canis familiaris) é um importante reservatório do parasito Leishmania infantum. Desde 2016, a miltefosina é utilizada como tratamento padrão para leishmaniose visceral canina no Brasil, porém falhas terapêuticas têm sido relatadas. Dois animais (CG03 e CG06) com diagnóstico confirmado de infecção por L. infantum foram submetidos ao tratamento com miltefosina (Milteforan™ - Virbac ®) durante dois ciclos. As análises mostraram aumento significativo na carga parasitária da pele de CG03 e CG06, mesmo após o tratamento com miltefosina. O “score” clínico do CG03 caiu de 1 para 0 (após uma rodada de tratamento), apresentando-se assintomático. Por outro lado, CG06 apresentou piora clínica, com sua pontuação aumentando de 1 para 2. Após duas rodadas terapêuticas, a carga parasitária diminuiu no CG03, mas ainda era maior do que antes do tratamento. O animal ainda se apresentava fisicamente assintomático. Não houve diminuição da carga parasitária de CG06, porém houve piora clínica. Sendo assim, o animal foi encaminhado para eutanásia. A resposta clínica dos animais foi diferente em resposta ao tratamento, mas a carga parasitária permaneceu elevada em ambos os casos, o que oferece risco à saúde pública, tornando essencial medidas para evitar o acesso do vetor flebotomíneo ao cão. urbanos Canis familiaris 2016 Brasil relatadas CG (CG0 L Milteforan™ Milteforan (Milteforan ® ciclos CG0 score “score , tratamento) apresentandose apresentando assintomático lado 2 assim eutanásia casos pública 201 (CG 20

Abstract There are no records of autochthonous cases of canine visceral leishmaniasis in the city of Curitiba, Paraná state, Brazil. In 2020, a male French bulldog (CW01), approximately 2 years old was taken by its owners to a private veterinarian clinic. The suspicion of CVL was confirmed by means of a serology test (ELISA/IFAT reagent), rapid chromatographic immunoassay (DPP®) (ELISA - Biomanguinhos®), parasitological culture and quantitative polymerase chain reaction (qPCR). The animal routinely frequented parks in Curitiba and was taken on several trips to the municipalities of Bombinhas and Balneário Camboriú (Santa Catarina) and to Matinhos (Paraná) where CVL had not previously been reported. Treatment was initiated orally with Milteforan™ which resulted in a significant reduction in the parasitic load. The suspicion of autochthony was investigated through entomological research. A total of 10 traps were installed, one at the animal’s home, seven in adjacent city blocks and two in a forest edge. No sandflies were trapped in the dog’s home and adjacent houses. The traps in the forest edge caught one Migonemyia migonei female and five Brumptomyia spp. females. This case serves as a warning of the possible introduction of CVL in the city of Curitiba. state Brazil 2020 CW01, CW01 CW , (CW01) clinic ELISA/IFAT ELISAIFAT ELISA IFAT reagent, reagent reagent) DPP® DPP (DPP® Biomanguinhos®, Biomanguinhos Biomanguinhos® Biomanguinhos®) qPCR. qPCR . (qPCR) Santa Catarina (Paraná reported Milteforan load research 1 installed animals s dogs dog houses spp females 202 CW0 (CW01 (DPP (qPCR 20 (CW0 (CW

Resumo Não há registros de casos autóctones de leishmaniose visceral canina (LVC) no município de Curitiba, Paraná, Brasil. Em 2020, um "bulldog" francês macho (CW01), com aproximadamente 2 anos de idade, foi levado por seus donos a uma clínica veterinária particular. A suspeita de LVC foi confirmada por meio de teste sorológico (reagente ELISA/IFAT), imunoensaio cromatográfico rápido (DPP®) (ELISA - Biomanguinhos®), cultura parasitológica e reação quantitativa em cadeia da polimerase (qPCR). O animal frequentava, rotineiramente, parques de Curitiba e foi levado em diversas viagens para Bombinhas e Balneário Camboriú (Santa Catarina) e para Matinhos (Paraná), onde a LVC não havia sido relatada anteriormente. O tratamento foi iniciado por via oral com Milteforan™ (Virbac) o que resultou em redução significativa da carga parasitária. A suspeita de autóctone foi investigada por meio de pesquisa entomológica. Foram instaladas 10 armadilhas, uma na casa do animal, sete em quarteirões adjacentes e duas na borda da mata. Nenhum inseto foi capturado na casa do proprietário do animal e nas casas adjacentes. As armadilhas na borda da mata capturaram uma fêmea de Migonemyia migonei e cinco Brumptomyia spp. fêmeas. Este caso serve de alerta para a possível introdução da LVC na cidade de Curitiba. (LVC Paraná Brasil 2020 bulldog "bulldog CW01, CW01 CW , (CW01) idade particular reagente ELISA/IFAT, ELISAIFAT ELISA/IFAT ELISA IFAT ELISA/IFAT) DPP® DPP (DPP® Biomanguinhos®, Biomanguinhos Biomanguinhos® Biomanguinhos®) qPCR. qPCR . (qPCR) frequentava rotineiramente Santa Catarina (Paraná) anteriormente Milteforan Virbac (Virbac parasitária entomológica 1 spp fêmeas 202 CW0 (CW01 (DPP (qPCR (Paraná 20 (CW0 (CW

RESUMO: A fasciolose é uma zoonose de distribuição global causada pelo parasita Fasciola spp. Infecções em humanos podem ocorrer em áreas endêmicas para fasciolose animal, sugerindo a necessidade de estudos sobre essa parasitose e seus determinantes. O presente estudo exploratório teve como objetivo analisar a distribuição espacial da fasciolose bovina, no estado de Santa Catarina, Brasil, a partir de casos notificados entre 2015 e 2017 no abatedouro frigorífico estadual, localizado em Orleans, SC, e associar a ocorrência da doença a altitude, temperatura e precipitação. A pesquisa foi conduzida na Universidade Barriga Verde em Orleans, SC e na Fundação Oswaldo Cruz no Rio de Janeiro, RJ. No período de análise o matadouro recebeu animais de 58 municípios do estado de Santa Catarina. Dos animais abatidos nesse período, 10,81% estavam infectados por Fasciola hepatica. A presença da infecção por fasciolose foi encontrada no Sul no território estudado, com maiores prevalências no Sudeste do estado. Houve uma associação entre baixas altitudes e maior ocorrência de fasciolose nos municípios. A prevalência de fasciolose bovina foi também maior em municípios com altas temperaturas e com baixa pluviosidade. Sendo assim, esses resultados devem ser levados em consideração para o planejamento de medidas de controle da doença no Sul de Santa Catarina.

ABSTRACT: Fascioliasis is a zoonosis of global distribution caused by the parasitic trematode Fasciola spp. Infection in humans can occur in areas endemic for animal fascioliasis, suggesting the need for studies on this parasitosis and its determinants. This exploratory study aimed to analyze the spatial distribution of bovine fascioliasis in the state of Santa Catarina, Brazil, based on cases notified between 2015 and 2017 in a state abattoir, located in the municipality of Orleans, and to associate disease occurrence with altitude, temperature, and rainfall. The research was conducted at Centro Universitário Barriga Verde (UNIBAVE)/Orleans, SC and Fundação Oswaldo Cruz/Rio de Janeiro, RJ. During the study period, the abattoir received animals from 58 municipalities in that state. Of the animals slaughtered in that period, 10,81% were infected with Fasciola hepatica. Presence of bovine fascioliasis infection was identified in the South and Southeast regions of the state, with higher prevalence rates in the latter. There was an association between low altitudes and higher occurrence of cases in the municipalities assessed. In addition, prevalence of bovine fascioliasis was higher in municipalities with high temperatures and low rainfall. Therefore, these results should be considered for planning disease control measures in the South and Southeast regions of the state of Santa Catarina.

Resumo Os cães são os principais reservatórios urbanos da Leishmania infantum, agente causador da leishmaniose visceral (VL), transmitida por vetores conhecidos como flebotomíneos. No Paraná, a primeira detecção de casos positivos caninos ocorreu em 2014, ano em que o Paraná perdeu o status de estado indene. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência da leishmaniose visceral canina no município de Palotina, a ocorrência de vetores que possam transmitir Leishmania infantum e o número de notificação de casos de leishmaniose visceral humana, no período de 2010 a 2020. Para determinar a ocorrência da leishmaniose visceral canina, amostras de sangue de 204 cães foram analisadas, utilizando-se o teste rápido (DPP®) para detectar anticorpos anti-L. infantum. Com o objetivo de investigar a ocorrência de potenciais vetores, coletas foram realizadas mensalmente em 18 pontos na área urbana do município. O número de casos de leishmaniose visceral humana foi investigado a partir de registros da Vigilância Epidemiológica. Nenhum cão testado foi positivo no teste sorológico. Apenas dois espécimes de Lutzomyia neivai, uma de Lutzomyia sp. e quatro de Brumptomyia brumpti foram coletados. Nenhum caso de leishmaniose visceral humana foi notificado. Esses resultados sugerem que não há evidência da circulação de L. infantum em Palotina.

Abstract Dogs are the main urban reservoir of Leishmania infantum, the causative agent of visceral leishmaniasis (VL), which is transmitted by sand flies. In the state of Paraná, the first detection of a positive dog for VL was in 2014, this year Paraná lost free status for this disease (VL). The objectives of this study were to determine the prevalence of canine visceral leishmaniasis in Palotina, the occurrence of vectors that may transmit Leishmania infantum, and the number of notifications of human visceral leishmaniasis cases from period 2010 to 2020. To determine the occurrence of canine visceral leishmaniasis, blood samples from 204 dogs were analyzed using the rapid test DPP® to detect anti-L. infantum antibodies. To investigate the occurrence of potential vectors, monthly collections were made at 18 points within the urban area of the municipality. The number of human visceral leishmaniasis cases was investigated from Epidemiological Surveillance records. None of the serologically tested dogs showed positive titration. Only two specimens of Lutzomyia neivai, one of Lutzomyia sp. and four of Brumptomyia brumpti specimens were collected. No human visceral leishmaniasis cases were reported. These results suggest that there is no evidence of circulation of L. infantum in Palotina.

Resumo: Os cães são os principais reservatórios do ciclo de transmissão domiciliar da leishmaniose visceral, e o diagnóstico é essencial para a efetividade das medidas de controle recomendadas pelo Ministério da Saúde. Os autores avaliam o desempenho diagnóstico do protótipo da ELISA-Vetlisa/BIOCLIN em amostras sorológicas de 200 cães, em triplicata, incluindo cães sintomáticos, oligossintomáticos e saudáveis, com dois painéis distintos (A e B) caracterizados por testes parasitológicos enquanto referência. No estudo, o kit-protótipo mostrou sensibilidade de 99% (IC95%: 94,5-100,0) e especificidade de 100% (IC95%: 96,4-100,0). A sensibilidade do kit-protótipo não variou de maneira significativa de acordo com o estado clínico dos cães. Considerando a classificação final dos resultados (positivo ou negativo), a concordância entre os resultados dos testes em triplicata foi quase perfeita (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). O protótipo ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tem o potencial de ser utilizada para o diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina no Brasil.

Abstract: Dogs are the main reservoirs in the domestic transmission cycle of visceral leishmaniasis, and the diagnosis is essential for the effectiveness of the control measures recommended by the Brazilian Ministry of Health. We assessed the diagnostic performance of the ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototype with serum samples from 200 dogs, in triplicate, including symptomatic, oligosymptomatic, asymptomatic, and healthy dogs, originated by two distinct panels (A and B) characterized by parasitological tests as the reference standard. In this study, the prototype kit showed a 99% sensitivity (95%CI: 94.5-100.0) and a 100% specificity (95%CI: 96.4-100.0). The sensitivity of the prototype kit did not vary significantly with the clinical status of the dogs. Considering the final result classification (positive or negative), agreement between the results of repeated tests was almost perfect (kappa = 0.99; 95%CI: 0.98-1.00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN is a promising option for the serological diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil.

Resumen: Los perros son los principales reservorios en el ciclo de transmisión doméstica de la leishmaniasis visceral, por ello el diagnóstico es esencial para la efectividad de las medidas de control recomendadas por el Ministerio de Salud de Brasil. Evaluamos el desempeño diagnóstico de ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototipo con muestras de sérum de 200 perros, en triplicado, incluyendo sintomático, oligosintomático, asintomático y perros sanos, originadas por dos paneles distintos (A y B), caracterizados por test parasitológicos como referencia estándar. En este estudio, el kit prototipo mostró un 99% de sensibilidad (IC95%: 94,5-100,0) y un 100% de especificidad (IC95%: 96,4-100,0). La sensibilidad del kit prototipo no varió significativamente con el estatus clínico de los perros. Considerando la clasificación final del resultado (positiva o negativa), el acuerdo entre los resultados de los tests repetidos fue casi perfecto (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tiene potencial para ser usado para el diagnóstico serológico de la leishmaniasis visceral canina en Brasil.

Resumo: Os cães são os principais reservatórios do ciclo de transmissão domiciliar da leishmaniose visceral, e o diagnóstico é essencial para a efetividade das medidas de controle recomendadas pelo Ministério da Saúde. Os autores avaliam o desempenho diagnóstico do protótipo da ELISA-Vetlisa/BIOCLIN em amostras sorológicas de 200 cães, em triplicata, incluindo cães sintomáticos, oligossintomáticos e saudáveis, com dois painéis distintos (A e B) caracterizados por testes parasitológicos enquanto referência. No estudo, o kit-protótipo mostrou sensibilidade de 99% (IC95%: 94,5-100,0) e especificidade de 100% (IC95%: 96,4-100,0). A sensibilidade do kit-protótipo não variou de maneira significativa de acordo com o estado clínico dos cães. Considerando a classificação final dos resultados (positivo ou negativo), a concordância entre os resultados dos testes em triplicata foi quase perfeita (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). O protótipo ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tem o potencial de ser utilizada para o diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina no Brasil.

Abstract: Dogs are the main reservoirs in the domestic transmission cycle of visceral leishmaniasis, and the diagnosis is essential for the effectiveness of the control measures recommended by the Brazilian Ministry of Health. We assessed the diagnostic performance of the ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototype with serum samples from 200 dogs, in triplicate, including symptomatic, oligosymptomatic, asymptomatic, and healthy dogs, originated by two distinct panels (A and B) characterized by parasitological tests as the reference standard. In this study, the prototype kit showed a 99% sensitivity (95%CI: 94.5-100.0) and a 100% specificity (95%CI: 96.4-100.0). The sensitivity of the prototype kit did not vary significantly with the clinical status of the dogs. Considering the final result classification (positive or negative), agreement between the results of repeated tests was almost perfect (kappa = 0.99; 95%CI: 0.98-1.00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN is a promising option for the serological diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil.

Resumen: Los perros son los principales reservorios en el ciclo de transmisión doméstica de la leishmaniasis visceral, por ello el diagnóstico es esencial para la efectividad de las medidas de control recomendadas por el Ministerio de Salud de Brasil. Evaluamos el desempeño diagnóstico de ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototipo con muestras de sérum de 200 perros, en triplicado, incluyendo sintomático, oligosintomático, asintomático y perros sanos, originadas por dos paneles distintos (A y B), caracterizados por test parasitológicos como referencia estándar. En este estudio, el kit prototipo mostró un 99% de sensibilidad (IC95%: 94,5-100,0) y un 100% de especificidad (IC95%: 96,4-100,0). La sensibilidad del kit prototipo no varió significativamente con el estatus clínico de los perros. Considerando la clasificación final del resultado (positiva o negativa), el acuerdo entre los resultados de los tests repetidos fue casi perfecto (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tiene potencial para ser usado para el diagnóstico serológico de la leishmaniasis visceral canina en Brasil.

Abstract INTRODUCTION: Dogs play an epidemiological role in several vector-borne diseases that affect human and animal health worldwide. We aimed to identify rickettsial circulation among dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL) from a region endemic for both diseases. METHODS: CVL-seropositive dogs were screened for spotted fever group rickettsiae using an indirect immunofluorescence assay. RESULTS: Among the CVL-positive dogs, anti-Rickettsia rickettsii antibodies were identified in one asymptomatic and one oligosymptomatic dog. CONCLUSIONS: This study shows low circulation of antibodies to R. rickettsii in CVL-seropositive dogs. It is recommended that surveillance studies in dogs should continue in order to monitor this scenario.

RESUMO: A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença zoonótica com reservatório canino na América do Sul. Cães oriundos de área endemica brasileira, naturalmente infectados por Leishmania infantum, apresentando doença clínica severa (CS) ou doença branda ou ausente (BA) foram avaliados. Carga parasitária, histopatologia e expressão de mRNA de citocinas e iNOS foram analisados em baço e fígado, buscando determinar possíveis marcadores de susceptibilidade ou resistência à doença. Como principais resultados, tanto cães CS como BA apresentaram alta carga parsitária. IFN-γ foi a citocina mais expressiva em ambos os órgãos, sendo IL-6 e IL-4 também detectadas em baço e fígado e IL-10 em fígado. No tecido hepático foram encontradas as maiores medianas de IFN-γ e IL-10, sendo o fígado o principal órgão produtor de citocinas, com IL-10 sugerindo acompanhamento regulatório. Granulomas foram detectados em ambos os órgãos. Quando de sua ausência no baço, essa foi associada à elevação dos níveis de IL-6, salientando o papel anti-inflamatório dessa citocina. Alterações microscópicas foram principalmente caracterizadas por extensiva desorganização de polpa branca, com a resposta esplência sendo sugerida como subotimizada. Carga parasitária, dano tecidual e resposta immune variaram mesmo em cães com quadros clínicos similares, não sendo, portanto, a análise clínica um bom parâmetro para avaliação de susceptibilidade animal à LV.

ABSTRACT: Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic disease with a canine urban reservoir in South America. Dogs from an endemic area within Brazil, which were naturally infected with Leishmania infantum, and those presenting severe clinical (SC), mild, or no clinical (MNC) disease, were evaluated. Parasite load, histopathology, and cytokine and iNOS mRNA expressions were assessed in the spleen and liver in order to determine the potential markers for disease susceptibility or resistance. As a result, dogs with both SC and MNC had high parasite loads; IFN-γ was the most expressive cytokine in both organs, along with IL-6 and IL-4 being detected in the spleen and liver, and IL-10 only in liver. The hepatic tissue presented higher medians for IFN-γ and IL-10, and was the main organ to produce cytokines with hepatic IL-10 suggesting a regulatory follow up. Granulomas were detected in both organs; however, when absent in spleen, they were associated with elevated IL-6 levels, thus highlighting the anti-inflammatory role of IL-6. Microscopic lesions in the spleen were predominantly characterized by an extensively disorganized white pulp and splenic response was suggested as sub optimized. Parasite load, tissue damage, and immunological response may vary in the dogs with similar clinical symptoms, which may not be a good parameter for assessing the animal’s susceptibility to VL.

Resumo: Foi avaliada a associação entre características ambientais obtidas por sensoriamento remoto e a prevalência da leishmaniose visceral canina (LVC) no bairro do Jacaré, área de recente introdução da doença, no Município de Niterói, Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Trata-se de um estudo seccional para avaliação da prevalência de LVC, definida por meio da positividade no teste imunocromatográfico rápido em dupla plataforma (dual path platform - DPP), confirmada com o ensaio imunoenzimático (EIE). Foram incluídos 97 cães com prevalência de LVC de 21,6%. Houve maior frequência de LVC em cães com a convivência com outro cão, gambá, mico e ouriço-terrestre, assim como com a história de remoção de outros cães com LVC do domicílio. Na análise multivariada, ajustada por sexo e idade do cão, cães residentes em áreas com maior cobertura de vegetação esparsa apresentaram prevalência da infecção por Leishmania infantum cinco vezes maior do que aqueles que residiam em áreas menos vegetadas (OR = 5,72; IC95%: 1,47-22,20). Por outro lado, áreas mais urbanizadas caracterizadas como comerciais ou residenciais carentes, identificadas pelo sensoriamento remoto como aquelas com alta densidade de estruturas cinza, estiveram associadas à menor ocorrência da LVC (OR = 0,09; IC95%: 0,01-0,92). A maior prevalência de infecção em cães convivendo com outros animais silvestres e em áreas com maior cobertura vegetal, associada com menor prevalência em áreas urbanizadas, indica um padrão rural de transmissão da LVC nessa área.

Abstract: The study assessed the association between environmental characteristics obtained by remote sensing and prevalence of canine visceral leishmaniasis (CVL) in the neighborhood of Jacaré, an area with recent introduction of the disease in the municipality (county) of Niterói, Rio de Janeiro State, Brazil. This was a cross-sectional study to assess CVL prevalence, defined as a positive result in the dual path platform (DPP) rapid immunochromatographic assay, confirmed by immunoenzymatic assay (IEA). The study included 97 dogs, with 21.6% CVL prevalence. CVL prevalence was higher in dogs with contact with another dog, opossum, marmoset, or hedgehog, as well as history of culling of other dogs with CVL from the household. In the multivariate analysis, adjusted for the dog’s sex and age, dogs in areas with sparse vegetation showed fivefold higher prevalence of Leishmania infantum infection compared to dogs in areas with less vegetation (OR = 5.72; 95%CI: 1.47-22.20). Meanwhile, less urbanized areas, characterized as commercial or low-income residential areas, identified by remote sensing as those with high density of gray structures, were associated with lower CVL prevalence (OR = 0.09; 95%CI: 0.01-0.92). The higher prevalence of infection in dogs living alongside wild animals and in areas with more vegetation and lower prevalence in more urbanized areas suggest a rural transmission pattern for CVL in this area.

Resumen: Se evaluó la asociación entre las características ambientales obtenidas por teledetección y la prevalencia de la leishmaniosis visceral canina (LVC) en el barrio de Jacaré, área de reciente introducción de la enfermedad, en el municipio de Niteroi, Estado de Río de Janeiro, Brasil. Se trata de un estudio seccional para la evaluación de la prevalencia de LVC, definida mediante la positividad en el test inmunocromatográfico rápido en una plataforma de doble vía (dual path platform - DPP), confirmada con un ensayo imunoenzimático (EIE). Se incluyeron a 97 perros con una prevalencia de LVC de un 21,6%. Hubo una mayor frecuencia de LVC en perros que conviven con otros perros, zarigüeyas, monos y erizos terrestres, así como con el historial de retirada de otros perros con LVC del domicilio. En el análisis multivariado, ajustado por sexo y edad del perro, los perros residentes en áreas con una mayor cobertura de vegetación muy dispersa presentaron una prevalencia de infección por Leishmania infantum cinco veces mayor que aquellos que residían en áreas con menos vegetación (OR = 5,72; IC95%: 1,47-22,20). Por otro lado, las áreas más urbanizadas, caracterizadas como comerciales o residenciales con pocos recursos, identificadas mediante teledetección como aquellas con una alta densidad de estructuras en gris, estuvieron asociadas a una menor ocurrencia de la LVC (OR = 0,09; IC95%: 0,01-0,92). La mayor prevalencia de infección en perros, conviviendo con otros animales silvestres y en áreas con una mayor superficie vegetal, se asocia con una menor prevalencia en áreas urbanizadas, lo que indica un padrón rural de transmisión de la LVC en ese área.

Resumo: Foi avaliada a associação entre características ambientais obtidas por sensoriamento remoto e a prevalência da leishmaniose visceral canina (LVC) no bairro do Jacaré, área de recente introdução da doença, no Município de Niterói, Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Trata-se de um estudo seccional para avaliação da prevalência de LVC, definida por meio da positividade no teste imunocromatográfico rápido em dupla plataforma (dual path platform - DPP), confirmada com o ensaio imunoenzimático (EIE). Foram incluídos 97 cães com prevalência de LVC de 21,6%. Houve maior frequência de LVC em cães com a convivência com outro cão, gambá, mico e ouriço-terrestre, assim como com a história de remoção de outros cães com LVC do domicílio. Na análise multivariada, ajustada por sexo e idade do cão, cães residentes em áreas com maior cobertura de vegetação esparsa apresentaram prevalência da infecção por Leishmania infantum cinco vezes maior do que aqueles que residiam em áreas menos vegetadas (OR = 5,72; IC95%: 1,47-22,20). Por outro lado, áreas mais urbanizadas caracterizadas como comerciais ou residenciais carentes, identificadas pelo sensoriamento remoto como aquelas com alta densidade de estruturas cinza, estiveram associadas à menor ocorrência da LVC (OR = 0,09; IC95%: 0,01-0,92). A maior prevalência de infecção em cães convivendo com outros animais silvestres e em áreas com maior cobertura vegetal, associada com menor prevalência em áreas urbanizadas, indica um padrão rural de transmissão da LVC nessa área.

Abstract: The study assessed the association between environmental characteristics obtained by remote sensing and prevalence of canine visceral leishmaniasis (CVL) in the neighborhood of Jacaré, an area with recent introduction of the disease in the municipality (county) of Niterói, Rio de Janeiro State, Brazil. This was a cross-sectional study to assess CVL prevalence, defined as a positive result in the dual path platform (DPP) rapid immunochromatographic assay, confirmed by immunoenzymatic assay (IEA). The study included 97 dogs, with 21.6% CVL prevalence. CVL prevalence was higher in dogs with contact with another dog, opossum, marmoset, or hedgehog, as well as history of culling of other dogs with CVL from the household. In the multivariate analysis, adjusted for the dog’s sex and age, dogs in areas with sparse vegetation showed fivefold higher prevalence of Leishmania infantum infection compared to dogs in areas with less vegetation (OR = 5.72; 95%CI: 1.47-22.20). Meanwhile, less urbanized areas, characterized as commercial or low-income residential areas, identified by remote sensing as those with high density of gray structures, were associated with lower CVL prevalence (OR = 0.09; 95%CI: 0.01-0.92). The higher prevalence of infection in dogs living alongside wild animals and in areas with more vegetation and lower prevalence in more urbanized areas suggest a rural transmission pattern for CVL in this area.

Resumen: Se evaluó la asociación entre las características ambientales obtenidas por teledetección y la prevalencia de la leishmaniosis visceral canina (LVC) en el barrio de Jacaré, área de reciente introducción de la enfermedad, en el municipio de Niteroi, Estado de Río de Janeiro, Brasil. Se trata de un estudio seccional para la evaluación de la prevalencia de LVC, definida mediante la positividad en el test inmunocromatográfico rápido en una plataforma de doble vía (dual path platform - DPP), confirmada con un ensayo imunoenzimático (EIE). Se incluyeron a 97 perros con una prevalencia de LVC de un 21,6%. Hubo una mayor frecuencia de LVC en perros que conviven con otros perros, zarigüeyas, monos y erizos terrestres, así como con el historial de retirada de otros perros con LVC del domicilio. En el análisis multivariado, ajustado por sexo y edad del perro, los perros residentes en áreas con una mayor cobertura de vegetación muy dispersa presentaron una prevalencia de infección por Leishmania infantum cinco veces mayor que aquellos que residían en áreas con menos vegetación (OR = 5,72; IC95%: 1,47-22,20). Por otro lado, las áreas más urbanizadas, caracterizadas como comerciales o residenciales con pocos recursos, identificadas mediante teledetección como aquellas con una alta densidad de estructuras en gris, estuvieron asociadas a una menor ocurrencia de la LVC (OR = 0,09; IC95%: 0,01-0,92). La mayor prevalencia de infección en perros, conviviendo con otros animales silvestres y en áreas con una mayor superficie vegetal, se asocia con una menor prevalencia en áreas urbanizadas, lo que indica un padrón rural de transmisión de la LVC en ese área.

BACKGROUND Visceral leishmaniasis is a major public health challenge in South America, and dogs are its main urban reservoir. OBJECTIVE Validation of the canine Dual-path Platform immunoassay for canine visceral leishmaniasis (DPP® CVL) for a sample set composed of 1446 dogs from different Brazilian endemic areas. METHODS A well-defined reference standard by means of parasitological culture, immunohistochemistry, and histopathology was used. Animals were classified as asymptomatic, oligosymptomatic, or symptomatic. Sensitivity and specificity were assessed as a single set and in clinical groups. A reproducibility assessment of the tests was conducted using the Kappa (κ) index at three different laboratories (A, B, and C). FINDINGS Overall, 89% sensitivity and 70% specificity were obtained for the entire sample set. Analysis of the clinical groups showed a gradual decrease in the sensitivity and an increase in the specificity with the reduction of clinical signs in the dogs that were assessed, reaching a sensitivity of 75% (42.8-94.5%) among asymptomatic dogs and lower specificity of 56% (46.2-66.3%) among symptomatic dogs. Inter-laboratory agreement was substantial (κAB= 0.778; κAC= 0.645; κCB= 0.711). MAIN CONCLUSIONS The test performance is somewhat dependent on canine symptomatology, but such influence was less evident than in previous studies. Favourable results for sensitivity and specificity can be obtained even in asymptomatic animals; however, caution is needed in these evaluations, and the results suggest that the immunochromatographic test may be further improved for better investigation in asymptomatic dogs. The results obtained confirm the usefulness of DPP® CVL for application in serological surveys.

Resumo Objetivo: descrever dificuldades operacionais na implementação de coleiras caninas impregnadas com deltametrina para o controle da leishmaniose visceral. Métodos: estudo de intervenção comunitária no município de Montes Claros, MG, Brasil, comparando (i) área-controle - sem encoleiramento canino - e (ii) área de intervenção - uso de coleiras caninas impregnadas com deltametrina 4%; foi realizado inquérito sorológico inicial, seguido de três outros ciclos (aos 12, 18 e 24 meses). Resultados: de 4.388 cães inicialmente soronegativos encoleirados, 36,9% não foram encontrados no segundo ciclo, 27,0% foram perdidos por sumiço/doação/venda e 22,6% porque a casa estava fechada; a perda de coleiras foi de 56,1% em um ano; entre os cães que permaneceram mais tempo no estudo, a perda foi menor. Conclusão: as altas frequências de perda de coleiras e de domicílios fechados são dificuldades operacionais para a implementação de um programa de controle baseado na estratégia avaliada.

Abstract Objective: to describe operational difficulties in the implementation of deltamethrin-impregnated dog collars for the control of visceral leishmaniasis. Methods: this was a community intervention trial in the municipality of Montes Claros, MG, Brazil, comparing (i) control area - dogs without dog collars - and (ii) intervention area - use of 4% deltamethrin-impregnated collars; an initial serological survey was performed, followed by three further cycles (at 12, 18 and 24 months). Results: out of 4,388 dogs initially seronegative wearing collars, 36.9% were not found in the second cycle, 27.0% of them were lost owing to disappearance/given away/sale, and 22.6% because no one was at home; 56.1% of collars were lost in one year; while among dogs that stayed longer in the study, collar loss was lower. Conclusion: high frequencies of collar loss and no one being at home at the time of the visit are operational difficulties for the implementation of a national control program based on the strategy evaluated.

Resumen Objetivo: describir las dificultades operativas en la implementación de los collares impregnados con deltametrina para el control de la leishmaniasis visceral. Métodos: ensayo comunitario de intervención en la municipalidad de Montes Claros, MG, Brasil, comparando (i) área control - perros sin collares - y (ii) área de intervención - uso de collares impregnados con deltametrina 4% -; se realizó una encuesta serológica inicial, seguida de otros tres ciclos (a los 12, 18 y 24 meses). Resultados: de 4.388 perros inicialmente seronegativos y con los collares, 36,9% no participaron del segundo ciclo, 27,0% se perdieron por desaparición/donación/venta y 22,6% porque el domicilio estaba cerrado; la pérdida de los collares fue del 56,1% en un año; entre los perros que permanecieron más tiempo en estudio, la pérdida fue menor. Conclusión: alta frecuencia de pérdida de los collares y de domicilios cerrados son dificultades operativas para la implementación de un programa nacional de control basado en la estrategia evaluada.

Resumo Objetivo: descrever dificuldades operacionais na implementação de coleiras caninas impregnadas com deltametrina para o controle da leishmaniose visceral. Métodos: estudo de intervenção comunitária no município de Montes Claros, MG, Brasil, comparando (i) área-controle - sem encoleiramento canino - e (ii) área de intervenção - uso de coleiras caninas impregnadas com deltametrina 4%; foi realizado inquérito sorológico inicial, seguido de três outros ciclos (aos 12, 18 e 24 meses). Resultados: de 4.388 cães inicialmente soronegativos encoleirados, 36,9% não foram encontrados no segundo ciclo, 27,0% foram perdidos por sumiço/doação/venda e 22,6% porque a casa estava fechada; a perda de coleiras foi de 56,1% em um ano; entre os cães que permaneceram mais tempo no estudo, a perda foi menor. Conclusão: as altas frequências de perda de coleiras e de domicílios fechados são dificuldades operacionais para a implementação de um programa de controle baseado na estratégia avaliada.

Abstract Objective: to describe operational difficulties in the implementation of deltamethrin-impregnated dog collars for the control of visceral leishmaniasis. Methods: this was a community intervention trial in the municipality of Montes Claros, MG, Brazil, comparing (i) control area - dogs without dog collars - and (ii) intervention area - use of 4% deltamethrin-impregnated collars; an initial serological survey was performed, followed by three further cycles (at 12, 18 and 24 months). Results: out of 4,388 dogs initially seronegative wearing collars, 36.9% were not found in the second cycle, 27.0% of them were lost owing to disappearance/given away/sale, and 22.6% because no one was at home; 56.1% of collars were lost in one year; while among dogs that stayed longer in the study, collar loss was lower. Conclusion: high frequencies of collar loss and no one being at home at the time of the visit are operational difficulties for the implementation of a national control program based on the strategy evaluated.

Resumen Objetivo: describir las dificultades operativas en la implementación de los collares impregnados con deltametrina para el control de la leishmaniasis visceral. Métodos: ensayo comunitario de intervención en la municipalidad de Montes Claros, MG, Brasil, comparando (i) área control - perros sin collares - y (ii) área de intervención - uso de collares impregnados con deltametrina 4% -; se realizó una encuesta serológica inicial, seguida de otros tres ciclos (a los 12, 18 y 24 meses). Resultados: de 4.388 perros inicialmente seronegativos y con los collares, 36,9% no participaron del segundo ciclo, 27,0% se perdieron por desaparición/donación/venta y 22,6% porque el domicilio estaba cerrado; la pérdida de los collares fue del 56,1% en un año; entre los perros que permanecieron más tiempo en estudio, la pérdida fue menor. Conclusión: alta frecuencia de pérdida de los collares y de domicilios cerrados son dificultades operativas para la implementación de un programa nacional de control basado en la estrategia evaluada.

RESUMO: O objetivo deste trabalho foi avaliar a soroconversão em cães imunizados com as vacinas Leishmune® e Leish tec®, através do teste imunocromatográfico rápido DPP® (Dual Path Platform) (DPP LVC) e do ensaio imunoenzimático (EIE) durante um ano após o protocolo vacinal. Trata-se de um estudo onde 28 cães divididos em dois grupos foram imunizados cada um com uma vacina anti - LVC e acompanhados durante um ano através de avaliação clínica e exames laboratoriais. Foi possível acompanhar 22 (78.5%) cães. Nos exames dos tempos 1, 2 e 3 (respectivamente 30 dias, 6 messes e 1 ano após a vacinação) os resultados de todos os cães também foram negativos para LVC, exceto de um cão que recebeu a vacina Leish tec® e soroconverteu no DPP LVC no T2, após 6 meses a vacina. Os exames posteriores deste cão foram negativos. Os resultados do presente estudo demostraram que, em área não endêmica e mesmo em diferentes tempos de avaliação, cães vacinados contra LVC, independente da vacina utilizada, não foram capazes de soroconverter no protocolo utilizado pelo Ministério da Saúde brasileiro (DPP/EIE).

ABSTRACT: The objective of the current research was to assess seroconversion in dogs immunized with Leishmune® and Leish Tec® vaccines using rapid chromatographic immunoassay DPP® (Dual Path Platform) (DPP CVL) and enzyme immunoassay (EIE) up to one year after the vaccination protocol. The study sample comprised 28 dogs divided into two groups, each group immunized with an anti-CVL vaccine and clinically monitored for one year through clinical evaluation and laboratory tests. 22 (78.5%) dog were monitored. During the evaluation time (T1-30 days, T2-6 months, and T3-1 year after vaccination) the results for all dogs were negative for CVL, except for one animal vaccinated with Leish tec® that seroconverted in the DPP CVL test at T2. Subsequent examinations of this dog were negative. Our results showed that in a non-endemic area, even at different evaluation times, dogs vaccinated against CVL with Leishmune® or Leish tec® did not seroconvert in the serological protocol used by the Brazilian Ministry of Health (DPP/EIE).

In Brazil, human and canine visceral leishmaniasis (CVL) caused byLeishmania infantum has undergone urbanisation since 1980, constituting a public health problem, and serological tests are tools of choice for identifying infected dogs. Until recently, the Brazilian zoonoses control program recommended enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) and indirect immunofluorescence assays (IFA) as the screening and confirmatory methods, respectively, for the detection of canine infection. The purpose of this study was to estimate the accuracy of ELISA and IFA in parallel or serial combinations. The reference standard comprised the results of direct visualisation of parasites in histological sections, immunohistochemical test, or isolation of the parasite in culture. Samples from 98 cases and 1,327 noncases were included. Individually, both tests presented sensitivity of 91.8% and 90.8%, and specificity of 83.4 and 53.4%, for the ELISA and IFA, respectively. When tests were used in parallel combination, sensitivity attained 99.2%, while specificity dropped to 44.8%. When used in serial combination (ELISA followed by IFA), decreased sensitivity (83.3%) and increased specificity (92.5%) were observed. Serial testing approach improved specificity with moderate loss in sensitivity. This strategy could partially fulfill the needs of public health and dog owners for a more accurate diagnosis of CVL.